活性（精选十篇）
活性 篇1
活性炭是一种具有丰富空隙结构和巨大比表面积的炭质吸附材料,作为一种优良吸附剂,具有吸附能力强、化学稳定性好、力学强度高,且可方便再生等特点,被广泛应用于工业、农业、国防、交通、医药卫生、环境保护等领域。
20世纪60年代初,欧美各国开始大量使用活性炭吸附法处理城市饮用水和工业废水。目前,活性炭吸附法已成为石油化工、医药化工、农药化工、城市污水、工业废水深度处理和污染水源净化的一种有效手段。我国于20世纪60年代已将活性炭用于二硫化碳废水处理,自20世纪70年代初以来,采用粒状活性炭处理工业废水,不论是在技术上,还是在应用范围和处理规模上都发展很快,并取得了满意的效果。
活性炭作为多孔吸附材料的一种,经过脱色或吸附饱和后,其内部的孔隙结构被吸附质堵塞,从而丧失吸附能力。大量的废活性炭被丢弃后,既造成能源浪费又产生二次污染。因此,国内外对废活性炭的再生都很重视。由于活性炭的用途不同,以及在环境治理过程中的吸附方法、吸附物质和吸附量的差异,再生时采用的方法也各不相同。新活性炭的生产需要大量的森林资源,废弃的活性炭又会造成二次污染,因此活性炭再生是一项研究已久而具有应用意义的项目。
1 传统的活性炭再生方法
传统活性炭再生方法主要有热再生法、生物再生法、溶剂再生法等,这些方法中热再生法是目前应用最多、工业上相对比较成熟的活性炭再生方法[1,2]。
1.1 热再生法
活性炭的热再生的原理是将湿炭用高温气体慢慢干燥,在加热过程中,被吸附的有机物按其性质不同,通过水蒸气蒸馏、解吸或热分解等过程,以解吸、炭化、氧化的形式从活性炭的基质上消除[3]。
热再生法发展历史较长,是目前被应用最多的一种再生方法。高温热再生一般采用的介质为水蒸气、烟道气、二氧化碳等惰性气体,其再生温度通常为300~900℃。高温热再生法的优点是再生效率高、再生时间短、对吸附质基本无选择性。但是热再生也有缺点,在热再生过程中炭损失较大,一般在5%~10%,再生炭机械强度下降,炭表面化学结构发生改变,比表面积减小,并且由于颗粒间的摩擦和可能被流动的氧化性气体带走,损失还会进一步增大,热再生炭的吸附效率也会有所降低,反复再生丧失吸附性能。另外,热再生所需设备较为复杂,运转费用较高,不易小型工业化。
1.2 生物再生法
生物再生法是利用经驯化过的细菌,解析活性炭上吸附的有机物,并进一步消化分解成H2O和CO2的过程[4]。生物再生法与污水处理中的生物法相类似,也有好氧法与厌氧法之分。由于活性炭本身的孔径很小,有的只有几纳米,微生物不能进入这样的孔隙,通常认为在再生过程中会发生细胞自溶现象,即细胞酶流至胞外,而活性炭对酶有吸附作用,因此在炭表面形成酶促中心,从而促进污染物分解,达到再生的目的。生物法简单易行,投资和运行费用较低,但所需时间较长,受水质和温度的影响很大。微生物处理污染物的针对性很强,需就特定物质专门驯化。且在降解过程中一般不能将所有的有机物彻底分解成CO2和H2O,其中间产物仍残留在活性炭上,积累在微孔中,多次循环后再生效率会明显降低。因而限制了生物再生法的工业化应用。
1.3 溶剂再生法
溶剂再生法的原理是利用活性炭、溶剂与被吸附质三者之间的相平衡关系,通过改变温度、溶剂的p H值等条件,打破吸附平衡,将吸附质从活性炭上脱附下来[5]。
根据所用溶剂的不同可分为无机溶剂再生法和有机溶剂再生法。前者用无机酸(H2SO4、HCl等)或碱(Na OH等)作为再生溶剂;后者用苯、丙酮及甲醇等有机溶剂,萃取吸附在活性炭上的吸附质。
溶剂再生法的优点是吸附质易于回收,活性炭的损失不大。其缺点是溶剂使用后处理不当易产生二次污染,且由于废液与再生炭分离困难,对粉状活性炭难于再生。对于被吸附物质为大分子有机物质或分子结构中支链较多的有机物质来说,因“瓶颈效应”或“章鱼效应”,溶剂再生效率低,在被吸附物种类较多、成分较为复杂时,通常需要几种以上的萃取剂。有人[6]把热再生和溶剂再生法结合起来取得了很好的再生效果。
传统的活性炭再生技术除了各自的特点外,通常还有三点共同的缺陷:(1)再生过程中活性炭损失往往较大;(2)再生后活性炭吸附能力会有明显下降;(3)再生时产生的尾气会造成空气的二次污染。因此,人们或对传统的再生技术进行改进,或探索全新的再生技术。
2 新兴的活性炭再生技术
由于传统的活性炭再生技术受到各方面的制约,限制了其在工业上的应用,同时新的再生技术不断的得到研究。新的活性炭再生技术主要有超临界流体再生法、电化学再生法、光催化再生法和微波辐射再生法。
2.1 超临界流体再生法
超临界流体(SCF)是指温度和压力都处于临界点以上的液体。利用SCF作为溶剂,将吸附在活性炭上的有机污染物扩散,溶解于SCF之中。根据流体性质依赖于温度和压力关系,可以将有机物与SCF有效分离,达到再生的目的。再生过程可间歇操作也可连续操作。
通过理论分析与实验结果,已证明SCF再生方法优于传统的活性炭再生方法[7](1)温度低,不改变污染物的化学性质和活性炭的原有结构;(2)活性炭无任何损耗;(3)方便收集污染物,切断二次污染;(4)操作连续化;(5)SCF再生设备占地小、操作周期短和节约能源。但是,该技术使用的超临机流体仅限于CO2,活性炭再生的过程受到限制,难以广泛的使用该技术。
2.2 电化学再生法
电化学再生法是一种正在研究的新型活性炭再生技术。电化学再生的工作原理如同电解池的电解,在电解质存在的条件下将吸附质脱附并氧化,使活性炭得以再生[8,9]。
该方法将活性炭填充在两个主电极之间,在电解液中,加以直流电场,活性炭在电场作用下极化,一端呈阳极,另一端呈阴极,形成微电解槽,在活性炭的阴极部位和阳极部位可分别发生还原反应和氧化反应,吸附在活性炭上的污染物大部分因此而分解,小部分因电泳力作用发生脱附。再生操作采用间歇搅拌槽电化学反应器或固定床反应器。该方法操作方便且效率高可接近90%、能耗低,其处理对象所受局限性较小,若处理工艺完善可以避免二次污染。与传统再生法相比,再生均匀,耗能少,炭损少,所需电解质价格较低,操作简单。
电化学再生活性炭具有较高的再生效率,可达到90%。此外,对工艺参数的研究表明,再生位置是活性炭再生工艺中最重要的影响因素,电解质Na Cl浓度是较重要的影响因素,再生电流和再生时间对活性炭的电化学再生也有一定的影响。
2.3 光催化再生法
光催化再生法的原理是利用一定波长范围的光,在某种催化剂存在的条件下,通过光化学反应使吸附有一种或多种有机物吸附质的饱和活性炭的吸附性能得到恢复。借助光催化剂表面受光子激发产生的高活性强氧化剂OH自由基,将水体中绝大多数的有机及部分无机污染物氧化,使其逐步氧化降解,最终生成CO2、H2O等无害或低毒物质[10]。
这种方法所使用的催化剂主要是固态氧化物半导体,且通常是高价的氧化物,因为高价的氧化物具有较高的稳定性。光催化再生型活性炭在其吸附达到饱和后,不需要其他步骤,直接在紫外光照射下即可实现原位再生,再生工艺简单,设备操作容易,生产规模可以随意控制,且可以使用日光辐射,能耗低。因此,光催化再生的研究具有重要意义。其不足之处是:耗时长,处理效果尚不十分令人满意。
2.4 微波辐射再生法
微波频率范围为300MHz到300GHz的电磁波,其波长从1m到1mm[11,12]。工业上主要应用的微波频率为915MHz或2450MHz。微波对被照物有很强的穿透力,对反应物起深层加热作用[13]。微波再生活性炭是用微波产生高温使活性炭上的有机污染物炭化、活化,恢复其吸附能力。微波作用使有机污染物克服范德华力吸引开始脱附,随着微波能量的聚集,在致热和非致热效应共同作用下有机污染物一部分燃烧分解放出二氧化碳,另一部分炭化。微波加热再生活性炭与传统的活性炭再生方法相比具有的优越性主要表现在[14]:(1)加热均匀,不需经过中间媒体,微波场中无温度梯度存在,故热效率高;(2)加热速度快,节能高效,只需常规方法的1/100~1/10的时间就可以完成;(3选择性加热;(4)再生效率高,能生成微孔发达的活炭。
活性炭的再生为活性炭吸附的逆过程。循环再生首先要考虑对炭基质本身的影响,保证再生活性炭的吸附能力。随着活性炭的广泛使用,活性炭的再生具有巨大的发展潜力,有广阔的环境、社会和经济效益。
综合以上所述的各种再生方法,微波再生法有着极大的发展前途,因为微波技术在工业上已显示了巨大的发展潜力,随着人们对微波技术认识的进一步深入,相关技术问题的解决和今后对低能耗、环境友好技术要求的提高,有理由相信微波技术在活性炭再生方面必将能发挥其应有的作用。
参考文献
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活性 篇2
青葙根水提物化感活性及抑菌活性的研究
以水稻(Oryza sativa L.)等5种植物和油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiovum (Lib) de Bary)等4种植物病原病菌为受试材料,通过生物测定的方法研究了青葙(Celosia argenteas Linn.)根水提物化感活性及抑菌活性.结果 表明,与对照相比,在250～400μg/mL浓度范围内,提取物对稗草(Echinochloa crusgalli (L.) Beauv.)和醴肠(Eclipta prostrate L.)种子的萌发,水稻和稗草幼苗苗高,烟草(Nicotiana tabacum L.)和醴肠幼苗的`单株鲜重不产生显著影响,而在相同的浓度范围内,对千金子(Leptochloa chinensis (Linn.)Nees)幼苗的根长和单株鲜重产生显著抑制作用.对5种植物相对应的其它生长特性方面,只有在高于250 μg/mL浓度时才能受到显著抑制.在25～400 μg/mL的浓度范围内,提取物对油菜菌核病、小麦赤霉病(Fusarium grarninearum Schw.)和杨树溃疡病(Dothiorella gregaria Sacc.)病菌的生长产生显著抑制作用,当浓度达到50 μg/mL时,提取物也显著抑制烟草灰霉病(Botrytis cinema Pets.)病菌的生长,400μg/mL时,对4种植物病原真菌的抑制率分别为45.90%、46.49%、45.64%和41.66%.上述表明,青葙根水提物具有开发为生物源农药的潜力.
作 者：周兵 闫小红 钟娟 王建元 ZHOU Bing YAN Xiao-hong ZHONG Juan WANG Jian-yuan 作者单位：井冈山大学生命科学学院,江西吉安,343009刊 名：井冈山学院学报(自然科学版)英文刊名：JOURNAL OF JINGGANGSHAN UNIVERSITY年，卷(期)：30(3)分类号：Q143关键词：青葙 水提物 化感活性 抑菌活性
系统生存的活性 篇3
其实古人有过更精辟的比喻：橘生淮南则为橘，生于淮北则为枳。
这里强调的就是系统对个体的辐射作用。
任何作用都是相互的。我认为一个企业的优势，可以分为三类：单点优势，系统优势，集成优势。单点优势：原始的分裂点
企业如人，任何一个伟大的企业都从一岁活起，一岁的时候不可能“十八般武艺样样精通”，它的优势往往只有一个两个，比如有个好的领头人，有个好的产品，有个好的市场操盘手……我们可以称它为“单点优势”。这个“单点优势”，如同受精卵一般开始“分裂”，最终不仅让企业活下来了，而且发挥“蝴蝶效应”，让企业一步步发展壮大，拥有越来越多的优势。
做企业是一个循序渐进的过程，单点优势有时候是与生俱来的，即企业一创立即有；更多的时候，单点优势是创造出来的。比如，手头有一笔资金，有的人平均用力，全面推进，眉毛胡子一把抓，结果啥事都没干成；有的人集中资源打通一点，结果豁然开朗，长驱直入……这种现象，军事学上有个专门的术语，叫做“集中优势兵力打歼灭战”。
对于创业者来说，有时候“屡败屡战，百战不挠”也可以成为单点优势。众所周知，孙中山推翻清朝时，起初起义一次失败一次，看上去是无止境的血腥，无止境的逃亡，但他毫不灰心，在惊人的“试错——创新——再试错——再创新”的反复演进中最终取得了胜利。要是一般的人，失败上七八次，逃亡上十几年，早把信念扔到爪哇国了。企业界成大器者，也多是这样一路走过来的，他们像爱迪生发明白炽灯那样，试了一个项目，又试一个项目，终有一天，“电灯”亮起来了……
没有理由轻视单点优势。单点优势是系统优势的“原始分裂点”，任何没有单点优势的企业，不可能过渡到系统优势。有时候，单点优势就是关键优势，抽掉这些“关键点”，系统就成了一个空壳。
系统优势：群体的磁化场
有两个相距不远的学校，在甲学校里，教师们总是议论说，班主任是个苦差使，挣钱少责任大，所以没人愿当；在乙学校里，大家从来不对工作角色进行消极议论，反而把当班主任视为一种成长的机会。这便是两个学校的“磁化场”不同的缘故。
西汉东方朔说过，人和人差异并不明显，“用之则为虎，不用则为鼠”。历史名将韩信在项羽手下“为鼠”，在刘邦帐下“为虎”，便是这一理论的佐证。那么，在一个企业中，变“虎”的成分大一些，还是变“鼠”的成分大一些呢?这就取决于企业“磁化场”的性质——有无系统优势。
人的行为模式多半不是由人自身决定的，而是由人所在的系统决定的。抛进海洋，就不能不游泳；落入丛林，就不能不搏斗。
企业的流程再造，实际上就是试图把一天天、一年年、一代代积累的“天才模式”沉淀下来，然后即使聘用一个凡夫，也能够按天才的方式行事，达成天才的成果。
但我以为，企业中针对人的最科学有效的设计模式莫过于让员工“为自己干”。为别人干不容易干好，因为那样做，我们不得不控制“双因素”，既要担心他的态度问题，又要担心他的能力问题；为自己干就容易干好，因为“双因素”变成了“单因素”，态度问题自动解决，我们只需关注能力问题就可以了。
当然，系统优势是多方面的，有针对人的，也有针对物的，还有针对规则和程序的……但企业的决定因素是人，所以，系统中“人的优势”是“万优之首”，解决了“人为虎不为鼠”的问题，其他优势自然不在话下。
集成优势：创新的生长极
系统的生存在于它的活性。活性的主要特征就是“新陈代谢”。这种“新陈代谢”，一方面表现为本体内部的重组与自新，另一方面表现为本体与外界的沟通与交换。
人们常讲学习型组织，实际上就是强调组织在思想上、知识上、技术上的新陈代谢。
说白了，企业要在继承与创新的有效平衡中大步流星，要做到这一点，就要具备“集成优势”。
历史上任何一个大学问家，孔子也好，朱熹也好，马克思也好，我们都说他们是“集大成者”。
一个伟大的企业，也必定是一个“集大成者”。它的创新路径四通八达：有自我创造的绝对创新，也有从外界“拿来”的相对创新……总之，古代现代，东方西方，生物界非生物界，凡是好的东西，不分彼此，为我所用，这就为卓越超凡提供了前提。
历史上，无论是老福特拒绝汽车颜色的“非黑化”，还是IBM在微型电脑上的贻误战机，都是在这一方面缺乏集成优势的结果。
对于一个理想的企业来说，个体成员的“排异反应”不宜过强，否则就会变成“听你的”还是“听我的”之类的意气之争，科学的做法是，不是听“谁的”，而是听“正确的”；整体组织的“排异反应”也不宜过强，世界上每天产生的新思想、新技术、新模式、新事物，比组织内部多一万倍、十万倍，如果不学习，不借鉴，不集成，闭门造车，那么，别人已经进入飞船时代了，你可能还在地上匍匐。
活性 篇4
1 材料与方法
1.1 材料
于2015年在黑龙江省兰西县采集瑞香狼毒根,洗净后烘干,采用小型粉碎机粉碎,过50目筛,装入塑料袋,置于阴凉处备用。
在白粉病盛发期(7月下旬至9月下旬),从哈尔滨市糖业研究所南瓜试验田内采集南瓜白粉病病叶标本,每月采集1次,每次采集5份,共采集15份病叶标本,置于5℃冰箱。
1.2 方法
称取瑞香狼毒根100g,放入棕色广口瓶中加入400mL无水乙醇,采用超声提取法,提取温度30℃,超声提取0.5h后,置于避光处(20~25℃),浸提24h过滤出溶剂,滤渣采取同样的方法进行处理,共重复3次。合并3次滤液,用旋转蒸发仪在55℃条件下减压浓缩至无溶剂蒸出,提取称重,计算提取率。后用乙醇定容至含干物质5g·mL-1,密封后放入4℃冰箱中备用。
采用硅胶柱层析和TLC检测进行活性组分的分离与鉴定。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇这4种溶剂作为萃取剂进行柱层析分离粗提物,依次加入混合洗脱剂,梯度洗脱,流速控制在0.5mL·min-1。TLC检测时,采用聚酰胺薄膜层板,点活性馏分于其上,展开剂根据活性组分确定,样品溶剂为无水乙醇,初步确定已筛选出的活性组分所含单物质的数目,并根据所选植物及提取方法,参考已报道文献,选择标准品与活性组分同时点样进行比对。
生物测定选用叶盘占药法。在南瓜长至3叶1心时,将第一片叶用打孔器打成直径1cm的离体叶盘放于9cm的玻璃培养皿,每皿放10片,已配制好的药液10mL置于培养皿中,设置空白对照,每处理设3个重复。施药12h后,接种浓度为5×105个·mL-1的白粉菌液10 mL至叶面上(治疗作用则先接种白粉菌液至叶面上,3d后施药),置于26℃,湿度60%,光照2级,无光/有光=8h/16h的人工气候箱中,接种后7d,空白对照充分发病,调查单叶片病斑数,记录各叶片发病情况,计算病情指数,防治效果。
2 结果与分析
抑制南瓜白粉病活性物质最佳溶剂是石油醚(见表1)。石油醚组分防治南瓜的防治效果最显著,其相对防效达到82.01%;其次是氯仿,抑制南瓜白粉病的相对防效为68.13%;相对防效最低的是正丁醇,仅为23.32%。
取生测活性较高的石油醚浸膏,用200~300目硅胶干柱层析,梯度洗脱(石油醚与乙酸乙酯比例分别为5个梯度,即1∶9、3∶7、5∶5、7∶3、9∶1),收集得到176馏分,然后根据色带切割柱并用甲醇洗脱各带,TLC检测,紫外灯显色合并。最后得Fl~F12这12种组分,将其对南瓜白粉病分别进行离体法活性测定,最终得到5个活性组分(F4、F5、F7、F9、F10)效果显著,其相对防效均大于70%(见表2)。
3 结论与讨论
在医药领域,瑞香狼毒的化学成分、药用价值开发研究已相对明确,在农用活性上,抑菌活性成分许多人开展了相关的研究工作,但对于其防治白粉病的研究鲜见报道,针对这一状况,本研究以石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇为萃取剂,得到萃取液进行室内生物测定,结果石油醚得到萃取剂的防治效果最好,相对防治效果为82.01%,石油醚萃取剂进一步柱层析分离,选用石油醚和乙酸乙酯为展开剂,对瑞香狼毒根石油醚萃取液梯度洗脱,得到的176个馏分,结合TLC点板,合并相同馏分,得到12个不同组分,这些组分分别对南瓜白粉病进行生物测定试验,最终鉴定5种组分为活性组分,这5种组分的获得为筛选防治南瓜白粉病的天然活性化合物奠定基础。从植物中寻找活性化合物和先导化合物是新农药创新的主要途径之一,而我国的瑞香狼毒资源丰富,原料易得,若将之开发为一种新型的植物源杀菌剂,可以变害为宝,不仅可以充分利用该植物资源,也可将其作为退化草原的优势种被清除,进而为草原生态环境的保护作贡献。
摘要：为寻找抑制南瓜白粉病新型的植物源抑菌剂,对瑞香狼毒根进行分离。采用乙醇提取法对瑞香狼毒根进行粗提取,所得粗提物溶入水溶液后,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇这4种溶剂萃取。结果表明:石油醚萃取液对南瓜白粉病的活性最高。进一步对石油醚萃取液分离,并根据TLC点板结果,得到12种馏分(F1~F12),将其对南瓜白粉病分别进行活性测定,最终得到5个活性组分(F4、F5、F7、F9、F10)。
关键词：南瓜白粉病,瑞香狼毒,活性组分
参考文献
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面试内容灵活性 篇5
(1)面试内容因应试者的个人经历、背景等情况的不同而无法固定，例如，两位应试同时应聘档案管理岗位，一位有多年从事档案工作的经历，一位是应届档案管理专业的大学本科毕业生。在面试中对前者应侧重于询问其多年来从事档案管理方面的实践经验，对后者则应侧重于了解其对该专业基础知识掌握的情况以及在校学习期间的情况。
(2)面试内容因工作岗位不同而无法固定。不同工作岗位，其工作内容、职责范围、任职资格条件等都有所不同，例如国家技术监督局的.有关技术监督岗位和国家人事部的考录岗位，无论其工作性质、工作对象，还是任职资格条件，都有很大差别，
因此，其面试的内容和形式都有所不同，面试题目及考察角度都应各有侧重。
因文而异 彰显活性 篇6
[教学过程]
一、名言激趣，确立目标
1.背名言。
2.补充名言，引导质疑。
师：大家知道的名言真多，今天我再送大家一句名言：我需要的是精确的时间，搞科学研究不能使用“大概”“也许”这些字眼，也不能用估计和推断代替观察。（竺可桢语）
（1）读了这句名言，你知道了什么？你还有什么疑问？
预设：竺可桢是在什么情况下说这句话的？为什么“搞科学研究不能使用‘大概’‘也许’这些字眼，也不能用估计和推断代替观察”？
（2）梳理、归纳，形成核心问题。
二、细读批注，整体感悟
师：竺可桢是怎么做的？让我们认真读读这个故事，在书本的空白处写一写自己的读书体会和疑惑。
三、品读体味，多元对话
1.自读自悟1—5节，组织学生交流感受。
（1）自读，同桌之间交流读完1—5节后的感受。
（2）师生对话，针对学情进行指导：抓住“又走近杏树数了数”“弯下腰来”“习惯地问”等词句进行点拨，引导学生体会竺可桢爷爷的慈祥以及他对杏花开放时间的关注。
2.总结学法：抓关键词句体悟作者行文思路；通过提示语揣摩人物内心，读好对话。
3.读、悟6—15节
（1）出示第6自然段：先自读体会，然后交流读后感受；引导学生品味“吹醒”“吹绿”“吹皱”“吹鼓”等词；根据文字联想写春景的诗词，组织学生朗读和积累；通过多媒体呈现美丽的春景图，组织学生欣赏。
（2）读好对话（7—14节）
组织自读自悟，理解对话；轻声读，体会竺可桢和“我”对话的情景；迁移学法，尝试给对话加上提示语，以读来呈现；同桌间分角色读，感受语境；指名读并点评，引导学生边读边想。
（3）交流第15节的重点语句
师：从第15节的语言文字中，你体会到了什么？
组织学生交流，然后指名汇报，在互动交流中点拨，将学生对文本的感受引向深处，把读书感受表达出来。
四、再现名言，深入理解
再次出示名言，谈谈你对这句名言的理解。
五、迁移说写，升华情感
1.出示竺可桢爷爷的资料，组织学生默读，再联系课文内容谈谈自己的感受。
2.尝试写一句名言自勉。
[解说]
一、整合
语文课程标准指出：“教师应创造性地理解和使用教材。”因此，教学过程的呈现应在准确把握教材的基础上，巧妙构思，灵活处理，以选取适合学生认知、发展规律的教学流程。如教学本文时，我将放在文章末尾的竺可桢不只说过一次的话当做一句补充名言展现在学生面前，然后引导学生质疑，并将不理解的问题当做本节课的研读目标。这个目标的确立，不是教师强制灌输的，而是在学生整体感知课文的基础上顺应学生的学情建立的隐性需求。在读书交流时，我将课文划分为“第一次看花”“第二次看花”和“竺可桢不只一次说过的一句话”这三大板块。这既遵循了文章的思路，又使教学过程层次分明，顺应学生的学习思维，便于学生整体感悟文本。
二、对话
现代阅读理论告诉我们：在作家、作品、读者的关系中，读者并不是被动、消极的接受者，而是主动的参与者和积极的生产者。名言呈现后，学生围绕“我要探求……”的读书目标与文本展开对话，虚心涵泳，潜心会文，既培养了专注阅读的品质，又在读书实践中习得了“不动笔墨不读书”的阅书方法。在这一过程中，学生探讨了竺可桢看花时的动作、神态及与小姑娘的对话，领会了竺可桢对科学严谨的精神。同时，我深入学生，指导、点拨他们，以便“以学定教，以学促教”，再从语文的性质（工具性与人文性的统一）的角度审视教学的过程，促进语言与精神同构共生。首先，我组织学生背储备的名言，然后巧妙地引出本课的重点段，将它用名言的形式呈现出来，接着针对名言，畅谈读名言后的感受，使语言与精神第一次同构。然后，在此基础上，学生用圈、划、标、注的方法与文本自主对话，即“读进去”，然后交流读书体会，即“用得出”。经历了这样的心路历程，学生实现了语言与精神的共生。最后，我设计了练说的环节，并让学生用名言自勉，使学生在习得语言的同时，端正情感、态度、价值观。
三、运用
语文教学只有同丰富的生活联系起来，才能焕发出生命的活力。要突破“以本为本”的局限，实现“以人为本”的跨越，教师就必须确立学语文、用语文的大语文教学理念，让学生把习得的语言运用到生活中。我设计了让学生联系课文说感受和试写名言自勉的环节，通过这一拓展练习，学生精心提炼了一句句鲜活的名言，激起生命的涟漪，同时也揭开了名言神秘的面纱，亲近名言，积累名言，从而培养创造性思维，提高语文素养。
活性 篇7
中药材传统的干燥方法有自然晒干、自然阴干、烘干等[15]。传统方法干燥连翘叶大都采用潮湿的滤纸擦拭表面后恒温鼓风干燥,但热风干燥过程中会导致连翘叶中的某些活性成分损失。合适的干燥方法既能保持连翘叶的活性成分,又能保证连翘叶的药用效果。目前对于连翘叶的干燥方法的研究较少,限制了连翘叶资源更深层次的开发利用。有研究表明连翘叶蒸晒品中连翘酯苷含量比生晒品含量高[16]。本研究对连翘叶采取不同干燥方式处理,评价其清除ABTS、DPPH自由基的活性,并采用分光光度法测定其总黄酮、总酚酸的含量,高效液相色谱法测定不同干燥方法得到的连翘叶中绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷的含量,探讨干燥方法对连翘叶清除自由基活性和总黄酮、总酚酸及绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷含量的影响,为选择合理的连翘叶干燥方法提供实验依据,同时为连翘叶资源的进一步开发利用提供一定的科学指导。
1 材料
连翘叶:2014年9月采自山西省陵川县连翘种植基地,经浙江中医药大学药学院张如松教授鉴定为木犀科植物连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)的叶;芦丁、绿原酸、连翘苷、连翘酯苷:购自美国Sigma公司。Folin-Ciocalteu试剂:购自德国Merck公司;DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼):购自日本化成工业株式会社;ABTS[2,2-联氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐]:购自阿拉丁试剂公司;乙腈(色谱纯):购自Fisher Chemical;娃哈哈纯净水:购自杭州娃哈哈集团有限公司;其他试剂均为市售分析纯。
Waters 2695液相色谱仪(由高精度2695四元梯度泵、全自动进样器、Waters 2996二极管阵列检测器及Waters Chemstation色谱管理软件组成);50 g中药材粉碎机:浙江武义县屹立工具有限公司;HH-2数显恒温水浴锅:国华电器有限公司;TB-215D微量分析天平:德国赛多利斯股份有限公司;722E型紫外可见分光光度计:上海光谱仪器有限公司;101-0AB数显鼓风干燥箱:天津泰斯特仪器有限公司。
2 方法
2.1 连翘叶的干燥方法
1)晒干:将连翘叶平铺于苇席上,置于太阳下晒干。2)阴干:将连翘叶平铺于苇席上,放在室内通风阴凉干燥处阴干。3)烘干:将连翘叶用滤纸擦拭表面,均匀摊放在电热鼓风干燥箱中,40℃下鼓风干燥。4)蒸后阴干:鲜叶蒸5 min,与阴干同等条件下干燥样品。5)煮后阴干:鲜叶煮5 min,与阴干同等条件下干燥样品。
连翘叶干燥后,用中药打粉机粉碎,过筛(40目)后,置于真空干燥器中备用。
2.2 连翘叶提取液的制备
称取不同干燥方法得到的连翘叶样品各1.000 g,加10m L体积分数80%乙醇研磨提取,转入25 m L容量瓶中,超声提取30 min后,离心(4000 r/min,5 min),将上清液用80%乙醇定容,置于-4℃冰箱中保存备用。
2.3 清除自由基活性测定
2.3.1 清除DPPH·活性测定
测定方法参考文献[17]。精密称取DPPH自由基2.5 mg于100 m L容量瓶中,用甲醇定容,配制为25 mg·L-1的DP-PH·甲醇溶液,放置于避光处(需现用现配)。取上述25 mg·L-1的DPPH·甲醇溶液3.9 m L于比色管中,向比色管中加入0.1 m L不同浓度的被测溶液,涡漩混匀,在黑暗避光处30℃水浴反应40 min,于515 nm测定吸光度值A,,同时以0.1 m L甲醇代替被测溶液做空白试验,每个样品做3个重复。根据下列公式计算DPPH·的清除率:DPPH·清除率(%)=[1-A/A0]×100,其中:A为样品溶液吸光度值,A0为空白溶液吸光度值。分别以各样品的不同浓度与其对应的DPPH·自由基清除率作图。
2.3.2 清除ABTS+·活性测定
按照文献[18]配制7 mmol·L-1的ABTS自由基储备液(以甲醇溶),取5 m L上述ABTS储备液,将其与88μL 140mmol·L-1的过硫酸钾溶液超声混匀,在室温、黑暗避光处放置12~16 h,形成ABTS+·储备液。临用前将生成的ABTS+·自由基储备液用甲醇稀释,于734 nm下测定其吸光值,使稀释液的吸光度为(0.70±0.02),得到ABTS+·工作液,将其保存于避光黑暗处。
取ABTS+·工作液4 m L加入比色管中,向其中加入0.04 m L不同浓度的样品甲醇溶液,漩涡混匀,30℃水浴避光反应15 min[19],于734 nm下测定其吸光度值A,同时以0.04 m L甲醇代替样品甲醇溶液做空白试验每个样品平行3份。根据下列公式计算ABTS+·的清除率:ABTS+·清除率(%)=[1-A/A0]×100,其中:A为样品溶液吸光度值,A0为空白溶液吸光度值。分别以各样品的不同浓度与其对应的ABTS+·自由基清除率作图。
2.4 活性成分测定
2.4.1 总黄酮含量测定
标准曲线的绘制:采用硝酸铝-亚硝酸钠显色法绘制标准曲线[20]。分别精密量取1 g·L-1芦丁溶液(甲醇制)0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 m L,置于10 m L容量瓶中,加入10%Na NO2溶液0.3 m L,摇匀后静置6 min,加入10%Al(NO3)3溶液0.3 m L,摇匀,放置6 min后加入4%Na OH溶液4.0m L,再用甲醇稀释定容至10 m L,摇匀,放置15 min,以试剂空白为对照,在510 nm处测定各自吸光度值,再以吸光度(A)为纵坐标,以芦丁的不同质量浓度(g·L-1)为横坐标,绘制标准曲线,所得回归方程为Y=12.46X-0.0214(r=0.9993),线性范围为0.01~0.05 g·L-1。
总黄酮含量测定:分别精密移取不同干燥方法得到的提取液1 m L于10 m L容量瓶中,按照上述方法在510 nm处测其吸光度值,以相应试剂为空白调零,用回归方程计算出不同干燥方法得到的连翘叶提取物中总黄酮的含量。
2.4.2 总酚酸含量测定
标准曲线的绘制:分别精密吸取1 mmol·L-1没食子酸对照液(甲醇制)45、60、75、90、105、120μL,置于5 m L具塞试管中,加甲醇补足至0.5 m L,加入Folin-Ciocalteu试剂1m L,摇匀,放置3 min后加入7.5%Na2CO3溶液1 m L,混匀,室温避光静置2 h后,离心(8000 r/min,10 min),于750 nm处测定各自吸光度值,以吸光度值为纵坐标,没食子酸的不同质量浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程Y=41.56X+0.05(r=0.9996)。
总酚酸含量测定:定量移取0.1 m L上述提取液于5 m L具塞试管中,按照上述方法在750 nm处测定吸光值,以相应试剂为空白调零,用回归方程计算出不同干燥方法得到的连翘叶提取物中总酚酸的含量。
2.4.3 绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷含量测定
提取方法同2.2,取上清液过0.45μm滤膜,待进HPLC分析。采用HPLC法检测绿原酸、芦丁、连翘苷和连翘酯苷的含量。色谱柱:Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A为乙腈,B为0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱程序为:0~8 min,8%~10%A;8~24 min,10%~15%A;24~30 min,15%~17%A;30~40 min,17%~30%A;40~50 min,30%~50%A;柱温:25℃;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:280 nm;进样量:10μL。
绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷标准曲线的建立:配制绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷浓度均为2.0 g·L-1的混合标准储备液,精密吸取储备液,分别稀释成1 000、500、250、100、50、10 mg·L-1的混合标准溶液,按照上述色谱条件进行HPLC测定,以进样浓度(X,mg·L-1)为横坐标,以峰面积(Y,mv·s)为纵坐标,求出直线回归方程,绘制标准曲线。
3 结果
3.1 不同干燥方法对连翘叶清除自由基活性的影响
3.1.1 不同干燥方法对连翘叶清除DPPH·自由基活性的影响
不同干燥方法得到的连翘叶清除DPPH·自由基的结果如图1所示,由图1可以看出,连翘叶提取液具有一定的清除DPPH·的作用,并且随着提取液浓度的增加,清除DP-PH·自由基的活性也随之增强,增加幅度基本相同。其中蒸后阴干的连翘叶提取液清除DPPH·的能力最强,煮后阴干、烘干、阴干的稍次之,而晒干的连翘叶提取液清除DPPH·的能力最差。
3.1.2 不同干燥方法对连翘叶清除ABTS自由基活性的影响
不同干燥方式处理的连翘叶提取物对ABTS自由基的清除作用如图2所示,由图2可以看出,随着浓度的增加,各提取液清除ABTS自由基活性也随之增加,但是增加幅度不尽相同。蒸后阴干、煮后阴干和烘干连翘叶提取液的清除ABTS自由基活性基本相同,其次为阴干,而晒干连翘叶提取液清除ABTS自由基活性最弱。对比图1和图2可以看出,不同干燥方式处理的连翘叶提取物清除DPPH·与ABTS自由基活性呈现出基本相同的趋势,在同等浓度下,清除ABTS自由基活性更强。
3.2 不同干燥方法对连翘叶活性成分的影响
3.2.1 不同干燥方法对总黄酮和总酚酸含量的影响
按2.4.1和2.4.2所述方法,对不同干燥处理得到的连翘叶中总黄酮和总多酚的含量进行测定,结果如表1所示。由表1可以看出,不同干燥方法得到的连翘叶中总黄酮含量差异不大;而总酚酸含量差异较大,这可能与连翘叶中所含活性成分的化学结构有关,不同的化合物对温度、氧气等敏感程度不同。就总酚酸含量而言,蒸后阴干得到的连翘叶中总酚酸含量最高,达到40 mg·g-1,而晒干的连翘叶总酚酸含量最低,仅为蒸后阴干的60%左右,这可能是由于连翘叶处于高温环境且暴露于空气中,一些结构不稳定的酚酸类化合物被氧化所导致的。
3.2.2 不同干燥方法对绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷含量的影响
经不同方法干燥得到的连翘叶,采用2.4.3所述方法测定其主要活性成分,4种成分及烘干连翘叶的色谱图如图3所示,由图3可以看出,在此色谱分离条件下,样品中的4种成分与其他成分达到良好的分离,峰形对称不拖尾。不同方法干燥的连翘叶中4种成分的含量如表2所示,由表2可以看出,经不同方法干燥的连翘叶,其主要成分基本一致,4种成分均有检出,但其各成分含量都有一定变化,不同干燥方法对4种成分的影响趋势趋于一致。从各成分含量来看,晒干得到的连翘叶中各成分含量均较低,蒸后阴干各成分含量均较高。
1.绿原酸;2.连翘酯苷;3.芦丁;4.连翘苷
4 讨论
通过选取清除ABTS、DPPH自由基及连翘叶中总黄酮、总酚酸和绿原酸、芦丁、连翘苷、连翘酯苷4种主要活性成分作为评价指标,首次摸清了晒干、阴干、烘干、蒸后阴干、煮后阴干5种不同干燥方法对清除自由基活性及活性成分含量的影响。本研究发现不同干燥方法处理的连翘叶,其清除自由基活性及活性成分的含量均有一定差别,蒸后阴干的连翘叶清除自由基活性及活性成分的含量均呈现较高水平,而晒干的连翘叶均最低,蒸后阴干是连翘叶的最佳干燥方法,与王秀文[21]等的研究结果一致。
绿原酸是一种具有邻位酚羟基结构的酚酸类化合物,在多酚氧化酶的催化作用下,可氧化缩合。在烘干过程中,鼓风干燥箱将水分带走,干燥速度较快,使得连翘叶中绿原酸含量较高。阴干时靠自然的空气对流干燥,干燥速度较慢,而且绿原酸暴露在空气中,极易被氧化。晒干时,中午温度较高,且连翘叶直接暴露在空气中,绿原酸也很容易被氧化。而蒸煮处理后使部分多酚氧化酶失活,绿原酸含量较高,含量测定结果表明其高于烘干处理。
芦丁又名槲皮素-3-O-芸香糖苷,为黄酮类物质,结构相对稳定,因此不同干燥处理对其影响不大。
连翘苷极易氧化,而温度对其稳定性影响不大[22],蒸煮处理后干燥得到的连翘叶中连翘苷含量较直接烘干、晒干、阴干含量高。
连翘酯苷是一种结构较为复杂的酚类化合物,遇酸、碱或高温等不稳定[23],会导致其分解为小分子化合物,晒干的连翘叶中连翘酯苷含量较低,蒸煮处理后阴干可显著提高连翘叶中连翘酯苷的含量。
活性 篇8
1实验材料与仪器
1.1样品来源及鉴定
水芫花样品于2010年8月采自海南省西沙永兴岛, 经浙江海洋学院食品与医药学院海洋药物研究所所长曲有乐教授鉴定为千屈菜科水芫花属植物水芫花Pemphis acidula的枝茎, 凭证标本存放在浙江海洋学院海洋药物综合实验室 (海科楼108-2室) , 标本编号:水芫花20100809。
1.2试剂与仪器
试剂:无水乙醇 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:20140121) 、石油醚 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:20140115) 、氯仿 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:20120810) 、乙酸乙酯 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:20130428) 、丙酮 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:T20060815) 、抗坏血酸 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:20130801) 、铁氰化钾 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:F20101214) 、氯化钠 (国药集团化学试剂有限公司, 分析纯, 批号:F20080310) 、Tris·HCL (国药集团化学试剂有限公司, 批号:20131212) 、营养琼脂 (国药集团化学试剂有限公司, 生化试剂, 批号:20111228) 、蛋白胨 (国药集团化学试剂有限公司, 生化试剂, 批号:F20101012) 、牛肉浸膏 (国药集团化学试剂有限公司, 生化试剂, 批号:20131212) 、红霉素软膏 (安徽新和成皖南药业有限公司, 批号:130709) 。
仪器:中药粉碎机 (DFY-400, 温岭市林大机械有限公司) 、超声波清洗机 (WF-180E, 宁波海曙五方超声波设备有限公司) 、旋转蒸发仪 (N-1100, 上海爱朗仪器有限公司) 、电子天平 (BSA323S, 赛多利斯科学仪器 (北京) 有限公司) 、冷冻干燥机 (FD-1E, 北京德天佑科技发展有限公司) 、低速离心机 (TD5K, 长沙东旺实验仪器有限公司) 、紫外分光光度计 (UV-1100, 上海美谱达仪器有限公司) 、超净台 (JB-CJ-1FXS, 苏州佳宝净化工程设备有限公司) 、恒温培养箱 (LHS-250HC, 上海慧泰仪器制造有限公司) 、全温培养摇床 (HZQ-B, 金坛市华城开元实验仪器厂) 、酶标仪 (SM800, 上海永创医疗器械有限公司) 。实验菌种:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副溶血孤菌, 实验菌种均为浙江海洋学院食品与医药学院水产加工工程实验室提供。
1.3实验方法
1.3.1材料预处理
水芫花→粗粉→烘干→粉粹→过筛→保存备用。
1.3.2系统溶剂提取物的制备
取粉碎的水芫花粉末20g至500m L锥形瓶中, 依次加入各提取溶剂400m L, 在50℃, 80W功率条件下超声45min, 重复提取3次, 离心取上清液混合, 用旋转蒸发仪减压浓缩, 各浓缩液取液经减压浓缩得石油醚浸膏、氯仿浸膏、乙酸乙酯浸膏和水提浸膏, 将上述浸膏水浴挥干溶剂, 称量重量, 计算浸膏得率, 放干燥器保存备用[3]。
1.3.3不同溶剂提取物的体外抗氧化活性研究
1.3.3.1供试品和阳性对照品溶液的配制
准确称量0.25g各溶剂提取浸膏和Vc, 分别用无水乙醇溶解于50m L的容量瓶中, 经半量稀释法分别制备成6个浓度梯度的各样品溶液和Vc阳性对照品溶液, 浓度梯度分别为:5.000mg·m L-1、2.500mg·m L-1、1.250mg·m L-1、0.625mg·m L-1、0.313mg·m L-1、0.156mg·m L-1。
1.3.3.2对DPPH自由基清除率的测定[4]
用移液枪移取不同浓度的各供试品溶液1m L加入10m L离心管中, 再加1m L的320μmol·L-1的DPPH-乙醇溶液, 用无水乙醇稀释至4m L充分混匀, 常温下避光反应30min后, 在517nm处测吸光度A1, 以无水乙醇代替供试品溶液测量A0, 计算公式如下:
式中:A0-未加入抗氧化物质时测得的溶液平均吸光度值;
A0-加入抗氧化物质后测得的溶液平均吸光度值。
1.3.3.3对羟基自由基 (·OH) 清除率的测定
取10m L离心管分别加入6mmol·L-1Fe SO4溶液、6 mmol·L-1水杨酸溶液和供试品溶液各1m L, 混匀, 最后加入1m L 6 mmol·L-1H2O2启动反应, 常温下避光静置30min后于510nm处测定吸光度A1, 以蒸馏水和无水乙醇混合物代替供试品溶液测定A0[5,6]。羟基自由基清除率计算公式同上。
1.3.3.4对超氧阴离子自由基 (O2-·) 清除率的测定
操作顺序如下:取4.5m L Tris-HCl缓冲溶液 (p H=8.2) →25℃静置30min→加入1m L供试品溶液→加入0.4m L邻苯三酚溶液→混匀→30℃水浴5min→加入1m L 8mol/L Hcl→终止反应→299 nm测定吸光度A1、以0.1mol·L-1HAc代替供试品溶液测定A0[7]。按2.3.2项下公式计算清除率。
1.3.3.5还原能力的测定
用移液枪移取1m L各供试品溶液于10m L离心管中, 分别加入2.5m L的磷酸缓冲溶液 (p H=6.6) 和2.5m L 1%铁氰化钾溶液, 混匀, 于50℃水浴反应20min, 再加入2.5m L的10%三氯乙酸溶液, 混匀, 低速离心10min, 移取上清液、蒸馏水、0.1%Fe Cl3 (按上清液:蒸馏水:0.1%Fe Cl3=5:5:1) 于玻璃试管中常温反应5min, 于700nm处测定吸光度, 以吸光度大小来衡量各供试品的还原能力[8]。
1.3.4水芫花提取物抑菌活性研究
1.3.4.1菌悬液的制备
用接种环取少量细菌于装有50m L液体牛肉膏蛋白胨培养基中, 37℃下摇床培养24h, 涂布平板, 检测备用[9]。
1.3.4.2提取物抑菌活性测定
分别取不同溶剂萃取物, 用二甲亚砜溶解并稀释至质量浓度为100 mg·m L-1的样品溶液, 在每个直径为9cm培养皿中接种各菌液150μL, 将已灭菌的不烫手的营养琼脂倒平板, 与菌液混合均匀。待培养基完全凝固后, 用0.8cm打孔器在培养皿上等距离打三个孔, 除去孔内培养基。用移液枪往各孔内注入120μL的样品溶液, 空白对照组各孔内注入等量的二甲亚砜溶液, 各组均置37℃, 70%湿度条件下培养24 h, 十字交叉法测定抑菌圈直径[10,11]。
1.3.4.3光密度法测定不同提取物的最小抑菌浓度 (MIC)
根据2.4.2实验结果, 选择丙酮提取物、无水乙醇提取物和蒸馏水提取物3种极性较大的提取物, 进行抑菌率实验, 取一定量的质量浓度为100mg·m L-1的各提取物溶液 (用0.22μm滤膜除菌) , 与高压灭菌的肉汤液体培养基等体积混合, 半量稀释法制备浓度梯度如下的各样品:50mg·m L-1、25mg·m L-1、12.5mg·m L-1、6.25 mg·m L-1、3.125mg·m L-1、1.563mg·m L-1取10μL各菌悬液与200μL各样品溶液于96孔板混合, 以相同浓度的红霉素软膏溶液为阳性对照, 37℃培养24h, 以肉汤液体培养基和生理盐水混合液为空白调零, 测定样品在630nm处的吸光度值 (A样品) , 同时测定样品空白和对照组的吸光度值。样品空白 (A空白) 不加菌悬液, 其余条件相同;对照组 (A对照) 用生理盐水代替各提取物, 其余条件相同。每个样品平行3次, 计算各提取物的抑菌率[12~14]。计算公式如下:
2结果
2.1系统溶剂对水芫花的萃取率
见表1。
由表1可以看出不同极性的各溶剂对于水芫花提取率差异较大, 丙酮和无水乙醇对水芫花的提取率较高, 分别达11.92%和11.26%, 蒸馏水次之, 其次为氯仿和乙酸乙酯, 石油醚提取率最低, 提取率仅为2.11%。
2.2不同溶剂提取物的体外抗氧化活性
2.2.1各提取物对DPPH自由基的清除作用
见图1。
由图1可以看出, 各溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力强弱不同, 在实验浓度范围内, 各提取物随着浓度的增加, 对DPPH自由基的清除能力也不断增强, 表现出较好的量效关系, 其中乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基的能力较强和VC相近, 并且其浓度在达1.250mg·m L-1之前, 对于DPPH自由基的能力随浓度变化较大, 在浓度为1.250mg·m L-1~5.000mg·m L-1范围内, 对于DPPH自由基的能力随浓度略有变化但不明显;石醚和氯仿提取物对于DPPH自由基的能力较前面三者次之, 且对于DPPH自由基的能力随浓度变化略微平缓, 水提物清除DPPH自由基的能力最差, 随浓度变化趋势与石醚和氯仿提取物相近。
2.2.2各提取物对羟基自由基 (·OH) 的清除作用
见图2。
羟基自由基 (·OH) 是已知的最活泼的活性氧自由基, 也是毒性最大的自由基, 由图2可以看出, 各溶剂提取物对羟基自由基 (·OH) 均有一定的清除作用, 但与阳性对照Vc组相比差距较大, 各提取随浓度变化物对羟基自由基 (·OH) 清除率不断增加, 但变化趋势并不是太明显, 尤其是蒸馏水提取物对羟基自由基 (·OH) 清除率随浓度变化最为平缓, 各提取物乙醇和丙酮提取物对羟基自由基 (·OH) 的清除作用最大, 在实验浓度范围内分别达73.61%和69.23%, 氯仿提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物次之, 水提取物清除能力最差, 最大仅为28.75%。
2.2.3各提取物对超氧阴离子自由基 (O2-·) 的清除作用
见图3。
由图3可以看出, 各溶剂提取物对超氧阴离子自由基 (O2-·) 均有一定的清除作用, 但与VC相比有一定的差距, 各溶剂提取物对超氧阴离子自由基 (O2-·) 的清除率与浓度存在一定的量效关系, 且对超氧阴离子自由基 (O2-·) 清除率随浓度变化趋势及其相近, 在浓度达1.250mg·m L-1前, 对超氧阴离子自由基 (O2-·) 清除率随浓度变化较大, 之后变化趋势较为平缓。
2.2.4各提取物的还原能力
见图4。
由图4可以看出, 各溶剂提取物随浓度的不断增加, 还原力也显著增强, 表现出较好的量效关系, 且各变化曲线较为分散, 基本没有出现变化曲线交叉或重叠现象, 其中乙醇提取物和丙酮提取物还原能力最强, 且随浓度不断增加, OD值变化较大, 在浓度超过2.5mg·m L-1时与VC的还原能力相差不大;乙酸乙酯提取物还原能力较前两者次之, 但还原能力随浓度的变化趋势与其相近, 石油醚提取物、氯仿提取物、蒸馏水提取物还原能力随浓度的变化趋势交前面三者较为平缓;各溶剂提取物的还原能力大小依次为:乙醇提取物>丙酮提取物>乙酸乙酯提取物>石油醚提取物>氯仿提取物>水提取物。
2.3水芫花提取物抑菌活性
2.3.1提取物抑菌活性
由图5可知, 各提取物对3种供试菌均有一定的抑制作用, 其中乙醇提取物、丙酮提取物对各供试菌的抑菌圈直径最大;水提取物与乙酸乙酯提取物的抑菌圈次之;乙酸乙酯提取物对副溶血孤菌的抑菌圈直径明显强于对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用;石油醚提取物和氯仿提取物对各供试菌的抑菌圈直径最小。
2.3.2不同提取物最低抑菌浓度 (MIC) 测定
见表2。
注:-表示没有抑菌作用。
由表2可知, 各提取物的抑菌活性明显小于阳性对照组, 各提取物对三种供试菌的抑制作用, 随浓度的降低而降低, 呈现良好的量效关系;同时可以看出, 丙酮提取物、无水乙醇提取物对于大肠杆菌的最小抑菌浓度在6.250~3.125mg·m L-1, 蒸馏水提取物对于大肠杆菌的最小抑菌浓度在6.250~3.125mg·m L-1;丙酮提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度在6.250~3.125mg·m L-1, 无水乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度<1.563mg·m L-1, 蒸馏水提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度在3.125~1.563mg·m L-1;同理可以看出, 丙酮提取物、无水乙醇提取物、蒸馏水提取物对副溶血孤菌的最小抑菌浓度分别为在3.125~1.563mg·m L-1、<1.563 mg·m L-1, <1.563mg·m L-1。
3讨论
活性 篇9
本工作采用PACT工艺处理某石化公司炼油厂的电脱盐污水,选取8种不同类型的PAC进行实验,并考察了优选PAC的投加量对该工艺处理效果的影响,旨在为PACT工艺的工业应用提供技术支持。
1 实验部分①
1.1 原料及试剂
电脱盐污水水质参数列于表1。
实验所用1#~8#PAC依次为:200目,碘值分别为500,600,700,800,900 mg/g;325目,碘值分别为700,800 mg/g的煤质活性炭,均由山西新华活性炭有限公司生产,其孔结构参数列于表2。
*:污水生化需氧量(BOD5)与化学需氧量(COD)之比。
实验所用活性污泥取自某石化公司污水处理厂。先空曝4 h后静置12 h,然后排出上清液,再加入污水进行培养和驯化,方法参照文献[8]。
1.2 实验方法
在20℃下,于自制的2 L生物反应器中,加入1 L驯化后的活性污泥,先静置沉淀16 h,排出上清液700 m L,然后加入700 m L污水,每日曝气8 h。驯化5~7 d后,投加一定量的PAC,每日曝气8 h,继续培养5~7 d。
1.3 分析检测
采用美国麦克仪器公司制造的ASAP 2020型物理吸附仪测定PAC的比表面积、孔容与孔径。按照重铬酸钾法(GB 11914—89),采用美国哈希公司制造的DR 2800型COD分析仪,测定混合液的COD。按照重量法测定混合液中悬浮固体(MLSS)的质量浓度。
2 结果与讨论
2.1 PAC的筛选
在MLSS质量浓度为2.0 g/L,PAC投加量为4.0 g/L的条件下,即混合液中m(PAC)∶m(MLSS)为2∶1时,分别考察了1#~8#PAC对混合液COD的去除效果,并与传统的活性污泥法(不投加PAC)进行了对比,结果见图1。
由图1可见,与传统活性污泥法相比,5#PAC(200目,碘值为900 mg/g)对提高混合液COD去除率的效果最显著,使COD去除率提高了15个百分点。PAC的孔容是影响PACT工艺处理效果的重要因素[9]。由表2可见,5#PAC孔结构参数的综合数据大于其他种类的PAC,说明其孔隙结构更为发达。
2.2 PAC投加量对混合液COD去除率的影响
选用5#PAC,在MLSS质量浓度为2.0 g/L的条件下,考察了PAC投加量对混合液COD去除率的影响,结果见图2。
由图2可见,随着PAC投加量的增大,混合液COD的去除率呈先上升后略有下降的趋势。这是因为在反应初期,投加的PAC可吸附污染物而去除,但随着活性污泥与PAC的不断接触,最终吸附在PAC上的污染物却逐渐被解吸出来,致使污染物的浓度下降趋势变缓。综合考虑COD去除效果及经济成本,混合液中m(PAC)∶m(MLSS)以2∶1为宜,此时COD去除率为92%。
2.3 PAC投加量对混合液污泥指数的影响
选用5#PAC,在MLSS为2.0 g/L的条件下,考察了PAC投加量对混合液污泥指数(SVI)的影响。结果(见图3)表明,随着PAC投加量的增大,混合液的SVI持续降低,即活性污泥沉降速率逐步提高。这说明PACT工艺具有明显的抗污泥膨胀性能。
3 结论
a.采用PACT工艺处理电脱盐污水,考察了PAC种类对处理效果的影响。结果表明,200目、碘值为900 mg/g的PAC对混合液COD的去除效果最佳。
b.随着优选PAC投加量的增大,混合液COD的去除率呈先上升后略有下降的趋势;混合液中m(PAC)∶m(MLSS)以2∶1为宜,此时COD去除率为92%,比传统活性污泥法提高15个百分点。
c.随着优选PAC投加量的增大,混合液的SVI降低,即活性污泥沉降速率逐步提高,这说明PACT工艺具有明显的抗污泥膨胀性能。
参考文献
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活性 篇10
金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxin,SE)是一类由金黄色葡萄球菌产生的细菌超抗原蛋白质,此类蛋白质分子结构相关,序列具有高度同源性[1]。作为一类典型的细菌超抗原,SE在极低的浓度下便可激活体内大量的T淋巴细胞,释多种细胞因子,并对主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)阳性的肿瘤细胞产生毒性杀伤。因此SE已经被越来越多地应用于抗肿瘤研究中[2]。
金黄色葡萄球菌肠毒素C2(Staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)是肠毒素家族中特殊的一类,因其较好的免疫刺激活性和相对较低的毒性,已经广泛地应用于肿瘤的临床治疗并取得了一定的治疗效果。为了分析SEC2不同结构区域对其活性的影响,并进一步提高其成药性,作者实验室前期对野生型SEC2蛋白分子的氨基端和羧基端分别进行了截短改造。研究发现,截短SEC2的羧基端导致蛋白亲水性严重降低,不利于后续纯化,难以成药。而截短氨基端的蛋白SEC14-239,保持了较好的亲水性,利于成药,但其超抗原活性较野生型SEC2有所降低[3,4]。
已有报道结果对SEC2分子晶体的研究发现,分子中的α3到α5螺旋结构主要决定其超抗原活性,而氨基端α1和α2螺旋及羧基端β11和β12折叠并没有直接参与MHCⅡ或T细胞受体(TCR)的结合[5,6]。在SEC2的α3至α5结构域中,第20、22及26位氨基酸残基对于形成SEC1和SEC2的专一性抗原决定部位十分重要,并且这些氨基酸残基暴露于肠毒素分子表面可能参与了受体的结合[3,6]。王小刚等人将野生型SEC2中20和22位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu后,突变蛋白的超抗原活性较野生型SEC2显著增强[7]。
因此,为得到一种分子量较小、可溶性好和超抗原活性高的改构SEC2分子,我们在前期的研究基础上通过基因工程技术对截短蛋白SEC14-239进行改造,利用基因工程方法将SEC14-239中7和9位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu,构建一种截短突变蛋白SEC14-239M。体外生物活性分析结果显示,SEC14-239M的超抗原活性明显高于SEC14-239,这表明以定点突变的方式增强SEC2截短蛋白的活性是可行的。并且,SEC14-239M造成的刺激T细胞增殖活性和抑瘤活性增强的程度不同,暗示了超抗原诱导的T细胞增殖和肿瘤细胞抑制作用并不完全关联。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料
产SEC2金黄色葡萄球菌0165菌株(CGMCC 0165)由沈阳协和生物制药股份有限公司提供;表达载体pET-28a为Invitrogen公司;小鼠肝癌细胞Hepa1-6细胞株由作者实验室保存[3];野生型 SEC2 蛋白纯品由作者实验室表达纯[8]; 6～8w龄雌性BABL/c小鼠购于辽宁长生生物技术有限公司。
1.1.2 试剂
T4 DNA连接酶为Takara大、Pyrobest DNA聚合酶、核酸限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ及DL2000 DNA分子量Marker均购自Takara大连公司;Ni-NTA亲和层析柱为Novagen公司产品;卡那霉素、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑盐(MTT)均为Sigma公司产品;胰蛋白酶为北京索莱宝科技有限公司产品;RPMI-1640细胞培养基和胎牛血清(FBS)为Gibco公司产品;胶回收试剂盒和Super-Bradford蛋白定量试剂盒和购自北京康为世纪生物科技有限公司;引物由上海生工生物工程技术服务公司合成;DNA测序由北京华大技术服务公司完成;其他化学试剂均为国产分析纯试剂。
1.1.3 仪器
PTC-200型PCR仪(美国MJ Research公司);Soniprep 150型超声波破碎仪(日本SANYO公司);NJ-2100型酶标仪(美国InterMed公司);IM型倒置显微镜(日本Olympas公司);WJ-3型加湿CO2培养箱(日本Harasawa公司)。
1.1.4 培养基
细菌培养基:LB培养基;细胞培养基:加10%胎牛血清的 RPMI-1640培养基。
1.2 方法
1.2.1 SEC14-239M表达载体的构建
接种含重组质粒pET-28-sec14-239的工程菌接种于LB液体培养基(含60 μg /ml 卡那霉素)37℃培养过夜,取适量的菌液按照质粒DNA提取试剂盒说明书提取包含有sec14-239 DNA片段的重组质粒pET-28-sec14-239。以质粒pET-28-sec14-239为模板,应用over-lap PCR技术构建获得含有突变位点的sec14-239m基因[7],使用引物见表1,端引物SEC2 F和SEC2R由作者实验室前期设计[4]。将经over-lap PCR构建得到的sec14-239m基因片段经切胶纯化后用EcoRⅠ 和XhoⅠ内切酶进行双酶切,与经同样酶切处理的表达载体pET-28a进行过夜连接,所得连接产物转化感受态细胞 BL21(DE3),LB平板(含60μg/ml卡那霉素)筛选阳性克隆,并将阳性克隆测序。
a氨基酸替换情况;b下划线部分代表氨基酸替换位点。a Amino acid substitution;b The substituted amino acids are indicated underlined.
1.2.2 SEC14-239M蛋白的表达纯化
将测序正确的阳性克隆菌E.coli BL21(DE3)接种于LB液体培养基中(含60 μg/ml 卡那霉素),37℃继续培养到菌液OD600约为0.6时,按体积比为1:1 000加浓度为1mol/L 的IPTG,并30℃诱导表达4h。菌液于5 000r/min 离心10min收集菌体,菌体重悬于平衡缓冲液(10mmol/L imidazole,500mmol/L NaCl,50m mol/L NaH2PO4,pH 8.0)中超声破碎,至菌液清亮后10 000r/min离心25min收集上清。上清通过 Ni亲和层析纯化获得SEC14-239M蛋白纯品,于透析液(PBS缓冲液,pH 7.4)中充分透析除盐,收集纯化蛋白,并以SDS-PAGE分析其纯度。纯化后的蛋白按照Super-Bradford蛋白定量试剂盒测定方法测定蛋白浓度。过滤除菌后保存于-70°C待用。
1.2.3 体外诱导小鼠脾细胞增殖活性的检测
6～8w龄的实验小鼠劲椎脱臼处死,75%酒精浸泡消毒min,取脾脏、研磨于200目钢丝网过滤,1 000r/min离心10min离心弃上清。加入无菌红细胞裂解液(Tri-NH4Cl溶液)裂解红细胞,用RPMI 1640 培养液洗涤,离心收集细胞。用RPMI 1640培养液(含10% 胎牛血清)调整细胞密度为1×107个/mL。以100μl /孔加入96孔细胞培养板中。经梯度稀释后的SEC14-239、SEC14-239M蛋白及野生型SEC2以100 mL/孔加入上述各孔,使终浓度分别为10ng/ml、100ng/ml和1 000ng /ml。以10%胎牛血清的RPMI 1640培养基做阴性对照,每个蛋白浓度3次重复。
将上述培养板在37℃、5% CO2 条件下培养72h。待到达培养时间后,向各孔中加无菌的MTT溶液(5mg/ml),孵育4h,离心弃上清,以120μl/孔加 DMSO并在室温振荡10min溶解结晶颗粒。通过酶标仪以测定波长570nm和参比波长630nm 测定各实验孔的吸光值(OD)。计算细胞增殖能力,以增殖指数(proliferation index,PI) 表示:PI =试验组OD值/阴性对照组OD值
1.2.4 体外抗肿瘤活性的测定
将脾淋巴细胞和小鼠肝癌细胞Hepa1-6以20:1的效靶混合(细胞浓度分别为5×105 个/孔和2.5×104个/孔)接种到96孔培养板,每种蛋白分别以不同浓度加入96孔培养板,体积最终为200μl/孔。同时做本底释放组(加入与实验孔相同量的淋巴细胞和蛋白样品),肿瘤细胞对照组(仅加Hepa1-6肿瘤细胞) 及空白对照组(仅加RPMI 1640)。同样方法以牛血清白蛋白(BSA) 为阴性对照,每样3次重复。将96孔细胞培养板置于37℃、 5% CO2 的细胞培养箱中培养72h,然后向各实验孔中加入30μl无菌的MTT溶液(5mg/ml),连续孵育4h,将培养板离心弃上清,以120μl/孔加 DMSO并在室温振荡10min溶解结晶颗粒。
用酶标测定仪于570nm处测定吸光值,蛋白抑制肿瘤生长程度以肿瘤生长抑制率表示。
肿瘤生长抑制率(Tumor growth inhibition %) = 100-[(试验组-本底释放组)/(肿瘤细胞对照组-空白对照组)]× 100。
2 结果与分析
2.1 SEC14-239M蛋白的构建及表达纯化
为了将SEC14-239蛋白的7和9位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu,构建SEC14-239M蛋白。本研究先通过PCR技术构建获得了sec14-239m基因片段,并连接表达载体pET-28a,最终构建了含有编码SEC14-239M蛋白基因sec14-239m的重组表达质粒pET-28-sec14-239m。
重组表达质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,用含有卡那霉素抗性培养基筛选和DNA测序,最终确认获得正确的阳性克隆,用于SEC14-239M的表达纯化。纯化后的蛋白经过15%SDS-PAGE电泳检测纯度达到95%以上(图1),可用于后续实验。
1,SEC2;2,SEC14-239M;3,SEC14-239。
M,protein molecular weight standards;Lane 1,SEC2;Lane 2,SEC14-239M;Lane 3,SEC14-239.
2.2 体外刺激小鼠脾淋巴细胞活性检测
用MTT法检测各蛋白刺激小鼠脾淋巴细胞增殖能力。研究结果显示,SEC2、SEC14-239M和SEC14-239都可以在体外剂量依赖性的诱导淋巴细胞的增值。蛋白SEC14-239M的刺激T细胞增值能力较SEC14-239显著增强(P<0.05,图2),尽管弱于野生型SEC2,但与SEC2相比没有显著性差异(P>0.05)。结果初步说明通过替换SEC14-239中7和9位氨基酸残基而构建成的SEC14-239M蛋白,其超抗原活性有显著提高。
2.3 体外抑瘤活性
本实验以小鼠脾淋巴细胞和小鼠肝癌细胞Hepa1-6分别作为效应细胞和靶细胞(效靶比为20:1),检测各蛋白在体外诱导淋巴细胞对肿瘤细胞生长的抑制活性。研究结果显示,与阴性对照BSA相比,SEC2、SEC14-239M和SEC14-239均能诱导显著的抑制肿瘤细胞生长活性(P<0.01),并且呈剂量依赖性(图3)。同等剂量条件下,与SEC14-239相比,SEC14-239M的肿瘤细胞抑制活性显著提高(P<0.05),但也显著低于野生型SEC2(P<0.01),进一步说明7和9位氨基酸的定点替换增强了SEC14-239M的超抗原活性,尽管与野生型SEC2完整分子相比仍有显著差异。
3 讨论
Turner T N等人研究发现,SEC1中第20位的Leu和22位的Glu对SEC1与TCR的结合可能起到决定性的作用。而SEC2的第20位和22位氨基酸分别为Thr和Gly,这可能是导致SEC1较 SEC2超抗原活性高的主要原因[9,10]。
Bohach G A等人发现删除SEC1氨基端的1～13位氨基酸残基并不影响其T细胞刺激能力,而进一步的删除则导致SEC1活性的显著降低[11]。在此文献基础上,周隽逸等人利用基因工程技术对SEC2蛋白的氨基端和羧基端分别进行了删除改造。结果显示,截短SEC2的羧基端会导致蛋白的亲水性严重降低,不利于后续纯化,成药性很低。而截短氨基端的蛋白SEC14-239,保持了较好的亲水性,具有相当的可溶性表达能力,但其超抗原活性较野生型SEC2有所降低。主要原因可能是氨基端1～13位的截短影响了与之相邻的α3-螺旋的空间构象,使其发生改变,而α3-螺旋对于SEC2与TCR的结合起关键作用,该区域的结构变化导致SEC2结合TCR的能力降低,进而影响其超抗原活性[3]。
我们推测,增强SEC14-239的TCR结合能力将能够提高其超抗原活性。结合文献报导和前期研究基础,本研究中,我们将SEC14-239的第7位Thr和第9位Gly(即野生型SEC2中的20位Thr和22位的Gly)分别替换为Leu和Glu,得到截短突变蛋白SEC14-239M。生物学活性检测结果表明,SEC14-239M刺激T细胞的增殖能力和抑瘤活性均高于SEC14-239。这与文献报道的研究结果相似,证明通过定点突变技术来增强超抗原活性的方法同样适用于截短后的小型化蛋白。
同时,我们发现虽然SEC14-239M刺激T细胞增殖活性和野生型SEC2相当,但是前者的抑瘤活性却显著低于后者,这暗示了超抗原蛋白刺激T细胞增殖和诱导肿瘤细胞抑制并不完全关联。在T细胞增殖中,起决定作用的T细胞亚群主要为CD4+T细胞,增殖同时伴随大量细胞因子的释放[12]。而在超抗原诱导的肿瘤细胞抑制中,起主要作用的除了CD4+T细胞诱导的细胞因子作用外,还有CD8+T细胞介导的细胞毒性作用。通过CD8+T细胞介导的细胞毒性作用,超抗原可以实现对MHCⅡ阳性的肿瘤细胞产生毒性杀伤[13,14]。我们推测,尽管被删除的1～13位氨基酸不存在已经报道的MHCⅡ分子结合区域,但截短蛋白SEC14-239的MHCⅡ结合能力还是受到一定影响。SEC14-239M较SEC14-239相比,虽然增强了对TCR的结合能力,诱导激活了大量的CD4+T细胞,导致细胞增殖,但是并未增强与MHCⅡ分子的结合能力,因此在体外抑瘤实验中显示出低于野生型SEC2的结果。以上假设还需进一步的研究进行验证。
摘要：目的:分析金黄色葡萄球菌肠毒素C2的截短蛋白SEC14-239中7和9位氨基酸对其超抗原和抗肿瘤活性的影响。方法:利用基因工程方法将SEC14-239中7和9位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu后,获得截短突变蛋白SEC14-239M。体外细胞学实验对其超抗原活性和抗肿瘤活性进行分析。结果:突变蛋白SEC14-239M体外刺激小鼠T细胞增值活性较SEC14-239显著增强(P<0.05),与未截短的SEC2相当(P>0.05)。在相同剂量条件下,SEC14-239M诱导的抗肿瘤活性尽管低于SEC2(P<0.01),但要显著高于SEC14-239(P<0.05)。结论:截短蛋白SEC14-239的第7和9位氨基酸突变后能显著增强其超抗原活性和抗肿瘤活性,但二者增强程度有差异。这一结果说明以定点突变改造SEC2截短体的活性是可行的,同时也暗示超抗原的T细胞增殖和诱导肿瘤细胞抑制并不完全关联。