丝氨酸蛋白酶（精选十篇）
丝氨酸蛋白酶 篇1
1 资料与方法
1. 1 一般资料
选取2014 - 09 ~ 2015 - 06 在佳木斯大学第一附属医院妇科收治的术后的病理回报为子宫内膜异位囊肿的病患50 例作为实验组, 取异位和在位内膜组织, 分为异位内膜组和在位内膜组。另选同时期因子宫疾病 ( 排除子宫内膜异位症) , 行手术治疗的患者50 例作为对照组, 取其正常子宫的内膜为对照组。入选患者年龄34 ~ 47 岁, 平均 ( 38. 2 ± 9. 1) 岁, 平均初潮年龄 ( 14. 7 ± 2. 5) 岁, 所有患者月经规律者, 采集标本之日前6 个月内, 未接受过任何激素治疗者, 近6 个月内未有妊娠、哺乳等, 近6 个月内未接受过放疗、化疗、生物治疗者, 近1 年内未使用过宫内节育器者, 病理专家复核确诊病理切片。
1. 2 标本处理
①内膜组织: 将处理干净的病理组织置40g /L甲醛液中固定24h, 制成蜡块, 4℃ 保留; ②血清: 分别抽取所有研究对象手术当天及术后第7 天晨起空腹时外周静脉血2m L至促凝管内, 置水浴箱静止10min, 水浴箱的温度为37℃ , 然后离心8min ( 速度:4000r / min) , 取上清液体置于干燥的无菌管内, 置-80℃ 环境中冷藏保存备测。
1. 3 实验方法
采用SP法检测Htr A1 在各种内膜组织中表达;外周血清中Htr A1 浓度采用ELISA法进行检测。Htr A1 抗体及血清试剂盒均来自于哈尔滨市南岗区赛特生物技术工作室。按试剂的说明进行各项实验操作。
1. 4 结果判定
每个标本做切片3 张, 每张切片在 × 400 倍镜下取4 个互不重叠的视野, 计数100 个细胞, 共400个细胞, 并数出染色细胞的数量, 计算该切片 ( 即该标本) 的染色细胞所占比例= 染色细胞总数/400 ×100% 。Htr A1 染色结果判定: Htr A1 主要在细胞核内表达, 为棕黄色或黄褐色颗粒。阴性- ) : 染色细胞比例≤5% ; 弱阳性 ( + ) : 染色细胞比例在6% ~25% ; 中等阳性 ( ) : 染色细胞比例在26% ~ 50% ;强阳性 ( ) : 染色细胞比例> 50% 。
1. 5 统计学方法
采用SPSS17. 0 软件进行统计学分析, 对计数资料用 χ2检验, 对计量资料用t检验, 所得数据均已均数 ± 标准差的形式表示, P < 0. 05 有显著差异。
2 结果
2. 1 Htr A1 在内膜组织中的表达
经统计学分析显示EMT组Htr A1 在异位及在位内膜的阳性表达率显著低于对照组 ( P < 0. 05) ;且在位的内膜组的阳性表达率显著高于异位的内膜组 ( P < 0. 05) 。见表1, 图1。
2. 2 血清中Htr A1 的表达
Htr A1 在EMT组术前血清中浓度显著低于对照组 ( P < 0. 05) 。术前外周血中Htr A1 的水平均显著低于术后第7 天 ( P < 0. 05) 。见表2。
3 讨论
Htr A家族广泛存在于微生物及动植物组织中, 目前发现在多种病理生理过程中均有该家族成员参与, 如细胞凋亡、生长、衰老及应激反应、癌症、关节炎等[4]。Htr A1 是近年来新发现的丝氨酸蛋白酶家族成员之一, 该因子在原发性肝癌、卵巢癌、宫颈癌及子宫内膜癌中均呈低度表达, 并随肿瘤恶性程度的升高, 其下调性表达越明显, 表明Htr A1 具有肿瘤抑制效应[3~6]。EMT虽为良性病变, 但是生物学行为却具有恶性肿瘤的特征 ( 侵袭性、远处转移等) , 本研究结果显示Htr A1 在EMT患者异位的内膜表达低于对照组, 表明Htr A1 可能参与盆腔内其他部位EMT的进展过程。
本实验结果显示, Htr A1 在EMT患者在位的内膜中表达明显低于对照组别, 经统计学分析差异有意义, 提示从生物学行为的角度, 在位的内膜与正常子宫的内膜具有差别, 在位的内膜的生物学行为可能是EMT发生过程中一个比较重要的因素, 从而验证了“在位内膜决定论”。卵泡抑素 ( follistatin FS) 和Htr A1 的N末端区域具有高度相似性, FS是TGF- β 的拮抗剂, 因此提出Htr A1 是一种新型的TGF- β 拮抗剂[7]。诸多研究提示TGF - β 在EMT异位病灶中表达显著升高, Htr A1 可拮抗TGF - β 信号通路的活化, 抑制细胞增殖, 表现为肿瘤抑制效应。本实验结果表明Htr A1 在异位、在位内膜及对照组中的表达呈上升趋势, 异位病灶的形成涉及了细胞增殖过程, 因此表现为增殖抑制效应的Htr A1的表达受到抑制甚至无表达, 削弱对TGF - β 及TGF - β 介导的信号通路效应, 导致TGF - β 内腹腔内异位病灶处高表达, 促进异位的内膜的增殖以及存活, EMT进展过程起到重要的作用。
本实验还检测了所有患者血清中Htr A1 的浓度, 结果示EMT组低于对照组, EMT组术前血清中Htr A1 的浓度低于术后第7 天, 表明其可能具备血清标志物的特性, 可能具有一定的临床价值, 或许可为EMT的术前诊断及预后随访提供新思路。但本次实验研究样本量较少, 实验数据存在一定误差和局限性, 需待更多严谨的设计, 大量的样本, 多中心进行的临床研究进一步明确其相关临床意义。
综上所述, Htr A1 在EMT患者异位和在位的内膜及血清中表达低于对照组, 但是术后第七天EMT患者薛强中的表达高于术前, 表明从组织学及血清学角度进行分析, Htr A1 可以作为EMT诊断及预后随访的血清标记物, 同时Htr A1 可能在EMT进展过程中起到一定的作用。
参考文献
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丝氨酸蛋白酶 篇2
采用农杆菌介导的.方法将高赖氨酸蛋白基因导入台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织中,经潮霉素筛选,抗性愈伤分化成苗, 共获得2株转基因植株.对这些植株及后代植株进行GUS染色和PCR及PCR Southern blot检测分析,确定高赖氨酸蛋白基因已整合到台粳9号基因组中,并能稳定遗传表达.经检测,转基因水稻糙米赖氨酸含量为0.349%,比对照提高29.3%;转基因水稻秸秆赖氨酸含量为0.341%,比对照提高8.3%.
作 者：蒋家焕 刘峰 许明 黄志伟 谢丽雪 郑金贵 JIANG Jia-huan LIU Feng XU Ming HUANG Zhi-wei XIE Li-xue ZHENG Jin-gui 作者单位：蒋家焕,JIANG Jia-huan(福建农林大学农产品品质研究所,福建,福州,350002;福建省农科院水稻研究所,福建,福州,350018)
刘峰,许明,黄志伟,谢丽雪,郑金贵,LIU Feng,XU Ming,HUANG Zhi-wei,XIE Li-xue,ZHENG Jin-gui(福建农林大学农产品品质研究所,福建,福州,350002)
丝氨酸蛋白酶 篇3
关键词：家蚕；pull-down；蛋白相互作用
中图分类号： S881.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0037-03
收稿日期：2014-03-03
基金项目：现代农业产业技术体系建设专项（编号：CARS-22）；江苏高校优势学科建设工程项目。
作者简介：王明慧（1986—），女，山东滨州人，硕士，主要从事家蚕资源与功能基因组学研究。E-mail：wangminghui.219@163.com。
通信作者：许雅香，副教授，主要从事家蚕资源与功能基因组学研究。Tel：（0512）65880260；E-mail：xuyaxiang@suda.edu.cn。Serpin全称为serine protease inhibitor，是一类能够抑制丝氨酸蛋白酶活性的超家族蛋白质，参与调节生物体内多种生理反应，包括血液凝集、纤维蛋白溶解、补体激活、免疫黑化、生长发育过程中组织构建等[1-5]。Serpin在昆虫各组织中均有分布，对昆虫的生命活动起到重要作用，目前关于家蚕Serpin的研究很多，但是几乎没有关于家蚕Serpin相互作用蛋白方面的研究，生物的生命活动主要体现在蛋白质水平，许多蛋白是通过与其他蛋白相互作用来发挥作用的，因此，研究蛋白质相互作用能更好地理解生物的生命活动。本研究原核表达并纯化了Bmserpin-3蛋白，应用pull-down及质谱技术筛选到Bmserpin-3的相互作用蛋白，并通过荧光定量PCR技术初步探索了这2个基因的组织分布，旨在为深入探讨 Bmserpin-3 的功能机制提供依据。
1材料与方法
1.1材料
家蚕品种为笔者所在研究室保存的大造，正常桑叶育，取5龄4 d幼虫的脂肪体，-70 ℃保存备用。Trizol RNA提取及M-MLV反转录试剂等化学常规试剂均购自宝生物工程（大连）有限公司。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
1.2重组表达载体的构建和鉴定
采用反转录的家蚕5龄4 d幼虫脂肪体的cDNA模板，PCR扩增serpin-3基因。引物为F：5′-CTAGCTAGCAACATAGATCCGAACACCCTAAG-3′（下划线为NheⅠ酶切位点）和R：5′-ACGCGTCGACCTATAGTACTTTATAATCCCCATCG-3′（下划线为SalⅠ酶切位点）。扩增条件是：95 ℃ 预变性 3 min；95 ℃变性30 s，60.4 ℃退火35 s，72 ℃延伸3 min，33个循环；最后72 ℃终延伸10 min。将PCR扩增产物与pET-28a（+）进行双酶切，然后再将其目的片段与 pET-28a（+） 连接，转化至E.coli Top10中，挑选阳性克隆进行酶切鉴定及测序检验。
1.3重组表达载体的诱导表达
含家蚕serpin-3全长cDNA的阳性菌株在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中加入诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）至终浓度为0.5 mmol/L，37 ℃诱导表达6 h后，4 ℃ 5 000 r/min离心10 min收集菌体，用PBS重悬，在冰浴中超声破碎，直到溶液变澄清。4 ℃ 5 000 r/min离心 10 min，收集沉淀即得包涵体形式的6His-Bmserpin-3。
1.4重组蛋白的纯化、鉴定
4 ℃ 5 000 r/min离心20 min收集细胞，以1 ∶20比例添加0.01 mol/L PBS （pH值为 8.0），在PBS中悬浮细胞，冰上超声后添加等量的蛋白loading buffer，蛋白样品煮沸5 min，5 000 r/min 离心20 min。上清通过SDS-PAGE（没有梳子）来纯化，锌染后，将胶条切成1 cm的条带，装到透析袋里，4 ℃ 透析过夜。用Brandford法检测蛋白含量后，-20 ℃保存备用，将纯化好的蛋白用SDS-PAGE来鉴定。
1.5pull-down筛选与Bmserpin-3重组蛋白相互作用蛋白
按照每100 mg组织加入1 mL裂解液的比例加入RIPA裂解液（使用前数分钟加入PMSF使PMSF终浓度为1 mmol/L），通过强烈的涡旋使样品裂解充分，5 000 r/min离心5 min，取上清，储存于-20 ℃冰箱中备用。用10 mL binding buffer 平衡250 μL树脂，将纯化后的Bmserpin-3蛋白与树脂在4 ℃下缓慢摇晃结合5 h，使Bmserpin-3蛋白与树脂充分结合，让蛋白液流出，用含50 mmol/L咪唑的Tris洗脱Ni2+柱，祛除未结合的Bmserpin-3蛋白，将1 mL血液总蛋白加入Ni2+柱中，与Bmserpin-3蛋白复合物共同4 ℃孵育过夜，使血液内靶蛋白与Bmserpin-3蛋白结合，从而形成树脂-Bmserpin3-血液总蛋白的复合物，用含50 mmol/L咪唑的Tris洗脱Ni2+柱，祛除未结合的血液总蛋白，用含 200 mmol/L 咪唑的 elution buffer洗脱液，将Bmserpin3-血液总蛋白复合物与树脂分离，收集洗脱液，12% SDS-PAGE分析收集的洗脱液。
nlc202309012308
1.6靶标蛋白基因的分布
采用Primer 5.0软件，引物如表1所示。采用SYBR PrimeScriptTM RT-PCR试剂盒测定，具体步骤按照说明书进行，反应程序为：95 ℃预变性1 min；95 ℃变性15 s，60 ℃退火 30 s，循环45次。反应体系为：SYBRPremix Ex TaqTM（2×） 10 μL，上游引物0.4 μL，下游引物0.4 μL，ROX Reference Dye Ⅱ（50×） 0.4 μL，DNA模板 2 μL，ddH2O 6.8 μL。反应过程由ABI7300荧光定量PCR仪（Applied Biosystems公司）软件自动设定，每个样品重复3次。表1实时荧光定量PCR的检测基因、内参照基因的引物
基因名称引物序列Tm（℃）Actin3F：5′-CGGCTACTCGTTCACTACC-3′；R：5′-CCGTCGGGAAGTTCGTAAG-3′59.27Bmsp-2F：5′-TTAATTCTGGCTGGGCTTGT-3′；R：5′-TTAGTTGGCTCACATCTTGG-3′ 55.80Bmsp-3F：5′-GATTTTAGCGGGGCTTATTG-3′；R：5′-AGTCCTGGGCGACTTTGTAG-3′ 55.80
2结果与分析
2.1重组表达载体的构建与鉴定
含有酶切位点NheⅠ、SalⅠ的引物扩增serpin-3基因的ORF，得到1 300 bp左右的条带，PCR纯化的目的片段与 pET-28a（+）连接后，转化至E.coli Top10中，挑选阳性克隆进行酶切鉴定（图1），条带约1 300 bp，表明重组质粒构建成功，命名为pET-28a-Bmserpin-3。
2.2重组蛋白的纯化与鉴定
重组质粒转化至E.coli BL21，经IPTG诱导表达重组 Bmserpin-3 蛋白，表达的蛋白多是以包涵体方式存在，用锌染、透析的方式进行纯化，结果如图2所示，SDS检测到1条单一的约49 ku的蛋白条带。
2.3重组蛋白相互作用蛋白的鉴定
样品组内形成树脂-Bmserpin-3-血液总蛋白的复合物后，先用含50 mmol/L咪唑的Tris洗脱，祛除非特异性结合，然后用含200 mmol/L咪唑的elution buffer洗脱液使 Bmserpin-3-血液总蛋白复合物与树脂分离，收集样品，后期用SDS-PAGE分析（图3）。可见与Bmserpin-3相互作用的3条蛋白条带。从SDS-PAGE胶上将3条蛋白条带切下，放入EP管中，加入胰蛋白酶进行胶内酶切，然后用LC-MS/MS技术对获得的3条蛋白条带进行分析（图4）。鉴定出的蛋白是家蚕储存蛋白、性别特异储存蛋白2，相关蛋白信息见表2。
2.4家蚕幼虫Bmsp-2，3在不同组织的表达变化
由图5可以看出，sp-2、sp-3在各个组织都有分布，且sp-2在脂肪体、血淋巴中表达量比较高；sp-3在精巢、脂肪体、血淋巴中表达量比较高。
4结论与讨论
蛋白质是生物生命活动的重要体现者之一，几乎参与生物所有的生命过程、细胞活动。它在体内主要通过与自身或其他蛋白质及核酸形成复合体来进行基因调节、免疫应答、信
表2相互作用蛋白相关信息
蛋白质名称基因登录号得分等电点分子量
（ku）性别特异储存蛋白2gi|1244307251015.7083.57家蚕储存蛋白gi|3793278111785.9083.04
号转导、细胞组装等生物学功能[6-7]。通过研究蛋白质之间的相互作用可获得更多的细胞功能信息。目前蛋白质相互作用的主要研究方法有酵母双杂交技术、免疫共沉淀法、噬菌体展示技术、pull-down技术、荧光共振能量转移（FRET）技术及生物信息学分析法等。已有学者利用pull-down 方法鉴定已知的2种蛋白质间的相互作用，或采用少量Ni2+-NTA agarose beads 在Eppendorf 管中进行小体积的pull-down[8-9]。笔者采用Ni2+-NTA agarose beads 柱使整个体系放大，更利于蛋白质的结合、洗脱，并结合质谱分析来筛选与Bmserpin-3相互作用的蛋白质。丝氨酸蛋白酶抑制剂在生物体内分布广泛，参与调节生物体内多种生理反应。研究发现，云杉卷叶蛾serpin-1在表皮中高表达，且在蜕皮期间的转录水平高于蜕皮期。烟草天蛾serpin-1mRNA在5龄幼虫脂肪体中含量丰富，但在蜕皮、化蛹时mRNA水平骤然降低[10]。冈比亚按蚊serpin-2与丝氨酸蛋白酶CLIPB9结合调节黑化反应，此外CLIPB9与serpin2的相互作用还影响雌性成虫寿命[11]。果蝇serpin27A与serpin28D都参与了先天性免疫反应，但果蝇serpin28D只参与由创伤引起的酚氧化酶激活产生的黑化，serpin27A在酚氧化酶激活路径中调节病毒或病原菌引起的黑化[12-13]。果蝇中serpin43AC参与了toll途径调节的先天性免疫反应[14-15]。研究发现，冈比亚按蚊中serpin10在中肠上皮细胞聚集与疟疾病原体的传播有关[16]。Serpin家族在昆虫的表皮、头部、血淋巴、脂肪体、丝腺、中肠、精巢、卵巢中均有分布，对家蚕的各种生理活动起到调节作用[17]。董照明等认为，serpin-16在维持丝腺稳定的泌丝环境中发挥重要作用[18]。查宏贤研究表明，家蚕serpin-4参与了先天性免疫反应[19]。王彦云等证实serpin-6与家蚕表皮黑化、蜕皮变态、先天性免疫等生理过程有关[20]。李国胜等推测serpin-5与家蚕的生殖生理有关，可能参加了家蚕的先天免疫反应[21]。serpin-3是以单体的形式发挥作用还是与伴侣分子一起作用或是与其他蛋白质形成复合物来发挥作用还不得而知。本研究选择适宜大分子量蛋白质的六聚组氨酸作为标签，构建了家蚕serpin-3六聚组氨酸蛋白，并以此为饵蛋白，采用His-pull down技术，从家蚕血液中调取了2个与该蛋白相互作用的蛋白。它们均是血液储存蛋白，同源性很高，与β-芳基储存蛋白亚基（烟草天蛾）、芳基储存蛋白（棉铃虫）、血清储存蛋白2（印度蚕）具有很高的同源性，功能也相似，主要是参与免疫、信号传导。对家蚕幼虫sp-2、sp-3在不同组织的表达变化分析可知，sp-2在脂肪体、血淋巴中表达量比较高，sp-3在精巢、脂肪体、血淋巴里表达量比较高。
丝氨酸蛋白酶 篇4
本实验拟分析丝氨酸蛋白酶抑制因子(Maspin)基因检测在乳腺癌骨髓微转移(bone marrow mi-crometastasis,BMM)诊断中的作用,以指导临床治疗和预后评估。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010 年12 月-2014 年8 月在湖南省长沙市第一医院行手术治疗的乳腺癌女性患者58 例。中位年龄46 岁。所有患者经病理检查确诊,术前未接受放射及化学治疗,常规检查血清钙、碱性磷酸酶及肝、肾功能,行乳腺钼靶照片、胸片、腹部、盆腔B超及全身发射型计算机断层扫描(emission comput-ed tomography,ECT),以排除远处转移。按照国际抗癌联盟(Union for International Cancer Contro,UICC)2010 年肿瘤TNM分期标准:Ⅰ期12 例,Ⅱ期29 例,Ⅲ期17 例。伴有腋窝淋巴结转移35 例,无腋窝淋巴结转移23 例。按照1982 年WHO乳腺肿瘤组织学类型分类标准:浸润性导管癌53 例,浸润性小叶癌3 例,导管内癌2 例。随机选取乳腺良性肿瘤,并排除合并身体其他部位恶性肿瘤的患者15 例。其中,纤维腺瘤14 例,导管内乳头状瘤1 例;年龄16~63 岁,中位年龄34 岁。健康者(单纯乳腺增生)10 例;年龄20~45 岁,中位年龄35 岁。以15 例乳腺良性肿瘤及10 例健康者骨髓标本为阴性对照组。本研究得到医院伦理委员会批准,所有患者签署知情同意书。
1.2 仪器和试剂
ABI PRISM 7300 荧光定量聚合酶链反应(re-al-time fluorescent quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)仪(美国Ap-plied Biosystems公司),连续光谱荧光酶标仪(美国Thermo Electron Corporation公司),Trizol Reagent(美国Invitrogen公司) 置于4℃冰箱保存,One Step SYB Prime ScriptTMRT-PCR kitⅡ(大连宝生物工程有限公司)置于-20℃冰箱冷冻保存,PCR引物(大连宝生物工程有限公司)。
1.3 研究方法
1.3.1 骨髓取样骨髓取样采用三点取材法(双侧的髂嵴和胸骨),取乳腺癌患者及非乳腺癌患者骨髓血进行研究。
1.3.2RTFQ-PCRRTFQ-PCR检测骨髓血中Maspin m RNA。1引物和探针。Maspin m RNA正向引物:5'-CTGACAACAGTGTGAACGACCAGA-3',反向引物:5'-GACAACGTGGCCTCCATGTTCATC-3',理论产物166 bp;以18 S r RNA作为内参照,正向引物:5'-ACTCAACACGGGAAACCTCA-3',反向引物:5'-AACCAGACAAATCGCTCCAC-3';Taqman荧光探针:5'-CATACCGTCAGTTCTACT-3'。以羧基荧光素作报告集团标记探针5'-,四甲基罗丹明为荧光淬灭集团标记探针3'-。2PCR条件。总RNA抽提后参照大连宝生物工程有限公司的One Step SYB Prime ScriptTMRT-PCR kitⅡ说明书进行逆转录反应,总体积20μl。扩增参数:95℃预变性5 min,95℃变性30 s,62℃退火30 s,72℃延伸30 s,共40 个循环。反应结束后仪器自动计算样本中的起始浓度(拷贝/ml)。3结果判断。样本检测结果<103拷贝/ml的检测下限为Maspin m RNA低表达(阴性),≥103拷贝/ml为高表达(阳性)。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0 统计软件进行数据分析,计数资料以率表示,并行 χ2检验和Fisher确切概率法,Maspin m RNA与临床病理特征的相关性选用多因素Logistic回归模型分析,纳入自变量用Enter法,P <0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 骨髓中Maspin m RNA的表达
本研究构建的RTFQ-PCR检测Maspin m RNA方法特异性较好,熔解曲线未发现非特异性峰,实现定量扩增(见附图)。58例乳腺癌患者骨髓标本中,20例出现Maspin m RNA阳性表达,阳性表达率为34.5%(20/58)。15例乳腺良性肿瘤患者及10例健康者骨髓标本中阳性表达率为86.7%(13/15)和90.0%(9/10),显著高于乳腺癌患者(P=0.000)(见表1)。
2.2 Maspin m RNA在乳腺癌患者骨髓中的表达及与临床病理特征的相关性
Maspin m RNA阳性表达与乳腺癌临床分期、腋窝淋巴结转移呈负相关(P <0.05);与年龄、肿瘤大小、雌激素受体(estrogen receptor,ER) 和孕激素受体(progesterone receptor,PR)的表达无关(P >0.05)。见表2。
例（%）
例（%）
3 讨论
微转移是指采用常规的病理学方法在机体组织、体液及细胞移植物中难以检测到的微量肿瘤细胞,而采用免疫细胞化学法和分子生物学方法可检测到[4,5]。其中最为灵敏的是RTFQ-PCR,其在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程,通过加入已知浓度的标准样本绘制的标准曲线,推算出样本中初始模板的浓度,可定性、定量地检测微量的肿瘤细胞。目前的精度已达到107 个细胞中即能找出1 个肿瘤细胞。
通过检测肿瘤的微转移来监测肿瘤的发展趋势,在肿瘤可能转移的早期就进行干预,消灭潜在的微转移灶,对提高肿瘤患者的总体疗效和改善预后都有重大的意义。骨髓组织具有分子筛的作用,其血管内皮细胞含有许多肿瘤抗原的受体,能够粘附肿瘤细胞使其滞留在骨髓组织。由于骨髓独特的结构和血流特点,往往是肿瘤细胞血行转移最早到达并聚集成灶的组织,因而骨髓微转移的临床研究已引起广泛关注[6]。
骨髓是肿瘤细胞最易到达的部位,一旦出现就预示已发生远处转移。乳腺癌很易发生骨转移,死于乳腺癌的患者尸检中75%有骨转移。淋巴结与骨髓转移相互独立,检测淋巴结转移阴性患者的骨髓微转移有重要的意义。目前越来越多的资料表明,BMM与乳腺癌的生物学特性关系密切,BMM可以作为一个独立的预后因素。乳腺癌表达某些特异性的标志物,为检测骨髓微转移提供可能[7]。多项研究证实,腋淋巴结转移阴性患者中,骨髓微转移阳性者预后差[8,9]。有研究检测307 例患者,81 例骨髓微转移阳性者26 例复发,226 例阴性者34 例复发,骨髓微转移阳性者无病生存期和生存率明显下降[10]。BRAUN等[11]用抗细胞角蛋白单抗和免疫组织化学方法分别检测150 例淋巴结转移阴性Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者的骨髓及淋巴结微转移。结果发现,骨髓微转移阳性率为29%(44/150),淋巴结转移阳性率为9%(13/150),多因素分析证明,骨髓微转移是独立预后因素,建议以此作为分层因素,选取淋巴结转移阴性患者进行术后化疗。目前,国际上也正在进行这方面的随机研究,以明确其相关性。骨髓微转移有望成为腋窝淋巴结转移阴性者术后化疗的参考依据。
Maspin基因位于染色体18q21.3,其蛋白属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族,卵清蛋白亚族,在肿瘤侵袭转移中起重要作用[12]。LELE等[13]研究表明,Maspin在乳腺细胞表达。STATHOPOULOU等[14]用巢式逆转录聚合酶链反应技术对乳腺癌患者Maspin m RNA表达进行研究,认为Maspin m RNA仅在乳腺癌中表达且与细胞角蛋白19 m RNA、癌胚抗原m RNA有相对很高的特异性。近年有研究证明,Maspin m RNA可作为乳腺细胞的特异性标志物[15],并可能成为乳腺癌治疗的特异性靶标。
丝氨酸蛋白酶 篇5
构建了一个植物高效表达质粒，使来源于四棱豆(Psophocarpus tetragonolobus (L.)DC)的高赖氨酸蛋白基因(lys)受控于单子叶植物ubiqutin强启动子下表达。用基因枪法将其导入水稻(Oryza sativa L.)幼胚诱导的愈伤组织，经潮霉素抗性筛选，得到可育的再生植株。经PCR和Southern blotting检测，表明该基因已整合到水稻的基因组中。GUS组织化学染色表明转基因水稻植株的叶、茎和根中均有gus基因的.表达。测定11株转基因水稻叶片中赖氨酸含量，大部分植株有不同程度的提高，最高幅度为16.04%。
作 者：高越峰 荆玉祥 沈世华 田世平匡廷云 Samuel S.M.SUN 作者单位：高越峰,荆玉祥,沈世华,田世平,匡廷云(中国科学院植物研究所，北京 100093)
Samuel S.M.SUN(香港中文大学)
丝氨酸蛋白酶 篇6
【关键词】同型半胱氨酸；尿微量白蛋白；肌酐；糖尿病肾病；诊断
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2016）01-0035-01
糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病患者临床中最常见的微血管并发症之一，其发生机制多与肾小球硬化，肾脏代谢功能紊乱有关，如不及时治疗甚至会导致肾功能衰竭[1]。DN的临床症缺少特异性，在确诊时通常已为晚期，而且治疗难度较大，因此早期诊断对DN至关重要。本文中将以2015年1月至2015年12月期间我院肾脏内科及内分泌科住院部收治的60例Ⅱ型糖尿病患者作为研究对象，探讨Hcy、UmAlb/UCr检测在糖尿病肾病早期诊断中的意义，具体报告如下。
1资料与方法
1.1临床资料
选取2015年1月至2015年12月期间我院肾脏内科及内分泌科住院部收治的60例Ⅱ型糖尿病患者作为研究对象，其中男性37例，女性23例；年龄43-76岁，平均（59.26±11.63）岁；病程1-10年，平均（5.76±1.24）年；所有患者入院后均经相关检查确诊，符合世界卫生组织糖尿病专家委员会于1999年制定的关于Ⅱ型糖尿病的相关诊断标准[2]。按照其24 h UAER将其分为NA组、MA组与DN组各20例，同时选取此期间内在我院行健康体检的20例健康人员作为健康组，其中男性12例，女性8例；年龄45-74岁，平均年龄（58.36±7.32）岁；病程1-12年，平均（5.09±1.54）年；且4组在性别、年龄等一般资料方面无明显差异，具有可比性。
1.2检测方法
所有受试者均禁食8 h后于次日清晨采集空腹中段晨尿5 ml，同时采集空腹静脉血液样本4 ml，并经低温离心机行血清分离；Cr检测采用苦味酸法，Hcy检测采用免疫比浊法，UmAlb检测采用乳胶免疫透射比浊法。
1.3统计学方法
应用 SPSS20.0软件分析，计量数据采用均数±标准差（ ±s）表示，组间比较采用t 检验，P<0.05，差异具有统计学意义。
2结果
经研究发现，DN组的血清Hcy水平与UmAlb/UCr值均明显高于其他各组，具有统计学意义，P<0.01；其中MA组的血清Hcy水平与UmAlb/UCr也明显高于NA组与健康组，具有统计学意义，P<0.01；NA组与健康组之间比较无明显差异，不具有统计学意义，P>0.05，见表1。
3讨论
研究发现绝大多数糖尿病患者伴有不同程度的Hcy代谢异常，其能够破坏细胞膜的完整性，从而导致糖尿病微血管并发症的发生的，因此高Hcy血症是DN的重要独立危险因素[3]。UmAlb是是肾小球滤过功能损伤的标志，但是单纯的UmAlb水平受多种因素制约，而UmAlb/UCr的水平可以作为糖尿病肾病患者早期肾损伤判断的重要指标[4]。
本组研究中，DN组的血清Hcy水平与UmAlb/UCr值均明显高于其他各组，MA组的血清Hcy水平与UmAlb/UCr也明显高于NA组与健康组，而NA组与健康组之间比较无明显差异，说明在糖尿病肾病的早期诊断中采用Hcy联合UmAlb/UCr检测，对病情的确诊具有重要的指导意义。
参考文献：
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丝氨酸蛋白酶 篇7
1 血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C测定方法
Cys C的测定方法很多, 包括单向免疫扩散法、酶免疫测定法、时间分辨荧光免疫法、放射免疫法、乳胶颗粒增强免疫比浊法等。目前, 我国临床实验室测定Cys C的方法主要有颗粒增强散射免疫比浊法 (PENIA) 和颗粒增强透射免疫比浊法 (PETIA) 2种。PETIA:将抗胱抑素C、Ig G共价结合到均一的胶乳颗粒上, 与抗原结合形成的免疫复合物被聚乙二醇一6000沉淀, 在特定的波长处比浊, 与同样处理的校准液比较, 计算标本中胱抑素C的含量。此法反应时间短, 精密度好, 检测范围宽、黄疸、溶血和脂血标本均不受影响, 是目前使用非常广泛的一种检测Cys C的方法。PENIA:将抗人胱抑素C的多克隆抗体标记在聚苯乙烯胶乳颗粒上, 利用胶乳颗粒增强的免疫散射比浊法测定。此法优于PETIA法, 反应时间短, 精密度好, 检测范围宽, 不受血红蛋白、胆红素和甘油三酯、类风湿因子和骨髓瘤异常蛋白的影响。但试剂成本较高, 需要特定的检测仪器。
2 血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C临床应用
2.1 Cys C与肾移植
肾脏移植目前已成为治疗终末期肾病最有效的方法, 因此肾脏移植手术后移植肾的功能监测成为临床工作之重点。王盛华等人的研究发现, Cys C在肾移植后诊断急性排斥反应时明显优于血清肌酐, 即Cys C比Scr提前 (2.7±1.8) d升高;与排斥前比较, Cys C升高148.9%, 远高于Scr的43.9%。Le Bricon等也曾报道, Cys C在排斥时比Scr升高得更早、更明显, 更有利于肾移植的临床监测。
Cys C在肾移植术后诊断感染时虽然升高幅度与Scr无明显差异, 但比Scr早 (4.4±1.5) d出现变化, 有利于早期发现, 这对肾移植患者来说有重大临床意义。
2.2 Cys C与肝脏疾病
Cys C在肝脏疾病患者中显著升高, 且慢性肝炎、肝硬化和肝癌均有不同幅度的升高变化, 推断Cys C与肝病的严重程度相关。血清Cys C在乙肝、丙肝、肝硬化及肝癌升高的阳性率分别为90%, 93%, 100%, 100%, 高于常用的生化指标。该研究还发现:各肝病组ALT、AST、GGT、TBIL等指标与正常对照组比较差异非常显著, 但各肝病组间差异不是很明显。
2.3 Cys C与糖尿病肾损害
糖尿病肾损害的主要病理改变为肾小球基底膜受损, 而作为全部肾功能单位滤过率的总和, GFR是评价肾功能受损的一项好的指标, 国内外很多研究都说明Cys C在评价肾损害比Scr要更为灵敏、特异。糖尿病肾病是糖尿病常见而严重的并发症, 其早期诊断和治疗极为重要, 微量清蛋白是实施干预治疗的关键时期。
2.4 Cys C与肿瘤
Strojan等收集了82例头、颈部鳞状细胞癌患者的癌组织和其相匹配的癌旁组织, 应用ELISA对组织中Cys C的浓度进行检测。他们在将癌组织与癌旁组织中的Cys C的表达量进行统计学分析后发现, 肿瘤样本Cys C的平均浓度要比癌旁组织低了1.18倍 (P=0.041) , 其中喉部肿瘤Cys C平均浓度要比其相匹配的正常组织中的量低1.42倍 (P=0.029) , 而非喉部肿瘤与其相匹配的癌旁组织间未发现明显差异。
2.5 Cys C与心血管疾病
Cys C与动脉硬化研究发现, 在血管平滑肌细胞中有该组织蛋白酶抑制剂Cys C的表达, Cys C可通过人类多核细胞趋化性的抑制而在人类免疫防御中其作用。在血管损伤后炎症因子产生增加, 轮流刺激血管损伤处促使胱氨酸蛋白酶含量增加, 加速血管损伤, 而这一作用可被Cys C所抗衡。然而在动脉粥样硬化及腹主动脉瘤的损伤处Cys C的表达则严重减少。Per等检测了急性心肌梗死患者急性期、恢复期及健康对照组的血清Cys C水平, 发现两者的Cys C水平均显著低于健康对照组, 提示Cys C的血清浓度改变, 在一定程度上可以作为急性心肌梗死诊断的参考指标。
摘要：随着医学上对血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的深入研究, 发现其不仅在肾脏疾病方面有临床价值, 而且在肝脏疾病、糖尿病、肿瘤等方面也具有一定的价值。本文旨在研究血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的测定方法及临床应用。
关键词：血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,测定方法,临床应用
参考文献
[1]顾万建, 张春兵.胱抑素C在心脑血管疾病中的研究进展[J].国际检验医学杂志, 2007, 28 (12) :1120-1121.
[2]王盛华, 杨小静, 邹雄.血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在肾移植功能检测中的应用价值[J].中华检验医学杂志, 2007, 30 (11) :1223-1226.
丝氨酸蛋白酶 篇8
1 资料与方法
1.1 临床资料
研究对象为2008年1月~2011年1月本科诊治的90例急性肾损伤患者,所有患者均经血、尿、影像学和组织学检查确诊,诊断标准参考2005年急性肾损伤网络(AKIN)制定的急性肾损伤共识[6]:肾脏功能或结构方面异常,时限不超过3个月;48h内血肌酐上升26.5μmol/L或较原先水平增高50%;和(或)尿量减少<0.5ml/(kg.h),持续6h以上(排除梗阻性肾病或脱水状态)。根据AKIN共识分级标准将研究对象分为AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组,每组研究对象各为30例AKI患者,另以门诊体检的30例正常健康患者为对照组(CON组),患者临床资料见表1,四组患者在性别、年龄、体重指数方面具有可比性,差异无统计学意义(P>0.05)。
1.2 观察指标及检测方法
抽取患者空腹肘静脉血,检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C):(1)Scr和BUN采用日立全自动生化分析仪检测,采用MDRD公式计算肾小球滤过率(GFR)=170×Scr-0.999×年龄-0.176×BUN-0.17×白蛋白×0.318(女性×0.762);(2)Cystain C,采用Behring免疫散射比浊法,正常参考值0.55~1.15mg/L。患者病情评估采用急性生理学及慢性健康状况评价(APACHEⅡ)、简化急性生理学评分(SAPS)和脓毒症相关性器官功能衰竭评分(SOFA)。
1.3 统计学分析
采用SPSS12.0软件进行数据处理和统计分析,计量资料采用(x±s)表示,多个样本均数间的多重比较采用Student-Newman-Keuls检验,计数资料采用c2检验。P<0.05认为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 生化指标对比
AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组患者血清Scr、BUN和Cys C显著高于CON组(P<0.05);AKI1期组、AKI2期组和AKI3期血清Scr、BUN、GFR和Cys C的差异具有统计学意义,Scr、BUN和Cys C随着AKIN共识分级增加而增加(P<0.05),GFR随着AKIN共识分级增加而降低(P<0.05)(表2)。AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组患者血清Cys C均与血清Scr和BUN正相关(P<0.005),与GFR负相关(P<0.005)(表3)。
2.2 病情严重程度与Cys C相关性分析
AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组病情严重程度APACHEⅡ、SAPS和SOFA评分患者均与血清Cys C正相关(P<0.005)(表4)。
3 讨论
随着对急性肾衰竭的病理生理及发病机制的研究深入,发现在致病因子的作用下尽管有些患者已发生不同程度的急性肾功能损伤,但尚未进入肾衰竭阶段,故近年来学者趋向于用急性肾损伤取代急性肾衰竭的概念,认为更能贴切的反应疾病的基本性质,可将急性肾衰竭的临床诊断提前,对于其早期诊断和治疗机降低病死率具有重要意义[7,8]。急性肾损伤的诊断主要依赖于Scr、BUN和尿量的改变,而这些指标影响因素众多,且只有在肾功能明显受损时才能检测出变化,无法真实同步地反应肾脏损害,因此急需一种新的AKI诊断生物学标记物[9]。Cys C由机体的有核细胞产生,产生速度恒定,可经肾小球自由滤过,在近曲小管被重新吸收并降解,肾脏是Cys C清除的唯一器官,血清Cys C主要由GFR决定,是一种理想的反应GFR变化的内源性生物标志物。研究表明,血清Cys C可作为急性肾损伤的诊断标准,较Scr改变能提前1~2d反应肾功能损害,使早期发现肾小管损害的灵敏指标,并与肾小管损害程度密切相关[10,11]。
Cys C在检测GFR方面具有较Scr更高的敏感度和特异性,有可能取代Scr和GFR应用于急性肾损伤的诊断。本研究结果表明,AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组患者血清Scr、BUN和Cys C显著高于CON组(P<0.05);AKI1期组、AKI2期组和AKI3期血清Scr、BUN、GFR和Cys C的差异具有统计学意义,Scr、BUN和Cys C随着AKIN共识分级增加而增加(P<0.05),GFR随着AKIN共识分级增加而降低(P<0.05),该结果与其它研究报道基本一致。AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组患者血清Cys C均与血清Scr和BUN正相关(P<0.005),与GFR负相关(P<0.005);AKI1期组、AKI2期组和AKI3期组病情严重程度APACHEⅡ、SAPS和SOFA评分患者均与血清Cys C正相关(P<0.005),这些说明Cys与病情严重程度密切相关,可反应病情严重程度而可应用于急性肾损伤的预后评估。
综上所述,急性肾损伤患者血清Cys C显著高于正常健康人,且随着分级增加而增加,与病情严重程度密切相关,做反应体内肾功能损害程度,敏感度和特异性显著高于Scr和GFR等传统指标,可作为急性肾损伤诊断和预后评估的生物标志物,但本研究病例数较少,对血清Cys C与急性肾损伤远期预后的关系未作研究,更准确的结果有待于进一步研究。
参考文献
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丝氨酸蛋白酶 篇9
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2011年1月-2013年12月我院收治的急性脑梗死患者120例作为观察组, 均经头颅CT或MRI证实, 均符合全国第四届脑血管病学术会议脑血管疾病分类和诊断标准。其中男75例, 女45例;年龄48~76 (62.62±11.42) 岁;病程12~48 (31.22±7.68) h;神经功能缺损评分 (7.18±2.13) 分。另选取我院同期收治的健康患者110例作为对照组, 年龄46~72 (61.45±10.95) 岁。2组脑梗死患者性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 方法
2组患者均于晨起空腹抽取静脉血5ml, 置于促凝管中, 室温离心10min, 转速3000r/min, 取血清置于冰箱-70℃冷冻待测。应用酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测血清MMP-9水平, 采用循环酶法测定Hcy, 并进行比较。
1.3 统计学方法
计量资料以±s表示, 组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
观察组血清MMP-9及Hcy水平均高于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。
注:与对照组比较, *P<0.05
3 讨论
以往大量临床报道脑梗死与超敏C-反应蛋白、D-二聚体等因素相关, 可作为预测、诊断、治疗该病的重要指标, 同时在脑梗死患者的诊治过程中给予高度重视。但近年来少数文献报道脑梗死患者的MMP-9和Hcy水平升高, MMP-9和Hcy与脑梗死患者存在相关性[5,6]。为进一步探讨脑梗死的发病原因, 更好地预防脑梗死的发生, 本文对MMP-9和Hcy在脑梗死中的意义和作用进行探讨。
MMP-9是一类锌原子依赖性内肽酶, 属胶原酶, 正常时以酶原的形式存在, 在细胞外激活。MMP-9可降解细胞外基质及基底膜中的Ⅳ型胶原, 此过程参与了脑梗死的发病, 病理情况下可破坏基底膜、血脑屏障[7]。Hcy是一种非必需氨基酸, 体内不能合成, 需从食物中摄取, 含有硫基, 人体内的含量甚微。Hcy的代谢酶功能缺陷可引起Hcy代谢紊乱而引起高同型半胱氨酸血症。高Hcy通过氧自由基介导引起血管内皮损伤, 促进血管平滑肌细胞增殖, 增加血小板的黏附性, 引起动脉硬化[8]。
本结果显示, 观察组患者血清MMP-9及Hcy水平均高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。急性脑梗死患者血清MMP-9及Hcy水平均明显升高, 提示血清MMP-9及Hcy可能参与了急性脑梗死的发生和发展, 可作为急性脑梗死的诊断依据, 了解病变程度。
摘要：目的 探讨急性脑梗死患者血清基质金属蛋白酶-9 (MMP-9) 及同型半胱氨酸 (Hcy) 检测的临床意义。方法 选取2011年1月-2013年12月该院收治的急性脑梗死患者120例作为观察组, 另选取同期该院收治的健康患者110例作为对照组。应用酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测2组血清Hcy及MMP-9水平, 并进行比较。结果观察组患者血清MMP-9及Hcy水平均高于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论 急性脑梗死患者血清MMP-9及Hcy水平均明显升高, 提示血清MMP-9及Hcy可能参与了急性脑梗死的发生和发展, 可作为急性脑梗死的诊断依据, 了解病变程度。
关键词：脑梗死, 急性,血清基质金属蛋白酶-9,同型半胱氨酸,临床意义
参考文献
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丝氨酸蛋白酶 篇10
1 资料与方法
1.1 一般资料
利用LIS数据库的数据导出功能以Excel2003的格式导出2010年6月-2013年2月的901名包含Cys C的儿童生化筛查组合结果数据, 其中男485名, 女416名;排除严重的全身疾病及血清标本为溶血、黄疸或脂浊者。
1.2 标本采集处理
静脉血的采集由护士完成, 采集2ml左右血样置含惰性胶体促凝集真空管内, 室温静置至少0.5h后, 800g离心5min分离血清, 标本采集后8h内完成检测。
1.3 仪器和试剂
Modular DPP全自动生化分析仪购自Roche公司;Cys C透射比浊检测试剂盒购自广东虹业抗体科技公司。
1.4测定方法
采用液相透射比浊法在Roche生化仪上按说明书要求测定临床标本, 样品中的Cys C与试剂盒中Cys C抗体试剂发生抗原—抗体反应, 使反应液浊度增加, 并在一定范围内反应液浊度与所加入抗原的量呈线性相关。
2 结果
经单因素方差分析, 总体上2岁前相邻2组间差异有统计学意义 (P<0.05) , 各组间两两比较差异均有统计学意义 (P<0.05) 。3~4岁与4~5岁、12~13岁及13~16岁间差异有统计学意义 (P<0.05) , 而其他组间显示差异无统计学意义 (P>0.05) 。综合分析后最终分为5个年龄组, 即1~29d、1~3个月、4~11个月、1~2岁、2~16岁。lg (Cys C) 浓度在5个年龄组男性均值依次为0.224、0.170、0.112、0.061、0.011 (mg/L, lg) , 女性依次为0.222、0.164、0.089、0.057、-0.010 (mg/L, lg) , 其性别间差异无统计学意义 (P>0.05) , lg (Cys C) 浓度在上述年龄组间的均值依次为0.222、0.166、0.100、0.059、-0.0104, 经单因素方差分析, 总体上组间差异有统计学意义 (P<0.05) , 各组间两两比较差异均有统计学意义 (P<0.05) 。2岁前血清Cys C水平变化较大, 其中1个月内Cys C水平最高, 以后随着年龄增长而逐渐降低, 但在2~16岁总体趋于稳定。
3 讨论
Cys C与性别、年龄的关系尚有争论, 部分文献表明血清Cys C浓度几乎不受年龄、性别、肌肉、体质量等因素的影响, 但也有文献报道年龄、性别等可影响血清Cys C水平[2]。笔者发现, 儿童Cys C水平与特定年龄组密切相关, 2岁前血清Cys C水平变化范围较大, 其中1个月内Cys C水平最高, 以后随着年龄的增长而逐渐降低, 但在2~16岁与年龄差别不大, 总体趋于稳定。Cys C水平在性别间差异无统计学意义 (P>0.05) 。结果显示, 1~29 d组为0.95~2.92 mg/L, 1~3个月组为0.81~2.67mg/L, 4~11个月组为0.65~2.45mg/L, 1岁组为0.56~2.35mg/L, 2~16岁组为0.45~2.13mg/L。本文中儿童Cys C随年龄的变化趋势与国外报道基本一致, 证实了新生儿Cys C水平最高, 以后随着年龄的增长而逐渐降低至成人水平, 新生儿期Cys C血清水平较高可能与出生后肾功能尚不完善有关。本文中儿童血清Cys C水平上限总体略高于国外报道, 可能与检测方法或试剂的差异有关, 另外, 种族的不同也可能与参考区间的差异等有关, 目前国内儿童Cys C水平参考区间的报道仍较少见[3]。
摘要：目的 探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (CysC) 与儿童肾功能相关性, 并分析CysC与年龄、性别的相关性。方法 从LIS系统导出2010-2013年包含CysC的1335名儿童生化筛查组合检测数据, 通过排除条件, 筛选出901名儿童为参考人群, 其中男485名, 女416名。CysC的测定采用液相透射比浊法在Roche DPP全自动生化分析仪上进行。结果 901名本地区儿童血清CysC浓度对数呈正态分布, 其男女间差异无统计学意义 (P>0.05) 。2岁前血清CysC水平变化较大, 其中1个月内CysC水平最高, 以后随着年龄增长而逐渐降低, 但在216岁总体趋于稳定。结论 儿童血清CysC参考区间与性别无密切相关性, 但不同年龄段之间变化较大, 临床应用CysC评价儿童肾功能时应考虑年龄因素。
关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,儿童肾功能,儿科学
参考文献
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