体外侵袭性

体外侵袭性（精选三篇）

体外侵袭性 篇1

关键词：胰腺癌,姜黄素,侵袭,转移

胰腺癌是较常见的消化系恶性肿瘤,该疾病的早期诊断十分困难,多数新发病例已存在周围器官侵犯和/或远处转移[1]。因此,探索有效的抗胰腺癌药物对降低胰腺癌死亡率极其重要。近年来,研究发现姜黄素(curcumin)具有较强的抗炎、抗氧化和抗肿瘤特性[2,3,4,5,6]。但姜黄素对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响尚未明确。本研究拟探讨姜黄素对胰腺癌PANC-1细胞体外侵袭和转移的影响,为姜黄素的进一步应用提供实验借鉴。

1 材料与方法

1.1 材料

细胞株及实验试剂人胰腺癌细胞系PANC-1购自上海细胞生物学研究所,细胞培养采用含10%胎牛血清(杭州四季青生物有限公司)的DMEM(赛默飞世尔生物化学制品有限公司)高糖培养基(内含1%的青霉素和链霉素)。姜黄素、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于Sigma公司。Transwell小室及聚碳酸酯购自Corning公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及处理

胰腺癌PANC-1细胞培养于含10%FBS的DMEM高糖培养基中,置于37℃,5%CO2潮湿空气的培养箱中培养,每48 h换液传代1次,倍增时间约24 h。取2代生长良好,细胞活性大于98%的细胞进行实验。用不同浓度的姜黄素(10μmol/m L、20μmol/m L、30μmol/m L和60μmol/m L)作用后收集细胞进行相关检测。

1.2.2 MTT法(比色实验)测定细胞增殖

取对数生长期的PANC-1细胞,调整细胞浓度为2×104个/m L。取3块96孔培养板每孔接种细胞悬液200μL,设未加药细胞组、姜黄素组(设10μmol/m L、20μmol/m L、30μmol/m L、60μmol/m L 4个浓度于细胞80%处于融合状态后加药),每组设5个平行孔。置37℃、体积分数5%CO2饱和湿度孵箱内培养。分别培养24h、48h和72 h后弃上清,每孔加入MTT 20μL(5 mg/m L)及无血清DMEM 200μL继续培养4 h,取出后2 000 r/min(r=15 cm)离心10min,弃上清,每孔加200μL DMSO震荡10 min,用酶标仪测定波长570 nm的吸光值(A)。实验重复3次,取平均值。计算药物在不同浓度、不同作用时间对PANC-1细胞的抑制率。细胞生长抑制率=1-(A实验组-A空白)/(A对照组-A空白)×100%。

1.2.3 Transwell小室检测细胞体外侵袭能力

在Transwell小室上下室之间置8μm聚碳酸醋滤膜,上室底部涂上Matrigel 50μg/孔(Matrigel:serumfree DMEM=1:3)后,置于37℃,5%CO2潮湿空气的培养箱中24h,取出制胶完成的Transwell侵袭小室。因20μmol/m L姜黄素处理后细胞活力与10μmol/m L没有显著的差别,为证明姜黄素对胰腺癌PANC-1具有剂量-效应关系,故选用10μmol/m L的姜黄素浓度与30μmol/m L的姜黄素浓度处理后进行比较;而60μmol/m L的姜黄素浓度处理后胰腺癌PANC-1本身的抑制率已经超过50%。Transwll实验结果是累计数目的结果,24h后一般细胞还有可以穿透胶的活力,而超过48h后PANC-1细胞活力大部分丧失。侵袭实验与细胞本身活力有关,故一般超过20%致死率浓度不采用,超过48h的时间点不采用。因此取对照组和实验组10μmol/m L、30μmol/m L浓度姜黄素处理48h细胞,消化离心后调整细胞密度为3×105个/m L,分别取200μL接种至上室,置于24孔板内,同时在下室中加入含10%FBS的DMEM高糖培养基600μL,培养48 h后,取出小室,用棉签头擦掉Matrigel胶,PBS液洗3次,800μL的冰冻甲醇中固定。常规甲紫染色,完整取下小室膜反面贴在载玻片上。结果判定:200倍光镜下,计数每膜5个随机不同视野的穿膜细胞数,取均值,每组平行设3个小室。实验重复3次。

1.2.4 统计处理

计量数据资料用±s表示,用t检验和方差分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 姜黄素对胰腺癌PANC-1细胞增殖能力的影响

分别采用10μmol/m L、20μmol/m L、30μmol/m L和60μmol/m L的姜黄素浓度处理胰腺癌PANC-1细胞。结果显示姜黄素对胰腺癌PANC-1细胞增殖有抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。并随时间延长和药物浓度加大而增强,即呈时效、量效依赖关系(P<0.05),见图1。

表1 姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响(n=3)

注:与对照组比较:*P<0.05;A表示吸光值。

图1 姜黄素对PANC-1细胞的生长抑制作用

2.2 Transwell侵袭实验

如下图所示,10μmol/m L姜黄素处理组(B组)、30μmol/m L姜黄素处理组(C组),PANC-1细胞穿过侵袭小室的侵袭细胞数与对照组(A组)侵袭细胞数相比较,较高浓度的姜黄素处理后的胰腺癌PANC-1细胞穿过的数目明显减少(A组穿透细胞数约:300;B组穿透细胞数约:237;C组穿透细胞数约:132),差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

胰腺癌具有恶性程度高、进展快、转移早、预后差等特点,号称“癌中之王”。虽然近年来胰腺癌的发病率和死亡率在缓慢下降,但胰腺癌仍是癌症相关死亡的第四大原因。目前胰腺癌的5年生存率仅为4%,而1年生存率也只有21%[7],主要原因为大多数患者就诊时已经发生了远处转移。因此,抑制胰腺癌侵袭转移的治疗策略一直是肿瘤研究的热点。近年来,癌症的多学科综合治疗得到了极大发展。我国传统医药在肿瘤治疗中地位愈发受到重视。姜黄素已被证实对包括乳腺癌、胃癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞具有抑制作用[8,9,10]。但姜黄素对PANC-1细胞侵袭的影响至今尚未有文献报道,本研究采用Transwell方法探讨姜黄素在体外对PANC-1细胞侵袭能力的影响。我们的实验结果表明,姜黄素可抑制胰腺癌细胞增殖、生存,并证实了姜黄素对抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖具有时效、量效的关系,这与既往研究结果相一致[11,12]。为排除药物对细胞活性的影响,本次实验采用了低于20%的非致死浓度姜黄素处理PANC-1细胞,观察药物处理前后细胞侵袭能力的变化。肿瘤细胞分泌蛋白降解酶等降解细胞外基质是肿瘤细胞侵袭转移的重要步骤,侵袭小室实验即模拟了细胞外基质的环境,降解基质的肿瘤细胞要得以从低营养培养基迁移至高营养培养基中,通过检测穿过膜的细胞数可间接反映肿瘤细胞侵袭能力。本实验结果表明,姜黄素可显著抑制PANC-1细胞侵袭能力,有望用于抗PANC-1治疗,但其具体作用机制尚需进一步实验证明。在本实验基础上,可考虑在后续研究中探讨姜黄素在胰腺癌的动物模型中作用,观测其对转移、侵袭相关基因或信号通路影响,进一步揭示姜黄素抑制PANC-1细胞的机制,为胰腺癌综合治疗提供新思路。

A组:对照组PANC-1细胞

B组:10μmol/m L姜黄素处理后的PANC-1细胞

C组:30μmol/m L姜黄素处理后的PANC-1细胞

参考文献

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体外侵袭性 篇2

【关键词】侵袭性牙周炎；牙周基础治疗；疗效

【中图分类号】R524【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2015）01-0515-02

侵袭性牙周炎与慢性牙周炎不同，它是属于有家族聚集性的空腔科病症，而且侵蚀性牙周炎主要分为两种，第一种就是局限型牙周炎，第二种就是广泛型牙周炎，侵袭性牙周炎大部分都是病发在青少年当中，在成人当中也经常见到，可是病因比较复杂，一般齿良下菌斑是其主要的致病因素之一。侵袭性牙周炎一般像要成功得到有效治疗，必须要对其早期治疗进行把握，如果能得到早期的治疗，我们可以快速地清楚微生物，并且对牙周组织周围健康成长的环境进行一个快速的健康保养，这是牙周基础治疗最重要的手段之一。想要去除牙周袋内的菌斑，可以采用机械以及超声波。与侵袭性牙周炎相比，局限型牙周炎更具有破坏性，破坏更广泛、更严重，再加上受到宿主的免疫及微生物等因素的影响，其治疗效果不尽相同，而宿主是影响ASP预后的一个重要因素。

1材料和方法

1.1研究对象的选择

随机抽取2010年9月—2013年12月我院牙周科96例侵袭性牙周炎患者进行全面分析。其中局限型牙周炎患者40例，其中男性18例，女性一共是22例。广泛型侵袭性牙患者56例，其中男性一共是26例，女性是30例。患者的平均年纪是16—30岁，平均年龄24.6岁。对研究对象的身体健康程度、還有系统的严重性、妇女的对求研究对象身体健康，无严重系统性疾病。

1.2研究方法

对患者最开始的诊断，一定要对其全额口腔进行拍摄，并且要利用Florida探针对患者的全口天然牙的牙周探诊深度和临床附着丧失，以及牙齿松动度。我们可以将医生的编号采用统计学随机数字进行表示。在治疗的布局当中，会出现初诊情况，还有行全口跟上洁治术并进行口腔卫生宣教；在治疗之后的1、3、6个月后，需要分别进行复诊治疗。

1.4统计学分析

采用的是SPSS13.0软件对测量结果进行全面统计分析，另外采用LSD和方差法对牙周探诊深度临床附着丧失前后变化分析。

2结果

局限型侵袭性牙周炎和广泛型侵袭性牙周患者治疗前以及治疗后1，3，6个月进行对比分析，最后得知，局限型侵袭性牙周炎患者治疗后1，3，6个月的牙周探诊深度，临床附着丧失，出血指数较治疗前均有明显降低，且有统计学意义（P<0.05）；治疗后6个月与治疗后3个月比较，全口牙的探诊深度，临床附着丧失，出血指数的差异均无统计学意义（P>0.05）；

3结论

经过本次研究得知，侵袭性牙周炎患者的治疗采用牙周基础治疗是最有效的治疗方法，广泛型侵袭性牙周患者一般在治疗后恢复的时间比治疗后恢复的时间较局限型侵袭性牙周炎患者更长。由于侵袭性牙周炎患者中，广泛型侵袭性牙周患者占大多数，所以我们在对待这些患者治疗的同时必须要有一些耐心才可，还要建立一些良好的交流工作，这样更能提高我们内部的复诊效率。对于我们的治疗而言，广泛型侵袭性牙周患者的牙周组织破坏是比较严重的，我们必须要采取细致的治疗方法，尤其是在治疗患者后的1、3、6个月当中，这段时间，我们必须要对菌斑的治疗方法进行研究，而且还要采取认真的治疗方法，尤其在患者治疗后1，3，6个月复查当中，需要仔细检查对其下菌斑进行处理，避免出现患者的预后影响。由于受患者复诊率的影响，本研究治疗后3个月和6个月复诊的病例较少，这需要我们进行大量实验研究。

参考文献

[1]邵长艳，姜广水，吴钦贞，张士灵，兰晶.吸烟对牙周基础治疗效果影响的研究[J].口腔医学.2006（01）

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[4]卢淑青，修殿芳，密保琴.牙周基础治疗35例糖尿病性牙周炎的临床效果观察[J].中国社区医师（医学专业）.2013（07）

体外侵袭性 篇3

关键词：侵袭性牙周炎;牙周基础治疗;效果【中图分类号】R781.4 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602(2014)03-0038-01

临床中，牙周炎属于常见的口腔疾病，该疾病主要是因为致病菌侵袭口腔，引起了牙周组织的破坏，导致其炎，该疾病是一种慢性疾病。牙周炎会对患者的身体健康产生非常严重的影响，患者的工作和学习受到了极大的影响，因此其危害性还是比较大的。和慢性牙周炎比起来，侵袭性牙周炎是另外一种牙周疾病，临床中患者会出现咀嚼功能障碍。现在的社会发展比较快，大家的生活环境有了很大改善，而牙周疾病的发生率也是比较高，很多的人都对自身的口腔卫生疾病有所关注，因此口腔疾病的治疗也是发展非常的快速。亚洲基础治疗对于患者的口腔健康和口腔环境具有很大的帮助，能够提升治疗效果让患者的口腔疾病得到控制，改善其生活质量。

1 资料与方法

1.1 一般资料:2009年至2012年我院共接收40例侵袭性牙周炎患者，对其进行研究分析，共有女性17例，男性23例，患者最小是20岁，最大36岁。所有患者经过临床诊断，均符合侵袭性牙周炎的诊断标准。40例患者中一共涉及牙齿98颗，其中无松动的牙齿有29颗，有21颗牙齿为I度松动，有23颗牙齿为II度松动，有25颗牙齿为III度松动。所有患者在治疗之前的半年内，均没有进行过牙周系统治疗。

1.2 治疗方法:临床中为患者进行牙周基础治疗，医护人员在初期需要对患者的牙齿情况进行检查，根据患牙的情况来研究治疗方案，采取对应的治疗方法，再根据实际情况来选择龈下刮治术和龈上洁治术。医护人员对患者的牙周炎情况进行了解，用过氧化氢溶液为其清洁牙周袋，过氧化氢溶液的浓度控制在3%，并使用盐酸米诺环素软膏对牙周袋进行治疗。另外，对于存在松动情况的患者，需要使用舌侧强力纤维对存在松动的牙齿进行固定，患者每个月需要定期进行复查，护理人员需要对固定效果以及治疗效果进行检查以及记录。对于侵袭性牙周炎而言，单纯的刮治术无法对牙龈中的伴放线放线杆菌进行清除，因此需要在患者进行牙周基础治疗后，采用抗生素进行治疗，例如甲硝唑以及阿莫西林，甲硝唑剂量控制在每次200毫克，阿莫西林的剂量控制在每次500毫克，每天服用3次，患者连续使用7天。最后，护理人员还需要对患者落实健康宣教，从而将牙周健康以及口腔健康等知识进行宣传和普及，一般可以通过宣传册的发放以及举办相关的知识讲座等途径，从而使患者对疾病加强认识和了解，并让患者学会自主干预。

1.3 观察指标:对患者治疗前后的牙周改善情况以及牙齿松动情况进行评价和观察，牙周改善主要以牙周探诊深度（PD）、出血指数（BI）、附着丧失（CAL）以及菌斑指数作为内容。

1.4 牙齿松动分级。 牙齿松动主要分为I度牙齿松动、II度牙齿松动以及III度牙齿松动。其中I度松动主要是颊舌方向的松动，松动度在1毫米内。而II度牙齿松动则是指颊舌方向的松动度在1毫米到2毫米内，或者是存在颊舌方向以及近远中方向的动度。III度牙齿松动主要是颊舌方向的动度大于2毫米，或者牙齿松动存在颊舌方向、近远中方向以及垂直方向三个动度。

1.5 统计学方法。此次临床研究主要采用SPSS12.0软件对数据进行统计和处理，计量资料采用t检验，以P<0.05表示差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 牙周治疗效果对比分析。在对患者提供牙周基础治疗之后，进行了牙周深度、出血指数、菌斑指数等等的对比分析，其和治疗之前具有很大的改善，临床中患者获得了比较好的牙周治疗效果。

2.2 牙齿松动情况对比分析。经过基础牙周治疗，患者的牙齿松动情况有了很大的变化，治疗后，松动病例减少，说明牙周基础治疗可以缓解牙齿松动情况。

3 讨论

牙龈的微生態环境比较特殊，很容易残留致病菌，让其出现炎症反应，这也是牙周袋屡屡出现疾病的主要因素，牙周炎也是因此而产生。就口腔健康的研究表明，牙周炎对于人体口腔健康卫生具有非常大的威胁[1]。 有对侵袭性牙周炎的研究表明，青壮年群体是侵袭性牙周炎的主要危害对象，他们的发病过程比较长，因此在这一过程中比较难以察觉，而等到症状明显表现出来的时候，往往都是到了非常严重的时候，这样对治疗也造成了很大的影响。我国的经济发展比较快，社会生活水平比较高，大家对于自身的口腔疾病卫生比较关注，因此侵袭性牙周炎的就诊率也是很高的，其治疗也是有了很大的发展，基础治疗是现在对侵袭性牙周炎治疗比较有效的一种方法[2]。 牙周基础治疗对于侵袭性牙周炎具有非常好的效果，患者的牙齿松动情况得到了明显的改善。临床中，根据40例侵袭性牙周炎患者的治疗来进行研究分析，患者的牙齿松动轻获得了不错的治疗，而且牙周健康状态也有了很大的提升，说明临床牙周基础治疗对于侵袭性牙周炎具有非常好的治疗效果，临床中应用价值高，值得推广使用。

参考文献

[1] 刘萍，宋爱萍.侵袭性牙周炎患者牙周基础治疗的近期疗效观察[J].口腔医学，2009，13（5）：126-128.

[2] 曹小马，刘瑜，沈未伦.两组方法治疗慢性牙周炎疗效比较研究[J].中华全科医学，2011，10（5）：89-91.