细菌培养

细菌培养（精选十篇）

细菌培养 篇1

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验药物

庆大霉素、链霉素、林可霉素、头孢氨苄、菌必治等。

1.1.2 试验器材

生物显微镜、托盘天平、锥形瓶、电炉、载玻片、盖玻片、恒温培养箱、超净工作台、立式圆形压力蒸汽灭菌器、冰箱、接种环、酒精灯等。

1.1.3 试剂

乳糖、磷酸氢二钾、氯化钠、琼脂、胆盐、超纯水、中性红、结晶紫、95%乙醇、硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、蛋白胨水、葡磷胨水、拘橼酸盐、尿素、半固体琼脂、葡萄糖产气、赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖等。

1.1.4 试验动物

试验犬均来自云南农业大学动物科学技术学院动物医院 (西站) 及康大妈流浪动物收容所。首先进行犬健康状况状况调查, 调查内容包括品种、年龄、性别、体重、临床症状, 引起犬腹泻的原因。根据犬的临床症状:出现呕吐, 慢性肠卡他, 厌食, 稀便, 血便, 渐进性消瘦, 营养不良, 精神不振, 体温升高, 脱水等有典型腹泻症状, 经诊断后排除病毒性腹泻及寄生虫腹泻可能的犬。

1.2 试验方法

1.2.1 粪样的采集

在动物医院里, 由于不可能随时都能采到新鲜粪便样品, 所以采用棉棒采集每只试验犬直肠深部少量粪便直接涂片观察, 并编号记录被检犬的年龄、营养状况、品种、性别等, 并保存待检。本次试验粪样采集时间为0d:2010年4月20日, 采到3个样品分别编号1、2、3。1d:2010年4月21日采到4个样品分别编号4、5、6、7。2d:2010年4月22日采到3个样品, 分别编号8、9、10。本次采样的犬品种不一, 有北京犬、雪橇犬、金毛、博美等。年龄从1月龄至8岁之间。各个体的粪样分别取2份。

1.2.2 培养基制备

麦康凯琼脂培养基制备, 麦康凯培养基用于肠道致病菌的选择性分离培养。配方如下蛋白胨20.0g, 乳糖10.0g, 胆盐5.0g, 氯化钠5.0g, 中性红0.03g, 琼脂14.0g, pH值7.1±0.2, 加热溶解于1000ml蒸馏水中, 121℃高压灭菌15min备用。本次试验使用的是由上海市医学化验所试剂厂生产的麦康凯琼脂培养基, 取样品52g加入1000ml蒸馏水中混合放置10min微火煮沸使之完全溶解, 115℃高压灭菌15min备用。鉴定原理为蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子;牛胆盐可抑制革兰氏阳性菌的生长;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;乳糖为可发酵的糖类;中性红是pH指示剂, 细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。

1.2.3 粪样检测

每一个样品分别取少量的粪样经无菌纯水稀释后涂于载玻片上等干后用革兰氏染色法[5]染色之后进行镜检。

1.2.4 接种培养

将样品在超净工作台上分别接种到麦康凯琼脂培养基上, 并且标明接种的编号。接种时用采样的棉签轻轻涂抹于培养基的一头, 之后用接种环以“之”字型画开, 每涂过培养皿的一半时旋转90°, 接种环烧白灭菌后继续沿“之”字画开。接种完成后将培养皿放入37℃恒温培养箱培养24h。

1.2.5 生化鉴定

使用精氨酸、鼠李糖、乳糖、水杨素、甘露醇、蔗糖、七叶苷、半乳糖、果糖、山梨醇、葡萄糖、懒氨酸、麦芽糖、阿拉伯糖、棉籽糖、木糖、卫矛醇、甲基红实验、V-P试验、吲哚等分别配制生化鉴定管[5]。将培养皿中的典型菌种在超净工作台上接种至鉴定管中, 24h后观察结果。

1.2.6 药敏试验

使用药敏纸片呋喃妥因、链霉素、头孢氨苄、环丙沙星、妥布霉素、庆大霉素、卡那霉素、林可霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、四环素、氯霉素、菌必治做两组药敏实验。以上药敏纸片均产自杭州天和生物试剂有限公司, 执行标准:WS/T125-1999。

1.2.7 注意事项

在操作中严格按照无菌操作, 使用明火、电时注意自身安全。实时记录试验数据。严格按照操作规程操作, 注意保护设备安全完整。

2 试验结果

2.1 粪样检测结果

在每一个便样的镜检中视野内大量存在革兰氏阴性、中等大小、两端钝圆的短杆菌, 呈单个或多个散在排列。从形态和革兰氏特性上判断在视野中的细菌为大肠杆菌[6] (图1) 。

2.2 接种培养结果

所有麦康凯培养基中均有均匀红色, 边缘整齐, 中心突起, 中等大小, 表面光滑湿润的散在菌落长出。其中1号培养皿有菌落200个, 2号有菌落185个, 3号有菌落50个, 4号有菌落130个, 5号又菌落70个, 6号有菌落150个, 7号有菌落134个, 8号有菌落124个, 9号有菌落125个, 10号有菌落113个 (图2) 。

2.3 生化实验结果

见表1。

注:“+”产酸;“—”阴性;“○+”产酸产气。

2.4 药敏试验结果

见表2。

注:敏感度按《抗菌药物药敏试验判断标准》抑菌圈大于等于20mm为极敏, 大于等于15mm小于20mm为高敏, 大于等于10mm小于15mm为中敏, 小于10mm为耐药。

3 讨论

3.1 生化分析

生化试验结果与动物传染病书上大肠杆菌基本特性相符[8], 而且与王云峰等[9]、孙善发等[10]的试验结果相一致。该菌能够分解麦芽糖、果糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖、乳糖、山梨酸, 产酸产气, 不能产生硫化氢。因此从生化结果来看此菌种为大肠杆菌。

3.2 药敏分析

从药敏试验的结果来看, 该菌对头孢类, 和喹诺酮类[12]抗生素高度敏感, 但是林可霉素、四环素、庆大霉素的治疗效果不佳。这与有关的报道相符[11]。药敏试验说明该菌种已经对常用的药物产生耐药性。当前在犬细菌性腹泻的治疗中常常出现乱用抗生素, 或者使用了合适的抗生素却达不到良好治疗效果的现象。

3.3 犬病治疗中的误区

误区一:一泻就用止泻药。过早的服用止泻药, 或者是止泻药服用不当, 反而会延误病情, 甚至可以导致严重的并发症。误区二:先镇痛缓解腹泻, 感染性腹泻时可能会出现腹痛的现象, 一些犬主则习惯给犬服用654-2、颠茄片等止痛剂, 而且不按犬的的月龄, 随意使用。这种做法非常不安全, 因为止痛后, 不让肠蠕动, 会导致肠道蠕动功能瘫痪, 肠音消失或减弱, 容易引起肠黏膜脱落, 便血。误区三:一泻就吃消炎药, 许多人一看到犬腹泻, 就使用复方新诺明或诺氟沙星等抗生素。其实这种做法是不合适的。因腹泻有感染性和非感染性两类, 非感染性腹泻可由饮食不当、食物过敏、生活地域的改变、气候突变等原因引起, 此类腹泻使用抗生素治疗是无效的, 而应当服用一些助消化药或采用饮食疗法等。即便是感染性腹泻, 在选用抗生素时, 最好先做大便细菌培养, 明确致病菌种类, 再选用对细菌最敏感的抗生素进行治疗。切不可滥用抗生素。误区四:泻止就停药, 有的人腹泻常依症状服药, 即腹泻重时多服药, 腹泻轻时少服药, 稍有好转就停药。这样做很容易造成治疗不彻底而使腹泻复发, 或转为慢性腹泻, 给治疗带来很多困难[7]。正确的使用抗生素后, 就不能随便停用, 否则就容易使细菌产生耐药性。

3.4 试验犬与健康犬肠道菌比较

通过对引起犬细菌性腹泻的细菌进行分离鉴定得出的结果与健康犬的常规肠道菌进行对比发现。在正常的犬肠道内存在着许多种类的细菌其中包括需氧、兼性厌氧、厌氧细菌、真菌在内的45个菌属的约164种菌。涉及菌种包括链球菌、葡萄球菌、棒状杆菌、埃希菌、双歧杆菌、拟杆菌、乳杆菌、梭菌、念珠菌、青霉菌、地霉菌、毛霉菌与链格孢霉等[13], 通过对正常犬只的大便进行培养也证明了这点。而引起这次细菌性腹泻的细菌培养后主要得到的是大肠杆菌, 说明了这些犬的细菌性腹泻主要是由致病性大肠杆菌引起的。

4 结论

光合细菌培养条件的研究 篇2

光合细菌培养条件的研究

对光合细菌(PSB)培养的最适光照、温度、pH值、最佳接种量等条件进行了系统研究,结果表明:PSB生长环境的光照强度越大,生长速度越快,生物量也越大;其最适生长温度为30℃,最适pH值为7.5～8.5,最佳接种量为20%.

作 者：张峰峰 周可 赵玉洁 谢凤行 李亚玲 ZHANG Feng-feng ZHOU Ke ZHAO Yu-jie XIE Feng-xing LI Ya-ling 作者单位：天津市农业生物技术研究中心,天津,300192刊 名：天津农业科学英文刊名：TIANJIN AGRICULTURAL SCIENCES年，卷(期)：200915(2)分类号：Q939.11关键词：光合细菌 培养条件 生长

尿液细菌培养结果分析 篇3

【关键词】尿培养；检出率；病原菌分布

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）09-0393-01

随着科学技术的发展，检验技术也发生了突飞猛进的变化，随着抗生素和生物化学药品在各个领域的应用，使病原菌对抗生素的敏感性也发生了很大的变化。目前，国家卫生部门对抗生素的应用进行严格的规定，这就要求我们微生物室及时提供准确耐药信息。现将我院今年的尿液培养结果报告如下：

1 材料和方法

1.1 材料标本来源我院2011年7月--2012年6月疑为尿路感染住院病人的尿液。培养基：血液琼脂培养基。细菌鉴定仪：法国生物梅里埃鉴定仪。

1.2 方法一是采集样本接种，按《全国临床检验操作规程》进行，如果是男病人，可以告诉他，先用清水及肥皂把阴茎洗干净，然后用1：1000的新洁尔灭溶液泡洗阴茎10～15分钟（1：1000新洁尔灭给病人带走），然后留中段尿液。女病人留尿培养，首先用清水及肥皂把外阴洗干净，用1：1000的新洁尔灭把手消毒后再用1：1O00新洁尔灭棉球消毒尿道口，然后留中段尿，采集中段尿夜及时送检，将尿液用定量接种环定量接种于血液琼脂培养基上，置于35度孵箱培养18-24小时，观察细菌生长情况。若有细菌生长，立即涂片染色，细菌计数。二是分纯、细菌鉴定。按仪器说明书进行操作。

2 结果

2.1 335份尿液培养结果。335份标本检出72株细菌，检出率为21.5%.

2.2 72株病原菌的分布为大肠埃希氏菌46株，肺炎克雷伯氏菌8株，变形杆菌6株，阴沟肠杆菌3株，肠球菌3株，葡萄球菌2株，枸橼酸杆菌2株，假单胞菌2株。

2.3 检出病原菌的科室，泌尿外科44/199（检出病原菌数/送检样本数），内分泌科8/29，肾病内科6/28，神经内科4/9，心血管内科2/8，内科综合一2/6，骨科1/3，内科综合三1/3.儿科2/3，妇产科3/9，呼吸内科1/3.

2.4 检出细菌的72份标本中，53份尿液常规检验中检出白细胞.

3 讨论

3.1 我院尿液细菌检出率仅为21.5%，而国内文献报道可高达63%，差距很大，原因為我院未做L型细菌检测，而且L菌常规培养阳性率不高。现在知道L菌也存在于红细胞内，当红细胞裂解时此菌就大量释入于血中，故有学者就把采得的血标本用溶血法把红细胞溶解来培养L菌，结果常规培养检出率为1.4％（3/210份），溶血培养检出率为48.5％（102/210份），检出率明显提高[1]。

3.2 白细胞是机体抵抗内外环境中，有害因子的机构之一。 它对入侵的微生物和小颗粒的异物，有着吞噬作用，故有预防感染、对抗炎症和修复损伤组织的功能。中性粒细胞的颗粒为溶酶体，内含多种水解酶，能消化其所摄取的病原菌和异物。一般一个白细胞处理5-25个细菌后，本身也就死亡。死亡后的白细胞集团和细菌分解产物构成脓液。因此当泌尿系统有细菌感染时，尿液中就会出现白细胞。尿路感染诊断标准其中一项就是清洁离心中段尿沉渣白细胞数>10/HP，有尿路感染症状。我统计我院的尿路感染中有73%的尿液中有白细胞。

3.3 我院分离的病原菌分布情况与国内某些文献报道基本一致。

3.4 尿是血液流经肾脏时，经肾小球的滤过、肾小管和肾集合管的重吸收与分泌后生成，再流经输尿管，在膀胱内暂时贮存，最终排出体外。送检标本科室以泌尿外科为主，送检标本越多，更能反应病原菌真实的分布情况，以便能更好的为临床服务。这也是专科专治的必然结果。

综上所述，我院的尿液培养结果与国内的情况还有一定的差距，为了缩短和国内的差距，为了更好的为临床提供有效的诊断和治疗依据，应增加尿液L型细菌检测，和国内检验水平接轨。

参考文献：

[1] 马宗东，503例尿液标本细菌L型培养结果分析，中外健康文摘，2012.7.15-16.

细菌培养 篇4

关键词：细菌培养法,阴道细菌检验,应用价值

阴道炎是一种我国常见的临床妇科病, 其主要原因就是来源于阴道组织受到外界的细菌来袭, 加上患者自身的免疫力低下, 引起各种的情况反应。在正常的情况下, 阴道口会由外阴唇和小阴唇的双重保护下而不会让阴道受到细菌侵害, 但是由于阴道内部属于碱性环境, 由此可以帮助大多数的细菌生存。但是如果出现内分泌失调的情况下, 就很可能出现阴道炎。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013~2015年本院阴道炎患者100例作为研究对象, 年龄20~40岁, 平均年龄 (30.21±10.25) 岁, 病程3个月~3年, 均为育龄期妇女, 且知情达到同意。临床症状表现为:异味、外阴瘙痒、白带增多及分泌物居多等现象;排除近期服用过药物, 或是正处于月经期、妊娠期等。

1.2 方法

1.2.1对于细菌培养法患者进行分泌物收集, 患者用医用无菌面签插到阴道后穹隆处, 在其选择并以沾取患者的阴道分泌物来检测, 同时将其进行标签标记, 随后放入到二氧化碳的恒温箱中, 需要持续到48 h后, 会出现半透明的灰色光滑的菌群体, 最后作为鉴定。

1.2.2 PCR检查方法是需要选择含有阴道分泌物的生理盐水进行检测, 根据离管内的生理盐水计量进行选择女性阴道分泌物的剂量。将其投放入距离心机当中的离心处理检测, 转速设置为12000 R/min, 离心的时间必须达到统一的进行。在检测完毕后, 将清夜抽取后进行丢弃, 在去沉淀物当中进行实施进一步的检测。在样本当中填入具有碱性的液体, 将样本放置于水浴锅当中进行不断加热, 将水浴锅的温度控制在600℃左右, 水浴时间将设置成2 min左右, 然后利用同样的转动速度进行相同的做法, 时间也同样设置为12000 R/min, 待离心达到完成后, 选取试管当中的清夜作为模板, 将其放入到PCR内部的检测中心进行循环检测, 分析出阴道分泌物当中出现的菌类。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析, 计数资料以百分数 (%) 表示, 采用x2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

根据本次试验的检测分析, 采取细菌培养法的检查结果比PCR的检测效果明显, 细菌培养法检测率为85.0%, PCR检测率为60%, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。

3 讨论

阴道内出现细菌感染是造成女性阴道炎的主要原因, 通常情况下, 女性的阴道自身也是存在着大量的球菌和杆菌等, 但是由于女性的阴道内壁分泌物主要呈现碱性体质, 而这种环境下能够生存的菌类不多, 因此, 在阴道内部环境中细菌能够保持平衡[1]。但是如果女性内部的阴道里存在细菌的数量逐渐增多, 或是女性自身出现的免疫力低下等, 就会导致阴道内大量的益生菌出现死亡的现象, 从而打破阴道内部碱性环境的形成, 使细菌开始拥有大量的生活空间, 逐渐的在女性阴道内呈现大量递增繁殖[2]。而此时大量的细菌会由女性所引导的上表皮细胞新城代谢的运动而导致阴道内的酸碱性情况出现混乱。阴道内的细菌杆菌也是造成阴道炎等疾病发生的主要因素[3]。随着女性阴道内部环境的失调, 阴道的细菌可侵袭性增高, 稳定性较差, 女性会出现一些白带居多, 颜色较深、外部瘙痒等症状, 但是由于是初发病期, 情况较为轻、发病比较缓慢, 不容易引起女性们的注意, 一旦病情进一步的发展, 就会导致女性的盆腔以及腹部出现疾病, 严重时会直接导致女性出现不孕的现象[4]。由于女性的阴道内部属于无痛无知觉组织, 在前期出现病情时, 体现不出太大的感觉, 阴道内部也会出现疼痛感, 因为, 女性阴道是无痛体质, 所以只能在病情变严重时才能发现出自己的身体不舒服, 那时才去医院接受治疗时有些晚, 很多患者在发病的初期显示的临床状况比较轻, 因此, 难以加深重视, 从而丢失了良好的时机医治, 才会导致患者的病情不断增加、恶化, 如果不及时治疗, 很有可能会出现加重, 病情转移到盆腔的位置, 那么患者就会出现小肚子疼痛难忍, 腰酸痛的现象[5]。女性的盆腔是一个疼痛感极其严重的地方, 若是出现小肚子和腰部出现酸疼的现象就是形成了盆腔炎, 然而盆腔炎最为苦恼的地方就是, 会不断地折磨女性, 出现疼痛感, 甚至痛到无法动, 然而一旦有阴道炎转移到盆腔炎当中, 后果不堪设想。女性患有盆腔炎的话很难治愈, 其病情总是反复发作, 得不到痊愈。在妇科的临床数据分析当中, 采用传统的方式进行取出阴道的分泌物, 并采取细菌培养法, 这种方法的临床理论很简单, 因此, 在以往的早期治疗当中就已经成为了确诊阴道炎的重要指标。但是由于这种检测形式耗费的时间比较长, 并且由于采取的方法比较复杂, 对于实验室内部的环境要求也要高, 因此, 需要随着科学的发展, 需要对此方法进行不断地创新改进, 完善现代技术的进行, 寻找操作简单、便捷的方式。

综合本文的临床研究表明, 细菌培养法在阴道细菌检验中的应用价值是非常高的, 同时为患者的治疗质量提升到一个空间。

参考文献

[1]姚虹, 吕治, 苏建荣, 等实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌的方法及价值[J].现代中西医结合杂志, 2013, 22 (7) :768-770.

[2]欧志方.三种不同检验方法用于阴道细菌检验的比较分析[J].中外医疗, 2013, 7 (05) :171-172.

[3]史跃杰.99例阴道细菌的检验方法比较分析[J].现代预防医学, 2011, 38 (14) :2815-2817.

[4]潘杰, 李蔼文, 叶青.三种检测方法在细菌性阴道病快速诊断中的比较分析[J].国际医药卫生导报, 2013, 19 (22) :3471-3474.

分析6尿液细菌培养及药敏结果 篇5

1 资料与策略

1. 1 一般资料 本次共收集650例泌尿系统感染患者的尿液样本， 其中男性样本315例， 女性样本335例， 患者年龄20～61岁，平均年龄(40.5±8.8)岁， 患者病程最短2 d， 最长16 d，平均病程(6.9±2.6)d。所有患者均要求选取中段尿放于无菌容器中， 并于采集后的1 h内将尿液标本送检。

1. 2 培养策略 收集到标本后， 立即接种于血平板和麦康凯平板培养基， 在35℃条件下进行分离培养鉴定。药敏试验采用K-B法， 药敏试验评价标准采用美国临床实验室标准委员会制定的标准。

1. 3 质控标准参考菌株 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及白色念珠菌等菌株均购自原卫生部(现卫计委)临床检验中心， 1次/周对所有菌株进行室内质控。

2 结果

2. 1 病原菌分布 在培养的650例尿液标本中共分离出247株细菌， 检出率为38.0%。其中大肠埃希菌81株， 占全部病原菌的32.8%;金黄色葡萄球菌45株， 占18.2%;粪肠球菌38株， 占15.4%。具体分布见表1。

2. 2 药敏试验 将检出率较高的大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌对临床常用的12种抗菌药物的耐药性进行了分析， 详见表2 。81株大肠埃希菌中， 敏感性排在前三位的依次是氨芐青霉素/舒巴坦(84.0%)、哌拉西林他唑巴坦(75.3%)、阿米卡星(69.1%);45株金黄色葡萄球菌中， 敏感性排在前三位的依次是万古霉素(91.1%)、头孢他啶(66.7%)、氨苄西林(55.6%)。

3 讨论

细菌性尿路感染临床中是指由病菌侵犯尿路黏膜或组织， 进而引起的一种尿路炎症， 本病多发于女性患者， 属于临床常见的疾病之一[2]。但关于尿路感染病原菌的分布以及对抗菌药物的敏感性特点， 不同的文献报道并不一致， 这可能与菌种变异以及不同医院抗生素的使用情况不同导致菌群发生较大变化密切相关， 同时也可能与不同的地域特点有着一定的关系[3]。

室外培养参数对光合细菌生长的影响 篇6

关键词：光合细菌；室外；快速扩培

光合细菌（Photo Synthetic Bacteria简称PSB）是一类能够在厌氧和光照条件下进行光合作用且不产生氧气的一类细菌的总称。它广泛存在于自然界的湖泊、江河、海洋、水田、氧化池、活性污泥槽、污水沟内，其菌体营养丰富，细胞干物质中蛋白质含量达60%以上，而且蛋白质氨基酸组成齐全，含有机体必需的16种氨基酸且各种氨基酸的比例较合理。还含有丰富的B族维生素，尤其是维生素B12、叶酸、生物素等含量高[1]。大量的应用研究证明，光合细菌可明显提高养殖动物的生长速度和抗病能力，而且具有重要的优化水质，改善养殖环境的功能，在畜牧、水产养殖和环境污水治理等领域都有非常重要和广泛的应用前景。目前，对光合细菌培养条件的研究，国内外已有许多相关报道，但众说不一，均停留在室内用灯光培养。这种培养方式耗能大、成本高，不利于光合细菌的推广应用。因此，如何因地制宜利用空闲地在自然环境条件下快速扩培光合细菌已成为迫切需要解决的技术问题。为此，我们承担了广西直属公益性科研院所基本科研业务费专项资金自主选题项目“光合细菌快速扩培技术研究”，采用单因子优化试验考察不同的光照度、初始pH值、初始接种浓度、氧需求程度、摇动次数等对光合细菌生长的影响。

1试验材料

1.1试验菌株

试验菌株PSB由广西水产科学研究院南宁海可海乐微生物公司从高产虾塘底泥中分离获得并培养保存，经鉴定为红螺菌科沼泽红假单胞菌（菌株编号NC01），活菌数≥4×109个/mL，杂菌率≤10%，深红色，粘稠状液体。

1.2培养基

液体配方：使用广西水产科学研究院南宁海可海乐微生物公司优化筛选的扩大培养基，其基本成分如下[2]： CH3COONa 3.3 g、KH2PO4 060 g、NH4Cl 1.0 g、NaCl 2.00 g、 MgSO4·7H2O 0.3 g、CaCl2 50 mg、MnSO4 25 mg、FeSO4 5.00 mg、酵母膏 1.0 g、调节pH值至 7.0、曝气自来水 1 000 mL。

2光合细菌生长的测定

菌体浓度：用7504型分光光度计，在660 nm波长处，测定培养物光密度值（OD）；

细胞数量：用光合细菌基础培养基[3]，以平板菌落计数法测定。

3室外培养参数的优化

3.1光照度对光合细菌生长的影响

将活化后的菌种以30%接种于已灭菌的培养基中，置于室外自然光源下（温度控制在35 ℃左右），采用增减遮阴网疏密来调节光照度，设置5个梯度：分别为2 000、4 000、6 000、8 000、10 000 lx，每个梯度设置2个重复，静置培养6 d后取样测定，探讨其生长情况。

从表1可见，光合细菌在光照强度2 000～10 000 lx的范围内均可以生长，而且在2 000～8 000 lx范围内，光强度越大，光合细菌的生长速度就越快，生物量也越大，而且菌液粘稠均匀，无分层、无附壁。但在10 000 lx强光照度下，光合细菌的生长明显受到了抑制，菌液颜色发生变化且分层、附壁现象较严重。因此，光合细菌比较适宜在光强度为6 000～8 000 lx下培养。在实际批量生产过程中可采用增减遮阴网疏密来调节光照度实现室外自然光照培养。

3.2初始pH值对光合细菌生长的影响

先配制液体培养基，采用1 mol/L的醋酸和5%碳酸氢钠溶液调节液体培养基的初始pH值。共调节6个梯度，分别为6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0，每个梯度设置2个重复。将活化后的菌种以30%接种于已灭菌的培养基中，置于室外温度控制在35 ℃左右、6 000 lx光照度下静置培养6 d后取样测定，探讨其生长情况。

从表2得知，光合细菌在pH值6.5～9.0范围内均能良好生长，但不同的初始pH值对光合细菌生长产生不同影响。从测定的数据可以看出，各组之间，OD值、活菌数量差异明显。初始pH 7.0时生长最好，OD值达1.98、最高活菌数量达4.38×109个/mL，其次是pH 7.5。最差是pH 9.0，OD值为0.65、最高活菌数量1.44×109个/mL。由于光合细菌的代谢产物为碱性，随着培养时间的递增，各组pH呈现不断上升的趋势，光合细菌活菌数量也不断增加。因此，在培养过程中，必须随时测定和调整pH值，pH值过高或过低对光合细菌的生长都不利。为了延长光合细菌的对数生长期，当pH值上升超出最适范围时，可以采用加1 mol/L的醋酸溶液调整菌液pH值。

3.3初始接种浓度对光合细菌生长的影响

将活化后的菌种以10%、20%、30%、40%、50%接种于已灭菌的培养基中，每个梯度设置2个重复。置于室外温度控制在35 ℃左右、6 000 lx光照度下静置培养6 d后取样测定，探讨其生长情况。

从表3得知，初始接种浓度对光合细菌生长的影响很大，初始接种浓度越高，光合细菌的生长就越快，达到最高活菌数量的时间就越短。比较不同初始接种浓度对光合细菌生长的影响发现，初始接种浓度在20%～40%时对最终的生物活菌数量影响不大，而初始接种浓度在10%时，光合细菌在培养液中很难占绝对优势，培养初期易长杂菌，生长缓慢。初始接种浓度在50%时，生长速度快、很容易形成优势菌群而抑制其他杂菌生长、培养周期较短，但从大批量生产的角度来讲，成本相对较高；初始接种浓度低，培养周期相对有所延长，但成本降低。综合考虑各方面的因素，在室外大批量生产中，建议采用30%初始接种浓度，相对延长培养时间的方法来提高活菌数量。

nlc202309040128

3.4氧需求程度对光合细菌生长的影响

氧需求程度的调控设置3个梯度，分别为：完全厌氧培养、有孔瓶盖培养、开盖培养，每个梯度设置2个重复。将活化后的菌种以30%接种于已灭菌的培养基中，置于室外温度控制在35 ℃左右、6 000 lx光照度下静置培养6 d后取样测定，探讨其生长情况。

从表4得知，光合细菌在完全厌氧、有孔瓶盖培养、开盖培养条件下均能进行正常的生理活动。但不同的氧需求程度对光合细菌最终的OD值、活菌数影响还是比较大的。在有孔瓶盖培养条件下生长代谢最为旺盛，最高活菌数达4.31×109个。其次是完全厌氧，最高活菌数3.98×109个。最差是开盖培养，由于杂菌感染，生长缓慢最高活菌数仅有2.26×109个。完全厌氧与有孔瓶盖培养相比，差异不明显，但与开盖培养相比，则差异显著。由于是室外培养，考虑到受天气等外界条件的影响，因此采用完全厌氧培养方式是切实可行的。

3.5摇动次数对光合细菌生长的影响

摇动次数的调控设置3个梯度，分别为：每天摇动次数1次、2次和不摇动的培养方式。将活化后的菌种以30%接种于已灭菌的培养基中，置于室外温度控制在35 ℃左右、6 000 lx光照度下静置培养6 d后取样测定，探讨其生长情况。

从表5结果表明，在培养过程中适当摇动对光合细菌的生长还是非常有利的，摇动1次，2次的OD值、活菌数明显高于不摇动。适当摇动可以使沉底的光合细菌上浮，在培养液中分布更加均匀，更好地获得光照，从而促进细胞的更好生长。因此，在培养过程中建议每天摇动1～2次。

4结论

本研究结果表明，光合细菌快速扩培最为关键的技术问题就是创造有利于光合细菌生长的良好环境及减少杂菌的污染。其最适光照度6 000～8 000 lx、初始pH值为7.0～7.5、最佳接种量为30%、厌氧培养、每天摇动1～2次，一般培养6 d可使光合细菌活菌数≥4×109个/mL，杂菌率≤10%，为在自然环境条件下快速扩培光合细菌提供有效的技术支撑。

参考文献：

[1]

占家智，羊茜，吴青，等.水产活饵料培育新技术[M].北京：金盾出版社，2002

[2] 黎建斌，何为，李大列，等.高活性荚膜红假单胞菌分离鉴定及应用[J].南方农业学报，2012，34（4）：540-543

[3] 邱宏端，腾蓉，陈雷鸣，等.荚膜红假单胞菌应用型扩大培养液的优化实验[J].大连水产学报，2001，16（1）： 29-33

（收稿日期：2014-12-12）

痰细胞细菌培养的临床意义 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

所有痰标本来自东海县医院EICU从2010-06~2011-03下呼吸道重度感染的住院患者, 共42例126个标本, 全部在喉咙中有痰时采用无菌集痰器采集, 并在1h内进行处理。

1.2 方法

将42例患者随机分成实验组和对照组, 对照组进行常规痰培养, 痰细胞细菌培养组取痰液约1mL, 加4倍体积的0.1%二硫苏糖醇 (dithiothreitol) 去黏液处理。反复摇匀震荡, 使之成为均匀的混悬液[3], 再将其加于装有6mL 17%的蔗糖溶液的20mL离心管中, 2000转离心15min[4], 用吸管自上而下吸去上层液体, 更换吸管将管底细胞部分吸入5mL蒸馏水中, 均匀搅拌10min, 按常规接种培养鉴定和进行药敏试验;并根据药敏试验结果选用窄普抗生素, 足量治疗一周, 观察患者的治疗前后的胸片, 血象, 和发热三个指标。

1.3 观察指标

我们也通过观察细菌生长均一情况, 一致性, 和临床效果三个指标进行比较, 细菌生长情况通过直观的菌落观察;一致性通过对比同一病人三次培养结果, 如为同一菌种, 为一致, 两次为同一菌种为基本一致, 三次各不相同为不一致;药敏临床效果以病人治疗一周后, 胸片明显好转、发热控制和血象均恢复正常为感染控制, 否则为未控制。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0统计学软件。组间一致性比较采用两个独立样本的秩和检验, 组间疗效控制采用卡方检验, 均以P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

细菌生长情况, 所有实验组中菌落生长比较单纯, 但发现5例有2种细菌菌落按照相近的比例分布, 三次培养比例十分接近, 仅有7例有个别的杂菌菌落, 杂菌总数<3%, 培养一致性较高, 实验组21例中20例完全一致, 对照组却只有3例完全一致, 8例完全不一致;药敏临床指导效果实验组均完全控制, 而对照组却有6例完全没有效果, 且对照组未控制有1例放弃治疗

3 讨论

在呼吸道正常菌群中存在不少机会致病菌, 还有很多是下呼吸道定植菌, 对现行的肺部感染可能不负有责任, 在常规的痰培养中很难加以区分, 临床医生就更难以把握, 尤其对于ICU病人, 多数年龄较大, 同时存在其他器官功能障碍, 很少给临床留有充足的时间去观察, 很多在找到致病菌和敏感药物时已经错过最佳治疗时机, 所以我们需要最可靠的方法尽快明确致病菌及其敏感药物。

当微生物侵入人体大量繁殖并形成肺炎时, 会通过炎症反应趋化大量炎症细胞到病灶内, 利用体液免疫和细胞免疫来驱除这些入侵的致病菌, 巨噬细胞和中性粒细胞等吞噬病原微生物后会形成痰液的细胞部分[3,5], 随咳嗽排出体外, 但是有些细菌并不是被细胞吞噬后就会立即死亡, 在一定的时间内还是可以继续存活的, 而这部分被吞噬的细菌肯定要进入到粘膜下对感染负有责任, 如果选择性地对这部分细菌进行培养, 对我们临床诊断和治疗意义会是十分巨大的;而正常菌群和定植菌多不会进入人体粘膜下组织和引起机体的防御反应。

我们通过二硫苏糖醇对痰去黏液处理, 再利用蔗糖密度离心对不同直径和密度的颗粒进行有效的分离[6,7], 蔗糖溶液有着较大的粘度, 对不同大小的颗粒有较好的分离作用, 只需选择合适浓度的蔗糖及离心参数, 就能对吞噬细胞等细胞成分进行分离, 对这些细胞进行细菌培养, 就可以确切地找出感染的致病菌;虽然常规的痰培养和半定量培养对临床的治疗起到较大的作用, 但是其确切性和去除非致病菌方面还远达不到ICU救治危重患者的要求, 我们通过上述改进, 获得了十分满意的疗效, 但是实验例数还不多, 经验还较少, 希望在以后不断的应用中加以完善。

摘要：目的:探索痰细胞细菌培养的临床应用价值。方法:通过对痰标本的二硫苏糖醇的去黏液处理和蔗糖密度离心作用, 分离出痰中的吞噬细胞等细胞成分, 对其进行细菌培养, 并通过观察细菌生长情况, 一致性, 和临床效果进行比较。结果:实验组培养的病菌纯正, 一致性好, 临床治疗效果均具有显著差异 (P<0.01) 。结论:痰细胞细菌培养能够较好地反映出肺部感染的致病菌情况。

关键词：肺部感染,密度离心,致病菌,细菌培养

参考文献

胆汁标本219份细菌培养结果分析 篇8

1.1 资料

219份胆汁标本来自2005年2月至20088年6月本院胆囊切除或 (和) 胆总管探查术中患者。其中急性胆石症合并胆囊炎156例, 急性胆囊炎28例, 其他有化脓性胆囊炎、坏疽性胆囊炎、慢性胆囊炎及胆总管结石合并梗阻性黄疸等共35例。

1.2 方法

于术中无菌操作抽取胆汁5 ml, 手术台旁立即分别注入增菌液 (50 ml Oxoid) 和硫乙醇酸盐肉汤 (50 ml自制) 中做需氧菌增菌培养。疑有菌生长时移种血平板、麦康凯平板、厌氧血平板及沙保弱平板, 常规鉴定。疑难菌同时用MicroScan-4微生物自动分析仪 (美国DADE公司) 鉴定。

药敏试验用纸片扩散法。按美国临床实验室标准化委员会标准判定敏感 (S) 、中介 (I) 、耐药 (R) 。同时用金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、绿脓假单胞菌ATCC27853及粪肠球菌ATCC33186 (购自中国生物制品药品检定所) 进行质量控制。

2结果

219份胆汁标本中119份检出细菌, 阳性率为54.3%。共检出细菌13个属、21个种、133株。需氧菌中革兰阴性杆菌65株 (48.9%) , 革兰阳性球菌45株 (33.8%) 。厌氧菌株23株 (17.3%) 。检出率最高的需氧菌是大肠埃希菌 (21.4%) , 与国内报道一致[1] 。其次是肺炎克雷伯菌 (10.5%) , 第3位是表皮葡萄球菌与产气肠杆菌 (各占7.9%) 。还包括检出的多种葡萄球菌、肠球菌、醋酸钙不动杆菌、腐败假单胞菌、温和气单胞菌等。厌氧菌检出23株, 主要有脆弱类杆菌 (10.2%) 、产黑色素类杆菌、消化链球菌。有106份标本只检出1种细菌, 有14份标本检出2种细菌 (混合感染) 。检出菌均对头孢唑啉 (95.5%, 100.0%) 、头孢呋肟 (98.4%, 100.0%) 、头孢哌酮 (96.6%, 96.2%) 敏感。对其他抗生素敏感性亦不尽相同。如丁胺卡那霉素 (94.66%) 、万古霉素 (89.89%) 等。

3讨论

近年来, 胆汁中检出细菌种类增加较多。本文检出13个属, 21个种。分离的细菌多为1株, 少数有两种细菌混合感染。尚未见真菌引起胆道系统感染。

胆道系统感染过去常用的抗生素为大剂量青霉素类, 另加广谱抗生素;近年来, 不仅引起感染的细菌种类有所增加, 由于临床大量应用新的广谱抗生素, 使得这些菌产生耐药性。笔者的试验结果表明, 各种细菌共同敏感的抗生素是第一代、第二代、第三代头孢菌素, 对其他常用抗生素均有不同程度的耐药性。

一般从临床需要, 应根据细菌学的检查及药敏试验选择抗生素。但由于术前胆汁标本留取有一定难度, 且易受到消化道菌群的污染;胆道系统感染发病急, 而细菌学检查需时较长, 因此临床上主要靠经验用药。但细菌对抗生素的敏感性不是固定不变的, 任何一种抗生素在使用过程中都可能产生耐药性。因此经验用药也需不断调整。手术中应常规留取胆汁做细菌学检验, 最好能总结半年的感染细菌谱和对抗生素的敏感谱, 作为下半年临床经验用药的依据。并可作为手术后抗感染治疗的选药依据。

参考文献

痰标本直接涂片与细菌培养结果分析 篇9

1 资料与方法

1.1 一般资料

采集我院158例患者痰液标本, 其中呼吸内科115例, 其他科室43例。

1.2 方法

采集标本:嘱患者早晨空腹咳出深部痰用无菌痰盒送检。直接涂片:从收集到的痰中挑取脓性、血性、黏稠性痰液涂片, 待自然干燥后→酒精灯火焰固定→革兰染色→显微镜观察。低倍镜观察上皮细胞数量, 油镜观察白细胞的数量。一张合格的痰标本应该是上皮细胞<10个/低倍视野, 白细胞 (WBC) >25个/油镜视野, 可接受的痰标本为上皮细胞10～25个/低倍视野、WBC>25个/油镜视野。

痰液细菌培养:将痰标本接种在血平板、巧克力、麦康凯平板上, 并将接种的血平板、巧克力平板放置于35℃CO2孵箱培养, 将麦康凯平板放置于普通的培养箱培养24 h～72 h即可。

病原菌处理原则: (1) 优势菌:占50%量的菌类、每一视野>10个的细菌; (2) 占一定量并是明确的致病菌, 如金黄色葡萄球菌, 肺炎链球菌、β-溶血链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌和革兰阴性杆菌; (3) 对溶血葡萄球菌、非流感嗜血杆菌如占70%或100%量时也应报告提供医生参考; (4) 草绿链球菌、奈瑟菌、类白喉、凝固酶阴性葡萄球菌无充分理由不应作为致病菌报告; (5) 除呼吸道正常细菌外多于3种或3种以上菌时要考虑痰标本的口腔污染。

2 结果

158份痰标本均进行了直接涂片, 经质量鉴定158份痰标本中有95份为合格标本, 合格率为60.1%;用这95份合格标本进行培养, 阳性者56份, 阳性率为58.9%。其中细菌为47株, 革兰阳性菌17株 (为金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌) , 革兰阴性杆菌30株 (为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、阴沟肠杆菌) ;真菌检出率9株, 主要为白假丝酵母菌。

3 讨论

临床尿液细菌培养及药敏试验结果 篇10

1 材料与方法

本文资料均来源于某医院2008年1月—2009年10月门诊与住院病人细菌培养及药敏试验原始记录。

1.1 材料

超净工作台、生化培养箱、3 mm定量接种环、1～10 μl定量加液器、血平板、EMB平板、巧克力平板(含万古霉素)、MH琼脂平板、系列生化鉴定试剂盒(广东环凯)、肠道致病菌诊断血清。

1.2 方法

与门诊或住院病人预约,以无菌方法留取中段尿立即送检,用定量加液器取尿液5 μl,滴注在血平板培养基上,用接种环涂抹,待表面干燥后,血平板放35 ℃生化培养箱中过液,另不需定量直接划线接种一含万古霉素巧克力平板,置蜡烛缸中35 ℃培养24～48 h。计数血平板上的菌落数乘以200即为每毫升尿中菌数(若平板上菌落超过3种则可能被污染,应重留尿液培养),然后取相关菌落革兰染色(革兰阴性杆菌大于105 CFU/ml、革兰阳性菌大于104 CFU/ml有诊断意义)、分纯培养、生化鉴定和血清学鉴定,并用琼脂扩散法(改良K-B法)进行药敏试验[2](庆大霉素、阿米卡星、青霉素G、环丙沙星、头孢噻吩、复方磺胺甲恶唑、氨苄西林、卡那霉素、万古霉素、氯霉素、头孢唑啉、复方新诺明)。

2 结果

422份中段尿培养,有诊断意义(阳性)的198份,占46.9%。分离出致病菌223株,有25份分离出2种致病菌,占14.6%。422份标本,男167份,女255份,见表1。223株致病菌的分布情况见表2。药敏试验结果见表3(8株霉菌的药敏试验未作统计)。

注:革兰阳性菌共67株,占总株数的30.0%;革兰阴性菌共148株,占总株数的66.4%。

3 讨论

表1显示,422份中段尿尿培养阳性数女性明显高于男性,且其检出的阳性率也是如此,这与文献[3]报道的基本相符,但比文献[3]报道的要高。说明在该院就诊的泌尿道感染者中女性病人多于男性病人,一方面,可能由于女性泌尿道的解剖特点容易造成感染;另一方面,说明社会对女性泌尿生殖道保健知识的宣传普及还很不够。应引起有关部门的重视。

分离出的223株泌尿道感染病原菌构成中,66.4%是革兰阴性杆菌,30.0%是革兰阳性球菌,3.6%是霉菌,与文献[1,2,3]报道的基本相符,但比值远没有其显著。其中革兰阴性杆菌主要是大肠埃希菌,排其后的分别是阴沟杆菌和不动杆菌;革兰阳性球菌则主要是表皮葡萄球菌,排其后的分别是草绿色链球菌和粪链球菌,这又与相关文献报道的菌谱有着明显的差异。

表3的药敏试验结果显示,除万古霉素、呋南妥因、亚胺培南外,其他10种抗菌药物均有较高的耐药率,常用的青霉素、氨苄西林和复方新诺明以及庆大霉素,其平均耐药率竟分别为71.6%、71.6%、75.3%和67.4%,这与文献[3,4]报道的有些大同小异。

药敏试验与临床实际疗效虽然存在一定差别,但细菌对药物的敏感性是临床选用抗菌药物的重要依据,随着全球经济的发展、人群流动的加速,促进了耐药病原菌的播散和其形态特征的不断变异。抗菌药物的疗效已受到细菌耐药力的严峻挑战,我们要认真对待这一全球性的问题,认真合理规范地使用抗菌药物。因此,在临床工作中切不可滥用抗生素,更不可盲目求新,求高档,求抗菌谱广,以免造成耐药菌株的进一步增多、药物不良反应增加和医疗资源浪费等不良后果。

参考文献

[1]王海燕.肾脏病学[M].2版.北京:人民卫生出版社,1997:801-822.

[2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006:743-744,890-891.

[3]李明友,黎永新,林茂锐,等.591例中段尿细菌培养结果分析[J].海南医学,2007(8):131.