细菌计数（精选五篇）
细菌计数 篇1
关键词：A群溶血性链球菌,细菌悬液,浓度测定,平板菌落计数
在临床细菌诊断试剂盒的评价过程中,菌液浓度的确定是参考品制备的关键步骤,因此菌液浓度的测定方法应当准确、便捷。目前,菌液浓度的测定和参考品的制备常用浊度法(包括比浊法、分光光度法等)和平皿计数法[1,2,3,4,5,6],但浊度法难以区分活菌与死菌,以及与微生物大小类似的杂质[7]。传统用于测定菌液内活菌量的方法主要是平板涂布法。此方法虽结果较为准确,但可计数浓度范围窄,且人眼计数不够客观;操作复杂,所需时间较长,当制备大批量参考品时,其计数工作量也变得不可忽视,更易因疲劳而使误差变大。
平板点样计数法是调理吞噬实验(opsonophagocytic assay,OPA)中的细菌浓度检测方法。调理吞噬实验是评估肺炎球菌疫苗效价的实验方法,其原理是用肺炎球菌疫苗免疫后的血清样本(抗体)、HL-60细胞和补体构建体外型别特异性抗体介导的调理吞噬模型,对一定浓度的肺炎链球菌进行清除,之后通过检测体系中存活肺炎链球菌的浓度计算出血清样本中的功能抗体活力,实现对肺炎球菌疫苗保护效力的准确评估[8]。近年来,美国阿拉巴马大学通过长期探索,建立了优化的多重调理吞噬实验(multiplexed opsonophiagocytic killing assay,MOPA),可同时对4种血清型的肺炎球菌功能抗体进行检测,简化了实验流程,减少了工作量并节约血清样本,更使得OPA技术的检测通量成倍提高[9,10,11]。此实验方法准确高效,被WHO推荐用于肺炎球菌疫苗的功能性抗体检测[12,13],且国外部分药企已经开始采用[14,15,16]。其中检测存活肺炎球菌浓度所用的平板点样方法是该实验实现高效便捷的关键步骤。
在目前申报检验的临床细菌诊断试剂盒中,A群链球菌抗原检测试剂盒申报较多、应用较广[17,18,19],且A群链球菌与肺炎球菌寄生部位接近,培养条件较相似。因此本实验选用A群链球菌抗原检测试剂盒的国家参考菌株制备悬液,参考调理吞噬实验中平板点样的方法,同时与传统平板涂布法比较验证,建立一种更快速简便的活菌浓度检测法。
1 材料与方法
1.1 一般材料
菌株是由中国医学微生物菌种保藏管理中心提供A群溶血性链球菌CMCC32300、CMCC32301、CM-CC32067。试剂是注射用生理盐水;MH培养基(Bacto)、羊血(陆桥公司);Todd-Hewitt Broth(Bacto)、酵母提取物(Bacto)、琼脂(Bacto)、2,3,5-氯化三苯基四氮唑TTC(Amresco)、水。培养基为10%羊血培养基:MH培养基10.5 g;水500 mL;在使用前融化培养基,温度冷却至50～60℃时加入羊血50 mL混匀。THYA培养基:Todd-Hewitt Broth培养基12 g;酵母提取物2 g;琼脂6 g;水500 mL。上层培养基:Todd-Hewitt Broth培养基24 g;酵母提取物4 g;琼脂6 g;水800 mL。TTC储液:TTC 1.25 g;水50 mL,用0.22μm滤膜过滤除菌后,于4℃保存。溶液呈淡黄色;若颜色变红,废弃,重新制备。
1.2 仪器
电子天平(ME204)购自瑞士METTLER TOLEDO仪器(上海)有限公司;恒温培养箱(LRH-250-Ⅱ)购自广东省医疗器械厂;恒温水浴锅(XMTD-6000)购自北京市长风仪器仪表公司;超净工作台(SG-603TX)购自BAKER公司;菌落计数仪(ProtoCOL3)购自英国Synbiosis公司;显微镜(BX51)购自日本OLYMPUS公司;振荡器(QL-901)购自海门市其林贝尔仪器制造有限公司。
1.3 样品制备
1.3.1 菌悬液制备
将A群溶血性链球菌CMCC32067、CMCC32300、CMCC32301冻干粉复苏后,制成悬液涂布在羊血培养基平板上,在37℃过夜培养。将平板上的菌体刮至10 mL注射用生理盐水中,制成均一菌悬液。
1.3.2 梯度稀释
将CMCC32067制备7份菌悬液,将其中5份进行1/10系列稀释8个梯度,另外2份做1/2系列稀释18个梯度;将CMCC32300和CMCC32301各制备1份菌悬液,并进行1/10系列稀释8个梯度。
1.4 平板点样
1.4.1 培养基准备
将THYA±培养基融化后,倒于13 cm×13 cm方形培养皿中,25 mL/板;凝固后在超净台内开盖吹30～45 min,备用。将上层培养基融化后保存于50℃水浴中1～2 h,确保温度至50℃,备用[20]。
1.4.2 平板点样
1/10梯度稀释每个浓度菌液以及1/2梯度稀释的后8个浓度的菌液,分别取10μL滴在THYA方形培养皿左侧,每点完一个样品立即倾斜平板,使菌液滴流成2～3 cm长,每个梯度做两个平行。待所有样品点完后,室温放置20～30 min,让菌液吸收到琼脂板上。从水浴中取出上层培养基,取25 mL入25 TTC储液混匀,从板子边缘缓慢倾倒在点样的THYA平板上。待上层培养凝固,倒置于37℃孵箱中培养过夜,
1.4.3 菌落计数
用菌落计数仪统计每个点样条的菌落数[21]。
1.5 平板涂布
分别取各系列菌液中的部分梯度50μL或100μL菌液均匀涂布于羊血平板,各做两个平行,倒置于37℃孵箱中培养过夜,手动计数。
1.6 统计学方法
将7份菌悬液的各稀释梯度用两种平板计数法计数,再用各个梯度的计数结果分别折算出初始浓度,采用SPSS 13.0对两组结果进行相关性分析和成对t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各稀释梯度平板点样法计数结果
5份CMCC32067菌悬液1/10系列稀释,2份CMCC32067菌悬液1/2系列稀释,用THYA平板点样法分别检测每份菌液的多个梯度,计算初始浓度结果分别见表1、2,点样平板见图1。
2.2 平板点样法与平板涂布法计数结果比较
7份CMCC32067菌悬液的THYA平板和血平板计数结果比较见表3。将两种方法的计数结果做相关性分析,得到r值为0.84,高度相关;并且用t检验比CHINA MEDICAL HERALD Vol.13 No.6 February 2016 147
较二者结果的差异性,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3其他菌株两种方法计数结果比较
CMCC32300和CMCC3 2301菌悬液1/10系列稀释,用THYA平板点样法(点样10μL)分别检测每份菌液的多个梯度,计算初始浓度结果,与血平板涂布法(点样500μL)计数结果比较,见表4,点样平板见图2。
注:“-”无法计数
3 讨论
在本实验中,用不同菌株、不同稀释方法且多次重复试验,平板点样法的结果均随菌液稀释梯度呈现出较好的梯度。比较了平板点样法与平板涂布法计数7份CMCC32067的菌悬液的不同浓度梯度,以及不同的血平板点样量,结果均显示出高度相关性,且差异无统计学意义;用两种平板计数方法计算另外两株A群溶血性链球菌菌液浓度,同样具有较好的一致性。比较两种计数方法的操作性和准确性,发现平板点样法点样区域小、点样量少,计数简便,因而可检测的浓度范围比平板涂布法较宽。
用多个稀释度的浓度检测结果计算初始菌液浓度显示,测定结果随稀释度提高略有升高,分析原因可能为:①存在稀释过程中的操作误差;②点样区域有限,在稀释度低时菌液浓度高,菌落密集且大小不均,容易漏计或合并计数,造成计算结果偏低;高稀释度时菌液浓度低,菌体可能未落在点样区域,造成平行孔之间CV值较大,浓度计算不准确。根据结果分析,选择菌落数在20～100个之间的点样区计算菌液浓度的偏差较小,点样浓度最好在2×104～2×102 cfu/mL,将同一菌液的多个梯度的计数结果平均,计算初始菌液浓度更为准确。
由于平板点样法所需样品量少、点样区域小,可以在一块方形培养皿里同时检测多个稀释度或多种菌液。若待检样品多,还可以将初始菌悬液用移液器在96孔板中梯度稀释后,再用多道移液器同时点样多个梯度或多种菌液,操作更加便捷[20]。且此方法用仪器自动计数,并且可以根据情况进行手动调整,准确度和效率更高,减少了传统平板涂布法的涂布不均和人眼计数误差。
对于其他细菌检测试剂盒,当制备试剂盒评价参考品时,如果其抗原菌株不能在THYA培养基上生长,如淋病奈瑟菌等,在测定参考品浓度时可筛选出适宜其生长的且透明度好的培养基点样,以便于TTC显色后用仪器计数,这部分研究将在本室的后续工件中进行。
细菌计数 篇2
光合细菌荧光定量PCR计数方法与其他测定方法的比较
光合细菌具有复杂多样的`代谢功能、丰富的营养及生理活性物质,而使其在农业应用中显示了越来越巨大的潜力,前景十分广阔.目前,以光合细菌为菌种生产的微生物肥料企业已有几十家,产品在水稻、蔬菜、果树和烟草等作物上都取得了较好效果.
作 者：关大伟 李俊 沈德龙 曹凤明 杨小红 作者单位：农业部微生物肥料与食用菌菌种质量监督检验测试中心,北京,100081刊 名：农业质量标准英文刊名：AGRICULTURAL QUALITY & STANDARDS年，卷(期)：2009“”(1)分类号：Q94关键词：
细菌计数 篇3
1 资料与方法
1.1 临床资料
选取2011年1月至2012年4月来本院进行尿路感染诊断的643例疑似病患, 女341例, 男302例, 年龄为19～74岁, 平均年龄 (45.2±2.4) 岁。
1.2 诊断方法
将643例尿路感染病患分成A、B两种诊断方法, A种方法是尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测的方法进行诊断, 采用自动尿沉渣分析仪器, 计量尿沉渣白细胞及细菌数量, 对所有的病例进行诊断, B种方法是尿细菌培养方法, 取尿液接种培养皿, 计数菌落数, 以B诊断方法作为检测的金标准。
1.3 临床观察
测定A、B两种诊断方法阳性以及阴性例数、阳性以及阴性率、阳性以及阴性的预测符合率、病患满意度、花费时间等指标。A种方法每微升大于两千五百个的情况, 判为阳性。B种方法出现菌落大于每毫升一万个的情况, 判为阳性。
2 结果
A组以及B组阴阳性情况见表1, B组阳性的例数为211例, 阳性率32.81%, 阴性率为67.19%, A组阳性219例, 阳性率34.06%, 阴性率为65.94%, 并且P值>0.05, 不存在统计显著性差异。
A组阳性219例, 其中也同时是B组的210例, 符合率为95.89%, 阴性例数424例, 同时也是B组的422例, 符合率为99.53%, 并且P值>0.05, 不存在统计显著性差异。A组以及B组病患态度情况见表2, A组病患满意度99.53%, B组病患满意度93.47%, A组花费时间低于B组, 并且P值<0.05, 存在显著性差异, 有统计意义。
3 讨论
尿细菌培养诊断方法主要是利用培养皿, 对正常尿液里的细菌进行培养, 然后通过对病患尿液中菌落数进行计算, 达到诊断效果, 这种方法长期以来被应用于尿路感染的诊断中, 其效果相当显著, 但由于其本身存在不足, 很多病患在使用这种方法的时候, 很不配合, 延误了诊断和治疗。
而尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测方法是一种新型的诊断尿路感染的方法, 这种方法通过采用先进的自动尿沉渣分析仪器, 方便的通过诊断病患尿液中白细胞及细菌, 达到准确的诊断, 及时发现病患病情的目的, 并且具有诊断的速度快、符合率高、成本低等优点, 在临床尿路感染的诊断中, 具有很大的推广以及研究意义。本文通过对643例疑似尿路感染病患进行了尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测以及尿细菌培养的诊断, 证明了两种方法内在一致性, 具有类似的诊断效果。当然, 在尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测诊断方法应用的初期, 会投入比较大的固定成本, 存在花费费用高以及医生题, 随着其广泛应用, 一定能最大化的降低成本, 更加方便群众, 除此之外, 由于这种诊断方法使用的仪器先进, 很多操作人员没有能够很好的掌握这方面技能, 因此, 各单位要注意, 在加大引入先进设备以及先进技术的同时, 要极大对医生以及护理人员先进理论知识以及操作方法的培训, 从而使得他们技能跟上时代的发展, 更好的为人民服务。
摘要：目的 分别应用尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测以及尿细菌培养的检测方法来对尿路感染病患进行诊断, 对比两种方法的诊断是否具有一致性。方法 选取2011年1月至2012年4月来本院进行尿路感染诊断的643例疑似病患, 分成A、B两种诊断方法, A种方法是尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测的方法进行诊断, 采用尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测的方法对所有的病例进行诊断, B种方法是尿细菌培养方法, 以B诊断方法作为检测的金标准, 测定A、B两种诊断方法阳性以及阴性例数、阳性以及阴性率、阳性以及阴性的预测符合率、病患满意度、花费时间等指标。结果 B组阳性的例数为211例, 阳性率32.81%, 阴性率为67.19%, A组阳性219例, 阳性率34.06%, 阴性率为65.94%, 并且P值>0.05, 不存在统计显著性差异;A组阳性符合率为95.89%, 阴性符合率为99.53%, 并且P值>0.05, 不存在统计显著性差异;A组病患满意度99.53%, B组病患满意度93.47%, A组花费费用低于B组, 并且P值<0.05, 存在显著性差异, 有统计意义。结论 应用尿沉渣白细胞及细菌定量计数联合检测的方法与尿细菌培养诊断诊断尿路感染具有很好的一致性, 并且花费更低, 时间也更短, 值得推广。
关键词：尿沉渣白细胞,细菌定量计数,尿细菌培养
参考文献
细菌计数 篇4
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2016年3~5月我院疑似尿路感的患者中段尿标本383份,其中,男173例,女210例;平均年龄(53.23±16.93)岁。做完尿细菌定量培养后迅速用UF-1000i尿沉渣分析仪进行尿沉渣分析,标本收集到完成接种及尿沉渣分析不得超过2 h。
1.2 仪器与试剂
UF-1000i型全自动尿沉渣分析仪,校准品、质控品和配套试剂均购自Sysmex医用电子有限公司。10μL无菌定量接种环,哥伦比亚血琼脂平板(OXOID),法国生物梅里埃Vitek2细菌鉴定仪及配套鉴定药敏板(法国梅里埃生物技术公司)。
1.3 方法
1.3.1 标本留取
使用一次性无菌带盖尿杯收集患者清洁中段晨尿约10 m L(要求尿停留在膀胱中4 h以上),按照科室标准操作规程(SOP)规定时间内送至实验室检查。
1.3.2 中段尿定量培养及菌种鉴定
用一次性定量接种环取充分混匀的尿液10μL接种哥伦比亚血琼脂平板,放35°C温箱内孵育18~24 h,取出计数菌落,以革兰阴性菌≥105cfu/m L,革兰阳性菌或真菌≥104cfu/m L为定量尿细菌培养结果阳性。菌株分离培养按全国临床检验操作规程(第3版)常规方法进行,Vitek2细菌鉴定仪鉴定菌株到种。
1.3.3 Sysmex UF-1000i尿沉渣分析
将接种完成后的尿液立即进行Sysmex UF-1000i仪尿沉渣检测,记录白细胞和细菌计数分析结果。
1.3.4 临床诊断尿路感染的标准
(1)正规清晨清洁中段尿(尿停留于膀胱4 h以上)细菌定量培养。菌落数革兰阴性菌≥105cfu/m L,革兰阳性菌或真菌≥104cfu/m L。(2)清晨清洁中段尿正规方法的离心尿沉渣革兰染色找细菌,如细菌>1个/油镜视野或白细胞数>10个/HP,结合临床尿感染症状尿频、尿急、寒战发热可确诊。
1.4 数据分析及统计学方法
1.4.1 样本含量的估算
估计试验敏感度为70%,特异性为60%,设允许误差Δ=0.10,α=0.05,Zα=1.96(双侧)。则病例组样本量=1.962×0.70×(1-0.70)/0.102=81;对照组样本量=1.962×0.60×(1-0.60)/0.102=92,研究样本多于最少估计例数,具有研究意义。
1.4.2 绘制ROC曲线确定cut off值(阈值)
采用SPSS 19.0软件进行统计学分析,绘制白细胞和细菌计数的ROC曲线,确定诊断的cut off值(阈值),计算诊断试验敏感度、特异度、似然比等相关评价指标。
1.4.3 白细胞和细菌计数诊断试验的评价比较
采用等效性检验Z检验,通过ROC曲线下面积Az1、Az2和标准误差SE1和SE2计算Z值:
。以P<0.05为差异有统计学意义。
1.4.4 诊断性试验的评价指标计算
灵敏度=TP/(TP+FN);特异度=TN/(TN+FP);正确指数=灵敏度+特异度-1;符合率=(TP+TN)/(TP+FP+TN+FN);阳性预测值=TP/(FP+TP);阴性预测值=TN/(TN+FN);阳性似然比=灵敏度/(1-特异度);阴性似然比=(1-灵敏度)/特异度。其中,TP为真阳性,TN为真阴性,FP为假阳性
2结果
2.1 定量尿细菌培养结果
383例疑似尿路感染送检尿标本培养结果阳性141例,阳性率为36.81%(141/383),其中,革兰阴性杆菌108例(76.60%),革兰阳性球菌30例(21.28%),真菌3例(2.13%),大肠埃希菌和肠球菌是尿路感染最常见的两种细菌。
2.2 Sysmex UF-1000i白细胞(WBC)计数和细菌(BACT)计数诊断尿路感染的ROC曲线下面积及cut off值
以临床诊断尿路感染的标准为“金标准”将Sysmex UF-1000i检测所得WBC、BACT结果绘制ROC曲线。WBC和BACT诊断尿路感染ROC曲线下面积(AUC)分别为0.799(95%CI:0.754~0.844)和0.891(95%CI:0.859~0.924),见图1。当敏感性和特异性同等重要时,选择图中最靠近左上方点的值为该诊断试验的cut off值。由此,从SPSS输出表中查得WBC和BACT的cut off值分别为71.2个/μL和171.25个/μL。
2.3 白细胞计数和细菌计数诊断尿路感染的诊断性能评价
以WBC 71.2个/μL和BACT 171.25个/μL为cut off值,计算白细胞和细菌计数单独诊断尿路感染的诊断性能指标和两指标联合应用的诊断性能。单独应用时UF-1000i细菌计数具有较好的敏感性和特异性,两试验并联时敏感性为95.04%,两试验串联时特异度为95.45%。见表1。
2.4 WBC和BACT计数ROC曲线下面积
细菌计数ROC曲线下面积为0.891,白细胞计算曲线下面积为0.799,两者在UTI诊断中具有较高的价值。比较两种诊断试验曲线下面积,采用等效性检验Z检验,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
3 讨论
尿路感染是泌尿系统常见疾病之一,引起感染的病原体包括细菌、真菌及其他病原微生物,其实验室诊断的“金标准”是中段尿定量培养,但该法费时、费力(常需要3~5 d),且所需费用较高。因此,如何早期快速筛选出尿路感染成为国内外众多学者研究的热点[3,4]。UF-50/100尿沉渣分析仪是较早用于尿液有形成分分析的仪器,上述仪器采用流式细胞技术、电阻抗及导电率原理,以激光散射强度、散射波幅及荧光强度和荧光波幅分析尿液中包括白细胞和细菌在内的多种有形成分。由于各种结晶、细胞碎片和上皮细胞的影响,UF-50/100尿沉渣分析仪白细胞和细菌计数在尿路感染的诊断中价值并不理想。Sysmex UF-1000i尿沉渣分析仪是Sysmex公司在UF-100尿沉渣分析仪进行改进后推出的一款新的全自动尿液分析仪,其改进之处包括:光源采用半导体激光,对分析波增加了侧向散射光;采用能高灵敏度检测微细粒子的细菌专用通道和特异性染液,使得其他干扰物质对细菌检测的影响降到最低限度[5],从而提高了其对尿路感染的诊断价值。本文对383例疑似尿路感染患者进行中段尿培养和Sysmex UF-1000i尿沉渣分析,由Sysmex UF-1000i尿液WBC计数和细菌计数分别做ROC曲线,确定其诊断阈值并且评估上述指标在UTI诊断中的价值。
本研究Sysmex UF-1000i尿液分析仪检测尿液WBC计数和BACT计数ROC曲线下面积分别为0.799(95%CI:0.754~0.844)和0.891(95%CI:0.859~0.924),说明WBC计数和BACT计数在尿路感染诊断中具有较高的诊断价值。当敏感性和特异性同等重要时(最佳Youden指数),选择图中最靠近左上方点的值为该诊断试验的cut off值,分别为WBC≥71.2个/μL和BACT≥171.25个/μL。本研究中通过ROC曲线所建的WBC计数的cut off略高于文献报道[6,7],原因可能是研究中有较多病例为泌尿系结石患者,血尿可明显影响白细胞计数;BACT计数的cut off值则低于文献报道[6,7],是由于研究中尿沉渣分析采用清洁中段尿,患者皮肤污染细菌明显较其他研究减少,尿沉渣分析时尽量缩短标本运送及处理时间,减少了阳性标本自身细菌繁殖对结果的影响。以WBC≥71.2个/μL和BACT≥171.25个/μL作为诊断尿路感染的标准,其敏感性为70.21%和83.69%,特异性为75.21%和81.82%,阳性似然比为2.83和4.60,阴性似然比为0.40和0.20。对于门诊或体检患者,以WBC≥71.2个/μL和BACT≥171.25个/μL作为cut off值,两试验并联其敏感性为95.04%,阴性预测值为95.51%,可有效避免患者的漏检;对于住院患者,采用两试验串联,其特异性为95.45%,阳性性预测值为88.3%,可避免医生的误诊。合理的对两试验进行联合应用可提高其敏感性或特异性。
ROC曲线下面积作为诊断试验真实性评价的固有准确度指标已得到很多专家的普遍认可。完全无价值的诊断试验曲线下面积为0.5,而最理想的诊断试验曲线下面积为1。通常认为一个诊断试验的ROC曲线下面积在0.5~0.7之间时诊断价值比较低,在0.7~0.9之间时诊断价值中等,而在0.9以上时具有较高诊断价值。本研究通过ROC曲线下面积的估计值表明,WBC和BACT计数两个指标的ROC曲线下面积都在0.7~0.9,表明诊断价值中等。简单地比较上述两种诊断试验的诊断效能是通过观察两种试验ROC曲线下面积大小,但是这种方法缺乏统计学意义。为了准确地比较两种诊断试验的诊断价值,临床常常采用配对设计的方法进行研究,即随机选择一些患者和非患者作为研究对象,对每一个研究对象同时用两种诊断试验进行诊断,绘制ROC曲线并计算两种的ROC曲线下面积和标准误差,用等效性检验Z检验比较其差异是否具有统计学意义[8]。本研究中,WBC计数和BACT计算的ROC曲线下面积分别为0.799和0.891,标准误差为0.023和0.017,计算Z值等于3.287,P值等于0.001,差异有高度统计学意义。表明细菌计数具有更高的诊断价值,这与多个研究报道相一致[9,10,11,12,13,14,15,16]。
总之,Sysmex UF-1000i尿分析仪白细胞和细菌计数适用于临床尿路感染的快速诊断。通过设定诊断的cut off值,WBC≥71.2个/μL可排除47.5%尿培养真阴性标本,BACT≥171.25个/μL可排除63.2%尿培养真阴性标本,提高工作效率,降低成本。联合应用白细胞和细菌计数,两试验并联时其敏感性为95.04%,可用于门诊患者的筛查;两试验串联时其特异性为95.45%,可用于住院患者的确诊。与实验诊断的“金标准”尿培养比较,Sysmex UF-1000i尿分析仪白细胞和细菌计数报告时间大大缩短,减少不必要的经验用药。特别是对Sysmex UF-1000i细菌计算和白细胞计数进行联合应用时具更高的敏感性或特异性,操作简单且易于标准化和质量控制,可作为临床诊断泌尿道感染快速筛查或确诊的一种重要辅助实验诊断方法。
摘要：目的 运用ROC曲线法建立Sysmex UF-1000i全自动尿液分析仪白细胞和细菌计数的阈值(cut off),评估上述指标在筛选尿路感染中的临床价值。方法 应用Sysmex UF-1000i全自动尿分析仪对2016年3~5月于湖北医药学院附属太和医院住院患者383份尿标本进行检测,同时做中段尿定量细菌培养。以临床诊断尿路感染的标准作为诊断尿路感染的“金标准”,绘制白细胞和细菌计数的ROC曲线,采用Z检验比较两种方法的ROC曲线下面积。结果 UF-1000i全自动尿液分析仪检测白细胞数和细菌数的阈值为白细胞数71.2个/μL和细菌数171.25个/μL,以该阈值筛检尿路感染,其敏感度分别为70.21%和83.69%,特异度分别为75.21%和81.82%。白细胞计数和细菌计数ROC曲线下面积分别为0.799和0.891,经等效性检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Sysmex UF-1000i尿分析仪白细胞和细菌计数可作为临床尿路感染快速筛检的一个辅助指标,其中细菌计数较白细胞计数有更高的诊断价值。
细菌计数 篇5
1资料与方法
1.1一般资料选取2005年1月～2010年12月本院住院和门诊患者,确诊细菌感染炎症(细菌培养阳性)320例,男160例,女160例,年龄5～61岁,平均(29±2.5)岁,其中血100例、脑脊液9例、尿41例、便27例、痰40例、脓液31例、骨髓5例、胸腹水7例、泌尿生殖系统标本54例、创伤感染标本6例。非细菌感染(病毒感染11例,其他支原体感染9例,衣原体感染10例及正常人190例)220例,男110例,女110例,年龄5～61岁,平均(29±2.1)岁。两组一般情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。
1.2标本采集及处理方法选取病例要求是CRP定量、中性粒细胞比值、白细胞计数此3项测定结果在1天之内报告(基本是同时抽血作此3项检查的)。CRP定量标本为空腹用干试管抽取空腹静脉血2 ml,3000 r/min离心10 min,取得无溶血血清上机测定;中性粒细胞比值和白细胞计数采用EDTAK2抗凝管静脉血2 ml混匀上机测定血常规[1]。
1.3方法、仪器及诊断标准CRP定量采用颗粒增强免疫透射比浊法,试剂为英国Randox laboratories Ltd.公司产品,仪器是Olympus AU640全自动生化分析仪;中性粒细胞比值、白细胞计数采用日本Sysemx XT-1800i血液分析仪[4],试剂为仪器厂家专用配套试剂,每天同时加入质控样本,符合要求后再行测定。CRP定量>6 mg/L,中性粒细胞比值>70%,白细胞计数>10.0×l09/L为截断值(阳性判定标准)[2]。
1.4细菌感染炎症确诊选取的细菌感染炎症确诊病例为血、脑脊液、尿、便、痰、脓液、骨髓、胸腹水、泌尿生殖系统标本、创伤感染标本等细菌培养阳性病例,采用的仪器是Siemens walkAway96微生物分析仪。
1.5测定结果分析
1.5.1联合测定(1)平行联合测定:CRP定量与中性粒细胞比值、白细胞计数三项测定结果任何一项出现阳性结果即判定平行联合测定阳性;(2)系列联合测定:CRP定量与中性粒细胞比值、白细胞计数三项测定结果同时出现阳性结果才判定系列联合测定阳性。
1.5.2评价指标诊断测定评价指标:灵敏度Sensitivity,Se=a/(a+c)×100%;特异度specificity,Sp=d/(b+d)×100%;准确度accuracy,Ac=(a+d)/(a+b+c+d)×100%;阳性预测值(positive predictive value,+PV)=a/(a+b)×l00%;阴性预测值(negative predictive value,-PV)=d/(c+d)×100%,其中a为患病组的阳性数,b为对照组的阳性数,c为患病组的阴性数,d为对照组的阴性数。
1.6统计学处理采用u检验,比较两测定的灵敏度和特异度。
2结果
经u检验,平行联合测定的灵敏度与各单项测定灵敏度之间,系列联合测定的特异度与各单项测定特异度之间差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1、2、3、4。
注:从表1、表2可据公式分别计算出单项测定及联合测定的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度
注:表3、表4比较表明平行联合测定可提高诊断的灵敏度和阴性预测值,但特异度和阳性预测值下降;系列联合测定可提高诊断的特异度和阳性预测值,但降低灵敏度和阴性预测值
3讨论
本文在细菌培养阳性确诊病例基础上,系统评价C R P定量与N%、WBC单项及联合测定对细菌感染炎症的诊断价值。从本文统计可发现,单项测定中CRP定量相比N%和WBC,灵敏度高而特异度较低。由于WBC、N%应用广泛,更适宜急诊,再与CRP定量联合测定比较,结果发现,WBC和CRP定量平行联合测定的灵敏度可提高至97.5%,三者平行联合测定的灵敏度可达100%,阴性预测值达100%。而WBC和N%系列联合测定的特异度可达99.1%,三者系列联合特异度可达100%,阳性预测值达100%。经u检验,平行联合测定的灵敏度与各单项测定灵敏度之间,系列联合测定的特异度与各单项测定特异度之间差异均有有统计学意义(P<0.05),平行联合测定较单项测定明显提高诊断的灵敏度,而系列联合测定较单项测定明显提高诊断的特异度。
白细胞分类计数是细菌性感染较好的实验诊断指标,能为临床诊断提供较为可靠的依据。但由于目前白细胞分析仪的广泛使用,仪器分类的结果不一定全部可信,需同时做血涂片瑞氏染色分类,但瑞氏染色分类耗时较长,限制了其在临床上的广泛应用。WBC的基础值个体差异较大,正常值范围较宽,根据异常结果的判定标准,只有在<4.0×109/L或>10.0×109/L时才被认为异常,而且升高不显著,只成一倍至几倍增长。并且WBC总数易受运动、精神等多种因素影响,所以WBC用于细菌性感染的诊断敏感性不够,有一定局限性。
CRP是一种急性时相反应蛋白,CRP在健康人群中浓度很低,当人体受相应刺激时血中浓度急剧升高,甚至可达正常人的2 000倍,CRP能激活中性白细胞系统,在补体系统免疫中扮演了一个重要生物学角色。而WBC、N%的测定仅有部分病例对诊断有帮助,而部分病例的WBC、N%与临床症状不相符合。CRP测定应用显出重要性。CRP主要是由肝细胞合成,受白细胞介素、TNF等炎症因子的调节。正常情况下每天合成1～10 mg,急性炎症时每天可合成1 g[3],CRP通常在机体受到感染、外伤、肿瘤及理化因素刺激后5～8 h迅速升高,24 h内峰值可为正常值的数百倍;半衰期为5～7 h,若感染得到控制,CRP可在24～48 h内快速下降,1周后恢复正常。CRP含量的增高有助于临床对上呼吸道细菌感染的早期诊断,应作为常规项目推广,以减少抗菌药物的不合理使用。而CRP在病毒感染时无显著升高,这为疾病早期感染类型的鉴别提供了极其重要的依据[4]。CRP可作为鉴别感染病原类型的重要辅助指标,并对治疗起指导作用,确定抗生素的疗效,并且个体的CRP基础水平和未来心血管疾病的发病关系密切[5,6]。
CRP定量与N%、WBC联合测定可以较好地指导临床用药,更好地预防抗生素的滥用以及所导致的不良后果、不良反应以及耐药菌株的不断增多。
摘要：目的 探讨C反应蛋白(CRP)定量与中性粒细胞比值(N%)、白细胞计数(WBC)联合测定在细菌感染炎症诊断中的应用价值。方法 采用Sysemx XT-1800i自动血细胞分析仪、Olympus AU640全自动生化分析仪、Siemens walkAway96微生物分析仪,分别对确诊的320例细菌感染炎症患者和220例非细菌感染炎症患者进行CRP定量与N%、WBC测定,并作相关统计学分析。结果 CRP定量、N%、WBC单项测定对细菌感染炎症诊断的灵敏度及特异度分别为91.3%、78.1%、71.3%及69.1%、90%、91.8%;CRP定量与WBC、N%与WBC两项平行联合测定的灵敏度及特异度分别为97.5%、93.7%及63.6%、78.2%;系列联合的灵敏度及特异度分别为71.2%、68.8%及97.3%、99.1%;CRP定量与N%、WBC 3项平行联合测定的灵敏度及特异度为100%、61.8%;系列联合的灵敏度及特异度为67.5%、100%。经u检验,平行联合测定的灵敏度与各单项测定灵敏度之间,系列联合测定的特异度与各单项测定特异度之间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 CRP定量、N%、WBC平行联合测定可提高灵敏度,系列联合测定可提高特异度。
关键词：细菌感染炎症,C反应蛋白,中性粒细胞比值,白细胞计数
参考文献
[1]向金玉.C-反应蛋白和结核抗体联检在诊断结核病中的临床意义[J].中国医学创新,2011,8(8):111-112.
[2]Opstaken RM.Muris JM,Knottnerus JA,et al.Contributions of symptoms, sign,erythrocyte sedimentation rate,and C reactive protein to a diagnosis of pneumonia in acute lower respiratory tract infection[J]. Br J Gen Pract,2003,53(490):358 -361.
[3]曹秀华,吴晓棠,王成英,等.C-反应蛋白检测的临床应用[J].中国医学创新,2009,6(33):249-251.
[4]许琳,陈雅雯.C-反应蛋白监测对急诊手术后的意义探讨[J].中国医学创新,2010,7(27):61-62.
[5]Prasad k.C - reactive protein and cardiovascular disease[J].Inter J Angiol,2003,12:1 -12.