直接药敏（精选三篇）
直接药敏 篇1
1 资料与方法
1.1一般资料选取2013年6月~2014年6月我院接收发热合并全身感染的患者220例, 入选标准:入院前均未进行相关治疗;无血液系统疾病。以无菌操作在病人发热高峰期采集阳性血液样本220份, 每人采集20ml静脉血进行送检。
1.2方法常规药敏试验法:从血培养瓶中取少量培养液在巧克力平板、麦康凯平板和血板上接种, 放置在二氧化碳培养箱中过夜培养16~18h, 取菌落涂片进行革兰染色, 选择合适的酶进行氧化酶试验, 选用VITEK2-compact系统鉴定, 尔后进行药敏试验。直接药敏试验:将样本接种于BACTEC系统进行培养检测, 检测显示为阳性样本时, 抽取10ml样本放至无菌试管中, 以1500r/min速度对细菌进行离心分离, 5min后收集上层清液, 再以3000r/min离心15min后去除上清液, 洗涤2次沉淀后进行重悬。将20μl悬液进行革兰氏染色并在显微镜下观察。若发现形态为链状的革兰阳性菌 (G+) , 则使用MH+5%羊血血平板进行药敏试验初试验, 根据试验结果选择酶试验, 将菌液浓度调至6.8×108cfu/L后于NC21板上接种进行细菌鉴定和药敏试验。一般菌种则于MH平板上1~2滴混悬液, 并用无菌试子均匀涂于平板上, 贴上药敏纸片。根据2015NCCLS标准进行耐药性、敏感性评判。
1.3 观察项目观察两种检验方法的检出符合率及药物敏感性比较。
1.4 统计学处理采用SPASS 15.0 软件分析及处理数据, 计数资料采用百分比 (%) 表示, 用卡方检验, P<0.05 差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两种药敏试验方法检测细菌的符合率比较220 份阳性标本, 直接药敏试验法检测革兰阴性、阳性菌与常规药敏试验法的检验结果符合率为92.8% (116/125) , 93.7% (89/95) , 总符合率为93.2% (205/220) , 见表1。
2.2 两种药敏试验的药物敏感性对比抗菌药敏方面, 常规与直接药敏试验相比, 差异无显著性 (P>0.05) , 见表2。
3 讨论
近年来, 伴随抗菌药物在临床的广泛使用, 不合理使用抗菌药物的比例也逐渐升高, 使细菌多重耐药感染患者逐渐增多, 而诱发败血症或全身感染等疾病, 从而给患者的生命安全带来隐患。 因此快捷有效的检测方法对于临床诊断、治疗具有重要意义[1]。近年来, 临床上主要用于鉴定细菌等方法有常规检验、镜检、直接药敏试验、血清血凝集测试等。 药敏试验法有稀释法、纸片扩散法、自动检测法、抗生素浓度梯度法等。 本文采取的是BACTEC9120 仪器检测法, 它是将血液样本中的细菌利用全自动培养法进行分离培养, 采用荧光探测技术测定培养箱内CO2或O2的变化趋势以检测微生物的增殖情况, 该系统可在血液快速检验中广泛应用, 同时还能培养杆菌、真菌等多种细菌。 直接药敏试验直接进行血液标本接种, 并置于培养箱中孵育后进行药敏试验鉴定, 相比于常规检验方法, 该方法省略分离培养的步骤, 从而缩短检测时间, 更简单、快捷地显示药检试验结果[2,3]。 研究指出采用Bactec系统进行直接药敏试验, 可明显缩短检测时间和药检结果等待时间, 使医生能够根据检验结果尽快制定出给药方案, 及时得到治疗[4]。
本文通过对220 份血培养阳性标本进行常规药敏试验和直接药敏试验, 结果发现两种检验方法的革兰阴性杆菌的符合率为92.8%, 革兰阳性球菌的符合率为93.7%, 总符合率为93.2% , 与陈欢欢等[5]报道的直接法与常规法的总符合率为93.5%大致相符, 另外在药物敏感性方面, 两种药敏检验方法相比差异不具有显著性 (P>0.05) , 提示采用BACTEC9120 进行直接药敏试验可替代常规检测方法, 且直接药敏试验省略细菌的培养时间, 要比常规法提早16~18h, 为临床治疗赢取宝贵的时间。
综上所述, 采用BACTEC9120 进行直接药敏试验可替代常规检测方法, 且直接药敏试验法克服常规法耗时的缺点, 是一种便利、快捷有效的检验方法, 值得推广。
参考文献
[1]庄浩林.直接药敏试验法和常规药敏试验法在血液细菌检验中的应用研究[J].黑龙江医学, 2015, 39 (2) :172-173.
[2]张茂海.两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用研究[J].湖南中医药大学学报, 2011, 31 (12) :3-4, 7.
[3]陆俊梅, 王洁, 黄晓辰, 等.显微镜观察药物敏感性检测技术在痰标本直接药敏试验中的应用[J].中华预防医学杂志, 2011, 45 (1) :21-25.
[1]张茂海.两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用研究[J].湖南中医药大学学报, 2011, 31 (12) :3-4, 7.
[5]陈欢欢, 文怡, 刘根焰, 等.血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏中应用分离胶试管的方法探讨[J].实用临床医药杂志, 2011, 15 (15) :156-157.
直接药敏 篇2
【关键词】血培养；细菌鉴定；药敏试验；PhoenixTM 100
【中图分类号】TH773 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）03-0090-01
血流感染（Blood stream infections，BSI）及相关的败血症是临床急症，具有较高的发病率和死亡率，是全球面临的重要医学挑战。流行病学研究资料表明，约2%的住院病人和高达75%的重症监护病人可发生败血症，死亡率高达20～50%。住院病人中，血培养阳性病人的死亡率是血培养培养阴性者的12倍。另据报道，从败血症休克发生直到开始靶向治疗，每延误1小时，败血症休克死亡的危险性约增加8%[1]。
因此，加快血流感染的诊断，进而及早进行有针对性的抗菌药物治疗，对于救治病人，降低死亡率有十分重要的意义。血培养检查是诊断血流感染的“金标准”，然而，尽管证据表明快速鉴定和有效的抗菌药物治疗能挽救病人的生命，但当前，临床微生物实验室即使应用先进的自动化血培养仪检测阳性后，还需进行革兰染色，传代培养，生化试验，再进行药物敏感实验，至少耗时2～3天，而对于一些苛养菌或非典型菌则耗时更长，不可避免错失了救治的最佳机会。国内外报道了很多直接从阳性血培养液用各种自动化仪器进行鉴定和药敏试验的方法，为积累经验，减少血培养报告周转时间，我们对连续送检的103例阳性血培养标本进行了直接鉴定和药敏试验，现将结果报告如下：
材料与方法
一、样本
103份革兰染色表明是单一菌血症的血培养标本来自2013年2月至2013年5月间浙江大学医学院附属第一医院的住院和门诊病人，同一病人只计第一次阳性送检样本。其中传代培养以后有两种以上细菌生长的3例（2.9%）标本，将其排除在外。剩下100例单一菌血症血培养经鉴定为阳性球菌的42例，阴性杆菌的58例。42例阳性球菌中以葡萄球菌为主（33株），包括金黄色葡萄球菌10株，
其他凝固酶阴性葡萄球菌23株；肠球菌属5株；链球菌属3株；微球菌属1株。58株阴性杆菌中，肠杆菌科44株，包括大肠埃希菌16株，肺炎克雷伯菌占25株，产酸克雷伯菌1株，奇异变形杆菌1株，产气肠杆菌1株。非发酵菌14株，包括鲍曼不动杆菌9株，铜绿假单胞菌4株，嗜麦芽窄食假单胞菌1株。
二、主要仪器与试剂
美国BD公司BACTEC FX自动血培养仪及其配套BD需氧和厌氧血培养瓶，PhoenixTM 100自动化细菌鉴定仪及其配套的阴性杆菌和阳性球菌的鉴定药敏复合卡。
三、标准方法鉴定和药敏
将已取好病人血样的血培养瓶置于BACTEC FX血培养仪中孵育，仪器阳性报警后，取少量阳性血培养瓶中的液体涂片革兰染色，同时接种于血琼脂平板，置37℃，5% CO2孵箱中孵育过夜，挑取单个菌落调整至0.5～0.6麦氏浊度，根据细菌菌落的生长特征来区分是阳性菌还是阴性菌，分别选用阳性球菌或阴性杆菌鉴定药敏卡用PhoenixTM 100自動化鉴定仪鉴定和药敏。
四、PhoenixTM 100直接鉴定和药敏
从阳性血培养瓶中抽取少量液体涂片革兰染色，根据染色结果区分阳性菌和阴性菌。然后抽取6ml液体注入带有分离胶的真空采血管中，3500rpm/min，离心5min后，细菌就沉降在分离胶的表面，用灭菌枪头吸出上清液，留取0.1ml液体，轻轻混匀至底部细菌悬浮于液体中，将浓缩的菌液调至0.5～0.6麦氏浊度，之后的鉴定和药敏过程参考标准方法。
五、数据分析
以标准方法为对照，根据是否正确鉴定至细菌种的水平，将直接法鉴定结果分为三类：正确鉴定，不能鉴定和错误鉴定；将药敏不符的结果分为三类：极重大错误（标准法是R，直接法是S）、重大错误（标准法是S，直接法是R）、次要错误（标准法是I，直接法S/R；标准法是S/R，直接法是I）。
讨论
菌血症有较高的发病率和死亡率，早期给予病人合适的抗生素治疗对于病人的生存是至关重要的，同时可以减少各种广谱抗生素滥用给病人带来的副作用并减轻病人的经济负担，减少不必要的浪费。之前国内外有较多阳性血培养用各种不同鉴定仪器直接鉴定和药敏试验的报道，我们与之前的研究结果都表明直接法的鉴定和药敏试验对于革兰阴性杆菌有很高的符合率和准确率，但对于阳性球菌的鉴定结果可信度不高[2]。有研究表明在用PhoenixTM 100鉴定前，在阳性血培养液内加皂素后，直接法对革兰阳性球菌的鉴定和药敏结果与标准法比较符合率可达82%和97%，大大提高了直接法鉴定结果的准确性。
本次研究，只针对单一菌血症的病人，所以阳性血培养涂片与革兰染色非常重要，对血涂片结果是单一细菌，血琼脂平板上生长多种细菌的病例也排除在外，以减少实验误差。本次研究也只针对革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌，对于血液中的酵母菌引起的单一菌血症也排除在外。
对于鉴定错误的阳性球菌，我们发现大都被鉴定为片球菌属和库克菌属，因此对于此类菌的鉴定结果，需借助其他补充试验确认。库克菌是皮肤和口腔常居菌，很少引起菌血症，有研究表明，表型变异可能是将葡萄球菌错误鉴定为库克菌属的原因。
尽管革兰阳性球菌的鉴定准确率较低，但其药敏符合率却高达96.6%，并且有12株（47.8%）菌株的药敏结果与标准法完全一致；阴性杆菌的药敏符合率也高达98.8%，其中45株（77.6%）的药敏结果与标准法完全一致。本次实验中，只有苯唑西林和四环素发生了极重大错误。重要的是，直接药敏法（比标准法快24h）克服了常规方法用转种的菌落做细菌鉴定和药敏试验费时的缺点，充分发挥了全自动血培养和全自动微生物鉴定仪的作用，可以及时为临床提供较为准确的药敏结果，使病人能够早期合理运用抗生素，减少不必要的广谱抗生素的使用，降低菌血症病人的死亡率。
参考文献
[1]Byran CS： Clinical implications of positive blood cultures. Clin Microbiol Rev 1989；2：329-53.
直接药敏 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取了2010年5月至2012年5月广州市白云区第一人民医院门诊或住院患者的血液标本共721份, 所有患者采集完血液标本后讲样品冷藏, 并送检验科检验, 经过血液培养和细菌鉴定分析检查出阳性血液标本442份。同时, 所有血液标本采集前48h内未服用药物, 患者无其他血液系统疾病和凝血功能的障碍。
1.2 方法
对确定为阳性血液标本进行血液细菌鉴定与检验, 主要采用直接药敏试验和常规药敏试验检方法, 进而比较两种检测方法在细菌检验的符合率以及药敏结果的符合率。
直接药敏试验:抽取血液标本10m L于无菌试管中, 并通过1500r/min离心机进行细菌分离, 5min后收集上层清液, 然后在3000 r/min下离心15min后去上清液, 用PBS洗涤沉淀两次后重悬[2], 收集悬液通过革兰染色进行试验检测, 于倒置显微镜下观察, 使用无菌拭子均匀涂抹, 贴上药敏纸片[3]。药敏检测标准根据2005 NCCLSI的标准进行评价。
常规药敏试验:将检查为阳性的血液标本接种于麦康凯平板、血平板和巧克力平板, 然后在5.0%C02下孵育18~24h, 其温度为35℃, 然后取菌落涂片通过革兰染色法进行检测分析[4]。根据检测结果选择酶。
1.3 统计学分析
采用SPSS17.0统计软件进行分析统计, 计数资料以 (±s) 标准差表示, 比较均采用χ2检验, 组间比较用t检验, 以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
本研究中, 广州市白云区第一人民医院门诊或住院患者中收集的721份血液标本中检查为阳性的血液标本442份, 进而采用直接药敏试验与常规药敏试验方法检测出革兰阴性杆菌 (G-) 346株, 革兰阳性杆菌96 (G+) 株, 同时两种检测方法对G+球菌、G-杆茵药敏检测结果 (敏感以及中度敏感、耐药) 的符合率无明显差异 (z=-1.0507, P>0.05) 。详细情况见表1。
3 结论
从近年来的临床调查来看, 在用药合理性上, 抗生素的不合理使用情况较为严重, 在抗生素滥用的情况下易造成细菌的多种耐药性, 甚至引起其他的感染和并发症, 如菌血症、败血症等, 导致患者生存质量的严重下降[5]。对此, 加强细菌的鉴定分析和药敏试验检测是临床诊断治疗的重中之重, 其对临床科学用药提供了重要的依据。从检测方法来看, 目前临床上常用的检测方法有常规药敏试验和直接药敏试验, 直接药敏试验可直接对血液标本进行检测, 相对简单且便捷, 而从本次研究来看, 其与常规药敏试验检测的符合率无显著差异, 对G+球菌与G-杆菌以及肠杆菌的检出符合率较高[6]。
综上所述, 直接药敏试验与常规药敏试验在临床血液细菌鉴定与检验中具有较好的效果, 检测符合率相对较高, 且两种检测方法之间比较无显著差异, 通过检测可确定病原菌和药敏结果, 从而为临床用药提供依据, 以减少用药过程中的满目行, 提高临床诊断和治疗的有效率。
摘要：目的 探讨直接药敏试验与常规药敏试验在临床血液细菌鉴定与检验中的临床应用价值。方法 选取了2010年5月至2012年5月广州市白云区第一人民医院检查为阳性的血液标本442份, 并对其进行血液细菌鉴定与检验, 主要采用直接药敏试验和常规药敏试验检方法, 进而比较两种检测方法在细菌检验的符合率以及药敏结果的符合率。结果 两种检测方法检测出革兰阴性杆菌 (G-) 346株, 革兰阳性杆菌96 (G+) 株, 同时两种检测方法对G+球菌、G-杆茵药敏检测结果 (敏感以及中度敏感、耐药) 的符合率无明显差异 (z=-1.0507, P>0.05) 。结论 在临床血液细菌鉴定与检验中, 采用直接药敏试验与常规药敏试验具有较好的效果, 在细菌感染的检测中具有较高的符合率, 同时检测时间短、操作简单, 值得在临床中进行有效的推广和应用。
关键词：血液细菌,鉴定,直接药敏试验,常规试验
参考文献
[1]朱小妮, 沈红良, 肖红, 等.API鉴定系统在临床微生物检验中的应用[J].中国医师杂志, 2010, 12 (2) :295.
[2]黎海东, 谢文锐.细菌鉴定在临床血液检验中的应用研究[J].中国卫生检验杂志, 2010, 17 (5) :955-957.
[3]李慧.两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用[J].现代预防医学, 2011, 38 (9) :170-177.
[4]J ames E, John AW.Compariso of Direct and Standardized A ntimicrobial susceptibilit y TestinG+of Positive Blood Cultures[J].Antimicrob Agents Chemothe, 2009, 10 (2) :211-214.
[5]蒙美平.直接药敏试验法在涂阳肺结核耐药性检测中的应用[J].中国热带医学, 2009, 7 (2) :262-264.