高效液相色谱仪

2024-06-14

高效液相色谱仪（精选十篇）

高效液相色谱仪篇1

1 方法原理

采用液相色谱中的正相色谱分离法。选用极性固定相 (如硅胶、氨基等) 和非极性流动相 (如正己烷等) 的色谱分离模式, 在一定的条件下, 对柴油中的非芳烃 (包括开链烃及环烷烃、单烯烃) 、单环芳烃 (包括苯类、四氢化萘类、茚满类、噻吩类、共轭多烯烃类) 、双环芳烃 (包括菲类、茚类、屈类、三苯撑类及苯并蒽类) 进行分离, 用示差折光检测器检测, 依据组份的峰面积, 利用标准曲线计算出各组份的含量。

2 实验部分

2.1 仪器设备

(1) 高效液相色谱仪;

(2) 容量瓶:10mL;

(3) 微量注射器:100uL。

2.2 村料与试剂

(1) 环己烷:

纯度大于99%。

(2) 邻二甲苯:

纯度不低于98%。

(3) 二苯并噻吩:

纯度不低于95%。

(4) 9-甲基蒽:

纯度不低于95%。

(5) 1-甲基萘:

纯度不低于98%。

(6) 菲:

纯度不低于98%。

(7) 正己烷:

HPLC级, 作为HPLC流动相。

2.3 典型的试验条件, 见表1。

2.4 分辨率的测定

(1) 配制以下溶液, 用分辨率的测定。

在100m容量瓶中, 分别称取环己烷 (1.0±0.1g) , 邻二甲苯 (0.5±0.05g) , 二苯并噻吩 (0.05±0.005g) 及9-甲基蒽 (0.05±0.005g) 。然后, 用正戊烷稀释至刻度。在不加正戊烷之前必须保证二苯并噻吩及9-甲基蒽完全溶解于邻二甲苯和环己烷的混合物种。

(2) 待仪器稳定后取约80μl的上述样品, 注入定量管 (10μl) 中, 启动色谱仪进行测定。见图1。

分辨率undefined

其中:t1=以秒为单位的环己烷峰的保留时间;

t2=以秒为单位的邻二甲苯峰的保留时间;

y1=以秒为单位的环己烷峰的半峰宽;

y2=以秒为单位的邻二甲苯峰的半峰宽。

计算环己烷与邻二甲苯之间的分辨率, 如果大于5, 则能满足组份分离的要求。

2.5 多环芳烃反冲时间的确定

在预定的时间内, 双环芳烃冲出以后, 对色谱柱进行反方向洗脱, 从而使多环芳烃量窄的谱带洗脱,

因此必须确定反方向洗脱时间。在选定的色谱条件下首先测定二苯并噻吩和9-甲基蒽的保留时间, 然后用下列公式计算反冲时间。

计算公式:B=tA+0.4 (tB-tA)

其中:tA=以秒为单位的二苯并噻吩峰的保留时间;

tB=以秒为单位的9-甲基蒽的保留时间;

计算反冲时间。

2.6 标准曲线的绘制

(1) 依据表2配制标准溶液。用于绘制邻二甲苯、1-甲基萘和菲的标准曲线。

(2) 待基线稳定后, 依次对A、B、C、D标准溶液进行测定, 根据浓度和峰面积, 绘制邻二甲苯、1-甲基萘和菲的测定数据及标准曲线, 分别见图2~4。

图2~4中三条曲线的相关系数均大于0.999, 具有良好的线性相关性。

2.7 重复性考查

本次实验中, 选取了5个不同组份的柴油, 对其进行了测定并进行了重复性考查, 测定结果见表3。

通过表3的数据分析, 可以看到5个不同组份的柴油测定结果有较好的重复性。

2.8 样品再现性的考察

用以上5个不同组份的柴油, 进行了再现性试验, 试验结果略。

通过样品再现性考察的数据, 可以看到在不同实验室测定数据, 具有较好的再现性。

3 结论

利用高效液相色谱仪能够快速准确地测定柴油中芳烃含量, 指导柴油的生产, 保证柴油的质量。

摘要：随着对柴油质量的要求愈来愈高, 对柴油中的稠环芳烃含量作出了严格的要求。使用液相色谱仪, 能够测量出柴油中的各种芳烃含量, 保证柴油质量。

高效液相色谱仪篇2

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高效液相色谱仪篇3

关键词：高效液相色谱仪食品检验应用

中图分类号：TS207 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）04-0029-01

相对于其他的食品检测设备而言，高效液相色谱仪的优势还是比较多的。从技术的角度来分析，该仪器主要是在经典液相色谱的基础之上，引入了气相色谱的理论，并且加入了较多的零部件，以此来完成检测水平的提升。从现有的食品检测工作来看，高效液相色谱仪在运用当中，具有速度快、效率高、灵敏度高等特点，为食品检验工作提供了较多的帮助。随着经济的发展和生产水平的进步，高效液相色谱仪的应用范围和频率也在不断的提升。在此，本文主要对高效液相色谱仪在食品检验中的应用展开研究。

1 概述

1.1 高效液相色谱仪的原理

食品检验工作需要对食品的多个指标和含量进行检验，以此来获得更多的数据。从客观的角度来说，现阶段的很多食品虽然在大的指标上没有问题，但很多小指标容易出现超标的现象，尤其是市面上的一些小食品，这些食品对儿童造成的危害是非常大的。运用高效液相色谱仪检测食品的过程中，需对每一项指标都开展细致的检验，在充足数据和信息支持的基础上，为食品的安全生产和管理，提供较多的依据。从现阶段的高效液相色谱仪来看，其原理是比较贴合食品检验的。首先，高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上发展而来的，也就是说，该仪器具有经典仪器的优势，同时又结合当下的一些先进原理，能够满足食品检验的较多要求。其次，高效液相色谱仪在工作当中，主要是在高压条件下，溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程。在这个过程中，通过对食品开展针对性的检测，能够进一步了解食品的各项指标。高效液相色谱仪的优势在于，利用溶质在两相之间的分配系数、亲和力等等，促使不同的溶质能够得到分离，以此来实现对食品的准确检验。由此可见，高效液相色谱仪在食品检验方面，其原理还是值得肯定的。

1.2 仪器组成

为了能够更好的应用高效液相色谱仪开展食品检验工作，我们需要对仪器的组成有所了解。现阶段所使用的高效液相色谱仪主要有四个组成部分：第一，贮液罐。该设备的材料是利用耐腐蚀的材料来制作的，以此来完成不同食品的检验工作。第二，高压输液泵。泵的作用对于高效液相色谱仪来讲是绝对性的。为此，高压输液泵的要求比较多，例如，泵体的材料，必须具有较强的稳定性，能够实现高标准的耐化学腐蚀效果。在多数情况下，泵体的材料，会选择优质的不锈钢来制造。同时，高压输液泵必须能够连续工作，因为部分食品检验工作，需要观察其持续的变化。一般而言，高压输液泵要求其能够连续8h--24h工作。第三，色谱柱。它的主要功能就是指标的读取和对比，色谱柱主要是包括柱管和固定相两个部分。第四，检测器。该设备是高效液相色谱仪的核心组成部分，其主要的功能在于，有效的监视经过色谱柱分离后，组分随着淋洗液流出的浓度变化。现阶段所应用的高效液相色谱仪，主要是上述四个部分所组成的，其功能比较多样，基本上能够满足食品检验的需求。

2 高效液相色谱仪在食品检验中的应用

2.1 在乳品分析中的应用

现阶段的食品类型较多多样，乳制品是比较常见的一类食品。近几年，我国的奶粉在行业发展过程中，遇到了很大的难题。自从三聚氰胺曝光后，国内的多家知名乳制品企业的产品，相继被查出含有不同浓度的三聚氰胺。此时，食品检验也被推到了风口浪尖上。高效液相色谱仪作为重要的检测仪器，必须能够对乳制品开展相应的检查。从目前的工作来看，高效液相色谱仪在乳制品的检查当中，其效果还是值得肯定的。例如，用YWGC18色谱柱，甲醇乙酸胺为流动相，紫外检测器230nm处测定了AD奶和活性乳中的山梨酸和苯甲酸含量。

2.2 在肉制品分析中的应用

除了乳制品之外，肉制品也是现阶段的重要食品检验类型，尤其是火腿肠一类的肉制品。曾经有新闻曝光，我国的知名企业双汇、金锣等等，在火腿肠及相关肉制品中，参杂很多的不合格添加剂，对食用者造成了很大的危害。高效液相色谱仪在肉制品的检验中，可尝试应用应用岛津 LC-4A 高效液相色谱仪测定肉类抗生素残留量，对色谱分离实验参数，包括色谱柱、流动相配比、缓冲液、pH、温度、检测波长等，进行了系统的试验，使肉类食品中的四环素、土霉素和金霉素能够同时分离和定量测定。从检验结果来看，总体上的数据和信息比较准确，可以作为检验的最终结果。

3 结语

本文对高效液相色谱仪在食品检验中的应用展开讨论，从现有的工作来看，食品检验的难度不断提升。很多厂家在生产食品的过程中，不仅小心斟酌添加剂的用量，而且很多的物质都经过特殊处理，部分检测设备根本分析不出来，导致有毒食品流入市场。今后，需要对高效液相色谱仪进一步优化处理，融入较多的技术和内容，实现对食品检验水平的进一步提升。

参考文献

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[4]张建莹，杨修斌，罗耀，金晓蕾，岳振峰，陈波.超高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中双酚A[J].食品安全质量检测学报，2014，11：3437-3443.

高效液相色谱仪篇4

1 高效液相色谱仪的日常维护

高效液相色谱仪主要由贮液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、工作站等几部分组成, 因此, 日常维护工作即可从这几个主要部件展开。

1.1 贮液器

1) 保持贮液瓶清洁, 定期清洗或更换;2) 尽量使用HPLC级溶剂和试剂;3) (含有缓冲盐和) 非HPLC级的流动相一定要过滤;4) 含有缓冲盐的流动相应现用现配, 防止微生物生长和组分改变。

1.2 泵

泵的密封圈和柱塞杆是最容易磨损的部件, 因此在使用过程中要注意:1) 仪器使用完毕, 需将泵中的缓冲盐冲洗干净, 防止盐沉积;2) 用HPLC级试剂;3) 定期清洗过滤筛板, 用1mol/L的硝酸浸泡1h, 再用纯水清洗干净 (切勿超声) 。

1.3 进样器

1) 样品进样前要过滤;2) 手动进样器, 要用液相专用的平头针, 而不能用气相色谱用的尖头针代替以免损伤转子, 进样针和进样阀使用完毕后用有机溶剂冲洗干净。

1.4 色谱柱

1) 在使用新柱之前, 最好用适宜溶剂在低流量下 (0.2~0.3m L/m in) 冲洗30 m in, 长时间未用的分析柱也要同样处理;2) 定期使用强溶剂冲洗柱子;3) 使用缓冲盐时, 要先用水冲洗, 再用有机溶剂冲洗;4) 卸下保存时, 要盖上盖子, 避免固定相干枯;5) 使用保护柱;6) 避免流动相组成及极性的剧烈变化;7) 避免压力脉冲的剧烈变化。

1.5 检测器

1) 保持检测器清洁, 每天与色谱柱一同清洗;2) 防止空气进入检测池内;3) 检测器灯有一定寿命, 不用时不要打开灯, 但也不能频繁开关灯;4) 不要用手直接接触氘灯表面。

仪器在使用过程中, 难免会出现一些故障。故障出现后, 要善于用逻辑推理的方法, 逐一排查, 寻找问题所在, 然后根据故障的类别、大小, 采取相应的解决措施, 必要时需请仪器厂商的工程师进行维修服务。

在分析工作中色谱仪出现的许多问题都能够在谱图上反应出来, 如压力的变化、保留时间的漂移、色谱峰的峰型问题等, 下面就在日常分析工作中频繁遇到的问题特作如下总结:

以上从几个方面简介了高效液相色谱仪在使用过程中的常见问题及解决方法。在日常工作中, 液相色谱仪的保养非常重要, 良好的记录习惯是成功地进行故障排除的关键, 只有分析原因, 有针对性地解决, 维护好液相色谱仪, 才能保证分析时仪器处于最佳工作状态, 从而大大延长仪器的正常使用期限, 并使仪器的性能得到最大限度的发挥, 保证检测的准确性, 降低检测成本。希望本文的经验汇总可以为大家遇到的问题提供可以借鉴的经验, 对大家有所帮助!

参考文献

[1]陈莲, 高洪, 肖啸.高效液相色谱仪使用中常见问题及其解决方法.饲料工业.2005.

大豆磷脂的高效液相色谱分析篇5

采用正相高效液相色谱法,梯度洗脱程序和蒸发光散射检测器对大豆磷脂组成进行分析,在15 min内将大豆磷脂中4种重要组分:卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂和磷脂酸与其它组分完全分离.用外标法对这4 种重要成分进行定量,线性范围为0.2～5.8 g/L;回收率为96.7～100.8%;相对标准偏差为0.82%～1.34%.方法用于实际样品测定,获得满意的`结果.

作者：夏海涛安红刘郁芬于春玲作者单位：夏海涛,安红,刘郁芬(齐齐哈尔大学化学与化学工程学院物理化学教研室)

于春玲(北华大学吉林林学院)

高效液相色谱法测定叶酸片的含量篇6

【关键词】叶酸片；叶酸；测定

叶酸是由喋呤啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物，是一种水溶性B族维生素，相当于蝶酰谷氨酸[1-2]。叶酸从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。叶酸对孕妇尤其重要。叶酸用于预防胎儿神经管畸形，准妈妈在备孕期间就服用0.4毫克叶酸可以下降胎儿神经管畸形率85%[3-4]。如在怀孕头3个月内缺乏叶酸，可导致胎儿神经管发育缺陷，从而增加裂脑儿，无脑儿的发生率。人类如缺乏叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，还会导致身体无力、易怒、没胃口以及精神病症状[5-7]。本文用高效液相法对叶酸片中的叶酸的进行了含量测定。

1.仪器与试药

1.1仪器

LC-100（梯度配置）高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；制冷和加热循环槽（上海汗诺仪器有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；ELGA超纯水器（上海澜锐仪器科技有限公司）；ABS 220-4分析天平（德祥科技有限公司）；3升基本型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）；TΜ-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2试药

乙腈（杭州興成化工有限公司）、磷酸（江西省新干县金成化工厂）、盐酸（襄樊金译成精细化工有限公司）、磷酸氢二铵（淄博市淄川区鑫川化工厂）、冰醋酸（吴江市龙申化工有限公司）、甲醇（江西省新干县金成化工厂）、冰乙酸（杭州兴成化工有限公司）、四氢呋喃（吴江市龙申化工有限公司）。

2.含量测定

2.1色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[8-12]。色谱柱为依利特hypersil BDSC18色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相；检测波长为254nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按叶酸峰计算应不得低于2000。

2.2供试品溶液的制备

取叶酸片适量，研细，精密称定至容量瓶内，加适量5%氨水超声溶解，放凉，用水定容，过0.45μm的滤膜，即得。

2.3对照品溶液的制备

精密称取叶酸对照品约50mg，置50毫升棕色容量瓶中，用5%氨水超声波振荡溶解并用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含叶酸100μg）。

2.4阴性干扰试验

按方中比例取叶酸片辅料，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与叶酸相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。

2.5标准曲线的制备

制备浓度为20μg·mL-1、40μg·mL-1、80μg·mL-1、160μg·mL-1、200μg·mL-1、240μg·mL-1、280μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，叶酸对照品在40～320μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6精密度试验

精密吸取叶酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.77%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7重现性试验

分别称取同批叶酸片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.65%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8稳定性试验

取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品叶酸峰面积积分值的RSD为0.89%。结果表明叶酸至少在4h内稳定。

2.9回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的叶酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.95%。

2.10样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定叶酸片三批样品中叶酸的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的99.3%、99.6%、100.1%。

3.讨论

叶酸溶于热的稀盐酸和硫磺，略溶于氢氧化碱和碳酸碱溶液，微溶于甲醇，不溶于乙醇和丁醇。本实验采用5%氨水溶解效果较好。分别考察乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1），0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH到3.0）-乙腈（20∶80），乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：20：55∶0.1），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），乙腈-甲醇-四氢呋喃-水（10：15：35∶40），乙腈-甲醇-水（20∶20：60），磷酸二氢钾6.8g与0.1mol·L-1氢氧化钾溶液70mL，加水稀释至800mL，调节pH至6.3，加甲醇200mL，用水稀释成1000mL，磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值6.0）-乙腈（60：40）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定叶酸片含量的方法。叶酸片中叶酸的含量为标示量的95-105%。 [科]

【参考文献】

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高效液相色谱仪篇7

随着科学技术的进步,液相色谱用户对液相色谱技术的要求也不断提高,他们需要“更快地得到更好的结果”。因此,超高效液相色谱(Ultra Performance LC)概念的提出也就十分自然;简单的说:UPLC(超高效液相色谱)是用HPLC(高效液相色谱)的极限作为自己的起点,把分离科学推向一个新领域。

超高效液相色谱应用范围广泛,主要应用类型为高沸点中分子,高分子有机化合物,离子性无机化合物,热不稳定具有生物活性的生物分子。

三聚氰胺(分子式C3N6H6)是一种重要的氮杂环有机化工原料,具有肾毒性。三聚氰胺分子中含有大量氮元素,而普通的凯氏定氮法测定乳粉及食品中的蛋白质含量时无法区分氮元素来源于蛋白分子还是三聚氰胺的氮杂环,因而一些厂商为了降低成本而添加这种化工原料,以提高产品中蛋白质含量检测值。因此,才衍生了乳制品中三聚氰胺的检测方法。三聚氰胺是一种有机化合物,因此采用超高效液相色谱法检测。

检验依据

参照GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法

检验原理

样品用三氯乙酸溶液和乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用超高效液相色谱仪测定,外标法定量。

高效液相色谱仪篇8

关键词：粮食,检测仪器

随着现代检测技术的飞速发展, 高效液相色谱仪广泛应用在医药、食品、粮食等领域。高效液相色谱仪只要求样品能配成溶液, 不受样品挥发性的限制, 流动相可以选择的范围很宽, 固定相的种类繁多, 还可以分离热不稳非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。高效液相色谱仪检测的精准性在粮食行业的应用更是起到了举足轻重的作用。在粮食的检测国家标准中对高效液相色谱的进样注意事项并没有明确说明, 进样方法的正确与否对检测结果影响很大。笔者结合小麦粉中过氧化苯甲酰 (面粉增白剂) 的测定-高效液相色谱法 (GB/T22325-2008) 与自身实践进行了总结, 愿与各位专家、同行共同探讨手动进样操作时的注意事项, 为粮食面粉增白剂的精确检验和粮食安全做出贡献。

1 进样器的选用

美国SP8800型高效液相色谱仪进样器必须选用针头是平头的, 长度为5厘米左右的微量进样器, 过长的微量进样器针头进样时容易弯曲;过短的微量进样器针头进样时待测液不能全部进入检测, 所以选择微量进样器时针头的长短一定要注意。另外不能用尖头的微量进样器。如果采用了尖头的微量进样器, 进样时就容易扎伤或扎坏进样阀的密封装置。造成进样阀的密封装置密封不严, 待测样液流失, 严重影响检测结果。另外也容易堵塞微量进样器, 严重的也容易堵塞色谱柱。从而造成微量进样器和色谱柱损坏, 产生不必要的经济浪费。

2 进样阀的清洗

手动进样阀清洗比较麻烦, 首先用微量进样器吸取甲醇 (色谱纯) 注入进样阀清洗三次, 然后用微量进样器吸取流动相液清洗进样阀三次 (每次时间1分钟左右) 。用微量进样器吸净排液管中的洗液, 然后再用吹风机吹干进样阀。这时要注意风的温度和风量, 一般用微风20℃左右即可。风的温度过高或过低会给进样阀的密封装置造成损害, 影响密封效果, 从而直接影响检测结果。

3 进样前的准备

首先要对事先配制好的流动相液进行过滤, 根据实际需要选择不同型号的滤膜。滤膜分水相和有机相, 水相滤膜是过滤水溶解液的, 有机相是过滤有机溶剂的, 两者绝对不能混用。如果混用就会造成过滤操作失败, 水溶解液和有机溶剂中的杂质过滤不出去, 进样时容易堵塞微量进样器和色谱柱, 还可能使色谱柱压力急剧增高, 影响高效液相色谱仪的正常工作, 从而影响检测结果的准确性。小麦粉中过氧化苯甲酰 (面粉增白剂) 的测定-高效液相色谱法 (GB/T22325-2008) 中规定用0.45μm的滤膜过滤流动相。滤膜的孔隙大小选择非常重要, 孔隙大了不能把流动相中的杂质滤除;孔隙小了可能把流动相中的有效成分截留, 不能充分发挥其作用。过滤完成后要对流动相进行脱气操作, 一般采用超声脱气, 脱气时间至少20分钟。看脱气效果如何, 不行可适当延长脱气时间, 直至起跑脱尽为止。如果不脱尽气泡就进样, 会造成出峰效果不佳, 峰畸形, 直接影响检测结果。

其次进样前先用甲醇 (色谱醇) 清洗微量进样器5~10次, 然后用待测样液润洗3次以上。对于标准曲线制备时进样除上述操作外, 还要注意待测样液浓度的变化, 待测样液浓度依次递增变化时, 微量进样器正常清洗即可。如果待测样液浓度依次递减时, 一定要注意, 先用甲醇 (色谱醇) 清洗微量进样器10次以上, 再用待测样液润洗6~10次, 确保待测样液浓度不变化, 不交叉污染, 检测结果的准确性。

最后进样前要冲洗高压泵和色谱柱。待SP8800型高效液相色谱仪开机正常后, 先用甲醇 (色谱醇) 调节流量为1.0m L/min进行冲洗, 观察泵的压力变化, 一般情况下不要超过2000。如果压力高了, 应及时停机, 检查线路、高压泵和色谱柱, 看看是否有堵塞的地方。如果堵了, 要及时清除;如果没堵, 重新开机, 重新调节流量进行冲洗, 一般用甲醇 (色谱醇) 30分钟以上。冲洗正常后再用流动相进行冲洗, 冲洗20分钟左右, 直到准备指示灯亮为止, 然后准备进样。

4 进样时的操作

SP8800型高效液相色谱仪调试正常后, 取下进样口的保护针, 开始进样。手平稳的持微量进样器取适量待测样液, 排除针中气泡, 水平插入进样阀。不能来回摆动或抖动, 防止针头碰壁或碰伤进样阀。针头插到位后推动针柄进样。此时不能将针拔出, 如果拔出首先是待测样液会顺进样口外渗, 其次是空气会迅速进入, 待测样液挥发, 检测结果就不准确。注射完后迅速、平稳地扳下进样阀扳手, 一秒钟内完成此操作为宜, 以保证进样量的准确。扳下的速度越快进样的压力就大, 压力越大待测样液就全部进入样品定量管, 保证检测结果准确。

5 进样完成后操作

进样完成后待色谱工作站检测出峰后, 将进样阀扳手复位, 才能取下微量进样器清洗干净, 待用。

6 进样完成后的维护

高效液相色谱仪篇9

1 仪器与试药

1.1 实验仪器:

试验中需要用到的仪器包括:超声波清洗仪 (型号:KQ-250DB, 厂家:昆山市超声仪器有限公司) , 电子天平 (型号:Sartorius-BT124S/BT 25S电子天平, 常见:北京赛多利斯仪器系统有限公司) , 高效液相色谱仪 (Agilent 1100) 等。

1.2 试剂与试药:

试验所需试剂中乙腈为色谱纯, 水为纯净水, 其他试剂均为分析纯。试验中所需中药材钩藤样品经鉴定为茜草科植物钩藤的干燥钩藤茎枝。异钩藤碱购自上海中药标准化研究中心, 纯度不低于98%。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:

高效液相色谱法所需色谱柱为Alltech C18柱, 规格为4.6 mm×250 mm, 5μm, 流动相为乙腈-水, 乙腈为流动相A, 水为流动相B, 并以1 m L/L三乙胺, 冰醋酸调节p H值至7.5, 梯度洗脱, 0~20 min时A在50%~55%, 流速为1.0 m L/min, 检测波长为246 nm, 柱温为25℃, 进样量为20μL;超高液相色谱法色谱柱为Waters AC-QIITY UPLCTMT3 C18柱, 规格为2.1 mm×50 mm, 1.7μL, 流动相为乙腈-水, 乙腈为流动相A, 水为流动相B, 并以1 m L/L三乙胺, 冰醋酸调节p H值至8, 梯度洗脱, 流速为0.6 m L/min, 检测波长为246 nm, 柱温为50℃, 进样量为1μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供试品溶液的制备:

取钩藤粉末样品2 g, 称定后放置在圆底烧瓶中, 精密加入2 m L氨水, 闷润30 min后, 精密加入50 m L的乙腈, 称定重量后, 加热回流2 h, 冷却后再次称重, 经乙腈将损失重量补足, 摇匀后过滤, 取续滤液, 作为供试品溶液。同法制成超过液相色谱法供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液制备:

精密称取异钩藤碱对照品适量, 经乙腈溶解后制成每毫升中含有异钩藤碱50 g的对照品溶液, 同法制成超高液相色谱法的对照品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察:

超高液相色谱法:分别取食量的异钩藤碱储备液配制成浓度为0.4602、0.36816、0.27612、0.18408、0.09204、0.04602、0.02301、0.011505、0.002301和0.0004602 mg/m L的对照品溶液, 在2.1所示色谱条件下1μL进样检测, 以对照品的浓度作为横坐标, 峰面积作为纵坐标绘制标准去洗, 结果得到异钩藤碱的线性回归方程为Y=4×106X-4364.9, r2=0.9999, 证实异钩藤碱浓度在0.4602~460.2 g/m L时存在良好的线性关系。

高效液相色谱法:精密称取异钩藤碱5.05mg, 经乙腈溶解后配制成浓度为0.505 mg/m L的对照品溶液, 精密吸取该溶液配制成不同浓度的对照品溶液, 分别为:0.505、0.404、0.303、0.202、0.101、0.0505、0.02525、0.012625、0.002525、0.000505 mg/m L。在2.1所示色谱条件下20μL进样检测, 记录峰面积, 以异钩藤碱浓度为横坐标, 以峰面积作为纵坐标, 绘制标准曲线, 结果得到异钩藤碱的标准曲线为:Y=41.101X-0.233, r2=0.9999, 证实异钩藤碱浓度在0.505~505 g/m L之间时存在良好的线性关系。

2.3.2 精密度实验:

超高液相色谱法:选取浓度为0.036816 mg/m L的对照品溶液, 一日日重复进样3次, 连续进样3 d, 按照2.1所示色谱条件1μL进样检测, 记录峰面积, 结果得到RSD值为0.16%, 证实该仪器的精密度良好。高效液相色谱法:选取浓度为0.02525 mg/m L的对照品溶液, 日内重复进样3次, 连续3 d, 在, 2.1所示条件下20μL进样检测, 记录峰面积, 结果得到RSD值为0.16%, 证实该仪器的精密度良好。

2.3.3 稳定性实验:

超高液相色谱法:精密称定供试品2 g, 在2.2.1条件下制成供试品溶液, 在2.1所示色谱条件下分别在0、1、2、4、8、12、24、36、48、72 h时1μL进样检测, 记录峰面积, 结果得到RSD职位0.14%, 证实溶液在72 h内的稳定性良好。

高效液相色谱法:精密称定供试品2 g, 在2.2.1条件下制成供试品溶液, 在2.1所示色谱条件下分别在0、1、2、4、8、12、24、36、48、72 h时1μL进样检测, 记录峰面积, 结果得到RSD职位0.34%, 证实溶液在72 h内的稳定性良好。

2.3.4 重复性实验:

超高液相色谱法:取6份钩藤药材粉末, 在2.2.1条件下制成供试品溶液, 在2.1色谱条件下进样检测, 记录峰面积, 结果得到RSD值为0.6%, 证实该方法的重现性良好。高效液相色谱法:取6份钩藤药材粉末, 在2.2.1条件下制成供试品溶液, 在2.1色谱条件下进样检测, 记录峰面积, 结果得到RSD值为1.5%, 证实该方法的重现性良好。

2.3.5 回收率实验:

超高液相色谱法:取5份同一批次一直含量的钩藤药材样品, 分别精密加入一定量的对照品溶液, 在2.1所示条件下进样检测, 记录峰面积, 计算回收率, 结果发现, 平均回收率为96.41%, RSD值为3.1%;高效液相色谱法:取5份同一批次一直含量的钩藤药材样品, 分别精密加入一定量的对照品溶液, 在2.1所示条件下进样检测, 记录峰面积, 计算回收率, 结果发现, 平均回收率为98.01%, RSD值为4.1%。

2.4 样品含量测定:

取不同批次钩藤药材粉末样品, 在2.2.1条件下配制成供试品溶液, 在2.1条件下进样检测, 记录峰面积, 计算含量。结果发现, 超高液相色谱法测定钩藤中异钩藤碱的含量平均为0.09653%, 高效液相色谱法测定钩藤中异钩藤碱的含量平均为0.09159%, 二者无明显差异。

3 讨论

中药材钩藤为茜草科植物钩藤、大叶钩藤、毛钩藤、华钩藤的干燥带钩茎枝。钩藤的主要功效为熄风定惊、清热平肝, 在肝风内动、感冒夹惊、惊痫抽搐、小儿惊啼、妊娠子痫以及头痛眩晕等症的治疗中具有很好的效果[2]。经超高液相色谱法和高效液相色谱法对钩藤中有效成分异钩藤碱含量进行测定时具有方法准确可靠, 操作简单等优势, 值得关注。

参考文献

[1]张荣, 刘睿, 刘启德, 等.钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定[J].中药新药与临床药理, 2009, 11 (4) :1001-1003.

半夏炮制前后高效液相图谱变化篇10

关键词：半夏,法半夏,炮制,高效液相色谱

半夏属于天南星科半夏属植物, 入药为块茎, 在我国长江流域及东北、华北等地区分布广泛[1]。该药首次出现于《神农本草经》, 迄今为止已有几千年历史。该药物味辛且性温, 小毒, 可有效消痰散结、燥湿化痰及降逆止咳。现代药理学研究表明, 半夏还具有明显的护肝、抗生育与肿瘤及促血脂下降等作用[2], 同时可用于治疗冠心病, 效果明显。半夏中含有诸多化学成分, 如半夏淀粉、胆碱、半夏蛋白、腺苷、胡萝卜苷、胆碱、无机元素、草酸钙、葡萄糖及半夏脂蛋白酶等[3,4,5]。生半夏炮制后会降低其毒性与刺激性, 导致成分结构出现变化, 进而降低毒性与刺激性成分含量, 达到降低或消除刺激性、毒性作用。目前, 临床尚未明确其具体毒性与刺激性成分。为分析半夏炮制前后高效液相图谱的变化, 现采用HPLC法对其化学成分进行分析, 并为临床研究其毒性与刺激性成分提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器

采用高效液相色谱仪, 型号为Agilent 1200;KQ5200型超声清洗器;滤膜为微孔 (0.54μm) ;电子天平。

1.2 试剂

乙腈、甲醇为色谱纯, 重蒸水。

1.3 材料

生半夏 (湖南中医药大学中药鉴定教研室) ;半夏干燥块茎。

2 方法与结果

2.1 炮制法半夏

分开大小不一的半夏, 浸泡于水中, 待其无干心即可, 净半夏100kg。适量甘草 (15kg) 加水煎煮, 2次, 将煎液合并, 用水对石灰液 (生石灰10kg) 予以制作, 倒入合并煎液搅拌至均匀;添加半夏浸泡, 搅拌 (2次/天) , 确保浸泡液pH大于12。当剖面变为均匀黄色且尝后舌微麻时, 取出并充分洗净, 烘干或阴干即可[6]。

2.2 样品溶液制备

半夏药材行干燥、粉碎处理后, 过60目筛, 精密称量, 取1.0g半夏于50mL锥形瓶放置, 添加30%甲醇30mL, 行超声提取, 持续时间30min, 待冷却后弥补失重重量, 过滤取滤液5mL, 微孔滤膜 (0.45μm) 过滤;萃取主要使用25mL乙酸乙酯与正丁醇, 数次后浓缩为浸膏, 溶解时主要添加30%甲醇, 再次过滤即可。

2.3 色谱条件

色谱柱型号为VP-ODS C18, 参数为:内径为5μm, 规格为150×4.6mm;0.01%磷酸水:乙腈线性梯度洗脱从100∶0 (0min) 至50∶50 (45min) , 流速为1.0mL/min, 检测波长260nm, 进样量为10μL, 柱温30℃。

2.4 精密度试验

检测供试品溶液, 进样, 连续5次, 测定HPLC图谱。结果表明:该方法精密度优良, RSD (相对保留时间) 小于0.2%, RSD (相对峰面积) 小于2%。

2.5 稳定性试验

精密称量1.0g半夏粉末, 依据“2.2”项方法制备, 进样检测, 分别于0、4、8、12、24h开展。结果表明, 试验稳定性良好, RSD小于0.2%, RSD小于2%。

2.6 重复性试验

取5份批号相同的半夏药材, 制备供试品溶液, 经检测后发现该方法重复性较好, RSD小于0.2%, RSD小于2%。

2.7 测定不同类型供试品HPLC图谱

将各供试品分别取出并进样, 可得到HPLC谱图。生半夏炮制后其化学成分含量与内在成分均出现变化, 见图1、图2、图3。

3 讨论

3.1 样品处理方法考察

本研究, 主要考察回流提取、超声等方法, 超声提取样品图谱有较少的杂质干扰与分离较好的色谱峰基线, 且该方法易于操作, 提取时间少, 省时省力, 值得借鉴。

3.2 色谱条件选择

研究[7,8]认为, 半夏指纹图谱检测波长为260nm或254nm。本研究中主要开展双波长检测, 结果发现260nm有较好的色谱峰峰形及较丰富色谱信息, 且分离度优良。因此, 检测波长主要选择260nm。流动相选择主要对类型不一的流动相梯度洗脱进行考察, 如0.01%磷酸水-乙腈、甲醇-水及乙腈-水, 其中选择第一种有较好的峰形。

3.3 法半夏与生半夏HPLC图谱分析

本研究, 主要采用HPLC法检测半夏炮制前后药材图谱, 方法重复性较好且易于操作, 有利于分析半夏药材炮制前后化学成分的改变情况。炮制在一定程度上影响药材的成分与质量, 与中医药理论中半夏炮制的增效和减毒存在联系[9], 临床需深入研究药材炮制后新型组分化学结构与功效变化之间存在的关系。

参考文献

[1]中国医学科学院药物研究所.中药志[M].第2版.北京:人民卫生出版社, 1993.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010版.北京:中国医药科技出版社, 2010:110-111.

[3]汪蕾, 张继振.天南星属植物研究进展[J].延边大学学报:自然科学版, 2004, 30 (1) :66-73.

[4]文燕, 张玉琴, 屈玲, 等.清半夏炮制过程中化学物质及刺激性变化[J].中国保健营养:上旬刊, 2013, 23 (3) :1435.

[5]高昌琨, 吴琼, 张陆军.半夏及炮制品对动物黏膜刺激性比[J].安徽中医学院学报, 2001, 20 (6) :49-50.

[6]戎其月, 伍庆, 童红, 等.半夏的HPLC指纹图谱研究[J].中国中药杂志, 2008, 3 (11) :1342-1343.

[7]文燕, 张明, 廖志华, 等.半夏药材HPLC指纹图谱研究[J].中药材, 2008, 31 (4) :503-506.

[8]邹菊英, 陈胜璜, 雷昌, 等.半夏炮制前后HPLC图谱的比较[J].湖南中医药大学学报, 2010, 30 (9) :127-129.

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