反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物（通用11篇）

篇1：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

对植物中9种多酚类化合物的色谱分离条件进行了优化,分别探讨了流动相组成、流动相中醋酸浓度、醋酸溶液与甲醇的比例对保留时间的影响,确定了梯度分离条件,并对9种天然多酚类化合物进行了定量分析.该方法的检测限为13.26～59.29 mg/kg(S/N=3).在3.0～100.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数r2为0.997 9～0.999 9.9种待测化合物的加标回收率为96.8%～108%,相对标准偏差(RSD)小于3.8%(n=3).用80%甲醇超声提取烟草样品,并通过优化的色谱条件对其进行分析,测定了实际烟草样品中芸香苷和绿原酸的.含量.结果表明,该方法具有一定的实用价值.

作 者：李福娟 蔡文生 邵学广 LI Fujuan CAI Wensheng SHAO Xueguang 作者单位：南开大学化学系分析科学研究中心,天津,300071刊 名：色谱 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY年，卷(期)：25(4)分类号：O658关键词：反相高效液相色谱 超声波提取 多酚 烟草

篇2：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

反相高效液相色谱法分离测定5种黄酮类化合物

建立了用反相高效液相色谱法测定槲皮素、芦丁、桑色素、木犀草素和染料木素等黄酮类化合物的方法.色谱条件是:ZORBAX ECLIPSE XPB-C8 5μm(4.6 mm×150 mm)色谱柱,V甲醇:V水(含0.2%磷酸)=50:50的.溶液为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长260 nm.结果表明槲皮素、芦丁、桑色素、木犀草素和染料木素能较好的分离,分别在0.04～20,0.03～15,0.02～20,0.03～15,0.02～16 μg/mL的浓度范围内与峰面积成良好线性关系,检测限分别为12.6,10.0,15.2,13.3,6.1 ng/mL,方法可用于槐米中黄酮类物质的测定.

作 者：严军 张志远 刘绍璞 YAN Jun ZHANG Zhi-yuan LIU Shao-pu 作者单位：西南大学,化学化工学院,重庆,400715刊 名：西南大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SOUTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)年，卷(期)：200729(3)分类号：O657.7+2关键词：反相高效液相色谱法 黄酮 槐米

篇3：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

氢醌、苯酚、熊果苷、曲酸是美白祛斑类化妆品中可能用到的功效成分;水杨酸、间苯二酚均具有较强的抗菌和消炎作用, 含这类物质的化妆品的使用能够显著改善皮肤的状态, 起到抗菌消炎和美白祛斑的功能, 因此被世界各国广泛应用于化妆品中。但这类物质均具有一定的毒性, 对人体有潜在的毒副作用, 长期使用很可能引起病变。日本官方已禁止进口和生产含有曲酸的化妆品, 我国《化妆品卫生规范 (2007版) 》规定:祛斑类产品中苯酚为禁用物质, 水杨酸在化妆品中使用的最高限量为0.5%;间苯二酚限量为:0.5%;氢醌的限量为0.2%, 同时注明避免接触皮肤。

目前这类物质常用的检测方法有胶束电动毛细管色谱安培检测法, 气相色谱法, 液相色谱法, 液相色谱-串联质谱法等。在目前已报道的检测方法中通常选择其中的一种或几种进行测定, 但任何一种功能性化妆品都不能仅依靠一种成分达到祛斑美白的功能, 因此, 多种成分在同一化妆品中的复合使用十分常见。目前尚未有同时测定氢醌、苯酚、熊果苷、曲酸、水杨酸和间苯二酚的方法报道。本方法建立了二极管阵列检测器高效液相色谱法同时测定化妆品中的六种酚类物质。

实验部分

仪器与试剂

仪器

Aglient1260高效液相色谱仪、四元梯度泵及PDA二极管阵列检测器 (美国Agilent公司) ;XDB-C18色谱柱 (美国Agilent公司) ;台式高速离心机 (湖南湘仪实验室仪器开发有限公司) ;超声波清洗器 (昆山禾创超声仪器有限公司) ;Milli-Q超纯水器 (美国Millipore (上海) 贸易有限公司) 。

水杨酸纯度为99.5% (中国三联化工厂) ;苯酚纯度为99.0% (国药集团化学试剂有限公司) ;间苯二酚纯度为99.5% (江苏永华精细化学品有限公司) ;氢醌纯度为99.0% (国药集团化学试剂有限公司) ;熊果苷纯度为98.0% (ANPEL Scientific Instrument (Shanghai) Co.Ltd) ;曲酸纯度为95.0% (ANPEL Scientific Instrument (Shanghai) Co.Ltd) ;乙腈 (色谱纯) ;甲醇 (色谱纯) ;乙醇 (分析纯) ;乙酸乙酯 (分析纯) ;超纯水 (实验室自制) ;四种美白祛斑化妆品乳液购自当地超市, 两种美白化妆水由企业无偿提供。

标准储备溶液的配制:准确称取适量的水杨酸、苯酚、间苯二酚、氢醌、熊果苷、曲酸于6个25m L容量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 配制成浓度分别为4.88mg/m L、3.44mg/m L、3.34mg/m L、4.17mg/m L、4.13mg/m L、4.24mg/m L的单一标准储备溶液。

混合标准溶液的配制:分别移取适量的各单一标准储备溶液于50m L容量瓶中, 用甲醇溶液稀释并定容至刻度, 混匀。使用时根据需要稀释至所需浓度的标准溶液。

色谱条件

XDB-C18色谱柱 (5μm, 4.6mm×250mm) ;柱温:35.0℃。检测波长:273nm;进样量:2.0μL;流动相:A为0.01mol/L的乙酸铵溶液, B为甲醇, 采用梯度洗脱程序:0-10.0min, A:B=75:25;11.0-30min, A:B=60:40。流速:0.8m L/min。

样品的制备

准确称取1.0g样品于25m L具塞刻度试管中, 加乙醇定容至刻度后摇匀, 超声提取30min, 经离心分离后, 经0.45μm滤膜过滤, 滤液作为待测样品。

结果与讨论

样品处理方法的选择

提取方式的选择

为尽量减少操作步骤和获得尽可能高的提取效率, 试验比较了微波提取和超声提取两种方式对样品进行萃取的效果。研究表明, 采用超声提取操作简便, 提取效率较高。

提取剂的选择

提取溶剂的选择是基于六种酚类化合物的分子特点来确定的。曲酸、水杨酸、苯酚、间苯二酚、氢醌、熊果苷均能够溶于水、醇中, 曲酸、熊果苷、间苯二酚均微溶或不溶于乙醚、氯仿。根据化合物的特点试验考察了水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯四种溶剂的提取效率, 研究表明, 当采用乙醇为提取溶剂时, 提取效率最佳。

提取时间的选择

在化妆品中添加相同量的六种酚类化合物的混合标准溶液, 采用不同时长进行超声提取并测定溶液中六种酚类化合物的含量, 测定结果表明, 超声提取时间30min, 能够实现对六种酚类的完全提取, 因此选用30min为最佳提取时间。

色谱条件的选择

波长的选择

根据各化合物的特征, 氢醌、苯酚、熊果苷在230nm、280nm处有较大紫外吸收;曲酸在268nm处有最大吸收;水杨酸在225nm、273nm处有最大吸收;间苯二酚在227.5nm、278nm处有最大吸收。本试验研究了化合物在225nm、230nm、273nm处各化合物的吸收情况和灵敏度, 发现在273nm处六种化合物的灵敏度较高, 同时干扰也最低, 因此, 最终选择在273nm处进行测定。

流动相的选择

试验分别研究了不同比例的乙腈-水、甲醇-水, 甲醇-水 (乙酸铵0.02mol/L) 、甲醇-水 (磷酸氢二钾0.01mol/L) 对结果的影响, 发现当采用甲醇-水 (含0.02mol/L乙酸铵) 时, 六种酚类物质能够初步分开。

实验同时研究了流动相配比和流速对结果的影响, 研究结果表明, 当采用梯度洗脱、乙酸铵含量为0.01mol/L、流速为0.8m L/min时, 六种酚类物质能够完全分离。

综上所述, 试验最终采用XDB-C18色谱柱 (5μm, 4.6mm×250mm) ;柱温:35.0℃。检测波长:273nm;流动相:A为0.01mol/L的乙酸铵溶液, B为甲醇, 采用梯度洗脱程序:0-10.0min, A:B=75:25;11.0-30min, A:B=60:40。流速:0.8m L/min及进行测定。色谱图如图1所示。

线性范围和检出限

将配制好的混合储备标准溶液逐级稀释后, 按照已经建立的方法进行测定, 结果表明, 六种酚类物质在各自的质量浓度范围内, 其峰面积与质量浓度有良好的线性关系, 相关系数和定量检出限分别见表2所示。

实际样品的测量

在最佳试验条件下分别对六种化妆品进行了测定, 每个样品平行测定3次, 其中发现有一款水润美白日霜产品中含有熊果苷, 含量为1.32%;一款控油保湿乳液中含有水杨酸成分, 含量为0.23%。

加标回收率

采用添加法在待测样品中添加不同浓度水平的六种酚类物质的混合标准溶液, 进行回收率和精密度的测定, 添加三个水平, 每个水平平行测定三次, 结果表明该方法的平均回收率为92.8%~102.5%, 相对标准偏差 (RSD) 为0.87%~3.95%。各化合物的回收率及相对标准偏差见表3。

(1熊果苷;2曲酸;3氢醌;4水杨酸;5间苯二酚;6苯酚)

结语

本文建立了同时测定化妆品中六种酚类物质的高效液相色谱法。以乙醇为溶剂, 采用超声萃取技术对化妆品中的酚类物质进行提取, 提取液经处理后, 经高效液相色谱分析。该方法简便快捷、定性准确, 灵敏度高, 检出限低, 完全能够满足市场检测的需要。

篇4：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

关键词 澳洲坚果 ；对羟基苯甲醇 ；3，4-二羟基苯甲酸 ；对羟基苯甲醛 ；对羟基苯甲酸 ；青皮

中图分类号 S664.9 ；TQ245.6 文献标志码 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.07.021

澳洲坚果（Macadamia ternifolia F. Muell）又名昆士兰果、昆士兰栗、澳洲胡桃、夏威夷果等[1]，因其果仁风味独特、营养丰富而被誉为“干果皇后”。随着我国农业产业结构的调整，我国澳洲坚果近年来获得空前发展，种植面积已近4万hm2[2]，年产干果近万吨，除果仁直接食用、少量果壳（种皮）制作木炭外[3-5]，其绿色的果皮（俗称青皮，占整果鲜重的45%～60%）仅有极少量用作沤肥或饲料，绝大部分被丢弃，亟需开发利用。

研究表明，澳洲坚果果仁中含有酚类酸、维生素E、甾醇等抗氧化活性成分[6-9]；芦燕玲等[10]用萃取和气相色谱-质谱联用法分离鉴定出澳洲坚果壳中含有酸类；张明楷等[11]对6种澳洲坚果青皮中的单宁含量进行了测定。根据植物化学成分分析，澳洲坚果皮中应含有大量多酚类物质，需要首先研究其化学成分，以便有针对性地开发利用。施蕊等[12]报道澳洲坚果青皮中含有熊果苷、豆腐果苷等化学成分，但这不足以解释其具有杀菌、抗氧化等多种生物活性。本研究课题组从澳洲坚果青皮中分离得到晶体状态的3，4-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛和对羟基苯甲醇4种酚类化合物（鉴定结果将另文发表），这4种酚类物质都有一定抗氧化或杀菌的作用，即它们可以部分地解释澳洲坚果青皮具有防腐杀菌和抗氧化[13]等功能与活性。

本研究旨在建立一种快速、准确测定澳洲坚果青皮中4种酚类物质的HPLC分析方法，以为该资源的进一步开发、利用、产品的质量控制等提供可靠的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料

澳洲坚果果实，由广西南亚热带农业科学研究所王文林老师课题组馈赠。

1.1.2 主要仪器及试剂

本研究使用的主要仪器：Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪及配套SPD-M20A光电二极管阵列检测器（DAD）（日本岛津公司）；3，4-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛标准品（AR级，阿拉丁试剂有限公司）；冰乙酸（AR级，天津化学试剂一厂）；甲醇（HPLC级，欧普森试剂有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 样品前处理

取自然干燥的澳洲坚果青皮磨成粉末，用70%的乙醇提取3次，合并提取液，50℃下旋转蒸发除去溶剂，乙醇定容至50 mL，过0.45 μm滤膜，待测。

1.2.2 色谱条件的优化

通过扫描得到流动相和各单体酚类物质在紫外光区的最大吸收波长，选择能同时测定以上4种酚类物质、又能避开溶剂吸收的适宜波长。流动相、流速、洗脱方式等都会对目标物质能否单独出峰不受其它杂质干扰造成影响，进而影响样品与标准品的对比，无法进行定性测定。通过调整流动相体系、梯度洗脱比例和流速、改变进样量等获得快速分离测定目标物质的最优条件。

1.2.3 标准曲线的绘制

精确称取标准品3，4-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛，对羟基苯甲醇100 mg，分别用甲醇定容至10 mL，得到每个标准品的单标储备液。

分别移取50、100、150、200、250 μL 3，4-二羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛的标准溶液，20、30、40、50、60 μL对羟基苯甲酸标准溶液和4、6、8、10、12 μL对羟基苯甲醇标准溶液，用甲醇定容至50 mL，得到不同梯度的酚类混合标准溶液，每个浓度重复进样6次，以各单体酚的平均峰面积（y）与标准溶液中物质的浓度（x）做校准曲线，计算标准曲线回归方程及相关系数。

1.2.4 检测限和定量限

将一定浓度的标准溶液逐级稀释，进样，当信噪比等于3时，所对应的标准溶液中所含组分的量为最低检测限；当信噪比等于10时，所对应的标准溶液中所含组分的量为定量限。

1.2.5 加标回收测定

已知酚类物质含量的青皮提取液中，定量添加各酚类物质标准品，平行制备6份，并精确吸取10 μL进样，计算各酚類物质的加标回收率。

1.2.6 重复性和仪器精密度测定

按上述方法重复制备6份样品进样，记录峰面积，计算峰面积相对标准偏差（RSD），检测方法的重复性。 同一样品分3 d进行实验，每天精确进样10 μL，连续进样6次，记录峰面积，分别计算日内和日间峰面积RSD值，比较日内和日间仪器的精密度。

1.2.7 样品稳定性测定

取同一样品室温下放置，并于样品制备后的0、2、4、8、12、16、24、36、48 h进样，每次进样10 μL，测定峰面积，计算RSD值。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

篇5：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

高效液相色谱法同时测定水中的9种酚类化合物

摘要：建立了高效液相色谱法同时测定水中的`9种酚类化合物的分析方法.水样经同相萃取法处理后,以Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d,5 μm)为分离柱,(甲醇+乙酸)/(水+乙酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,采用VWD检测器检测,9种酚类化合物的检出限均在0.000 10 mg/L以下,加标回收率在85%～130%之间.方法简便,适用于水中酚类化合物的分析.作 者：吴梅贤    WU Mei-xian  作者单位：广州市穗泉水质检测有限公司,广东广州,511400 期 刊：净水技术  ISTIC  Journal：WATER PURIFICATION TECHNOLOGY 年，卷(期)：, 27(6) 分类号：X502 关键词：酚类    水    高效液相色谱法    可变波长检测器   

篇6：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

反相高效液相色谱法同时测定黄芪中的4种酚酸

建立了黄芪中4种酚酸类化合物的高效液相色谱测定方法, 并分析比较了提取方法和测定条件. 实验色谱条件为: ZORBAX Eclipse XDB-C8柱(150 mm×4.6 mm;5 μm), 以乙腈-0.4%冰醋酸水溶液(体积比为22∶78, pH=2.9)为流动相, 柱温: 28 ℃, 流速: 0.8 mL/min, 检测波长为325 nm和260 nm, 外标法定量. 样品加标回收率在89.34%～103.45%, 相对标准偏差小于4.5%. 该法简便、快速、灵敏, 可用于黄芪中4种酚酸的同时测定.

作 者：刘丽敏 彭敬东 王丽峰 LIU Li-min PENG Jing-dong WANG Li-feng 作者单位：西南大学,化学化工学院,重庆,400715刊 名：西南大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SOUTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)年，卷(期)：30(3)分类号：O657.7+2关键词：高效液相色谱法 黄芪 酚酸

篇7：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

关键词：塞来昔布片,高效液相色谱法,测定

塞来昔布是一种新一代的化合物, 具有独特的作用机制即特异性地抑制环氧化酶-2 (COX-2) [1,2,3,4,5,6]。塞来昔布常用于缓解骨关节炎的症状和体征、缓解成人类风湿关节炎的症状和体征、治疗成人急性疼痛、缓解强直性脊柱炎的症状和体征[7,8,9,10,11]。本文采用高效液相法对塞来昔布片中的塞来昔布的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器:

安捷伦1100高效液相色谱仪、安捷伦色谱工作站、安捷伦1100可变波长检测器、瑞士梅特勒-托利多MS精密天平 (梅特勒-托利多中国公司) 、PS3200超声波震荡器清洗机 (普洛帝中国服务中心) 、C1450-230V微型高速离心机 (北京晨曦勇创科技有限公司) 、EPED-E-EDI系列超纯水机 (南京易普易达科技发展有限公司) 、p HS-2C型精密酸度计 (上海精科雷磁厂) 、TU-1901双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) 、XSYF-D实验室废水处理设备 (北京湘顺源科技有限公司) 、德国优莱博TW20通用水浴槽 (上海沃珑仪器有限公司) 。

1.2 色谱柱:

安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 (218 mm×4.6mm, 5μm) 。

1.3 对照品:

塞来昔布。

1.4 试剂:

甲醇 (上海一基生物科技有限公司) 、乙腈 (北京精华耀邦医药科技有限公司) 、冰乙酸、三乙胺 (上海倍卓生物科技有限公司) 、磷酸二氢钾 (北京精华耀邦医药科技有限公司) 、磷酸 (上海倍卓生物科技有限公司) 、醋酸 (上海倍卓生物科技有限公司) 、盐酸 (北京精华耀邦医药科技有限公司) 。

1.5 试药:

塞来昔布片。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件。

依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下[12,13,14,15]。流动相:乙腈-水 (70:30) 为流动相, 检测波长:254nm, 流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按塞来昔布峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备。

精密称取塞来昔布对照品适量, 置容量瓶中, 加甲醇制成每1m L含0.1mg的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液的制备。

取塞来昔布片, 研细, 精密称取 (相当于塞来昔布30mg) , 置圆底烧瓶, 加入80毫升甲醇, 回流提取半小时, 放冷, 过滤, 将滤液定容至100毫升。

2.4 专属性试验。

依照处方取除塞来昔布, 按样品制备工艺制成阴性对照样品, 研细, 精密称取 (相当于塞来昔布30mg) , 置圆底烧瓶, 加入80毫升甲醇, 回流提取半小时, 放冷, 过滤, 将滤液定容至100毫升, 依上述方法测定, 结果阴性试验没有干扰, 表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验。

精密称取塞来昔布对照品适量, 加甲醇使溶解, 制成浓度为0.2mg·m L-1的供试品溶液。照上述色谱条件, 精密吸取10μl, 连续进样6次, 记录峰面积。结果, RSD=0.95%, 表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察。

精密称取塞来昔布对照品10.0mg, 置10ml容量瓶中, 加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 分别精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0m L, 置于5m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL, 注人液相色谱仪, 依照2.1项下的色谱条件测定, 记录色谱峰。以峰面积 (Y) 为纵坐标, 对照品进样量 (X) 为横坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。结果表明, 塞来昔布在0.04~0.5mg·m L-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验。

称取同一批的塞来昔布片样品6份, 按测定方法项下的方法制备供试品溶液, 测定含量, 并计算样品的RSD值, 结果RSD为0.95%, 结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验。

精密称取已知含量的样品6份, 分别加入一定量的塞来昔布对照品, 上述方法进行测定, 计算回收率, 平均回收率分别为99.5%, RSD为0.88%。

2.9 样品稳定性试验。

取同一批塞来昔布片样品, 按2.3项下的供试品制备方法制备供试品, 将供试品置室温下放置, 分别于第0、1、2、3、4、5、8小时, 精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中, 记录色谱图。测定塞来昔布片中塞来昔布的RSD=0.89%。结果表明供试品8小时内稳定。

3 讨论

篇8：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

关键词： 厚朴树叶；厚朴酚；含量；高效液相色谱法；测定

中图分类号： O657 7+2；R284 2 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0311-03

厚朴（Magnolia officinalia）是木兰科木兰属的一种高大落叶植物 [1]，别名川朴、紫油厚朴，树高15～20 m，广泛地分布于湖北西部、四川西南部、陕西南部、甘肃南部、江西、安徽、浙江、福建、湖南等地 [2]，厚朴树皮是我国传统中药材，称为中药厚朴，始载于《神农本草经》，列为中品，其后历代本草均有记载，厚朴的树皮、根皮、花、籽及嫩芽均能入药 [3]，有燥湿消痰、化湿导滞、消除腹胀便秘、治疗痰饮喘咳、驱风镇痛等功效，还具有抗菌、抗病毒、抗过敏、影响胃肠活动、松弛肌肉和中枢抑制等作用，以厚朴树皮为主，将其作为中药材或深加工的原料使用。厚朴酚是厚朴中的活性物质之一 [4]，有抗菌、镇静中枢神经、松弛肌肉、抗溃疡、抗氧化、预防龋齿等药理作用 [5]，最近研究表明厚朴酚还有抑制癌细胞的作用 [6]，厚朴酚应用广泛，是一些中成药如保和丸、藿香正气水等的主要成分。目前，厚朴酚主要是从厚朴树皮提取，厚朴树皮资源有限，厚朴树一般要生长15年才能符合药用需要，挖根剥皮，一次性使用，而厚朴树叶资源却非常丰富 [7]。人们对厚朴树叶的开发利用研究报道较多 [8]，不同产地和不同季节厚朴叶中厚朴酚以及和厚朴酚含量存在差异 [9-11]，用高效液相色谱法检测厚朴树叶中厚朴酚的含量，不同提取方法测得厚朴树叶中厚朴酚含量不同 [12-13]，厚朴树叶提取物对植物病原真菌有抑菌活性 [14]，厚朴树叶中含有和厚朴树皮中相同的成分，可用厚朴树叶提取厚朴酚，厚朴树叶的利用前景广阔。陕西南部秦巴山区有丰富的厚朴资源，本研究采用超声辅助提取法和索氏回流提取法从厚朴树叶中提取厚朴酚，进行定性鉴定，用反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中厚朴酚的含量 [15]，可为开发利用厚朴树叶资源提供技术支撑。

1 材料与方法

1 1 材料、试剂和仪器

1 1 1 试验材料 厚朴树叶于2012年11月上旬收集于陕西南部秦巴山区，经陕西理工学院植物学专家赵桦教授分析和辨认，为木兰科木兰属植物厚朴的叶子。置于烘箱50 ℃烘干至恒质量，用中草药粉碎机粉碎过60目筛，密封保存备用。

1 1 2 试剂 厚朴酚标准品（中国药品生物制品检验所），色谱甲醇（色谱纯，进口分装），乙腈（色谱纯TEDIA，进口分装）。乙醇、甲醇、三氯化铁、间苯三酚、苯、香草醛、硫酸、盐酸、羧甲基纤维素钠均为国产分析纯，由天津市天力化学试剂有限公司生产。薄层层析硅胶GF254（分析纯，青岛海洋化工厂）。 1%香草醛硫酸显色剂配制：100 mL无水乙醇、1 g香草醛和10 mL浓硫酸，混合均匀。5%的三氯化铁甲醇水溶液配制：甲醇和水体积比1 ∶ 1混合，按质量百分数称取三氯化铁，混合均匀。间苯三酚盐酸溶液：称取间苯三酚0 1 g，加无水乙醇1 mL，再加盐酸9 mL，混匀，用时新配。水为二次蒸馏水。

1 1 3 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），SL二极管阵列检测器（美国安捷伦公司），Kromasil C18色谱柱（15 cm × 0 46 cm，5 μm，重庆中谱科技有限公司）。超声清洗机（浙江省宁波新芝生物股份有限公司），中草药粉碎机（F117型，天津市泰斯特仪器有限公司），电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司），循环式真空泵（SHZ-Ⅲ型，河南省巩义市予华仪器有限责任公司），电子分析天平（GR-200，日本），薄层色谱扫描仪（北京化学科技有限公司），旋转蒸发仪（河南巩义仪器厂），Soxhelt提取器。

1 2 试验方法

1 2 1 从厚朴树叶中提取厚朴酚 （1）超声辅助提取法：准确称取0 200 0 g粉碎好的厚朴树叶粉末置于带塞锥形瓶中，加入25 mL甲醇，超声30 min，浸渍24 h。提取液呈深棕色浑浊液体，用真空泵减压抽滤，滤液呈透亮棕色，用活性炭脱色，减压回收甲醇，真空干燥提取物。用色谱甲醇溶解，定容到25 mL的容量瓶中，供定性鉴定和含量测试。精确吸取定容液 2 5 mL 于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇稀释到刻度，摇匀，为超声提取待测样品溶液。（2）索氏回流提取法：准确称取厚朴树叶细粉2 000 0 g，用滤纸包好放置于Soxhelt提取器的提取管中，加入250 mL甲醇回流提取48 h，至回流液澄清。提取液呈棕黑色，用活性炭脱色，减压回收甲醇，真空干燥提取物。用色谱甲醇溶解，定容到250 mL的容量瓶中，供定性鉴定和含量测试。精确吸取定容液2 5 mL于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇稀释到刻度，摇匀，为索氏提取待测样品溶液。

1 2 2 厚朴酚定性鉴定 （1）厚朴酚定性检测：分别取超声提取物和索氏提取物脱色之后的定容液体2 mL各2份于小试管中，再分别加入三氯化铁甲醇水溶液3滴和间苯三酚盐酸溶液3滴，摇匀，进行显色反应。（2）厚朴酚的薄层色谱法检测：取超声提取物和索氏提取物脱色之后的定容液体，另取厚朴酚标准品储备液，按照《中国药典》2010年版一部附录中薄层色谱法，用毛细管吸取3种溶液，分别点于同一个硅胶薄层板上，以苯 ∶ 甲醇=27 ∶ 1为展开剂，展距8 cm，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸溶液后，在100 ℃下烘烤2～3 min，取出冷却，在日光下和薄层色谱扫描仪下分别观察。

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1 2 3 厚朴树叶中厚朴酚含量的测定 标准品溶液的制备：准确称取厚朴酚标准品1 500 mg，以色谱甲醇为溶剂，定容于10 mL棕色容量瓶中，配制成含厚朴酚0 150 mg/mL的标准品储备液。用厚朴酚标准品储备液精确配5个浓度梯度的标准品待测溶液，厚朴酚含量分别是0 012 5、0 025 0、0 037 5、0 050 0、0 062 5 mg/mL，在色谱条件下进样检测，确定线性标准工作曲线。色谱条件：用Kromasil C18色谱柱，分别以乙腈 ∶ 水体积比65 ∶ 35和甲醇 ∶ 水体积比78 ∶ 22为流动相进行分析测试，流速为1 mL/min，检测波长294 nm，进样量20 μL，保留时间8 min，柱温30 ℃。将超声提取待测样品溶液和索氏提取待测样品溶液与测试标准品待测溶液在同样色谱条件下测试。

2 结果与分析

2 1 提取方法选择

用超声辅助提取法和索氏回流提取法从厚朴树叶中提取厚朴酚，索氏回流提取法需要48 h才能提取完全，提取时间长，且长时间加热回流容易引起有效成分的氧化变质，使得提取液呈棕黑色，对实际操作中的提纯和含量测定都会带来很大的影响。超声辅助提取法温度低，一般控制在 50 ℃ 以下，所需时间短，约30 min，操作简单，由于提取温度低，有效成分不易损失，能耗低，一般可选用超声辅助提取法。

2 2 厚朴酚的定性分析

超声提取物和索氏提取物分别加三氯化铁甲醇水溶液，均呈现蓝黑色，是厚朴酚的酚羟基反应，发生了显色反应；超声提取物和索氏提取物分别加间苯三酚盐酸溶液，出现红色沉淀，是厚朴酚的丙烯基反应，说明有厚朴酚被提取出来。厚朴酚的薄层色谱板在日光下和薄层色谱扫描仪下，超声提取物和索氏提取物的色谱图和标准品相应的位置上，均显棕红色斑点，如图1所示的薄层板分析图谱，说明厚朴树叶提取液中含有厚朴酚，还有其他有机物被提取出来。

2 3 工作曲线的制作

检测浓度梯度的不同标准品待测溶液，以含量（mg/mL）为纵坐标、色谱峰面积为横坐标来绘制工作曲线图（图2）。当厚朴酚浓度为 0 012 5 mg/mL时，峰面积为421 489 90；浓度为0 025 0 mg/mL时，峰面积为822 312 62；浓度为 0 037 5 mg/mL 时，峰面积为1 264 469 70；浓度为 0 050 0 mg/mL 时，峰面积为1 665 953 74；浓度为 0 062 5 mg/mL 时，峰面积为2 055 781 55。由此可见，峰面积与厚朴酚含量建立了良好的线性关系。厚朴酚含量（y）与峰面积（x）的回归方程为：y=3 006×10 -5x+1 449 1×10 -5（r=0 999 9），线性范围在0 012 5 ～0 062 50 mg/mL。

2 4 厚朴树叶中厚朴酚的含量

在高效液相色谱（HPLC）测定过程中，流动相分别用乙腈 ∶ 水体积比65 ∶ 35和甲醇 ∶ 水体积比78 ∶ 22进行比较，测[CM（25]定结果如图3所示是以乙腈 ∶ 水体积比为65 ∶ 35作流动

相得到的图谱，图4是以甲醇 ∶ 水体积比为78 ∶ 22作为流动相得到的图谱。从图3中可以看到，以乙腈和水为流动相时出峰时间较早，厚朴酚的保留时间为3 935 min，各组分不能有效分离，分离度差，干扰严重，峰形不规则。从图4中可以看到以甲醇和水为流动相时出峰时间合理，厚朴酚的保留时间为4 528 min，各组分分离度好，干扰小，峰形规则，含量检测时误差会减小，在测定厚朴树叶中厚朴酚的含量时使用甲醇和水（体积比78 ∶ 22）为流动相较好。利用HPLC测定超声提取待测样品溶液和索氏提取待测样品溶液，归一化法得到峰面积，经过转化，表明超声提取法进行提取厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 768%，索氏提取法进行提取厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 725%，可见，不同的提取方法测得厚朴树叶中厚朴酚的含量是存在差异的。和按照《中国药典》2010年版中的方法测定厚朴树叶中厚朴酚的最高含量为0 32%相比较，高出了1 4倍，超声辅助提取法和索氏回流提取法能显著提高厚朴酚的得率，超声提取法相对更好一些。

3 结论

用超声辅助提取法和索氏回流提取法提取秦巴山区野生厚朴树叶中的厚朴酚，能显著提高得率，比按照《中国药典》2010年版中的方法提取和检测厚朴酚的含量高出1 4倍，超声辅助提取法和索氏回流提取法均能提高厚朴酚的得率，前者比后者会更适合工业化生产，超声法提取天然产物中的有效成分已得到广泛应用，可加快浸取速度，提取率高，操作简单方便。用显色法和薄层色谱法对提取的厚朴酚进行定性鉴定，厚朴树叶中含有厚朴酚，可从厚朴树叶中提取厚朴酚。反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中厚朴酚的含量，以 Kromasil C18色谱柱（15 cm × 0 46 cm，5 μm）为固定相，以甲醇和水体积比78 ∶ 22为流动相，检测波长294 nm，流速为 1 mL/min，进样量20 μL，测得厚朴酚的保留时间为 4 528 min，厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 768%，分离效果好，干扰小，峰形规则，含量检测时误差小，结果满意，适合于厚朴树叶中厚朴酚含量的测定。本试验仅是对厚朴树叶中的厚朴酚进行定性和定量检测，厚朴树叶中的其他酚性物质检测和分析还需要进一步深入研究。

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篇9：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

各国制定了咖啡因在饮料中的食品卫生标准, 美国、加拿大、阿根廷、日本、菲律宾规定饮料中咖啡因的含量不得超过200mg/L, 南斯拉夫规定不得超过120mg/L, 到目前为止我国仅允许咖啡因加入到可乐型饮料中, 其含量不得超过150mg/L, 为了加强食品卫生监督管理, 对饮料中咖啡因的含量进行测定是十分必要的。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters 1525双泵高效液相色谱仪 (美国沃特斯公司) ;色谱前处理柱;0.45um滤膜过滤装置 (上海摩速有限责任公司) ;万分之一电子分析天平 (梅特勒-托利多公司) ;25u L微量注射器 (Australia) ;KQ-50B超声仪 (昆山市超声仪器有限公司) ;咖啡因标准品 (纯度99%以上, 广佛精细化工公司) ;CH3OH (色谱纯) ;三氯甲烷 (分析纯) ;无水硫酸钠 (分析纯) ;氯化钠 (分析纯) ;试剂用水为18.2MΩ二次去离子水。

1.2 色谱条件

Diomonsil C18 (2) 5u色谱柱 (250mm×4.6mm, 柱温30℃) ;流动相为甲醇/水 (4:1, 流速1ml.min-1) ;紫外检测器。

1.3 样品前处理

由于可乐中含有大量的有机物, 这些物质通过色谱柱以后会对柱子造成很大的损害, 所以需要对可乐进行前处理, 为此我们设计了一款树脂填充的色谱前处理柱, 样品用超声清洗器在40℃下超声5min, 然后经前处理柱过滤, 除去了绝大部分的有机物, 最后经过0.45微米水系滤膜过滤后方可进样。

前处理柱管用一般滴定管改制而成, 上层填充吸附树脂 (YXA05型40-100目) , 下层填充阳离子交换树脂 (Y2X8型100-150目) , 吸附树脂在装前按照以下步骤净化:丙酮浸泡过夜———抽干———甲醇盐酸溶液 (1:1) 浸泡4小时———过滤———甲醇洗———水洗;阳离子交换树脂在装前经下述步骤净化:甲醇浸泡过夜———过滤———5%HCl浸泡4小时———水洗至无氯离子, 装柱时应先装阳离子交换树脂, 再装吸附树脂, 用去离子水冲洗预处理柱, 直至流出液无氯离子为止, 分析可乐试样时, 取一定量试样, 使其流过预处理柱, 再用去离子水冲洗, 洗水体积应大于床体积5倍以上, 收集样液和洗液, 定容以后通过0.45微米滤膜进行过滤, 然后通过色谱柱进行分析。预处理柱可以连续处理试样, 通常用约一个月后用甲醇盐酸溶液 (9:1) 洗涤, 再用去离子水洗净后又可使用, 实验证明本方法可以清除试样中有机物 (油溶性) 等污染物质, 而预处理柱对咖啡因不发生吸附 (回收率大于96%) 。其形状如图2所示。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择优化

本方法的主要目的就是检测可乐中咖啡因的含量, 我们采用美国沃特斯公司的Diomonsil C18 (2) 5u色谱柱, 实验表明该色谱柱对咖啡因有很好的分离性能。

通过选择比较不同的波长条件, 发现咖啡因甲醇溶液在286nm波长下有很大的吸收且与其他物质的吸收峰很好的分开, 所以选择286nm为测定波长。

通过选择比较不同的淋洗液体系, 发现甲醇/水体系能够很好的分离咖啡因, 不会出现峰拖尾, 鬼峰以及其他峰不完全分离的情况, 经过不同的浓度选择, 本方法选择甲醇/水 (4:1, 流速1ml.min-1) 作为流动相, 咖啡因在4分钟内完全出峰 (图3) 。

甲醇/水 (4:1, 流速1ml.min-1)

2.2 方法的精密度、线性关系和检出限

配制浓度为10、20、50、100、150 ug/m L的咖啡因甲醇标准溶液, 每个浓度在286nm波长下测定6次峰面积响应值, RSD在0.18%~1.36%之间, 分别测定不同浓度的咖啡因标准溶液的吸光度值, 咖啡因浓度在10~150 ug/L范围内与峰面积值呈良好线性关系, Y=1.7×104X-9.99×103, 相关系数为0.9998, 方法检出限为为0.72 ug/m L。

2.3 实际样品测定

我们以不同品牌的可乐饮料为实验对象, 测定其中含有的咖啡因, 含量见表1。

方法的相对标准偏差为 (RSD) 在0.38%~1.81%之间, 同时做回收率实验, 加标回收率为96.8%~101.8%。

3 小结

篇10：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

【关键词】RP-HPLC；牛黄上清胶囊；胆红素含量

牛黄上清丸是中医治疗湿热证的经典方剂之一，首载于明代李梃的《医学入门》，具有清热泻火、散风止痛之功效。可用于热毒内盛、风火上攻所致的头痛眩晕、咽喉肿痛、目赤耳鸣、口舌生疮等症[1]。

根据90版的《中国药典》所载牛黄上清丸剂，经改造所成的一个中药新药制剂——牛黄上清胶囊。其处方由牛黄、菊花等19味常用的中药材所组成，处方中的君药为人工牛黄，其主要有效成分主要为胆红素[2-3]。现在，对胆红素的含量测定方法主要有：紫外分光光度法、RP-HPLC和HPLC等。本研究对牛黄上清胶囊中所含的胆红素进行了含量测定，运用的方法为反相高效液相色谱法，以期为牛黄上清胶囊提供反相高效液相色谱法的质量控制标准。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪：Agilent1200泵。色谱柱：Hypersil BDS C18。

1.2试药牛黄上清胶囊（市售）；胆红素（批号：10077-200503，中国药品生物制品检定所提供）；研究中所用的水为超纯水，乙腈为色谱纯，各试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱使用Hypersil BDS C18柱（4.6mm ×250mm，5μm）；流动相为：二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液；流速为：1.0 ml·min-1；检测波长为：450nm。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液制备将胆红素对照品经过五氧化二磷干燥至恒重后，精密称取，置于100ml棕色量瓶中，加入二甲基亚砜-乙腈（7：3）溶液使其完全溶解，并将其稀释至刻度，摇匀后，制备成每1ml溶液含有胆红素40μg，即得。

2.2.2供试品溶液制备精密称取市售牛黄上清胶囊内容物0.3g，置于25ml的棕色量瓶中，加入二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液20ml，精密称定其重量，经超声处理10min后放冷，再次称定重量，用二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液补足其失重，摇匀后过滤，取滤液备用，即为供试品溶液。

2.2.3阴性样品溶液的制备量取牛黄上清胶囊的阴性对照品，制备方法参照供试品溶液方法来制备阴性样品溶液。

2.3线性范围考察精密量取对照品溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0和25.0ml，分别置于25ml棕色量瓶中，加入二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液稀释至刻度，摇匀后，即可获得6个浓度的对照品溶液。各浓度分别精密吸取10μl的溶液注入高效液相色谱仪中，依据正文中所述的条件测定峰面积，其中纵坐标表示峰面积积分值（A），横坐标表示进样浓度（C），做出标准曲线，其回归方程为A=6436422C-10755，r=0.9999。结果显示，胆红素在1.6μg/ml-40μg/ml之间浓度时呈现出良好的线性关系。

2.4专属性考察观察供试品溶液的反相高效液相色谱图，其胆红素峰的峰型对称、分离度好（计算得其理论塔板数为6971，对称因子为1.03，分离度为R=8.73）。

2.5精密度试验量取上文给出取线性条件下的4号对照品溶液，连续进样6次，根据文中色谱条件进行测定，结果显示RSD为0.87%。

2.6稳定性实验取市售牛黄上清胶囊内容物依法制备成供试品溶液，于室温下放置，分别在0，1，2，4，6小时时依法进行测定，每次进样10μl，记录峰面积。其峰面积峰RSD=0.79%，表明供试品溶液在6h内稳定。

2.7回收率实验采用加样回收的方法，取已知含量的牛黄上清胶囊（胆红素含量为3.012mg/g）内容物适量，大约为0.15g，之后再进行精密称定，记录数据后放置于棕色量瓶中，精密加入胆红素的对照品溶液10ml，之后再精密加入二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液10ml，同样的方法制备6分，依法测定，计算回收率，其平均回收率为98.94%，RSD=0.573%。

2.8含量测定取本次所购市售的牛黄上清胶囊，依照上述方法进行含量测定，测定6次，其平均胆红素含量为0.728mg/粒。

3讨论

人工牛黄为牛黄上清胶囊中的主要药物，而胆红素则是牛黄具有抗炎、解热和抗感染的主要有效成分之一，但由于牛黄上清胶囊质量标准中没有对胆红素进行相关的质量控制，且目前研究相对较少[4-6]，造成制剂中所投入的人工牛黄质量得不到行之有效的控制，制剂的疗效自然无法保证。

本研究选用反相高效液相色谱法来测定胆红素的含量，选用“Hypersil BDS C18色谱柱（4.6mm ×250mm，10μm）；二甲基亚砜-乙腈（7：3）作为流动相；452nm的检测波长；1.0 ml·min-1的流速”作为色谱，其选择性高、定量准确、快速、稳定性强，可作为其质量控制的有效方法。

注意在实验过程中应尽可能避光进行操作，以期能够减少因胆红素不稳定引起的实验误差。

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篇11：反相高效液相色谱法分离测定烟草中的多酚类化合物

1 仪器与试药

ULABO实验室温度控制器 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ; ver-tex高效液相色谱仪 (上海禾工科学仪器有限公司) ;PL ELS2100蒸发光散射检器 (江苏汉邦科技有限公司) ;JΜLABO TW系列通用水浴槽 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ;上海仪电科仪L系列紫外可见分光光度计 (上海仪电科学仪器股份有限公司) ;奥豪斯Explorer专业型分析天平 (奥豪斯仪器上海有限公司) ;PI5100台式p H浓度计 (安莱立思仪器科技 (上海) 有限公司) ;SCQ-25-6声彦分体式超声波清洗机 (上海声彦超声波仪器有限公司) ;ELGA超纯水器 (上海澜锐仪器科技有限公司) 。硫酸小诺霉素对照品 (中国药品生物制品检定所提供) 。三氯醋酸 (北京振翔科技有限公司) 、甲醇 (烟台鑫康商贸有限公司) 、乙腈 (西格玛奥德里奇 (上海) 贸易有限公司) 、磷酸二氢铵 (上海一基生物试剂有限公司) 、冰醋酸 (安庆市万盛精细化工有限责任公司) 、三乙胺 (上海一基生物试剂有限公司) 。

2 含量测定

2.1色谱条件。色谱柱为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱 (规格4.6mm×250mm, 5μm) ;0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 为流动相;流速1.0m L·min-1;柱温:30℃[1,2,3,4,5,6]。

2.2供试品溶液的制备。精密量取硫酸小诺霉素样品适量置50m L量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理5分钟, 放置至室温, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45μm) 滤过, 即得。

2.3 对照品溶液的制备。精密称取硫酸小诺霉素对照品适量, 用甲醇配置成每 1m L 溶液中含硫酸小诺霉素 5.5μg。

2.4阴性干扰试验。在处方中去硫酸小诺霉素, 按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂, 制成阴性对照溶液, 用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制, 观察在与硫酸小诺霉素相同的保留时间处是否存在吸收峰, 结果表明:在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与硫酸小诺霉素相同保留时间处不存在吸收峰, 因此说明选定的条件测定硫酸小诺霉素无干扰, 具有较强的专属性。

2.5标准曲线的制备。制备浓度为1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10μg·m L-1的硫酸小诺霉素对照品溶液, 分别吸取上述对照品溶液10μL注入HPLC, 记录色谱图, 以峰面积积分值A (μg) 为横坐标, 进样量为纵坐标, 绘制标准曲线。试验表明, 硫酸小诺霉素对照品在1~10μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验。依照 2.3 项下方法制备对照品溶液, 精密吸取硫酸小诺霉素对照品溶液 10μL 重复进样 5 次, 测定峰面积积分值, 对照品峰面积积分值的RSD为0.93%。结果表明, 本方法具有良好的精密度。

2.7重现性试验。分别称取同批硫酸小诺霉素样品样品6份, 依照2.2项下方法制备供试品溶液, 按上述含量测定项下方法, 分别精密吸取上述供试品10μL注入HPLC, 测定含量, 并计算样品的RSD值为0.95%。结果表明, 此含量测定方法的重现性良好。

2.8稳定性试验。取硫酸小诺霉素样品样品, 依照2.2相下供试品溶液制备方法制备供试品溶液, 精密吸取上述溶液10μL, 分别在0, 4, 8, 12小时注入高效液相色谱仪, 进样测定, 供试品硫酸小诺霉素峰面积积分值的RSD为0.79%, 说明硫酸小诺霉素至少在12小时内稳定。

2.9回收率试验。采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分精密添加一定量的硫酸小诺霉素对照品, 按供试品制备所述方法制备供试品溶液, 测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为98.71%, RSD为1.36%。

3 讨论

本实验对超声波振荡时间也进行了考察。超声波振荡分别提取2、5、10分钟, 制备供试品溶液, 含量结果表明:三个时间提取无明显差异, 为保证缩短处理时间, 采用超声提取5分钟。分别考察0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (90:5:5) , 甲醇 - 水 - 冰醋酸 (13∶86∶1) , 甲醇 - 水 - 冰醋酸 (33∶66∶1) , 甲醇 -1%冰醋酸溶液 (28∶72) , 0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 不同比例的流动相, 结果以0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 为流动相为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 为流动相为流动相。本文对硫酸小诺霉素样品中的硫酸小诺霉素进行含量测定的试验方法, 结果表明该法不受其它成分的干扰, 分离度好, 精密度、重现性佳, 回收率高, 可用于硫酸小诺霉素样品中硫酸小诺霉素的含量测定。

摘要：硫酸小诺霉素为氨基糖苷类抗生素, 主要用于大肠埃希菌、变形杆菌、肠杆菌属、克雷白杆菌、铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌引起的呼吸道、泌尿道、胆管、腹腔、败血症等。本文采用高效液相测定了硫酸小诺霉素样品中硫酸小诺霉素的含量, 固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱 (5μm, 4·6mm×250mm) , 0.2mol/L三氯醋酸-甲醇-乙腈 (95:2:3) 为流动相;硫酸小诺霉素在110μg范围内, 呈良好的线性关系。硫酸小诺霉素的平均回收率为98.71%, RSD为1.36% (n=6) ;此方法简便、准确、重现性好。可用于硫酸小诺霉素样品中硫酸小诺霉素的含量测定。

关键词：硫酸小诺霉素样品,硫酸小诺霉素,高效液相

参考文献

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