液相色谱培训

液相色谱培训（精选6篇）

篇1：液相色谱培训

高效液相色谱培训小结

分析：XXX 我来研究院已经一年多，主要做基本分析操作，需要负责液相，为了严格保证分析数据的准确性，必须以严谨科学的态度对待，从制备样品过程到仪器采集过程都要非常谨慎、认真。

这次有幸得到公司提供的培训机会，去上海Agilent科技大学培训中心参加了为期四天的液相色谱培训。培训期间老师讲述了从硬件、软件及维护保养各个方面的问题，让人一下充实了不少。

通过这次的学习培训，使我对分析过程有了深入的理解，并对高效液相色谱仪的使用和维护有了更全面的了解和更多的认识，现在做总结如下：

液相色谱主要分为：溶剂柜、脱机机、泵、自动进样器(手动进样器）、柱温箱、检测器。各个模块由CAN 线进行通讯连接，使得各个模块形成一整套系统。化学工作站和仪器系统之间用LAN线连接。

一、硬件

1、在线脱气机

2、泵（我公司使用的是四元泵，当使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到四元比例阀下面的通道上（A或D），有机溶剂接到上面的通道上（B或C）。如果经常使用盐溶液，建议定期用水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐沉淀。）

3、进样器（我公司为标准自动进样器。进样体积重复性高，进样动态范围宽，连续冲洗流路并有洗针功能，降低样品残留，可以容纳不同规格的样品瓶。灵活的进样程序编程可以进行样品前处理，使用旁路可以降低延迟体积。）

4、柱温箱

5、检测器（我公司使用的是VWD检测器用于产品开发及质量控制。）

二、化学工作站

1、方法的编辑和保存

2、谱图处理及优化

3、积分参数优化

4、光谱功能

5、校正表建立，设定报告，报告设计

三、日常维护和常见色谱故障

1、溶剂准备：溶剂过滤是要防止固体颗粒损伤仪器或柱头。常用0.45um的滤膜，使用色谱纯的溶剂。定期更换溶剂，避免溶剂瓶直接日照，每两天更换或过滤溶剂，用滤膜过滤溶剂去除微生物，在使用时一定要脱气。

2、保护色谱柱

①过滤所有的溶剂和样品 ②使用保护柱

③仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 ④在适当的溶剂中保存柱子 ⑤柱子在不使用时，两端密封保存 ⑥注意色谱柱的pH值使用范围 ⑦不要高压冲洗柱子

⑧不要高温下过长时间使用硅胶键合相

3、常见色谱故障 ① 双峰

原因：柱头塌陷或柱床运动、柱前滤芯堵塞、样品量过大、进样器流路存在分叉流路。

② 基线噪音、基线漂移

原因：检测池脏、灯能量下降、流动相脏、温度不稳定。③ 鬼峰、柱外扩散、峰扩展、拖尾峰、前伸峰、负峰 原因：流动相尤其水脏、连接接头不匹配、进样体积大、色谱柱过载、溶解样品溶剂通过色谱柱时平衡破坏。

④ 压力过高、压力过低、压力波动

原因：色谱柱过滤芯被污染、毛细管进样针或针座阻塞、阀失灵、密封垫老化、泵内有气泡。

⑤ 常规维护区域：溶剂入口、泵、检测器

四、Agilent Lab Advisor 软件

Agilent Lab Advisor是独立化学工作站之外的一个工具，这个工具提供维护、诊断、监控及警告功能。

经过这次的培训学习，使我对分析过程有了全新的认识，也解决了以前检测分析操作中遇到的问题，重新认识了许多应用方法，对仪器的操作使用维护有了新的认识，为以后的工作中更好地使用、养护仪器提供了更多理论依据。在此感谢领导，同事们对我的关心和支持，给我一个如此好的学习机会。

篇2：液相色谱培训

一、液相色谱理论发展简况

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点：

高压-压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。高速-流速为0.1~10.0 ml/min。

高效-可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

三、色谱法分类

按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外还有超临

为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。

正相色谱法与反相色谱法比较表

正相色谱法 反相色谱法 固定相极性 高～中 中～低 流动相极性 低～中 中～高 组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出

从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。3．离子交换色谱法

固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。

缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。pH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。4．离子对色谱法

又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。

分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。

分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。

离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。5．排阻色谱法

篇3：液相色谱培训

1 实验部分

1.1 试剂

实验试剂有高纯氢 (99.99%) 、高纯氮 (99.99%) 、异辛烷 (色谱纯) 。

1.2 仪器

实验仪器包括高效液相色谱系统的二极管矩阵检测器、600泵、watersMillennium32色谱数据管理软件, 岛津GC-14B气相色谱仪以及分液漏斗等。

1.3 分析步骤

首先进行样品预处理, 如果样品中有机械杂质, 需经过0.45μm滤膜过滤后供色谱分析用。

1.3.1 气相色谱分析

确定校正系数, 分别称取不同质量的联苯和联苯醚标样, 配成联苯比联苯醚 (M1∶M2) , 联苯和联苯醚的质量百分比在26.5±1.0∶3.5±1.0范围内。

吸取0.4μL配好的道生油标样进入进样口, 启动积分仪, 结束后得联苯含量为A1, 联苯醚含量为A2, 则联苯系数为μ1=M1∶A1。然后对样品进行分析。

吸取0.4μL配好的道生油样品进入进样口, 启动积分仪, 结束后得联苯含量为C1。

对所得结果按下式计算:

联苯含量 (%) =C1×μ1;

联苯醚含量 (%) =100%-联苯含量。

1.3.2 液相色谱分析

将流动相异辛烷用超声波脱气后置于高压泵进液管, 对标样联苯及联苯醚含量分析、制作标准曲线。

用异辛烷稀释纯的联苯和联苯醚标样, 配制的不同浓度的标准溶液见表1、联苯含量与对应峰面积见表2、联苯含量标准曲线见图1。

用与制作标准曲线相同的色谱条件进样分析样品 (由于联苯及联苯醚在紫外响应值很大, 所以道生油样品需要稀释进样) 。所得联苯醚含量与对应峰面积见表3, 联苯醚含量标准曲线见图2。

由图1、图2可知联苯、联苯醚其线性方程分别为:

Y联苯=24.955 X-4.1 383, 相关系数为0.9 999;

Y联苯醚=380.47 X+10.505, 相关系数为0.9 996。

其相关系数高, 线性好。

同理, 在设定色谱的条件下, 用液相色谱分析已处理好的样品, 得到联苯和联苯醚的峰面积, 根据标准曲线线性方程计算出其中道生油含量。同时根据标准曲线线性方程计算出相应联苯和联苯醚的含量。

联苯的含量:M联苯 (mg/kg) =24.955 X-4.1 383

式中:X-联苯相应的峰面积 (×106) ;

联苯醚的含量:

M联苯醚 (mg/kg) =380.47 X+10.505。

式中:X-联苯醚相应的峰面积 (×106) 。

2 结果与讨论

2.1 道生油组成精密度试验

精密度试验是评价分析方法准确度的重要手段, 在相同的试验条件下, 标准偏差或变异系数越小, 分析方法的精密度越高。为了比较气相色谱法与液相色谱法分析道生油组成的精密度, 取原料道生油样品连续5针进样, 经计算后得到气相色谱分析结果见表4。由于联苯及联苯醚的紫外响应值很大, 所以道生油必须稀释后进样, 取经稀释后的道生油样品连续5针进样, 经计算后得到液相色谱分析结果见表5 (以联苯醚含量代表道生油组成计算相对标准偏差和变异系数) 。

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由表4、表5可知, 两种分析方法的标准偏差及变异系数都较小, 能满足分析要求。但液相色谱分析法有更小的标准偏差及变异系数, 分析结果表明液相色谱分析法精密度更高。

2.2 道生油组成回收率试验

分析中常用回收率来评价分析方法的准确性, 回收率无限接近100%是最好的结果。在实际分析中, 只要回收率在规定范围内 (一般90%～105%) , 即认为该分析方法能满足分析的需要。为了比较气相色谱法与液相色谱法的回收率, 向原料道生油中加入不同量的联苯醚, 用选定的色谱条件进行分析, 每批样品进样两次, 经计算后分别得到液相色谱分析结果和气相色谱分析结果分别见表6、表7 (以联苯醚含量代表道生油组成分析结果) 。

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由图6、图7可知, 两种分析方法的收率都能满足分析要求, 但液相色谱分析法收率更好, 分析结果表明液相色谱分析法准确度更高。

2.3 道生油组成分离度比较

为判断相邻两组份在色谱柱中的分离情况, 可用分离度R作为色谱柱的分离效能指标。分离度是色谱柱将两个相邻峰分开的能力, 相邻两组份色谱峰保留值之差与两个组份色谱峰低宽度总和之半的比值即为色谱分离度。分离度计算如下。

液相色谱分离度计算:

气相色谱分离度计算:

其中:tR (1) 为联苯的相对保留时间 (min) ;

tR (2) 为联苯醚的相对保留时间 (min) ;

w1/2 (1) 为联苯的半峰宽 (min) ;

w1/2 (2) 为联苯醚的半峰宽 (min) 。

由色谱分析理论可知, 为了确保相邻两峰能完全分离, 其分离度要大于1.5。本试验液相色谱分离度为3.48大于1.5, 气相色谱分离度为0.78小于1.5, 液相色谱联苯及联苯醚可完全分离, 而气相色谱联苯及联苯醚不能完全分离。因此, 定性和定量分析道生油样品, 用液相色谱分析更加准确可靠。

2.4 道生油组成在工艺上的运用比较

在烷基苯生产工艺中, 一旦发生道生油泄漏, 可能对从原料煤油到中间产品抽余油及成品烷基苯等造成污染, 引发质量事故。常规的道生油、煤油、烷基苯等组成分析是用气相色谱, 由于气相色谱法定性和定量分析的主要依据是各组分的保留时间及其峰面积 (或峰高) , 所以能否准确对每个化合物进行定性和定量就变得十分关键。但少量道生油泄漏到煤油或抽余油中, 由于样品组成复杂, 则很难定性和定量分析。同时, 由于煤油组分多, 峰形复杂, 联苯、联苯醚与煤油的一些组份的分离度很小 (或峰重合) , 也很难进行定性和定量分析, 而联苯和联苯醚在紫外区域响应值比较大, 选择合适的色谱柱, 如果有足够的分离度, 用液相色谱定性定量分析是可行的。

用外标法可以进行定性和定量分析, 这是气相色谱无法做到的。所以液相色谱分析法在帮助装置查找漏点, 及时、准确制定工艺处理方案方面发挥了积极的作用。

3 结论及应用

通过以上试验发现, 从精密度试验和收率可判断出用液相色谱分析道生油的组成是准确、可靠的, 可以取代气相色谱法。液相色谱分析道生油的组成, 分析时间短 (每个样品分析时间约25 min) , 准确性高。利用液相色谱法分析油品中微量道生油的方法在协助查找漏点, 及时进行工艺处理方面也起到了很大的作用。

摘要：道生油组成测定传统的分析方法是气相色谱法, 定量方法是归一法。道生油主要组份为联苯和联苯醚, 联苯和联苯醚的紫外响应值比较大, 可以选择合适的检测器和色谱柱, 通过液相色谱用外标法来分析道生油的组成。本实验通过比较2种分析方法, 得出如下结论:液相色谱分析道生油组成变异系数小、收率高, 相对于气相色谱法, 液相色谱法更加快捷、准确、可靠, 特别是在查找道生油管线漏点上能起到至关重要的作用。

关键词：联苯,联苯醚,归一法,外标法

参考文献

[1]于世林.高效液相色谱方法及应用 (第二版) [M].北京:化学工业出版社, 2005.

篇4：基于液相色谱

试验材料

材料。（1）仪器与设备。超高效液相色谱质谱联用仪，Pipet-LiteXLS型移液器，RetschGM200型组织捣碎机，TGL-16M型高速离心机，N-EVAP型氮吹仪，Sep-PakVac型氨基固相萃取柱，RE-52AA型旋转蒸发器。（2）试剂和材料。三唑酮，乙腈、甲醇、甲酸为色谱纯，甲苯为优级纯，实验室用水为超纯水；氯化钠为优级纯，无水硫酸钠为分析纯，用前在650℃下灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。

三唑酮标准溶液：精密称取三唑酮标准品0.1000g于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，此溶液1mL相当于1.00mg三唑酮。临用时，用乙腈稀释至所需的质量浓度。

色谱条件。不同流动相色谱条件见表1。色谱柱：WATERSACQUITYC18（50×2.1mm，1.7μm）型；进样量：10μL；柱温：40℃。

质谱条件。电离模式：ESI+；扫描方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450℃；锥孔流速：50L/Hr；脱溶剂气流速：900L/Hr；碰撞气流速：0.17mL/min；母离子：294.2；子离子：197.1（定量离子），225.2；锥孔电压：25V；碰撞能量：15，13eV。

试验方法。（1）样品的提取。称取样品20 g于80 mL塑料离心管中，加入40 mL乙腈，用高速组织捣碎机在转速15 000 r/min 下匀浆提取1 min，加入5 g NaCl，再匀浆提取1min，以4 000 r/min离心5min，取上清液20 mL （相当于10 g 试样量），在40 ℃水浴中旋转浓缩至1 mL，待净化。（2）提取液的净化。在Sep-Pak Vac 型柱中加入约2 cm 高无水硫酸钠，并放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4 mL 乙腈+ 甲苯（3+1） 预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，并更换新鸡心瓶接收。再每次用2 mL 乙腈+ 甲苯（3+1） 洗涤样液瓶3 次，并将洗涤液移入柱中。在柱上加上50 mL 贮液器， 用25 mL 乙腈+ 甲苯（3+1） 洗脱农药及相关化学品合并于鸡心瓶中，并在40 ℃水浴中旋转浓缩至净干。将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，迅速加入1 mL 的乙腈+ 水（3+2）混匀，经0.2 μm 滤膜过滤，供UPLC-MS/MS 分析。

线性关系。选择不含有三唑酮的苹果为果蔬样品代表。准确称取20 g （精确至0.01 g） 未添加三唑酮的苹果匀浆液，准确加入三唑酮的对照品溶液，使样品中三唑酮的质量浓度为1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0， 100.0 ng/mL， 分别对这些溶液进行UPLCMS/MS 分析，记录MRM 图，得峰面积，并对各溶液的峰面积和质量浓度进行线性回归分析，得到线性回归方程和相关系数。

检出限与定量限。检出限与定量限是衡量方法灵敏度的指标之一。将对照品溶液逐级稀释， 分别对这些溶液进行UPLC-MS/MS 分析，记录MRM 图中定量离子的信噪比，以3 倍信噪比计算得出检出限，10 倍信噪比计算得出定量限。

回收率和精密度测定。选择不含有三唑酮的西红柿为果蔬样品代表。按照加样回收法低、中、高3 个水平对空白样品进行加标，每个质量浓度平行3 份，使西红柿样品中三唑酮的添加量为0.125，0.250，0.500 μg/kg，按照1.4 方法进行样品处理。按照色谱- 质谱方法进样，计算每个质量浓度下的回收率，同时计算相对标准偏差。

结果与分析

线性关系。选用三唑酮的溶液质量浓度为1.0-100.0 ng/mL的样品溶液进样分析，以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。得到标准曲线为Y=2 091.3X-778.58，R2=0.999 8。线性关系良好，完全符合方法学要求。

三唑酮的标准工作曲线见图1，三唑酮标准溶液的MRM 见图2。

检出限与定量限。对逐级稀释溶液中三唑酮的质量浓度进行分析，将所得MRM 图中的色谱峰进行信噪比计算。质量浓度为0.5 ng/mL 时，信噪比大于3 倍空白信噪比，得出检出限为0.5 ng/mL。质量浓度为1.0 ng/mL 时，信噪比大于10 倍空白信噪比，得出定量限为1.0 ng/mL。

回收率与精密度。苹果样品中三唑酮的回收率与精密度见表2

苹果样品中回收率为82.8%～94.7%。根据国家标准GB/T 27404—2008 实验室质量控制规范食品理化检测中对检测方法确认的技术要求中，被检测组分浓度含量小于0.1 mg/kg 时，回收率达到60%～120%，即符合方法学的要求。计算各质量浓度下平行3次的试验结果，计算相对标准偏差。

实际样品分析。依照以上的试验方法对市场上出售的几种蔬菜水果进行检测，结果表明，结果表明被检测的几种蔬菜水果中，均未检出三唑酮。

讨论

试验建立了一种快速检测水果蔬菜中三唑酮农药残留的液相色谱-串联质谱法的检测技术， 该方法回收率在84.9%～89.3%之间，完全符合方法学要求。该方法前处理简单，具有灵敏度高、分离效果好、重复性强等特点，适用于短时间内大批量测定蔬菜水果中的三唑酮。

（作者单位：林敏 余婷婷 张莉 刘迪 湖北省食品质量安全监督检验研究院；熊昕 湖北省食品药品监督管理局技术审评核查中心）

篇5：大豆磷脂的高效液相色谱分析

采用正相高效液相色谱法,梯度洗脱程序和蒸发光散射检测器对大豆磷脂组成进行分析,在15 min内将大豆磷脂中4种重要组分:卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂和磷脂酸与其它组分完全分离.用外标法对这4 种重要成分进行定量,线性范围为0.2～5.8 g/L;回收率为96.7～100.8%;相对标准偏差为0.82%～1.34%.方法用于实际样品测定,获得满意的`结果.

作 者：夏海涛 安红 刘郁芬 于春玲 作者单位：夏海涛,安红,刘郁芬(齐齐哈尔大学化学与化学工程学院物理化学教研室)

于春玲(北华大学吉林林学院)

篇6：液相色谱培训

青海秦艽高效液相色谱指纹图谱的研究

利用高效液相色谱法建立了青海秦艽的色谱指纹图谱.色谱条件:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm×5μm),甲醇:磷酸水(0.04%)梯度洗脱,流速为1 mL/min,检测波长222 nm.通过比较发现秦艽样品的13个主要共有峰,可作为鉴别秦艽药材的`主要依据.对12批秦艽药材进行了相似度计算和聚类分析,结果表明,所建立的秦艽指纹图谱可用于秦艽药材的真伪鉴别和质量评价.

作 者：吴启勋 安燕 张明锦 卢永昌 包锦渊 胡树青 于军 WU Qi-xun AN Yan ZHANG Ming-jin LU Yong-chang BAO Jin-yuan HU Shu-qing YU Jun 作者单位：青海民族学院,化学系,西宁,810007刊 名：西北植物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA年，卷(期)：26(1)分类号：Q946关键词：高效液相色谱 秦艽 指纹图谱 相似度 聚类分析