早期胚胎停育

早期胚胎停育（精选五篇）

早期胚胎停育 篇1

1 对象与方法

1.1 对象

选择2014年7月至2016年5月在无锡妇幼保健院产前诊断中心就诊的自然流产患者109例,孕周6~14周,B超检查提示胚胎停止发育。

1.2 绒毛培养及制备

采集绒毛组织20 mg左右,放入含有双抗的0.9%氯化钠液中漂洗,以剔除血块和其他非绒毛组织。选择相对较好的绒毛组织,用眼科剪剪成糊状,加入浓度为0.1%胶原酶1.5 ml和浓度为0.025%的胰酶分别消化10分钟,消化完毕后加入5 ml 1640培养基终止酶的消化。将用酶消化后的悬液用无菌纱布过滤到培养瓶,加入Gibco公司生产的培养基5 ml,放入CO2培养箱,如果需要,中间4~5天换液。7天左右,加入秋水仙素2滴,开始收细胞,加低渗液5 ml低渗10分钟,离心加固定液1 ml预固定,离心,加固定液5 ml固定2次,滴冰玻片,每标本制2张,在80℃的烤箱中烤2小时,行G带(显示350条带纹),染色阅片。

1.3 染色体的核型分析

用德国蔡氏公司提供的染色体图像分析系统软件在油镜下分析20个分散好的中期分裂相,包括染色体数目和结构,同时排列2~3个带纹清晰且完整的染色体核型图。

2 结果

2.1 绒毛细胞的培养

绒毛细胞收集过程中,由于不同绒毛组织的性状不一样,所以培养时间不同,具体情况见表1。109例标本,101例绒毛细胞培养成功,成功率为92.7%。在8例培养失败的标本中,除1例因细菌污染外,其余7例均为绒毛不新鲜或无活力而培养失败。

2.2 染色体核型分析

101例绒毛培养成功的患者中发现异常核型47例,阳性率为46.5%,其中16-三体8例,占17.0%;69,XXN和45,XO各6例,占12.8%。在数目异常的病例中,三体最常见,比例高达57.4%(27/47)。见表2。

3 讨论

在传统细胞遗传学染色体检测中,细胞标本主要有三个类型,绒毛、羊水和外周血(脐血),绒毛细胞染色体检测时间主要适用于孕周6~14周,因此,对于寻找早期胚胎停育的原因时,绒毛细胞培养和染色体核型分析是最为经典的方法,但是,绒毛细胞培养相对程序复杂,失败率较高[1~5],因此,绒毛细胞培养和核型分析目前在国内开展还不是十分普遍。

以前对于胚胎停育者绒毛细胞染色体核型分析所采用的方法多为直接法,制作过程简单,不需要培养,成本低,所需时间短,但相对培养法而言该法所制备的染色体质量较差,中期有效分裂相少,影响核型分析,造成检测的准确性和成功率大大降低,并且容易出现母细胞污染,特别是出现带有46,XX的嵌合型,只能在制片满意的情况下满足染色体计数的需要[6,7]。因此在欧美国家,培养法已经取代直接法成为检测早期胚胎停育最为常用的方法。

3.1 早期胚胎停育者绒毛细胞培养的探索

为了提高绒毛细胞培养的成功率,我们在培养过程中不断摸索,发现通过采取下述措施可以有效提高绒毛细胞或染色体分裂相数量,使检测的成功率明显提升。①新鲜和有活力的绒毛组织是绒毛细胞培养成功的基础。新鲜绒毛主要是指胚胎停育时间短(3天内),没有用药保胎或其他用药史的且无血液或其他成分污染,呈树枝或雪花状的白色新鲜的绒毛组织。由表1可见,没有细菌感染和用药保胎的新鲜绒毛细胞培养成功率高,达100.0%,而且培养时间短,平均7天。有学者认为绒毛染色体检测成功率与绒毛标本的形态、新鲜程度及终止妊娠的时间等有密切关系。本实验也证实了这一点,在8例培养失败的标本中,除1例因细菌污染外,其余7例均为绒毛不新鲜或无活力而培养失败。有4例孕妇用药保胎时间过长,绒毛组织变性坏死,无细胞生长,有3例绒毛组织因胎死宫内时间较长而腐烂,很难找到时新鲜的绒毛组织,造成诊断失败。②用眼科剪将绒毛组织剪成糊状,以便于酶消化更充分,使绒毛细胞分散完全,并且能缩短细胞培养时间。不用眼科剪,直接将绒毛组织用酶消化,培养时间平均要延长3~7天。③胶原酶和胰酶消化绒毛组织时间因绒毛组织块大小而定,如果绒毛组织为糊状,用胶原酶和胰酶分别消化10~15分钟左右,放在水浴锅中不停摇晃,当出较明显浑浊时,应立即停止消化。④过滤绒毛组织块可以大大提高染色体分裂相的质量,因为,尽管用眼科剪把绒毛组织剪成糊状,但绒毛组织块相对细胞而言体积要大得多,如果不进行过滤,由于大量绒毛组织块存在,不但使细胞生长缓慢,培养时间增长,而且会造成组织块、细胞和染色体重叠,使阅片困难,容易诊断失败。⑤好的培养基是绒毛细胞培养成功的关键,我室采用美国Gi Bco公司生产Ⅱ代液体培养基,相对于其他品牌培养基具有使绒毛细胞生长更为旺盛的优点。⑥对绒毛细胞培养收获时间的把握也是很重要的,因为绒毛细胞容易老化,这是绒毛细胞与羊水细胞收获最大的区别。对于绒毛细胞而言,当成熟细胞较多时,要立即收获,如果延长几天,会造成有效染色体分裂相大幅减少,甚至造成检测结果失败,无法出报告。而对于羊水细胞,延长几天对结果影响不大。⑦制片过程中,低渗时间和湿度对染色体的数量和质量有着至关重要的作用,低渗时间和细胞多少有关,也和室内湿度有关,细胞越多,所需时间越长;湿度越高,低渗时间越短,湿度越低,低渗时间则越长。⑧G显带前胰酶消化时,一定要试片,一定要摸索出最佳酶消化时间,这关系到染色体带纹质量的好坏,对阅片的效率和准确性有至关重要的作用。

3.2 早期胚胎停育的核型分析

本组资料显示,在101例标本中,染色体异常47例,占46.5%,这证实了染色体异常是导致胚胎流产的最主要原因[6],这可能是因为数目异常的胚胎,遗传缺陷大,致死性高的原因。在数目异常的病例中,三体最常见,比例高达57.4%(27/47),导致这一现象的主要原因是生殖细胞在减数分裂时染色体出现不分离。

由表2可见,在异常染色体核型中,47,XN+16(17.0%)、69,XXN(12.8%)、45,XO(12.8%)和47,XN+10(8.5%)这些罕见核型所占比例较高,而这些核型在孕中期羊水和脐血的产前诊断中很少见,因为,这种核型的胎儿大多在怀孕的早期就已流产,这也从另一方面证明了绝大多数流产是发生在孕早期,特别是47,XN+16,这种核型在绒毛细胞异常染色体中所占比例最高,三体中占29.6%(8/27),与国外文献报道比较一致[4],现在许多文献把这种核型称为“致死核型”。69,XXX核型6例,属于三倍体核型。其发生原因主要是双雄受精、双雌受精和有丝分裂染色体分离失调。临床研究表明,如果一个子代细胞获得三倍体和另一个子代细胞为单倍体,单倍体细胞通常不能存活而很快早期流产或胚胎停育[5]。45,X0核型也出现6例,占异常核型的12.8%。说明这类核型也是胚胎停育的主要核型之一。其发生机制是生殖细胞在减数分裂时X染色体发生不分离所造成的[5]。

综上所述,流产对有染色体异常的胚胎来说是一种重要的自然淘汰过程,我们在临床上如果遇到孕早期阴道流血患者时,不宜忽视胚胎有染色体异常的可能,不宜盲目保胎。如果能对早期胚胎停育者的流产绒毛细胞染色体进行常规检查,将可以明显提高检出率,而绒毛细胞的培养与绒毛标本的形态、新鲜程度、胚胎停育的时间及保胎时间等有密切关系。通过采取相关措施,尽量提高早期胚胎停育患者绒毛组织细胞培养和染色体核型分析的成功率,有针对性地进行遗传咨询及优生优育指导,对优生优育、提高出生人口素质有很大的作用。

摘要：目的:探讨绒毛细胞培养和染色体核型分析在早期胚胎停育中的应用价值。方法:通过对109例孕周为6~14周早期胚胎停育孕妇绒毛组织进行细胞培养,分析其染色体核型。结果:101例绒毛细胞培养成功,成功率为92.7%;其中没有细菌感染和用药保胎的新鲜绒毛细胞培养成功率达100%,培养时间短,平均7天。在8例培养失败的标本中,除1例因细菌污染外,其余7例均为绒毛不新鲜或无活力。发现异常核型47例(阳性率为46.5%),其中16-三体8例,占17.0%;69,XXN和45,XO各6例,占12.8%;10-三体4例,占8.51%;22-三体和21-三体各3例,占6.38%。结论:绒毛细胞的培养与绒毛标本的新鲜程度、胚胎停育的时间及保胎时间等有密切关系,通过采用相关措施,尽量提高早期胚胎停育患者绒毛组织细胞培养和染色体核型分析的成功率,以提高出生人口的素质。

关键词：早期胚胎停育,绒毛细胞培养,核型分析

参考文献

[1]Cavallotti D,Casilla G,Piantelli G,et al.Early complications of prenatal invasive diagnostics:perspective analysis[J].Acta Biomed Ateneo Parmense,2004,75(1):23-26.

[2]吴霞,李大金,袁敏敏,等.人早孕期绒毛和绒毛细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定[J].生殖与避孕,2004,24(2):70-73.

[3]乐杰,谢幸,林仲秋,等主编.妇产科学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2008:308.

[4]Jackson L.Cytogenetics and molecular cytogenetics[J].Clinical Obstetrics and Gynecology,2002,45(3):622-639.

[5]Macklon NS,Geraedts JP,Fauser BC.Conception to ongoing pregnancy the‘black box’of early pregnancy loss[J].Hum Reprod,2002,8(4):333-343.

[6]Cayp H,Todor V,Avryam A.Karyotyp of the abortus in reourrent miscarriage[J].Frtil and Steri L,2001,75(4):678.

早期胚胎停育 篇2

1 资料与方法

1.1 研究对象

83例来自我院2011年3月至2013年3月期间, 孕周<15周不明原因自然流产或经B超检查确认胚胎停止发育的流产绒毛组织标本。所有研究对象均在签署知情同意的情况下进行。

1.2 实验方法

1.2.1 FISH探针位点信息

探针选用北京金菩嘉医疗科技有限公司的13、16、18、21、22号和X、Y染色体数目异常检测试剂盒, 包括3组探针:CSP18/CSPX/CSPY, 定位于18p11.1-q11.1/Xp11.1-q11.1/Yp11.1-q11.1;GLP13/GLP21, 定位于13q14/21q22;GLP16/GLP22, 定位于16q22/22q11.2。CSP18/CSPX/CSPY探针组CSP18示蓝色信号、CSPX示绿色信号、CSPY探针示红色信号;GLP13/GLP21探针组GLP13示绿色信号、GLP21探针示红色信号;GLP16/GLP22探针组GLP22示绿色信号、GLP16探针示红色信号。

1.2.2 FISH实验

用冷磷酸盐缓冲液 (PBS) 对绒毛组织标本进行认真冲洗, 洗去污染的母血细胞。在倒置体视显微镜下用眼科镊挑选绒毛组织, 避免蜕膜组织的混入。视标本量的不同, 用0.3 ng/ml胶原酶B消化5~10分钟, 然后用0.25%胰蛋白酶消化10分钟。离心去除消化液后, 用0.075 mol/L KCl低渗30分钟, 3∶1液经过预固定、固定后, 沉淀在同一张载玻片上分别滴3个杂交区。处理后的薄片应用北京金菩嘉试剂有限公司生产的GLP16/22、GLP13/21、CSP18/X/Y荧光探针进行荧光原位杂交实验, 观察流产组织中染色体数目的异常改变。

1.2.3 FISH结果判读

每组探针计数至少100个细胞;单独判断每种指标, 正常细胞比例大于90%, 提示该指标无异常;某指标异常细胞比例大于60%, 提示该指标异常;单个指标异常细胞比例均小于10%, 提示为正常结果;某种指标异常比例介于10%~60%, 加大观测样本细胞数目, 如实记录异常细胞比例, 低于判断非嵌合体状态的异常标准 (60%) , 出现这种异常的原因可能有胎儿染色体异常嵌合体、胎盘特异性染色体异常嵌合体、母体细胞污染等, 建议遗传咨询。

2 结果

应用CSP18/CSPX/CSPY、GLP13/GLP21、GLP16/GLP22 FISH探针试剂, FISH方法对83例标本进行检测, 均获得满意的荧光信号。共检出异常核型43例, 异常核型检出率51.81% (43/83) , 其中16-三体13例 (30.23%, 13/43) , 22-三体9例 (20.93%, 9/43) , X0 6例 (13.95%, 6/43) 。FISH检测结果见图1。三倍体5例 (11.63%, 5/43) , 18-三体4例 (9.30%, 4/43) , 13-三体3例 (6.97%, 3/43) , 21-三体2例 (4.65%, 2/43) , XXX 1例 (2.32%, 1/43) 。

3 讨论

发生胚胎停育及自然流产的原因包括遗传学因素、内分泌因素、免疫因素及环境因素等。有研究表明, 发生早期胚胎停育及自然流产的患者中胚胎染色体异常是导致流产的主要原因, 发生率约占50%左右, 而反复自然流产患者中胚胎染色体异常率高达70.7%[2]。目前, 国内多采用检测自然流产夫妇双方染色体的方法[3,4]分析自然流产的病因。由于我国一般人群中染色体异常的频率为0.47%左右, 分析夫妇双方染色体仅能发现染色体易位导致的流产, 而通过对自然流产物的染色体核型分析发现染色体三体和多倍体是导致流产的主要因素[5]。因此, 仅仅通过分析自然流产夫妇双方染色体是无法得到大部分流产原因的直接证据。绒毛滋养细胞是胚胎外胚层细胞, 具有与胚胎组织相同的遗传性状, 利用绒毛滋养细胞染色体检查技术可以了解胚胎细胞的遗传学特点, 为探讨自然流产的病因提供直接诊断依据。

染色体数目畸变的发生主要源自双亲之一方的配子形成时或妊娠初期受精卵卵裂时出现染色体不分离, 导致该染色体增多或减少一条, 亦即导致三体性或单体性。大部分多倍体及单倍体染色体核型的胚胎均由于基因剂量效应无法发育成为成熟个体。仅有部分21-三体及性染色体多倍体或单倍体的胚胎可以发育成熟, 并且生存至成年。而这部分患者, 往往存在生长发育、智力及生殖方面的严重缺陷。因此, 不难理解染色体数目异常, 尤其是常染色体数目异常导致的孕早期自然流产或胚胎停育也是人类在长期繁衍过程中经过自然选择而发生的必然结果。

FISH技术是20世纪50年代在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的一种实验方法, 是原位杂交技术的一个分支。该方法利用己知核酸序列作为探针, 以荧光素直接标记或以非放射性物质标记后与靶DNA进行杂交, 在荧光显微镜下观察杂交信号从而对标本中待测的核酸进行定性、定位和定量分析。FISH适用于多种标本, 如羊水细胞、绒毛细胞及着床前胚胎卵裂细胞等。FISH的最大优势在于它不局限于分裂期细胞, 它不仅适用于中期染色体, 也同样适用于间期核及细胞周期的所有阶段, 还可以用于未培养的细胞。由于流产绒毛组织多数不新鲜, 易污染, 培养失败率高;染色体异常的妊娠组织往往生长不良, 而母体细胞容易发生选择性增长, 造成检测的可信度下降。因此应用FISH方法对流产组织进行检测, 可以充分发挥该实验技术的检测优势, 通过荧光信号的判读即可了解待检标本的染色体数目异常, 从而发现由于染色体数目异常而导致的流产病因。

本研究中经过FISH检测的83例孕早期流产及胚胎停育绒毛组织标本均取得了满意的实验结果。检测出16-三体13例、22-三体9例、X0 6例。16-三体所占的比例最高 (30.23%) , 该结论与国内已报道的16-三体是导致孕早期胚胎停育及自然流产的主要遗传学因素, 这一结论相一致[6]。由此可见FISH方法可以有效地检出大部分染色体数目异常导致的孕早期流产以及胚胎停育。

16-三体、22-三体胚胎很难存活, 迄今国外报道22-三体患儿最长存活时间为3年[7]。由于16-三体、22-三体的胚胎几乎无法发育成为正常个体, X0染色体核型的胚胎有99%在妊娠期间发生流产或胚胎停育, 存活的个体有性腺发育异常和 (或) 合并有智力障碍。因此一旦在产前筛查或产前诊断过程中发现有上述染色体异常时, 孕妇往往做出终止妊娠的选择。值得指出的是, 在孕早期通过绒毛膜活检术进行产前诊断过程中, 正常存活胚胎的绒毛组织亦有可能发现上述异常染色体核型, 此时需排除是否为限制性胎盘嵌合体现象 (confined placental mosaician) 。该现象的发生是由于孕早期绒毛细胞查出的嵌合体比孕中期羊水细胞发生率高, 并且部分异常核型只出现在胎盘组织而机体其他组织细胞都保持正常。临床医生在判断这类妊娠结局时应当考虑随诊及进行孕中期的羊水染色体检测[8]。

参考文献

[1]Macklon NS, Geraedts JP, Fauser BC.Conception toongoing pregnancy the black boxc of early pregnancy loss[J].Hum Reprod, 2002, 8 (4) :333-343.

[2]Rubio C, Simon C, Vidal F, et al.Chromosomal abnormalities and embryo development in recurrent miscarriage couples[J].Hum Report, 2003, 118 (1) :182-188.

[3]侯红瑛, 李小毛, 范建辉.习惯性流产的细胞遗传学分析[J].中山医科大学学报, 2000, 21 (5) :397-399.

[4]李继秋, 胡向明, 孙淑敏.承德地区480例咨询病例染色体检查及分析[J].中国优生与遗传杂志, 2000, 8 (4) :46-47.

[5]张月莲, 化爱玲, 郑梅玲, 等.100例习惯性流产患者的病因及绒毛染色体分析[J].中国优生与遗传杂志, 2007, 15 (1) :41-42.

[6]吴庆华, 史惠蓉, 解艳华, 等.FISH快速检测自然流产绒毛染色体非整倍体异常的临床价值[J].实用妇产科杂志, 2012, 28 (3) :215-218.

[7]Heinrich T, Nanda I, Rehn M, et al.Live-Born Trisomy 22:Patient Report and Review[J].Mol Syndromol, 2013, 3 (6) :262-269.

导致胚胎停育的原因分析及预防措施 篇3

我院2011年1月1日至12月31日行刮宫手术4267例, 发现稽留流产108例, 均为计划怀孕, 占人工流产总数的2.53%, 孕周在8~16周之间, 孕妇年龄在20~37岁。现就稽留流产的发生原因、临床表现、诊断、鉴别诊断、预防综述如下。

1 发生原因

造成胚胎停育的原因很多。每个孕妇的胎儿停止发育的具体原因不一定是一样的。常见原因[3]有如下几种:

1.1 胚胎本身的因素

在胚胎发育早期某些重要的组织、器官没有正常发育形成, 这种情况属于自然淘汰, 即“适者生存, 劣者淘汰”。其中包括染色体异常, 染色体异常又分数量异常和结构异常, 结构异常有缺失、平衡易位、倒置、重叠等。平衡易位是最常见的染色体异常。染色体异常的胚胎如发生流产, 妊娠产物有时是一空孕囊或已退化的胚胎, 即使妊娠足月, 胎儿出生后会发现有畸形或者有功能缺陷。故而, 需做产前诊断, 以防止染色体患儿出生。特别是女性年龄>35岁的准妈妈们, 还有不良环境的影响如有毒化学物质、放射线、高温、辐射等也可引起胚胎染色体异常而致胚胎发育异常。

1.2 胎盘发育不良

胎儿在母体内生长发育, 主要通过胎盘将母体的营养物质和氧输送给胎儿, 如果胎盘发育不良或出现疾病, 胎儿将得不到营养物质和氧而停止生长。

1.3 母体因素

(1) 孕妇患有如下的全身性疾病, 如严重的糖尿病、高血压、心脏病、病毒性肝炎、重度贫血、慢性肾炎或者严重的营养不良, 特别是维生素缺乏, 以及汞、铅、酒精中毒等致胚胎发育异常。 (2) 孕妇感染了风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、弓形虫或者患有流感、伤寒、肺炎等, 可导致孕早期流产。因为母体发生感染后病原体可通过血液循环引起绒毛膜和毛细血管内皮受损, 破坏胎盘屏障, 病原体进入胎儿导致胚胎停止发育、流产或胎儿畸形。 (3) 生殖器官疾病如子宫畸形、子宫肌瘤或宫腔粘连等, 子宫的内环境和子宫整体的环境都有可能对胚胎有影响, 内环境就是子宫内膜, 如果太薄、太厚都会影响着床。常见的子宫畸形有单角子宫、双角子宫及双子宫, 子宫畸形可致宫腔狭小, 血供受到限制, 子宫内膜发育异常等, 使胚胎种植异常或胚胎生长发育受限。还有宫腔的手术创伤、感染等阻碍了正常蜕膜化和胎盘种植。子宫肌瘤及子宫内膜异位症可引起子宫内膜血供减少, 蜕膜化不同步, 种植异常。

1.4 母体免疫系统异常

胚胎或胎儿与母体间存在复杂而特殊的免疫学关系, 这种关系使胚胎或胎儿在母体里不被排斥。因为妊娠宫内的胚胎或胎儿实属同种异体移植, 胎儿是父母的遗传物质的结合体, 和母体不可能完全相同。母—胎间的免疫不适应可引起母体对胎儿的排斥而阻止胚胎的发育, 即“免疫排斥”。

1.5 生殖内分泌因素

胚胎着床及继续发育依赖于内分泌系统的彼此协调, 在妊娠早期雌激素、孕激素、人绒毛膜促性腺激素等三种激素占主导地位, 而且在母体内激素水平是相互协调的, 如果母体自身的激素水平不足, 就满足不了胚胎发育的需要, 就有可能造成胚胎的停育和流产。其中最常见的是黄体功能不足, 即孕激素水平不足, 就造成子宫内膜发育迟缓和黄体期短, 从而影响受精卵的种植, 或早期妊娠流产。

1.6 外界不良因素

外界不良因素对胎儿的发育也起很重要的作用:如外伤、过度疲劳、精神刺激、服用了影响胚胎发育的药物、接触了有毒化学物质、劣质装修材料、受到放射线或大量电磁辐射的照射等。还有吸烟、酗酒、咖啡、毒品等均影响早期胚胎发育。

2 临床表现

如果发生胚胎停育, 孕母的一切妊娠反应都会逐步消失。首先是不再有恶心、呕吐等早孕反应, 食欲恢复正常, 乳房发胀的感觉也会随之减弱直至消失。常有不规则的阴道流血, 色为暗红或咖啡色血性分泌物。最后还可能出现下腹疼痛, 排出胚胎组织。上述表现因人而异, 有的甚至一点迹象都没有, 就直接出现腹痛, 然后流产, 或胚胎停育后无明显症状, 通过常规B超检查才可发现。

3 诊断

患者有停经史, 孕早期早孕反应突然停止, 无论有无见红, 应行B超检查, 了解胚胎、胎儿的发育情况, 如果胚胎、胎儿发育异常, 测定血β-hc G, 孕周≥5周, 血β-hc G<100IU/L;孕周≥6周, 血β-hc G<2000IU/L, 提示绒毛膜促性腺激素分泌不足, 动态观察其值不再上升者, 则可判定为胚胎停育[4]。在妊娠早期发生阴道少量出血时, 希望了解胚胎发育是否正常, 超声显像是首选的方法, 可对妊娠囊大小、形态、有无胚芽及胎心搏动等进行观察、估计妊娠的预后, 并能提示胚胎死亡时间。这也是临床医师及时采取治疗措施的可靠依据, 也是监测胎儿宫内生长发育的一种最为有效而准确的方法。

4 鉴别诊断

(1) 排卵延迟的早孕。胚胎尚未着床时, 出现阴道点滴出血易误认为宫内妊娠先兆流产或不全流产。应在阴道流血不多的情况下, 逐周复查B超和HCG定量值, 根据结果再结合临床表现作出最后诊断。 (2) 不典型葡萄胎, 也可出现不规则的阴道流血, B超早期一般显示是空孕囊, 无胚芽而且HCG定量值远远大于相同孕周的正常值, 逐日监测HCG定量值更具有诊断价值。 (3) 异位妊娠, 也有不规则阴道出血的表现, B超可能发现宫腔内无妊娠囊或假孕囊, 尤其是妊娠早期, 无明显腹痛的异位妊娠更易误诊。如果B超发现附件区混合回声, 甚至可见完整的孕囊及搏动的胎心, 异位妊娠的诊断成立。 (4) 子宫肌瘤:妊娠合并的子宫肌瘤, 特别是黏膜下子宫肌瘤, 若孕囊较小, 胎芽模糊不清时, 常会将肌瘤误认为胚胎停止发育后的宫腔内混合回声, 应仔细询问患者平时月经的月经情况。 (5) 先兆流产:胚胎发育一般正常, 子宫大小与孕周相符, 具体指妊娠20周以前, 阴道少量出血或同时伴有腰酸、腹痛、下坠等现象。大多数孕妇胎儿停止发育后无明显症状, 部分孕妇可能有不规则阴道出血, 偶有下腹隐痛, 这也是与先兆流产相同的。

5 预防

对于计划怀孕的妇女, 虽然没有办法完全避免胎死腹中的情形发生, 但是可以借医患双方的努力, 将胎死腹中的概率降到最低。

5.1 提前补充叶酸

在计划怀孕的时候, 提前就开始补充叶酸, 根据大规模的医学研究, 从孕前3个月到怀孕后的前3个月, 每天补充0.4mg的叶酸, 可以使胎儿神经管缺陷 (包括无脑症、脑膨出和脊柱裂) 的机会降低40%~80%, 这是少数可以预防的先天性畸形。

5.2 治疗母体的疾病

许多母体的慢性疾病, 例如高血压、严重的贫血、心脏病、糖尿病或甲状腺功能异常等疾病, 都会增加胎死腹中的机会, 所以在怀孕之前应该进行相关的检查, 如果发现这一类问题, 应该先治疗以后再怀孕。

5.3 避免接触环境中的有毒有害物质

环境中的毒物都会增加胎儿死亡的机会, 过去有一篇报告指出, 美国每年由于孕妇吸烟导致超过4000例胎儿死亡。孕妇也切忌没有经过医师处方擅自服药。至于毒品如海洛因, 也会导致胎儿发育不良、畸形、甚至死亡, 大量辐射也能导致胚胎发育异常, 甚至胚胎死亡。

5.4 调整作息

许多研究发现, 过重的工作压力、长期睡眠不足都会增加早产、流产、死产以及胎儿生长迟缓的机会, 所以孕妇应该调整作息, 劳逸结合, 保证充足的睡眠。

5.5 按时产检

孕妇应该按规定的时间产检, 可以及早发现问题, 例如妊娠期糖尿病、妊娠期高血压病、妊娠期肝内胆汁淤积症等疾病, 并且及时处理, 不但可以减少胎死腹中的机会, 也能确保母体的安全。

5.6 重视产前教育

产前教育可以提供资讯, 让孕妇了解怀孕的生理变化以及注意事项。无知会导致风险, 例如许多孕妇本身不了解吸烟或是乱服药物对胎儿所造成的伤害, 也不知道怀孕危险的征兆。按时参加医院的各种产前教育, 可以获得各种资讯, 降低风险。

5.7 注意避免流行疾病

有一些传染疾病, 不但会造成胎死腹中, 而且即使胎儿存活, 也会留下严重的后遗症。在疾病流行期间, 尽量避免到公共场所, 以避免被传染。

5.8 节制性生活

在妊娠早期的3个月应禁止性生活, 不然会导致流产, 有些性传播疾病, 会造成胎儿死亡或重大畸形, 如梅毒等, 应避免发生, 若发现有感染的现象, 应该及早治疗。

总之, 计划怀孕的妇女, 本身应该学习相关知识、收集相关的信息, 优生优育工作在准备怀孕的那一刻就应该开始戒除烟酒, 避免环境中有害的因素, 调整作息时间, 积极参加孕前和孕期教育, 补充适当的营养, 必要的孕前优生健康检查, 进行必要的防疫措施, 特别是早孕期 (妊娠的前3个月) 是胚胎发育和器官形成的最初也是最关键的阶段, 对于胎儿形态是否正常起着决定性的作用。这个时期绝对不能乱吃药、尽量避免接受电磁辐射及接触化学物质, 孕妇一定要做好防护措施, 而且要避免病毒感染。定期接受完整的产检, 可以让您和您的宝宝都更有保障。如果不幸发生了胎死腹中的情况, 孕妇最需要的是精神上的支持, 来自亲人的关怀, 医务人员的正确及时处理。如果死胎留在子宫内太久没有处理, 会对母体产生不利的影响。通常胎死腹中的时间超过4周以上, 孕妇就可因发生血液凝固功能受损而发生产后出血、感染等并发症, 严重影响孕妇的健康甚至危及生命。

摘要：胚胎停育是指宫内胚胎或胎儿死亡后未及时排出者。导致胚胎停育的原因比较复杂, 近年来发病率呈上升趋势, 有的多次发生胚胎停育, 给生育妇女带来一定心理负担和精神上的痛苦。由于B超、HCG定量等检查手段的广泛使用, 使胚胎停育的诊断技术大大提高, 在妊娠早期多能够被诊断, 避免了一些并发症的发生。

关键词：胚胎停育,原因分析,预防

参考文献

[1]乐杰.妇产科学[M].6版.北京:人民卫生出版社, 2004:104-105.

[2]Pridjian G, Moawad AH.Missed abortion:still appropriate terminol-ogy?[J]Am J Obstet Gynecol, 1989, 161 (2) :261-262.

[3]白凤楼.胚胎停止发育原因探讨[J].中国生育健康杂志, 2008, 19 (6) :377-379.

早期胚胎停育 篇4

1资料与方法

1. 1一般资料收集郑州大学第三附属医院2010年7月至2012年7月妇产科门诊经超声检查提示“胚胎停育”并自愿行人工流产患者125例的临床资料。年龄21 ~ 41岁, 平均年龄29. 25 ±4. 20岁, 平均终止妊娠的天数73. 08±21. 53天, 均为单胎。其中所有患者既往均有自然流产史或胚胎发育不良史, 且所有孕妇在此次孕期均未有支原体、衣原体、巨细胞病毒等感染病史。

1. 2实验方法所有患者负压吸宫术中无菌取绒毛组织, 用直接低渗法制备绒毛细胞, 标本应用FISH方法检测13、16、18、21、22、X和Y的染色体数目, 实验步骤严格按照北京金菩嘉医疗科技有限公司提供的DNA FISH探针操作使用说明书进行。

1.3分组方法125例胚胎停育患者根据FISH检测结果将其分为绒毛染色体数目正常组和异常组, 比较两组的年龄和胎儿性别的情况;根据流产次数 (1次、2次、3次、>3次) 的不同, 比较两组中的染色体数目异常情况。

1.4统计学处理采用SPSS 17.0统计软件, 计量资料使用均数±标准差 (±s) 表示, 正态性的计量资料组间比较采用两组独立样本的t检验, 计数资料采用卡方检验, 均以α=0.05为检验水准。

2结果

2. 1胚胎停育患者绒毛染色体数目异常构成情况

125例胚胎停育患者的绒毛中, 其中染色体数目正常70例 ( 56. 0% ) , 染色体数目异常共55例 ( 44. 0% ) 。 55例染色体数目异常的患者中常染色体三体35例 ( 63. 6% ) , 包括13-三体6例、16-三体9例、18-三体2例、21-三体6例、22-三体12例; 多倍体10例 ( 18. 2% ) , 包括三倍体6例, 四倍体4例; 嵌合体 ( Turner) 6例 ( 10. 9% ) , 其他异常 ( 常染色体缺失、性染色体缺失等) 4例 ( 7. 3% ) 。

2.2胚胎停育绒毛染色体数目异常的有关因素分析

2.2.1患者年龄绒毛染色体数目正常组的年龄 (29.46±4.27岁) 与异常组年龄 (29.19±4.04岁) 比较, 差异无统计学意义 (t=1.017, P>0.05) 。

2.2.2胎儿性别胚胎停育中常染色体数目异常组共38例, 其中胎儿性别XY 18例、XX 20例;胚胎停育中常染色体数目正常组共70例, 其中胎儿性别XY 33例、XX 37例。常染色体数目异常组和正常组的男女胎儿情况比较, 差异无统计学意义 (χ2=0.015, P>0.05) 。

2.2.3流产次数在胚胎停育患者中, 流产次数3次及3次以上的染色体数目异常发生率 (51.7%和68.8%) 高于流产次数为1次的发生率 (26.3%) , 差异有统计学意义 (χ2=5.197;χ2=13.781, P<0.05) ;流产次数>3次的染色体数目异常发生率 (68.8%) 高于流产次数为2次的发生率 (30.8%) , 差异有统计学意义 (χ2=8.287, P<0.05) 。流产次数1次的染色体数目异常发生率与流产次数为2次的发生率比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

注: 流产仅包括自然流产、胚胎停育等不良孕产史

3讨论

FISH是直接采用多种荧光素标记的不同染色体DNA探针, 与待测标本的中期分裂象或间期核细胞进行原位杂交, 对待测的多种染色体进行分析。由于FISH对染色体检测可在48小时内完成, 无需细胞培养, 不受组织是否污染影响, 近年来临床应用越来越广泛。本研究采用FISH技术对125例胚胎停育患者的绒毛染色体进行检测, 通过对荧光信号的检测, 可同时对待测的多种染色体进行定性、定量或相对定位分析, 其灵敏度较高, 所需细胞量很少, 无需细胞培养, 较染色体核型分析省时省力, 其技术更容易被掌握。检测结果示125例胚胎停育患者的绒毛中, 染色体数目异常共55例 ( 44. 0% ) , 提示染色体数目异常是胚胎停育的主要发病因素。

有文献报道, 染色体数目异常的主要发生源自双亲之一的配子形成时或妊娠初期受精卵卵裂时出现染色体不分离, 则导致该染色体增多或减少1条, 亦即导致三体性或单体性[2]。21-三体在活产儿中最常见, 13-三体、18-三体也可见, 而其他常染色体三体大多导致流产。性染色体的三体在活产儿可见, 性染色体的单体性不仅见胚胎停育, 也见于儿童或成人。Turner综合征, 是指在以100个细胞为基数, 若其异常率达60% 以上则认为其为嵌合体, 除减数分裂时性染色体不分离, 导致减少一条性染色体外, 其中大约3 /4是父系性染色体丢失。在本组资料胚胎停育绒毛染色体分析中, 常染色体三体 ( 63. 6% ) 是最多见的数目畸变, 包括13-三体、16-三体、18-三体、21-三体和22-三体, 这也是造成人类胚胎低着床率和早期丢失的一个重要原因。文献报道在自然流产绒毛中染色体异常的检出率为55% ~ 66%[3]。由于染色体数目异常, 阻碍了胚胎的正常发育, 大多数遭遇自然淘汰而流产, 虽然少数染色体异常患儿可以足月分娩, 但常常智力障碍。因此对停止发育的胚胎进行染色体检查十分重要。

本研究在胚胎停育患者绒毛染色体数目异常情况及其与患者年龄、胎儿性别及流产次数之间的关系的研究中发现: 绒毛染色体数目正常组与异常组在患者年龄及胎儿性别方面差异无统计学意义, 说明胚胎停育绒毛染色体数目异常与孕妇年龄、胎儿性别无关。有研究表明, 既往不良孕产史对胚胎停育有一定影响, 因为既往不良孕产史, 随着年龄的增长, 卵子存在衰老退化的现象[4], 受精卵细胞内纺锤丝老化, 导致功能不全或丧失, 导致胚胎停育的发生[5]。本组资料表明, 流产次数3次及以上的染色体数目异常发生率 ( 51. 7% 和68. 8% ) 高于流产次数为1次的发生率 ( 26. 3% ) , 说明对有3次及3次以上流产史的患者, 染色体异常的发生率升高, 不良孕产次与染色体数目异常有关, 不良孕产次越多, 所检测染色体数目异常有所增加。

从遗传学角度说[4，5], 染色体数目和结构异常是胚胎停育的主要原因, 绒毛染色体检查可对胚胎停育的原因及时作出判断, 由于胚胎停育是异常生命体自然淘汰的过程, 因此胚胎绒毛的遗传学检查不仅能够对胚胎停育进行病因学诊断, 同时为患者进行合理治疗和再生育的优生指导有重要意义。如患者要求再次妊娠, 建议夫妻双方对其自身染色体进行检查, 再次怀孕时加强孕期监测, 或如无生育正常儿的机会, 建议其避孕, 通过辅助生殖技术借卵得到健康的孩子。

参考文献

[1]刘丛丛, 刘俊涛, 宋亦军, 等.荧光原位杂交技术在自然流产绒毛染色体核型检测中的应用[J].中华围产医学杂志, 2012, 15 (6) :345-348.

[2]Norton ME, Brar H, Weiss J, et al.Non-invasive chromosomal evaluation (nice) study:results of a multicenter prospective cohort study for detection of fetal trisomy 21 and trisomy 18[J].Am J Obstet Gynecol, 2012, 207 (2) :137.e1-e8.

[3]Ji Hyae Lim, Min Hyoung Kim, You Jung Han, et al.Cell-free fetal dna and cell-free total dna levels in spontaneous abortion with fetal chromosomal aneuploidy[J].PLoS One, 2013, 8 (2) :e56787.

[4]干志峰, 肖英, 方小武, 等.孕早期绒毛染色体培养应用于产前诊断69例[J].中国优生与遗传杂志, 2011, 19 (7) :44-46.

早期胚胎停育 篇5

MMP - 2 是基质金属蛋白酶类 ( MMPs) 家族中的主要成员之一, 孕早期主要由滋养细胞产生, 在孕早期胚胎绒毛和子宫蜕膜中有广泛表达[2]。本研究旨在通过检测正常早孕妇女与胚胎停育妇女绒毛和蜕膜组织中MMP - 2mRNA的表达, 从而探讨其在胚胎停育过程中的作用。

1 资料与方法

1. 1 一般资料选择2014 年6 月—2015 年6 月于濮阳市人民医院和新乡医学院第三附属医院妇产科门诊就诊的胚胎停育患者50 例为研究组, 诊断标准: 经超声检查宫腔内可见孕囊, 但孕囊小于孕周, 未见胎芽或原始心管搏动者。另选同期正常早孕妇女因计划外妊娠而自愿终止者48 例为对照组, 超声检查证实胎儿发育正常, 既往无不良孕产史。纳入标准: ( 1) 年龄: 25 ~ 35 岁; ( 2) 月经周期基本正常 ( 25 ~ 35d) ; ( 3) 无内科合并症, 未放置宫内节育器, 且均已排除子宫畸形、宫颈松弛、子宫肌瘤、染色体异常、生殖道感染等会引起自然流产和胚胎停育的因素; ( 4) 排除男方因素的影响; ( 5) 双方均否认有遗传病史。标本采集时患者均知情并签署同意书, 研究方法符合伦理学标准。两组一般资料比较, 差异无统计学意义 ( P > 0. 05, 见表1) , 具有可比性。

1. 2 研究方法

1. 2. 1 实验标本采集采用无菌及灭活RNA酶的剪刀、镊子采集停育胚胎及正常早孕妇女的流产绒毛标本和蜕膜标本, 用0. 9% 氯化钠溶液反复漂洗, 干纱布吸除水分, 装入灭活RNA酶的冻存管中迅速置于液氮中保存备用。

1. 2. 2 RNA提取 ( 1) 将0. 1g人绒毛组织和蜕膜组织研磨成粉末状; ( 2) 加入1ml TRIzol试剂, 颠倒混匀10 下, 室温静置5min; ( 3) 加入0. 2ml氯仿, 剧烈震荡15s, 室温静置10min。4℃ , 12000 × g离心15min; ( 4) 小心吸取上层上清液0. 4 ~ 1. 5ml灭菌离心管中, 加入0. 5ml异丙醇, 吹吸混匀, 室温静置10min。4℃ , 12000 × g离心10min, 去上清; ( 5) 加入75% 乙醇1ml, 吹吸混匀, 4℃ , 7500 × g离心5min, 去上清; ( 6) 空气干燥5 ~ 10min ( 根据干燥程度决定, 直到白色沉淀物变为无色为止) , 加入DEPC水50μl, 吹吸混匀; ( 7) 取2μl RNA溶液测量A260、A280值, 计算总RNA浓度, 分装, - 80℃ 备用 ( 用甲醛变性琼脂糖凝胶15g/L电泳检测, 合格后用于反转录) 。

1. 2. 3 反转录- PCR ( RT - PCR) 反转录操作按试剂盒说明书要求进行, 总RNA根据不同样本浓度换算后添加, 25℃10min; 37℃ 50min; 70℃ 15min, 得到c DNA。PCR扩增目的基因, 设 β - actin为内参基因 ( 所有引物由捷瑞生物提供) 。MMP - 2 正向引物序列: 5' - GATGCCTTTGCTCGTGC - 3'; 反向引物序列: 5' - TATCCATCGCCATGCTC - 3'。进行PCR反应, 反应体系: 2 × Fast Start SYBR Green Mix 12. 5μl, 模板c DNA链2μl, 上、下游引物各0. 75μl, Water ( dd H2O ) 9μl。反应程序: 95℃ 15min, 39 个循环; 95℃ 10s、61. 4℃ 30s;制备溶解曲线: 65℃ 5s, 0. 5℃ /s升温至95℃ 。

1. 2. 4 RT - PCR结果判定应用软件Image进行灰度分析, 以目的基因的灰度值与对应 β - actin的灰度值之比作为mRNA的相对表达量, 以此比值进行半定量统计分析。

1. 3 统计学方法采用SPSS 17. 0 统计软件进行数据处理, 计量资料以± s表示, 采用t检验。以P < 0. 05 为差异有统计学意义。

2 结果

研究组绒毛组织中MMP - 2 mRNA表达量高于对照组, 差异有统计学意义 ( P < 0. 05) 。两组蜕膜标本中MMP - 2mRNA表达量比较, 差异无统计学意义 ( P > 0. 05, 见表2) 。

3 讨论

胚胎的植入及妊娠的继续是一个极其复杂、精细的过程, 这一过程需通过滋养细胞和蜕膜组织的相互作用以及其多种因素的共同调节来实现。早期胚胎停育可能是母- 胎界面内分泌、免疫、增殖与凋亡调控异常, 胚胎染色体异常而导致的妊娠丢失, 其发病机制复杂, 涉及因素众多[3]。近年来, 随着其发病率的上升, 国内外学者愈发重视对胚胎停育病因的研究。目前对胚胎停育的研究表明, 滋养细胞增殖不良、浸润异常可能是导致早期胚胎停育的原因之一[4]。

蛋白水解酶主要功能是降解细胞外基质, 而MMPs是其中一种。其在促进细胞浸润、细胞侵袭和转移过程中扮演着重要角色。研究显示, 妊娠早期对滋养细胞的迁移、侵袭以及植入有影响的因子, 如白介素- 8、表皮生长因子、缺氧环境等, 最终都是通过调控MMPs尤其是MMP - 2 发挥作用, 从而影响妊娠的维持及结局[5,6,7]。胚胎滋养层细胞在种植过程中不断与母体子宫内膜相互作用, 当母- 胎界面不能形成符合正常妊娠需要的低阻力血管, 则可致使滋养层变薄、退化、坏死, 进而使胚胎缺乏营养物质, 最终导致胚胎的丢失[8]。滋养细胞早期侵入子宫蜕膜和肌层的过程中, MMP - 2发挥了重要作用。当其侵入母体蜕膜的能力发生改变时, 则影响妊娠的继续, 这可能是造成早期胚胎停止发育的原因之一。也有研究显示, 正常妊娠组的绒毛组织中MMP - 2 的阳性表达率明显低于早期停育胚胎组[9]。Kesanakurti等[10]认为MMP - 2 基因的上游启动子可与活化的Stat3 特异性结合, MMP - 2 的来源广泛, 表达和功能可受到转录、分泌、激活及抑制等多个环节的共同调节, 其中孕激素、HCG等多种蛋白酶的分泌和激活可影响MMP - 2 的表达; 同时, 活化的MMP - 2 也具有相互激活的能力。故对MMP - 2 的深入研究可进一步揭示胚胎停育的发生机制。本研究结果显示, 研究组绒毛组织中MMP - 2 mRNA表达量高于对照组, 差异显著;两组蜕膜标本中MMP - 2 mRNA表达量比较无差异。

在胚胎早期的植入过程中, 子宫内膜细胞外基质的降解和滋养细胞对内膜的侵入, 两者之间存在一定的平衡关系。因此适当的降解与侵入则有利于胚胎的植入及发育, 但当滋养细胞的浸润能力过强时, 则有可能导致蜕膜组织中的胶原过度水解, 蜕膜组织坏死、脱落, 进而导致胚胎停止发育[11]。

综上所述, 妊娠的发生和维持需要胚胎与母体之间精细的协同作用, 本研究主要探讨了MMP - 2 在胚胎停育患者绒毛和蜕膜组织中的表达。但具有一定局限性, 后续研究需扩大例数和组数, 增加研究指标, 更进一步探讨胚胎停育的发病机制, 为其预防和治疗提供更为充分的实验依据。

摘要：目的 探讨MMP-2与胚胎停育的关系。方法 选择2014年6月—2015年6月于濮阳市人民医院和新乡医学院第三附属医院妇产科门诊就诊的胚胎停育患者50例为研究组, 另选同期正常早孕妇女因计划外妊娠而自愿终止者48例为对照组, 分别留取其绒毛和蜕膜组织标本, 采用半定量RT-PCR法对标本MMP-2 mRNA转录水平进行分析。结果 研究组绒毛组织中MMP-2 mRNA表达量高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。两组蜕膜标本中MMP-2 mRNA表达量比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。结论 MMP-2可能参与了胚胎停育的发生发展。