免疫测定法

免疫测定法（精选十篇）

免疫测定法 篇1

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院2012年1月—2013年1月收治的58例儿童T2MD患者为研究对象, 患者均符合WHO于1999年对DM的诊断标准。同时排除原发性、继发性肾病患者、尿路感染者、合并感染、血液疾病、自身免疫疾病以及肿瘤患者。根据UAER将T2MD患者分为2组:单纯糖尿病 (DM) 组30例, 男性患儿18例, 女性患儿12例, 患者平均年龄 (12.3±4.5) 岁;糖尿病肾病 (DN) 组28例, 男性患儿18例, 女性患儿10例, 患者平均年龄 (13.2±5.2) 岁。同时选取健康体检者30例为对照组 (NC组) :男性15例, 女性15例, 平均年龄为 (10.6±3.2) 岁。

1.2 方法

收集患者24 h尿液并测定患者尿蛋白总量, 同时将选取患者清晨尿液5~10 m L, 并置于-20℃冰箱中保存, 同时采用放射免疫法测定患者α1-MG、m Alb、TRF、β2-MG水平, 试剂盒由上海生物科学技术有限公司提供, 操作过程严格按照试剂盒说明进行操作。

1.3 统计方法

采用SPSS17.0进行统计学分析, 计量资料采用均数±标准差 (±s) 表示, 组间计量资料均值的比较采用成组设计t检验。

2 结果

与NC组相比, DM组及DN组α1-MG、m Alb、TRF、β2-MG水平显著上升, 而DN组显著高于DM组, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。

3 讨论

DN是糖尿病患者严重的并发症之一, 患者表现为肾功能衰竭, 预后效果较差。早期DN表现为尿中24 h微量蛋白排泄量增加, 在此期间约有20%的T2MD的DN患者可出现大量尿蛋白丢失的情况[2]。WHO对DN的定义是患者24 h尿中m Alb含量为30~300 mg时即可诊断为隐性DN患者。该研究中与NC组相比, DM组及DN组α1-MG、m Alb、TRF、β2-MG水平显著上升, 而DN组显著高于DM组, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 从而说明不仅TRF增加可引起肾脏损伤, 同时α1-MG、[Ig G]、β2-MG水平上升也可引起肾损伤。

DN病变的基础是由于肾小球基质及肾小球血管中的葡萄糖胺聚糖的浓度下降, 引起血管基底膜及血管内皮通透性增加, 导致尿液中白蛋白含量上升, 进而引起肾小球基底膜增厚, 导致肾小球硬化, 最终导致肾功能衰竭[3]。DN患者存在胰岛抵抗作用, 胰岛抵抗可使得肾小球动脉血管收缩过度, 导致肾小球内压上升, 从而增加尿液中白蛋白的排出量[4]。因此, 通过放射免疫法测定DN患者尿液相关蛋白含量, 可了解患者肾损伤的部位及程度, 为早期诊治DN提高临床依据。

参考文献

[1]Molina M, Gonzalez R, Folgado J.Correlation between plasma concentrations of homocysteine and diabetic polyneuropathy evaluated with the Semmes-Weinstein monofilament test in patients with type 2 diabetes mellitus[J].Med Clin (Barc) , 2013, 1 (17) :163-164.

[2]Yoshida S, Hashimoto T, Kihara M, et a1.Urinary oxidative stress markers closely reflect the efficacy of Candesartan treatment for diabetic nephropathy[J].NephronExp Nephrol, 2009, 111 (1) :20-30.

[3]龙芝琴, 安岩.探讨化学发光法和放射免疫法测定血清胰岛素、C肽的比较[J].人人健康 (医学导刊) , 2008, 4 (2) :656-657.

免疫测定法 篇2

免疫亲和色谱-高效液相色谱法测定土壤中氯磺隆残留

采用碳酰二咪唑(CDI)将Sepharose CL-4B活化并与纯化的抗氯磺隆抗体共价偶联,合成免疫亲和吸附剂并制备对氯磺隆具有特异性亲和力的免疫亲合色谱(IAC)柱.对IAC条件进行优化,选择0.02 mol・L-1 pH7.2磷酸盐缓冲液作吸附与平衡介质,80%(体积分数)甲醇水作洗脱剂.结果表明,在实验条件下,IAC柱对氯磺隆的.动态柱容量达2.6 μg・mL-1床体积.当标样溶液中氯磺隆含量为2.0 ng・mL-1时,经IAC柱富集后浓度提高近250倍.土壤中添加氯磺隆0.10 μg・g-1、5.0 ng・g-1,提取液以IAC柱分离富集,洗脱液采用高效液相色谱(HPLC)法测定,5次重复实验的平均回收率分别为92.9%、94.8%,相对标准偏差分别为8.46%、8.41%.成功建立了氯磺隆IAC-HPLC分析技术并用于土壤中痕量残留氯磺隆的测定.

作 者：冯大和 邵秀金 韦林洪 刘曙照 FENG Da-he SHAO Xu-jin WEI Lin-hong LIU Shu-zhao 作者单位：扬州大学环境科学与工程学院,江苏,扬州,225009刊 名：农业环境科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF AGRO-ENVIRONMENT SCIENCE年，卷(期)：25(6)分类号：X592关键词：免疫亲合色谱(IAC) 高效液相色谱(HPLC) 土壤 氯磺隆

免疫测定法 篇3

关键词：大便潜血 邻联甲苯胺法 免疫胶体金

The Comparison Between the Chemical Method and Immunogold Method in Detecting Sedoccult Blood

Duan Xiangyuan

Abstract:Objective:To explore the comparability between the chemical method and immunogold method in detecting sed occult blood．Methods:To detect the sed occult blood of 300 specimens with both O-tolidine method and immunogold method．then analyse the results．Results:2 kinds of methods in line with the consistency of the results of the measured rate of greater than 90%.Conclusion:Food and drink impact the results of chemical method very much．so chemical method is lesssensitive and specific than immunogold method．But immunogold method also has false positivereaction，therefore we suggest detecting sed occult blood with the both two methods.

Keywords：Sed occult blood O-tolidine method Immunogold method

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879(2012)03-0026-01

大便潜血 (fecesoccultblood,FOB)实验是临床诊断消化道出血的一项重要项目，也是普查筛选消化道肿瘤的有效手段。常用的化学法主要有联苯胺法、邻联甲苯胺法、无色孔雀绿法、愈创木脂法、匹拉米洞法等,以邻联甲苯胺法较为实用。随着近年来对粪便隐血检测试剂的深入研究,免疫法测定潜血，方便快捷并取得了较满意的结果，已逐渐取代邻联甲苯胺法。但实际工作中，某些特殊标本用胶体金试纸法检测结果与临床不符。为进一步了解粪便隐血免疫法与化学法在检测灵敏度特异性方面的特点，我们用化学法（邻联甲苯胺法）与免疫法（胶体金试纸法）测定粪便隐血结果作如下比较，探讨二者在临床上的应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本。测定本院300份无重复门诊及住院患者新鲜大便，均为成年人，女89例，非月经期，男211例(均排除痔肛裂出血)。患者随机分为A、B二组：A组（65例）严格按照医嘱进行饮食和药物控制3日。B组（235例）未按照医嘱进行饮食和药物控制。

1．2 试剂。艾康生物技术公司提供的便潜血胶体金检测试纸条（批号20070124）；邻联甲苯胺由上海远航试剂厂生产，冰乙酸及无水乙醇由开封化工厂生产，均为AR级。10g/L邻联甲苯胺冰乙酸试剂、3%过氧化氢自配。

1．3 方法。邻联甲苯胺法按文献操作［1］，便隐血胶体金试纸法严格按说明书操作。对收集的每份标本分别做邻联甲苯胺法和便隐血胶体金试纸检测，记录同一份二种不同方法的测定结果。邻联甲苯胺法阳性而胶体金试纸检测阴性的标本，按一定比例稀释后以胶体金法再测。

2 结果

2.1 化学法（邻联甲苯胺法）和免疫法（胶体金法）对二组检测结果的比较。见表1。

2.2 A组排除饮食及药物的影响，邻联甲苯胺法和胶体金法对A组检测结果基本一致。

2.3 B组受饮食及药物等干扰因素的影响，邻联甲苯胺法阳性率明显高于胶体金法。B组中80例化学法阳性者，胶体金法均为阴性，经咨询病史和饮食情况，除5例服用铁剂外，其他人近日曾食用动物血、肉、肝脏、及富含叶绿素食物等。其中胶体金法为阴性的2例柏油样便标本经1∶50～1∶100稀释后以胶体金法重测皆为阳性。

3 讨论

粪便隐血实验是消化道疾病辅助诊断试验。邻联甲苯胺法利用血红蛋白中的亚铁血红素具过氧化物酶活性，催化过氧化氢放出新生态氧，把受体邻联甲苯胺氧化成联甲偶氮苯而显蓝绿色。显色的深浅反映了Hb的多少，即出血量的大小。该法可检出1～5mg/L的Hb，消化道5～10ml出血即为阳性。但缺乏特异性和准确性，易出现假阳性反应，任何有类似氧化物酶活性的物质都可影响此实验，外源性动物食品如含有Hb、肌红蛋白，其含铁血红素的作用可使试验阳性；大量生食富含葉绿素蔬菜，其中含有活性的植物过氧化物酶也可催化H2O2分解出现阳性反应。邻联甲苯胺法灵敏性低于胶体金法［2］，故极少量的出血会造成邻联甲苯胺法(阴性)胶体金法(阳性)的结果。此时粪便外观通常无明显异常，但如果血红蛋白在消化道停留时间过长，或受细菌分解等因素而降解，其与胶体金试纸上包被的抗体的相应抗原受到破坏时就会出现假阴性，若此时出血量在邻联甲苯胺法检测限上就会出现邻联甲苯胺法阳性而胶体金法阴性的结果。另外当出血量大于胶体金法检测范围，随着血红蛋白含量增加，抗原抗体复合物反而减少，产生后带现象，免疫胶体金法出现假阴性，上述两种情况大便外观通常会有明显改变，只需将粪便溶液调配成一定浓度后检测，免疫胶体金法可获阳性结果。由于胶体金单克隆抗体免疫法是利用金标Hb-抗体与Hb结合后，向上扩散分别与测试区的抗-Hb抗体及对照区的Hb结合，此时胶体金的颗粒聚集呈颜色反应，它只特异地针对人-Hb抗原表位，基本排除了饮食及药物因素的干扰；且具有很好的灵敏度，一般Hb为0.2mg/L就可得到阳性结果［3-4］。被世界卫生组织（WHO）和世界胃肠镜检查协会推荐作为粪便隐血实验的一种较为确认的方法［5］，且对操作者无损害，但其成本较化学法高。

鉴于两种方法各有优缺点，有条件的实验室应同时开展两种方法：二者皆为阳性判断为真阳性；化学法阳性而免疫胶体金法阴性者，若外观无改变者建议禁肉食、富含叶绿素食物、停用某些已知有影响的药物2 d～3 d后复查，若外观有所改变者稀释重测免疫胶体金法；若化学法阴性而免疫胶体金法阳性者建议连续复查2次及做进一步检查。

参考文献

［1］ 叶应妩，王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.第3版.南京:东南大学出版社,2006.310-311

［2］ 王建洲，陆希明．三种便潜血试验测定方法的比较［J］．哈尔滨医药,2005,25(2)：1314

［3］ 朱立华.实验诊断学［M］.北京：北京医科大学出版社，2002，264-265

［4］ 高茂馗，束国防.免疫法与化学法测定隐血的比较［J］.临床检验杂志，2004，22（1）：69

紫外分光光度法测定免疫球蛋白A 篇4

1 实验方法

在10mL比色管中分别加入0.4mLpH值为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液0.30mL经过适当比例稀释的羊抗人IgA溶液, 0.60mL的PEG4000, 一定量的IgA溶液用二次纯水定容至3mL, 摇匀, 静置30分钟。用紫外可见分光光度计扫描得到体系的吸收光谱, 测定283nm波长处的吸光强度A;不加IgA作空白, 测其吸光强度Ib;计算ΔA=A-Ab。

2 结果与讨论

根据免疫反应原理, IgA抗原与IgA抗体发生特异性结合形成抗原-抗体复合物微粒。PEG为一种无电荷的线性分子的多糖, 能够解除抗原抗体周围的电子云和水化层, 促进两者靠近并结合成大复合物, 加快反应速度。IgA在一定浓度范围内随其浓度的增加, 在283nm处的吸收强度呈线性增强, 据此可建立IgA的免疫吸收光谱分析法。

2.1 吸收光谱

IgA和羊抗人IgA血清在283nm处都有1个吸收峰, 随着IgA浓度增大该吸收峰强度呈线性大大增强。本实验未采用试剂厂家推荐波长340nm, 因为在340nm处吸光度值变化幅度小, 为了增加灵敏度, 本实验采用283nm为测定波长。

2.2 p H值、缓冲溶液用量的选择

分别测定了pH值为5.8~8.0范围内体系在Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液中ΔA283nm的波动变化。结果表明, 当pH值为6.2时, ΔA283nm达到最大值, 增加灵敏度的效果达到最好, 所以本文选择了p H值为6.2的Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液;又考察了缓冲溶液的用量从0~0.8mL对ΔA28 3n m的影响。结果表明, 当缓冲溶液的用量在0.40~0.8mL时ΔA变化不大, 免疫复合物结合较稳定, 故选用0.40mL缓冲液。

2.3 聚乙二醇的选择

聚乙二醇简称PEG, 因分子量不同, 对体系的影响不同。分别考察了PEG-4000、PEG-6000、PEG-10000用量0~1mL对体系ΔA283nm的影响。随着PEG用量的增加, ΔA显著增加, 但Ab也有明显增加, 当PEG用量为0.8mL时, 空白值已上升的相当大, 严重影响了灵敏度。要提高灵敏度就必须得降低空白值, 所以本实验选取用0.6mL的PEG4000, 浓度为60mg·mL-1。

2.4 羊抗人IgA用量的选择

分别试验了羊抗人IgA用量为0-0.8mL时对ΔA283nm的影响变化情况。当羊抗人IgA用量为0.30mL时, 体系的ΔA达到最大值。随着羊抗人IgA用量的继续增加, ΔA呈降低趋势, 故本文选取羊抗人IgA血清的最佳用量为0.30mL。

2.5 温度及反应时间的影响

考察了不同温度下对体系的影响。结果表明, 室温下ΔA较大, 条件容易简单, 容易控制, 且灵敏度也较高。同时考察了反应时间的影响, 室温条件下30分钟后, 反应已完全且实验结果比较稳定, 在30分钟内基本无变化。故本文选择在室温条件下进行, 反应时间为30分钟。

2.6 线性关系

在选定的实验条件下, 分别测定不同浓度CIgA (μg·mL-1) 的吸光强度ΔA283nm, 并绘制工作曲线, 发现浓度在0.2-4.00μg·mL-1范围内与ΔA283nm之间存在良好的线性关系;回归方程为:ΔA283nm=0.1869CIgA+0.0204, 相关系数为0.998。

2.7 样品的测定

取正常人血清5份, 用移样器准确移取100μL用水稀释至5mL;再移取100μL按实验方法测定, 实验结果如表1, 测定结果与人体正常血清中IgA的含量基本一致[3]。 (如表1)

样品由商丘市第一人民医院提供。

摘要：本文建立了用紫外分光光度计测定免疫球蛋白A的方法, 分别考察了五个条件下在283nm处对测定IgA的影响。在选定的实验条件下, IgA浓度在0.20-4.00μg.mL-1范围内均与283nm处的吸光度呈线性关系, 该法已用于人血清中IgA的测定, 结果满意。

关键词：免疫球蛋白A (IgA) ,羊抗人免疫球蛋白A,吸收光谱

参考文献

[1]姚春艳, 俯伟灵.人免疫球蛋白功能及临床诊断方法[J].中国新医药, 2004, 3 (3) :55.中国煤炭工业医学杂志, 2004, 7 (12) :1209-1210.

[2]王娜.免疫球蛋白A等的免疫共振散射光谱分析[D].广西师范大学, 2007:29-39.

免疫测定法 篇5

高效液相色谱法与快速酶免疫法检测食品中黄曲霉毒素的比较

对黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2含量的`2种检测方法进行了比较,结果表明,快速酶免疫法灵敏度高,特异性强,操作方便,适合初筛.IAC-HPLC法准确,回收率平均值在93%～97%之间,适合确证、定量.

作 者：倪梅林 谢东华 曹苏仙 李佐卿 作者单位：宁波出入境检验检疫局技术中心食品安全分中心,浙江,宁波,315012刊 名：江苏农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES年，卷(期)：“”(5)分类号：Q935关键词：黄曲霉毒素 高效液相色谱法 快速酶免疫法 免疫亲和柱

自我健康测定法 篇6

1.火烈鸟

心情平静地单足站立，另一腿同时向后弯曲90度，两臂向左右伸平，身体不晃动，目视前方。判定标准：站立10秒钟以下记1分；站立11至20秒钟记2分；站立20秒钟以上记3分。

2.踏青

双腿膝盖稍弯曲，身体向前呈猫腰状，一根一根地拾起地面上的火柴棒，双足站稳。判定标准：拾14根以下为1分；拾15根至19根为2分；拾20根以上为3分。

3.燕式飞

右膝盖顶在地面上，左腿向后伸展平直，两臂向左右两侧分开。判定标准：头部能触碰地面抬不起来的记1分；头部触碰地面后能重新抬起来的记2分；连续完成上述两回者记3分。

4.体前屈

两腿直立，身体从腰部向前弯曲，膝盖不得弯曲，两臂同时用力向下使手触地面并保持3秒钟。判定标准：手指头触地者记1分；手掌向前方触地者记2分；手掌向后方触地者记3分。

5.背后握手

直立，双臂从左右方向用力向背后回合，使双手握在一起。判定标准：从一个方向朝背后回合后，使两手指尖相碰者记1分；再换个方向，向背后回合后使两手指尖相碰者记2分；能使两手背后握合者记3分。

6.腹肌运动

两脚向上翘起，腿部展平，两臂分别向后支撑在腰部后下方，使腰部离开床面做上下运动。判定标准：上下运动1-22次者记1分；上下运动22~29次者记2分；上下运动29-39次者记3分。

7.宇宙游泳

身体直立，两腿稍叉开，两臂向左右伸展平，双膝稍稍弯曲，然后用力跳起，使身体做顺时与逆时旋转跳跃。判定标准：能使身体跳起后顺时针旋转180°记2分；能使身体朝一个方向旋转360°者记3分。

8.拱桥式运动

躺在床上，两手支撑在头部双耳侧面，同时两脚掌支撑在床面上。判定标准：两手用力支撑后使腰部离开床面者记1分；两手用力支撑后使头顶顶在床面者记2分；两手用力支撑后使头部离开床面，身体呈拱桥状者记3分。

9.急速动作

两人一组，其中一人进行测验，辅助者直立，将手掌置于被测者头顶后不动。第一步，应测者应迅速下蹲，同时两手掌着地；第二步，身体用力快速向后伸展开，呈俯卧撑状态；第三步，迅速恢复身体成直立状态，使自己的头部正好碰在辅助者的手掌处。判定标准：上述动作在10秒钟内连续作1—3回者记1分；4回者记2分；5回以上者记3分。

10.滚动

仰面躺在地面上，四肢笔直伸展，并悄悄向上翘起后使脊背着地，然后用力使身体左右旋转(滚动)。判定标准：使身体左右两个方向各旋转90°者记1分；使身体左右两个方向各旋转180°者记2分；使身体旋转360°者记3分。

11.日常生活习惯的测验

A.自我健康关心程度的测验：(1)最近两周内有没有测量过体重?(2)最近一个月有没有测量过血压?判定标准：如果能做到上述1条者记3分；如果能做到上述两条者记5分。

免疫测定法 篇7

目前, 国内外关于万古霉素检测的研究主要集中于医学方面, 检测方法包括微生物法[3]、高效液相色谱法[4,5]和液相色谱-串联质谱法[6,7];关于动物源性食品中万古霉素的残留检测国外未见报道, 国内也较少, 且是与其他多肽类抗生素采用高效液相色谱-串联质谱法 (HPLC-MS/MS) 同时检测[8,9]。试验的目的是建立一种快速、灵敏地检测牛奶中万古霉素残留的胶体金免疫层析法, 为我国抗生素残留的现场监控提供理论依据, 现报道如下。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

万古霉素 (纯度≥99%) 、各种交叉反应药物 (纯度≥99%) 、牛血清白蛋白、卵清蛋白, 购自Sigma公司;氯金酸、柠檬酸三钠, 购自国药集团化学试剂有限公司;分泌万古霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 北京勤邦生物技术有限公司制备、保存。

复溶缓冲液, 由含牛血清白蛋白0.1%～0.3%、吐温-20 0.05%～0.2%及pH值为7.2的0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液混合而成。

1.2 仪器与设备

PVC背板, 购自上海金标生物科技有限公司;硝酸纤维素膜、吸收垫、样品垫, 购自普利来基因技术公司;2000SBL电子天平, 购自美国Setra公司;90-2磁力搅拌器, 购自上海振荣科学仪器有限公司;LGJ-50C冻干机, 购自北京四环科学仪器厂有限公司;CT300数控切条机, 购自上海金标生物科技有限公司;Isoflow点膜仪, 购自Biodot公司;752S分光光度计, 购自上海棱光技术有限公司。

1.3 万古霉素半抗原的合成

0.50 g万古霉素、0.40 g琥珀酸酐和2 mL吡啶在10 mL二甲基亚砜中混合, 在80 ℃搅拌反应10 h, 蒸除溶剂, 柱层析后在乙醇-水体系中重结晶得到万古霉素单琥珀酸酰胺, 即为万古霉素半抗原。

1.4 万古霉素半抗原-卵清蛋白耦联物的制备

取15 mg半抗原, 溶解于1 mL N, N-二甲基甲酰胺中, 取碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺各30 mg, 用0.2 mL水充分溶解后加入半抗原溶液中, 室温下搅拌24 h, 即可得到反应液A;称取卵清蛋白50 mg, 使之充分溶解在3.8 mL、pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中, 将反应液A逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中, 并于室温搅拌24 h;用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液4 ℃透析3 d, 每天换3次透析液, 以除去未反应的小分子物质;分装, 于-20 ℃保存, 备用。

1.5 胶体金的制备

用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释成0.01% (质量分数) , 置磁力加热搅拌器上搅拌煮沸, 每100 mL 0.01%氯金酸加入2.5 mL 1%柠檬酸三钠, 继续搅拌加热反应至液体呈红色时停止加热, 冷却至室温后补足失水, 4 ℃保存, 备用。制备好的胶体金通过肉眼观察其外观、颜色, 并采用电镜检测胶体金颗粒大小。

1.6 单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下, 用0.2 mol/L碳酸钾调胶体金溶液的pH值至7.0, 按1 mL胶体金溶液中加入10 μg的标准向其中加入万古霉素单克隆抗体, 搅拌混匀, 室温静置10 min;加入10%牛血清白蛋白使其在胶体金溶液中的体积分数为1%, 静置10 min;12 000 r/min、4 ℃离心20 min;弃上清液, 沉淀用复溶缓冲液洗涤2次, 用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬, 置4 ℃保存, 备用。

1.7 微孔试剂的制备

向微孔条中加入50 μL万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物, 放入冷冻干燥机中, 在-50 ℃条件下预冻3 h, 再真空干燥15 h, 即可取出, 得到冻干有万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂, 密封, 保存。

1.8 硝酸纤维素膜的制备

利用磷酸缓冲液将万古霉素半抗原-卵清蛋白耦联物与羊抗、鼠抗抗体分别进行不同倍数稀释, 并制备成试纸条检测, 根据测试结果确定硝酸纤维素膜上检测线 (T) 和质控线 (C) 的使用浓度及喷量。用点膜仪将所选浓度的万古霉素半抗原-卵清蛋白耦联物与羊抗鼠抗抗体喷在硝酸纤维素膜上, 在37 ℃烘箱中干燥2 h, 备用。

1.9 样品吸收垫的制备

将样品吸收垫置于含0.5%牛血清白蛋白 (体积分数) 、pH值为7.2的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡5～10 min, 37 ℃烘干2 h, 备用。

1.10 试纸条的组装

将样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次按顺序粘贴在底板上;样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连, 反应膜的末端与吸水垫的始端相连, 样品吸收垫的始端与底板的始端对齐, 吸水垫的末端与底板的末端对齐;在组装好的试纸上粘贴保护膜, 保护膜上印有MAX标记线的一端粘贴在样品吸收垫上。试纸条组装好后切成4 mm宽, 与冻干有万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂配合使用。

1.11 检测方法

用微量移液器吸取200 μL待检牛奶样品溶液于微孔中, 缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀, 室温 (20～25 ℃) 孵育5 min后, 将标记好的试纸条插入微孔中 (印有MAX线端朝下) , 使之充分浸入溶液中。再次室温 (20～25 ℃) 孵育5 min后, 液体会沿着试纸条垂直向上依次通过检测线 (T) 和质控线 (C) , 此时如果检测线和质控线上均出现红色条带, 说明样品呈阴性 (-) ;如果质控线上出现红色条带, 检测线上没出现红色条带, 说明样品呈阳性 (+) 。

1.12 评价试验

1) 样本检测限。

在空白牛奶样本中分别添加万古霉素标准品至质量浓度为0, 20, 50, 100 μg/L, 按照1.11所述方法用3批试纸条进行检测, 每个浓度重复5次, 根据试验结果确定样本检测限。

2) 特异性。

分别向空白牛奶样本中添加其他药物 (纳他霉素、三甲氧苄氨嘧啶、恩诺沙星、磺胺甲唑等) 至质量浓度为0, 10, 50, 100, 500, 1 000 μg/L。用试纸条进行检测, 不同药物每个浓度重复3次, 根据试验结果判定试纸条的特异性。

3) 准确性。

根据农医发[2005]17号文件, 胶体金免疫层析法是一种定性方法, 准确性以假阳性率和假阴性率表示。取空白牛奶样品和添加50 μg/L万古霉素的阳性牛奶样品各50份, 用试纸条进行检测, 计算假阳性率和假阴性率。

4) 重复性。

分别从3个批次中随机抽取试纸条, 对空白牛奶和添加50 μg/L万古霉素的阳性牛奶样品进行多次重复测定, 根据试验结果判定试纸条的重复性。

5) 稳定性。

将足量的试纸条保存于2～8 ℃环境中, 每隔1个月取出适量, 分别检测空白牛奶样品、添加50 μg/L万古霉素的阳性牛奶样品各10份, 重复测定2次, 根据试验结果判定试纸条的稳定性。

2 结果与分析

2.1 试纸条条件的确定

通过对抗体标记pH值、万古霉素半抗原-卵清蛋白耦联物浓度及羊抗、鼠抗抗体浓度等条件进行反复试验及调整, 最终确定最佳条件:抗体标记pH值为7.0、万古霉素半抗原-卵清蛋白耦联物的使用浓度为1 mg/mL (喷量为1.0 μL/cm) 、羊抗鼠抗抗体的使用浓度为200 μg/mL (喷量为1.0 μL/cm) 。

2.2 胶体金质量分析

用肉眼观察制备的胶体金, 颜色为酒红色, 均匀度较好, 无杂质, 透明度较高, 说明胶体金质量较好;对其进行电镜扫描, 结果显示, 所制备的胶体金粒径均匀, 随机测量100个颗粒, 胶体金粒径约为20 nm, 见193页彩图1。

2.3 样本检测限

在空白牛奶样本中分别添加不同质量浓度的万古霉素标准品, 按照1.11所述方法用试纸条进行检测, 观察结果, 确定检测限。以只出现C线时的最低标准品质量浓度作为试纸条的检测限, 结果见表1和193页彩图2。

注:+表示阳性, -表示阴性。

肉眼观察, 万古霉素质量浓度为0时, 检测线出现很深的红色条带, 随着质量浓度的增加, 检测线条带逐渐减弱, 当增加至50 μg/L时检测线完全消失。由此判断, 该试纸条对牛奶样本中万古霉素的检测限为50 μg/L。

2.4 特异性

对选取的其他4种药物进行检测, 结果表明, 该试纸条特异性强, 在0～1 000 μg/L范围内与其他药物无交叉反应, 结果见表2。

2.5 准确性

50份空白牛奶样品中有1份为阳性, 其余均为阴性, 试纸条假阳性率低于5%; 添加50 μg/L 万古霉素的50份阳性牛奶样品的检测结果均为阳性, 试纸条假阴性率为0。说明试纸条准确性较好, 适用于牛奶样本中万古霉素的检测。

注:+表示阳性, -表示阴性。

2.6 重复性

多次重复测定结果一致, 表明试纸条批内、批间测定差异小, 重复性良好。

2.7 稳定性

试纸条从生产之日起至第12个月, 空白牛奶样品的检测结果均为C线和T线显色, 为阴性;阳性牛奶样品的检测结果均为C线显色, T线不显色, 为阳性;随后试纸条检测出现了假阳性和失效现象。由此可见, 试纸条稳定性较好, 在2～8 ℃至少可以保存12个月。

3 结论与小结

试验应用胶体金免疫层析技术, 成功研制出了万古霉素快速检测试纸条, 适用于牛奶样本的检测, 检测限为50 μg/L。方法操作简单, 牛奶样品无需前处理, 可直接用于检测, 整个过程10 min内就能判定结果, 而且具有稳定性好、灵敏度高、结果准确、易于判定、经济实用等优点, 适合于大批量样品的现场快速检测。

试验所建立的胶体金免疫层析方法, 是将胶体金标记的单克隆抗体直接冻干在微孔试剂中, 这样在检测过程中, 能够使金标抗体与待检样品液充分接触, 充分反应, 从而减少误差, 增加整个体系的反应灵敏度, 易于对样品中的药物残留情况进行分析。但由于胶体金免疫层析法主要通过目测颜色来判断结果, 比较主观, 可能出现假阳性;因此对阳性样本还需用仪器方法进行确证。

1～4.万古霉素的质量浓度依次为0, 20, 50, 100μg/L。

参考文献

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免疫测定法 篇8

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本与试剂

猪肉:市售;磺胺“十五合一”ELISA检测试剂盒:北京勤邦生物技术有限公司生产,其中包括包被有偶联抗原的96孔酶标板,浓度分别为0、1、3、9、27、81μg/L的磺胺嘧啶标准液,酶标二抗,抗体工作液,底物液A液和B液,终止液,20×浓缩洗涤液,2×浓缩复溶液;磺胺类药物标准品:纯度≥99%,美国Sigma公司生产;乙腈、正己烷、氢氧化钠:分析纯,北京化学试剂公司生产。

1.1.2 仪器与设备

8010S匀浆机,2000SBL电子天平,KS-Ⅱ振荡器,Anke GL-20G-Ⅱ高速离心机,DSY-Ⅲ氮吹仪,QL-901漩涡混合器,微量移液器(单道20~200μL、100~1000μL,多道50~300μL):MK3酶标仪,Acquity液相色谱串联质谱仪(配有电喷雾离子源)。

1.2 方法

1.2.1 样品前处理

称取2.0 g±0.05 g匀浆后的样本至50 m L聚苯乙烯离心管中,加入8 m L乙腈-Na OH(0.1mol/L)溶液,立即用振荡器振荡5min,以4000r/min室温(20~25℃)下离心5 min后,取2 m L上清液至10 m L干净玻璃试管中,于50~60℃水浴氮气流下吹干;加入1 m L正己烷,用漩涡混合器涡动30 s溶解干燥残留物,再加入0.5m L复溶液工作液,涡动30s后转入2 m L离心管中,4 000 r/min室温(20~25℃)下离心5 min;除去上层正己烷相,取下层水相50μL用于分析。

1.2.2检测步骤

取出所需数量的微孔板,记录标准品和样品的位置;加入标准品、待测样品溶液50μL到对应的微孔中,然后加入抗体工作液50μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30 min;倒出孔内液体,用洗涤工作液(250μL/孔)充分洗涤4~5次,每次间隔10 s,用吸水纸拍干;再加入酶标二抗100μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30 min,重复洗板步骤;加入底物液A液和B液各50μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15 min;加入终止液50μL/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450 nm处测定每孔的吸光度。

1.2.3 结果计算

式中,A为标准品或样品溶液的吸光度;A0为空白液(浓度为0μg/L标准溶液)的吸光度。

以标准品百分吸光率为纵坐标,磺胺类药物标准品浓度的对数为横坐标,绘制标准曲线。将样品的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样品所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样品中磺胺类药物的实际浓度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

按照1.2.2步骤,分别测定0、1、3、9、27、81μg/L磺胺甲恶唑标准液的吸光度,建立标准曲线如图1所示。其中IC50值为4.6μg/L,标准曲线R2=0.998 7。

2.2 检测限

对20份空白猪肉样本进行检测,从标准曲线上查出对应于各百分吸光率的浓度,以20份样本磺胺类药物浓度的平均值(x軃)和标准差(s)来表示检测限(MDL),即MDL=x軃+3 s,结果获得该方法对猪肉样本的检测限为1.5μg/kg。

2.3 准确度和精密度

ELISA测定的准确度用回收率表示,精密度用变异系数表示。以市售空白猪肉样本为试验材料,向其中分别添加15种磺胺类药物标准品,添加浓度为100、200μg/kg,计算回收率及精密度。结果表明所添加磺胺类药物的回收率范围在76.1%~101.7%,变异系数为4.6%~11.9%,数据结果显示试剂盒重复性较好。

2.4 特异性试剂盒特异性用交叉反应率表示:

式中,X为引起50%抑制的磺胺甲恶唑的浓度;Y为引起50%抑制的其他磺胺类药物的浓度。

由表1可知,该试剂盒特异性良好,可用于检测猪肉样本中磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺甲噻二唑、磺胺喹恶啉、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺苯酰、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺(二甲基)异恶唑和酞酰磺噻唑15种磺胺类药物的多残留。

2.5 与LC-MS/MS作比对试验

随机抽取50份猪肉样本,分别用仪器方法与试剂盒方法检测,仪器方法参考“GB/T 21316-2007动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定:液相色谱-串联质谱法”(该标准方法对动物组织中磺胺类药物的检测定量限为50μg/kg)。结果筛选出4份阳性样本(浓度大于50μg/kg),比对结果见表2。

由表2可知,ELISA法和LC-MS/MS法测定的结果基本一致,符合度基本达到100%,适用于猪肉样本中磺胺类药物多残留的检测。

3 结论

本研究采用酶联免疫法对猪肉中的磺胺类药物残留进行了检测,灵敏度为1μg/L,对猪肉样本的最低检测限为1.5μg/kg;以100、200μg/kg磺胺类药物添加的猪肉样本,其平均回收率为76.1%~101.7%,变异系数为4.6%~11.9%;与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果虽一致,但耗时短(75 min)、样本前处理简单、仪器设备投资少、成本低,适合对大量猪肉样本中磺胺类药物多残留的快速检测,有利于我国畜禽养殖户、食品企业、政府监管部门等开展磺胺检测工作。但目前酶联免疫法筛选的检测限不统一,结果判定较困难,还可能存在假阳性问题,因此对于阳性样本,需要用LC-MS/MS、GC-MS等仪器方法作进一步确证。■

参考文献

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免疫测定法 篇9

迄今为止,关于黑熊妊娠诊断研究的报道较少,仅见到应用超声波检测以及人用妊娠诊断盒对母熊早期妊娠进行诊断试验,而放射免疫测定法对黑熊进行妊娠诊断的研究未见报道。为此,本试验采用放射免疫测定法对吉林省某熊场20 只圈养雌性黑熊血清进行检测,旨在探讨放射免疫测定法对黑熊早期妊娠诊断的可行性。

1 材料

5 ~ 13 岁繁殖机能正常、体况良好的圈养雌性黑熊20 只,吉林省某熊场提供; 孕酮放免试剂盒,购自北京市北方生物技术研究所。

2 方法

2. 1 血液样本的采集

圈养雌性黑熊禁食24 h后,每100 kg体重肌肉注射氯胺酮0. 2 g和鹿眠灵2 m L配合麻醉,仰卧保定,从后肢外侧皮下静脉采血5 m L,37 ℃保存24 h后,离心分离血清,保存于-20 ℃冰箱内待检。

2. 2 血清孕酮含量的测定方法

利用兔抗P4 抗血清作为抗体,125I - P4 作为标准抗原,同时利用驴抗兔免疫分离剂进行分离,按照说明书进行加样。测量结果利用log - logit绘图法进行标准曲线的绘制,通过标准曲线计算出孕酮浓度,此过程采用DFM -96 型多管放射免疫r计数器自带的计算机程序来完成。

2. 3 产仔情况观察

采样3 ~5 个月后,根据黑熊产仔情况将血清孕酮含量测定结果分为妊娠组和非妊娠组。

2. 4 数据的统计分析

试验数据用SPSS14. 0 软件分析,当P <0. 05 为差异显著,P <0. 01 为差异极显著。

3 结果( 见表1) 与分析

ng·m L-1

注: 同列数据肩注大写字母不同表示差异极显著( P <0. 01) 。

在采用放射免疫测定法对20 只圈养雌性黑熊血清孕酮含量进行测定的基础上,结合雌性黑熊产仔情况,发现妊娠雌性黑熊的血清孕酮含量依次为11. 60 ng / m L、4. 38 ng / m L、8. 22 ng / m L、6. 69 ng / m L、8. 94 ng / m L、7. 80 ng / m L、14. 45 ng / m L、34. 23 ng / m L和12. 64 ng/m L; 非妊娠雌性黑熊的血清孕酮含量依次为2. 23 ng/m L、1. 71 ng/m L、1. 61 ng/m L、1. 38 ng/m L、1. 22 ng / m L、1. 31 ng / m L、0. 92 ng / m L、1. 75 ng / m L、1. 67 ng / m L、1. 12 ng / m L和0. 90 ng / m L。如表1 所示: 妊娠雌性黑熊血清孕酮含量平均值为( 12. 11 ±2. 95) ng / m L,非妊娠雌性黑熊血清孕酮含量平均值为( 1. 44 ±0. 40) ng/m L,妊娠黑熊血清孕酮含量高于非妊娠黑熊,差异极显著( P <0. 01) 。

3 讨论

黑熊为季节性多次发情动物,雌熊受孕后受精卵一直游离到5 个月左右开始附植,附植后生长发育时间为6 ~8 周,腹围在临产前1 个月左右才有所增大,且不明显,故很难从雌熊的外观、行为对其是否妊娠进行判断。因此,进行雌性黑熊早期妊娠诊断,在研究黑熊繁殖规律中有重要的实践意义。

孕酮是孕激素生理上最重要的代表,妊娠期间它能抑制丘脑下部中枢发出促进卵泡成熟和排卵的冲动,并有维持妊娠和保胎作用。母畜妊娠后,由于黄体存在,血浆、乳汁或尿液中孕酮含量明显高于未孕; 因此,检测血浆、乳汁或尿液中孕酮含量可作为家畜早期妊娠诊断的依据。据报道,雌性日本黑熊受孕后血清孕酮含量逐渐升高,12 月份达到最高值[( 10. 86 ±1. 44) ng / m L]。对妊娠期和非妊娠期圈养树袋熊血清孕酮含量进行测定,发现前者显著高于后者。大熊猫妊娠后期尿液孕酮含量可达647. 6 ng/mg CR,而未妊娠大熊猫尿液孕酮含量仅为191. 7 ng/mg CR。叶猴尿液孕酮含量和狼粪便孕酮含量在整个孕期也呈上升趋势。但修云芳等发现,发情的小熊猫不论妊娠与否,在妊娠期内血清孕酮含量均维持在高水平; 因此血清孕酮含量升高不能作为判断小熊猫妊娠的标准。

免疫测定法 篇10

氯霉素是一种有旋光活性的酰胺醇类抗生素,具有优良的抗菌性,可大量生产,价格低廉,因此被广泛应用于畜禽疾病的预防治疗,但它对人体存在极大的毒副作用[1]。近年来,在畜禽产品中发现氯霉素的残留量很大,国际组织和世界上较多的国家和地区注意到氯霉素在动物体内残留的问题,并禁止在动物饲料中添加此类药品[2]。对氯霉素的检测方法有很多,酶联免疫吸附试验(ELISA)法是其中的一种[3,4]。试验旨在探究ELISA法在饲料中测定氯霉素的可行性。

1 材料

1.1 仪器设备

分析天平、离心机、微量振荡器、移液枪、酶标分析仪、氮吹仪、氯霉素试剂盒等,均由江西科技师范大学提供。

1.2 试验样品

豆粕、饲料样品,市购。

1.3 工作液的准备与试剂的配制

标准品:将各标准品从泡沫垫中取出,回温,备用。

酶标工作液:准确移取12 m L酶标物稀释液到酶标物浓缩液瓶内,混匀,使之充分溶解,并置于22~25℃条件下回温充分,备用。

样品稀释工作液:用去离子水按1∶10(1+9)的比例将10×样品稀释液稀释,备用。

清洗液:用去离子水按1∶20(1+19)的比例将20×清洗液稀释,备用。

显色剂:回温,备用。

终止液:回温,备用。

2 方法

2.1 样品的前处理

取20支大号的离心管编号(1~20号),分别称取0.5 g待检测的16份饲料样品以及4份做阳性添加试验的豆粕,在4支做阳性添加的试管中取1支作为空白对照,在其余的3支中分别加入0.2,0.4,0.6 m L的最高浓度(2.025 ng/m L)的氯霉素标准品。在20支试管中用移液枪分别加入5 m L的乙酸乙酯(在通风橱中进行添加试剂的操作),用微量振荡器振荡混匀10 min,将离心机调至5 000 r/min,室温条件下离心10 min。离心结束后用移液枪分别取500μL的上清液置于新编号(1~20号)的1.5 m L离心管中,用50℃氮吹仪吹干。在20支离心管中分别加入500μL的正己烷混匀30 s,使之充分溶解,再在20支离心管中用移液枪分别加入500μL的稀释工作液,充分混匀(此步骤防止乳化)。将含有正己烷和稀释液的离心管于室温条件下用离心机5 000 r/min离心10 min,离心后有明显的分层,用移液枪深入下层水相层取50μL用于检测。

2.2 检测过程

样品前处理完成后,试剂盒中的试剂以及酶标板均已回温充分,取试验所用微孔(双孔平行试验)移去多余的微孔,在微孔板上做好标注。用单道移液枪,在编号为A12~F12的各标准孔中加入50μL的氯霉素标准品,浓度分别为0、0.025 ng/m L、0.075 ng/m L、0.225ng/m L、0.675ng/m L、2.025 ng/m L,C34-H34中加入50μL的饲料样品提取液,在G12-B34中加入50μL阳性添加试验的豆粕提取液。用新的吸头配合8道移液枪和试剂槽,在所有孔中快速加入100μL酶标物工作液,注意要正确操作确保将吸头中的液体排空。22~25℃孵育10 min,在孵育过程中适度摇晃酶标板,以减少双孔试验误差,提高试验的准确度。孵育时准备好吸水纸巾以及清洗液,准确孵育10 min后去除微孔中的液体,在所有微孔中加入清洗液,轻敲反应板,然后倒掉微孔中的液体,重复此操作3次,共洗板4次,洗板完成后立即用吸水纸将微孔板拍干,彻底除去微孔中残留液体并对着光用洗耳球将气泡去除,立即用新的吸头配合8道移液枪和试剂槽,于每个微孔中加100μL显色剂,轻晃反应板,使之混匀(显色剂有刺激性,在加入显色剂时戴手套操作)。22~25℃显色10 min,显色完成,于每个微孔中加100μL终止液,微孔中的颜色由蓝色变成黄色,将酶标仪调至450 nm检测吸光度,结果要在10 min内读取才有效。

3 结果与分析

3.1 标准曲线

测得6个标准品的吸光度值,结果见表1。使用赛群分析软件绘制ELISA标准曲线,结果见图1。通过计算得出,标准曲线相关系数(R)为0.995,高于规定的0.98,同时标准品的离散系数(CV值)除了阴性标准外,均低于3.6%。说明本次试验标准曲线完全符合规范,试剂盒的试验操作正确。

3.2 样品中氯霉素含量

根据标准曲线计算样品中的氯霉素的含量,结果见表2。

参照农业部所指定的方法GB/T 8381.9—2005《饲料中氯霉素的测定》中规定的最低检测限为0.005 mg/kg,即测定结果小于5 ng/g时判定为阴性,检测结果均按未检出计。由表2可知,经计算,6个样品中氯霉素的含量均低于氯霉素的最低检测限,说明6个样品中氯霉素指标均为阴性。试验中共检测了16个饲料样品(其余10个样品的结果未列出),16个样品中的氯霉素均属阴性。说明所检测的饲料产品中没有添加氯霉素,饲料质量安全可靠。

3.3 回收率试验

结果见表3。

由表3可知,饲料在前处理过程中被稀释10倍,表中数值为提取液的测定浓度。通过提取液的测定浓度和加标的真实浓度进行计算,得到样品的回收率。空白试验的豆粕提取液中检测出氯霉素的含量为0.012 ng/m L,低于检测限表明未检出,其余加标样品的回收率均在90%以上,符合试剂盒中所规定的75%~95%,表明回收率达到要求,此次检测数据准确、可靠。

4 讨论

目前,氯霉素的检测方法主要有三大类:1)微生物测定方法。主要有棉签法、杯碟法、纸片法、TTC法、戴尔沃检测法、蓝黄检测法(BY法)、发光细菌法等[5]。2)免疫分析法。主要有ELISA法、放射免疫分析(RIA)法、常用来检测小分子农兽药痕量残留的免疫荧光分析(FIA)法、胶体金免疫层析(GICA)法等[6]。3)仪器分析法。主要有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱-质谱联用(GC-MS)法、液相色谱-质谱联用(LC/MS)法等[7]。每种方法都具有其自身的特性。微生物测定法的优点是:简单、快速、费用少;缺点是:易受干扰、检测限高且灵敏度不高。免疫分析法的优点是:操作简便、特异性强,可以成批检测,仪器化程度和成本低灵敏度高;缺点是:影响因素多,易出现假阳性。仪器分析法的优点是:结果准确,灵敏度高、特异性强,可操作重复性高;缺点是:仪器设备要求高,分析速度慢,样品处理过程复杂,成本较高。

ELISA法是一种较为成熟的检测方法,试验结果表明,采用ELISA法测定氯霉素回收率在95%左右,标准曲线相关系数为0.995,证明ELISA法测定饲料中氯霉素准确、可靠。但在具体操作中,需要注意相关事项,减少试验误差。1)在使用试剂盒前要注意查看保质期为12个月,应在有效期内使用,试剂盒未使用时应在2~8℃条件下储存,不得在室温以及0℃的冷冻室中保存;2)使用前在22~25℃条件下回温1 h以上,回温不充分会影响试验的准确性;3)试验操作过程中不要中断任何程序和改变试验操作步骤;4)孵育时间以及温度是试验操作的关键,要准确把握10 min的孵育时间和22~25℃的温度,添加试剂要迅速,尽量保证前后孔的孵育时间一致;5)试验中用到乙酸乙酯、正己烷以及显色剂和终止液时要在通风橱中进行并且要戴橡胶手套进行操作。

5 小结

氯霉素为一种较为常见的广谱抗生素,危害较为广泛,对氯霉素的检测任务较为重要,试验采用ELISA法不受荧光物质以及色素等干扰,并且一次可检测多个样品,且操作简便,表明采用ELISA法检测饲料中氯霉素含量的前景广阔。

参考文献

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