间接酶联免疫吸附法

间接酶联免疫吸附法（精选九篇）

间接酶联免疫吸附法 篇1

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺、牛血清白蛋白 (BSA) , 购自美国Sigma公司;乙草胺多克隆抗体、包被原 (Acetoclor-OVA) , 购自北京中检维康技术有限公司;盐酸、明胶、磷酸二氢钠、氯化钠, 购自北京化学试剂公司;羊抗鼠IgG-辣根过氧化物酶 (HRP) 标记物, 购自上海康城生物公司。

酶标仪 (MK3型) , 美国Thermo公司制造;高速离心机 (3K-15) , 德国Sigma公司制造。以上仪器均由北京中检维康技术有限公司实验室提供。

1.2 ELISA溶液体系

包被液:0.05 mol/L碳酸盐缓冲液, pH值为 9.6;洗涤液:为含0.05% Tween-20的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液 (PBS) , pH值为7.4;封闭液:0.6%的明胶溶液;抗体及样品稀释液:含0.1%BSA的0.01 mol/L PBS, pH值为7.4;终止液:2 mol/L硫酸。

1.3 多克隆抗体的鉴定

1.3.1 抗血清效价的测定

按照常规间接ELISA法进行抗血清的效价的测定, 用包被液将抗原 (SAL-OVA) 1 000倍稀释后加入酶标板, 100 μL/孔, 4 ℃包被过夜, 弃去包被液, 加洗液200 μL/孔, 于振荡器上振荡3 min;洗涤3次, 加入6%明胶封闭液, 200 μL /孔, 37 ℃封闭2 h;洗涤3次, 加入倍比稀释的待测血清, 100 μL/孔, 最后一列加阴性血清对照组, 37 ℃反应30 min;洗涤3次, 加入HRP-羊抗兔IgG (1∶4 000稀释) , 100 μL /孔, 37 ℃反应30 min;洗涤3次, 加入TMB底物液, 100 μL/孔, 室温避光放置10 min;加入2 mol/L的硫酸溶液终止反应, 50 μL/孔。用酶标仪测定OD450 nm值, 并按下列公式计算P/N值:P/N值=阳性对照孔OD450 nm值/阴性对照孔OD450 nm值。当P/N值>2时, 即阳性对照OD450 nm值大于2倍阴性对照孔OD450 nm值时, 以阳性血清最高稀释倍数作为血清的ELISA效价。

1.3.2 特异性的鉴定

按照间接ELISA法和方阵滴定法确定抗原抗体的最适工作浓度。在最佳工作条件下, 采用间接竞争ELISA法检测乙草胺抗血清与甲草胺、丙草胺、丁草胺、异丙甲草胺的交叉反应率。测定时, 以系列稀释的竞争物溶液作为被检抗原, 空白对照吸光值为B0, 不同质量浓度药品的吸光值为B, 以B/B0为纵坐标, 质量浓度的对数为横坐标, 绘制标准品抑制曲线, 得到每种竞争物的抑制剂浓度 (IC50值) , 计算交叉反应率。公式:R0 =C1/C2×100%, 式中:RO为交叉反应率, C1为乙草胺的50%抑制质量浓度, C2为其他药物的50%抑制质量浓度。

1.4 间接竞争ELISA法的建立

1.4.1 最佳包被原、抗体工作浓度的确定 采用点阵滴定法, 分别选择OD450 nm值在1.5左右的包被原浓度和抗体稀释度作为最佳的工作浓度。最佳包被原浓度为0.2 μg/mL时, 抗血清最佳工作浓度为1∶8 000。

1.4.2 酶标二抗稀释度的选择 确定最佳包被原工作浓度和抗血清稀释度后, 分别选择1︰2 000, 1︰4 000, 1︰6 000, 1︰8 000稀释度做对比试验, 依据其OD450 nm值选择最佳的酶标二抗稀释度。2次平行样的OD450 nm均值分别为2.504, 1.790, 1.559, 0.784, 因此, 选择二抗的稀释度为1︰6 000。

1.4.3 抗原最佳包被时间、明胶封闭时间、抗原与抗体最适竞争反应时间和温度的选择 以最佳包被原工作浓度包被, 分别在4 ℃过夜和37 ℃温育1, 2, 3 h, 以最佳抗血清稀释度进行ELISA测定。明胶封闭时间的选择:每孔加入250 μL封闭液, 37 ℃分别封闭1, 2, 3 h, 比较结果的差异。在37 ℃下, 分别进行20, 30, 40, 60 min抗原与抗体的竞争反应, 测定OD450 nm值。结果表明:最佳包被条件为4 ℃过夜, 明胶封闭条件为37 ℃ 2 h, 抗原与抗体最适竞争 (37 ℃温育) 反应时间为30 min。

1.4.4 ELISA检测程序的建立 按照常规间接ELISA操作程序, 抗原按一定浓度比例用包被缓冲液稀释, 100 μL/孔, 4 ℃包被过夜;弃去液体, 洗涤4次, 每孔加入250 μL封闭液, 37 ℃封闭2 h;洗涤4次, 将50 μL标准品溶液或样品溶液与等体积的抗乙草胺多克隆抗体加入酶标板孔中, 37 ℃反应30 min;洗涤4次, 加入HRP-羊抗兔IgG, 100 μL/孔, 37 ℃反应30 min;洗涤4次, 每孔加入3, 3′, 5, 5′-四甲基联苯胺 (TMB) 溶液100 μL, 37 ℃显色10 min;每孔加入50 μL 2 mol/L的硫酸溶液终止反应。在酶标仪上测定OD450 nm值。不加乙草胺OD值为B0值, 药物浓度抑制的OD值为B值, 以B/B0值为纵坐标, 各药物浓度的对数值为横坐标, 采用RIDASCREEN软件分析, 绘制标准曲线, 计算IC50值。

1.4.5 标准曲线的建立 采用间接竞争ELISA方法建立标准曲线, 分别选择标准品浓度0, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0 ng/mL, 以浓度为0抑制时的OD值为B0值, 相应乙草胺浓度抑制时的OD值为B值, 百分吸光度值 (B/B0) 为纵坐标, 以标准品的浓度为横坐标, 绘制标准曲线。

1.5 样品的检测试验

1.5.1 样品的前处理

取5.0 g粉碎的花生样品, 置于50 mL离心管中, 加20 mL甲醇, 加盖振荡30 min, 3 500 r/min离心5 min。取1.0 mL上清液用9 mL纯化水稀释, 混匀后用ELISA法检测。

1.5.2 结果的判定

结果的判定方法: 计算百分吸光度值, 以乙草胺标准品浓度值 (μg/kg) 为横坐标, 百分吸光度值为纵坐标, 绘制标准曲线。每个样品的相应浓度可以从标准曲线上读出。也可用回归方程计算出样本溶液浓度。样品的实际浓度为读数结果乘以稀释倍数。计算公式:IO = I1/ I2×100%, 式中:IO为百分吸光度值, I1为每个浓度标准溶液以及样本吸光度值的平均值, I2为第1个标准溶液 (浓度为0) 的吸光度值。

1.6 生物基质的影响

将花生样品用甲醇溶液提取后, 离心分离, 取上清液, 将上清液用纯化水稀释成所需要的各种倍数 (1︰2, 1︰5, 1︰10) 。将乙草胺标准溶液加入稀释液和各种稀释倍数的样品中, 使得乙草胺在ELISA检测中的终浓度为0, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0 ng/mL, 测定OD450 nm值, 建立竞争曲线, 确定花生基质的影响。将各稀释倍数花生样品中的IC50值和B0值与稀释液中的IC50值和B0值进行比较, 确定何种稀释倍数可用于回收率的检测。

1.7 回收率试验

根据试剂盒的检测范围确定添加浓度, 在花生样品中分别进行3个浓度 (10, 50.0, 100.0 μg/kg) 的添加回收试验, 每个添加水平做5个重复的平行样。添加回收率 (%) = (添加后测定值-原样品测定值) /已知添加量×100%。

1.8 试剂盒的稳定性试验

对试剂盒的稳定性采用37 ℃加速破坏试验进行研究, 将试剂盒分别置于4 ℃和37 ℃条件下, 每隔24 h进行ELISA测定, 测定阴性对照 (不加毒素B0) 和阳性 (即50%的抑制毒素浓度B) 的吸光度 (A) 值, 计算两者的比值 (B/B0) 。当B0<0.6×吸光度值, 或B/B0<0.7×吸光度值时, 即可判定ELISA试剂盒已失效。在37 ℃放置24 h相当于在4 ℃放置45 d。从试剂盒的生产日期到失效的时间可以确定ELISA试剂盒的稳定周期, 即保质期。

2 结果与分析

2.1 血清抗体效价测定结果

血清抗体效价采用间接非竞争ELISA测定效价, 结果见表1。

表1结果表明, 血清抗体效价为1︰20 000。

2.2 特异性的鉴定结果 (见表2)

试验制备的多克隆抗体对甲草胺、丙草胺、丁草胺、异丙甲草胺没有交叉反应, 只对乙草胺有很好的特异性反应;因此, 该抗体适合该试剂盒的应用。

2.3 间接竞争ELISA方法的建立结果

经点阵法确立, 包被抗原浓度为0.2 μg/mL, 抗乙草胺多抗稀释比为1︰8 000, 酶标二抗浓度为6 000倍稀释, 抗原抗体反应时间为30 min, 酶标反应时间为20 min, TMB底物显色时间为10 min, 乙草胺标准品浓度设定范围为0～10.0 ng/mL, 50%的抑制浓度为4.5 ng/mL, 最低检出浓度为0.1 ng/mL, 标准曲线见图1。

2.4 花生样品中基质效应的影响 (见图2)

由图2可以看出, 随着稀释倍数的增大, 花生的基质效应逐渐变小, 2, 5倍稀释基质标准曲线的OD值明显低于样品稀释液标准曲线, 而10倍稀释基质标准曲线则与样品稀释液标准曲线几乎重合。因此, 将花生样品稀释10倍进行检测可以基本消除基质效应的影响。

2.5 回收率 (见表3)

由表3可以看出, 将花生样品分别进行了3个浓度 (10, 50, 100 μg/kg) 的添加回收试验, 每个添加水平做5个重复的平行样, 回收率在79.0%～112.3%之间, 变异系数小于20%, 该方法测定的花生样品灵敏度为4.0 μg/kg。

2.6 试剂盒稳定性试验结果

经过37 ℃加速老化试验, 试剂盒可在37 ℃下存放100 h, 超过40 h其吸光度值开始下降, 100 h后吸光度值仍大于0.6, 表明该试剂盒在4 ℃条件下可以稳定保存6个月以上。

3 讨论

试验建立了间接竞争ELISA法检测花生中的乙草胺, 结果表明间接竞争ELISA法检测灵敏度高, 而且无污染, 检测成本低, 对大量样品进行初筛非常有优势;但容易出现假阳性或假阴性的现象, 尤其是对成分复杂的样品。试验也对生物基质的影响进行了研究, 分别对花生样品作2, 5, 10倍稀释, 结果随着稀释倍数的增大基质的干扰逐渐减小, 当稀释10倍时基质干扰基本消失。

试验制备的ELISA试剂盒对甲草胺、丙草胺、丁草胺、异丙甲草胺没有交叉反应, 只对乙草胺有很好的特异性反应;因此本试剂盒能够特异性检测乙草胺。

对试剂盒的稳定性采用37 ℃加速破坏试验进行研究, 将试剂盒分别放置于4 ℃和37 ℃条件下, 每隔24 h进行ELISA测定, 结果表明, 该试剂盒在4 ℃条件下可以稳定在6个月以上。

4 结论

间接酶联免疫吸附法 篇2

重金属残留的酶联免疫吸附检测技术研究进展

重金属残留是当前重点关注的难降解持久性污染物,建立重金属的现场速测方法是重金属残留含量分析中急需解决的研究内容.酶联免疫吸附法是将免疫学技术应用于重金属残留含量速测的新技术,其对于提升重金属残留含量检测的.技术水平具有重要意义.本文对检测重金属残留的酶联免疫吸附法进行了文献整理,对近期重金属残留酶联免疫吸附检测技术的研究进展进行了一定的阐述,以期为相关研究工作提供一定参考.

作 者：车晓青 郭明 Che Xiao-qing Guo Ming  作者单位：浙江林学院理学院化学系,浙江临安,311300 刊 名：福建分析测试 英文刊名：FUJIAN ANALYSIS & TESTING 年，卷(期)： 18(4) 分类号：Q55 关键词：重金属   酶联免疫吸附法   半抗原   抗体  

间接酶联免疫吸附法 篇3

[关键词] 酶联免疫吸附实验；HIV抗体；影响因素

[中图分类号] R446.61 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）02-0076-02

The impact factors of enzyme-linked immunosorbent assay in detection of HIV antibodies

BI Xiuxin

International Travel Health Care Center of Dandong in Liaoning Province, Dandong 118000, China

[Abstract] By analysis of all relevant factors in pre-test, during test and post-test of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in detection of HIV antibodies, to explore the various impact factors on the results, in order to find a solution and strengthen the quality control management, to ensure accuracy and precision of the test results.

[Key words] ELISA; HIV antibody; Impact factors

酶联免疫吸附实验因其操作简单、灵敏度高、特异性好、价格低廉等特点成为HIV抗体初筛实验的常用方法。优质的试剂、良好的仪器、正确的操作和高素质的技术人员是保证检测结果准确可靠的必要条件。由于ELISA法检测结果受很多因素影响，其中任何一项因素都可造成HIV抗体结果假阴性和假阳性结果的发生。因此必须加强HIV抗体初筛实验室的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。笔者从事多年的HIV抗体检测工作，现将影响因素分析如下。

1 检测前

1.1 试剂

1.1.1 试剂的选择 优质的HIV抗体试剂是结果质量的基础。试剂要从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性和经济性做出全面的评价并选择好的试剂，根据实验室要求选择灵敏度高（精密度高，CV值＜15%）、特异性好的试剂。试剂的选择很关键，通过厂家了解试剂包被物的组成，如原料来源（基因组成或合成多肽）、片段组成（按比例组成或化合组成）、片段长短等来判断抗原、抗体包被的完整性和特异性。根据试剂批号检定报告了解其质量水平和试剂的优劣，还可以室间质评报告中对试剂的评价结果来客观评价、选择适合实验室的试剂。要选择和订购长效批号的试剂，避免试剂批号改变而重新建立质量控制体系[1]。

1.1.2 试剂的储存 试剂应储存在2～8℃冰箱中，力求温度恒定，并防止阳光照射。试剂盒中有3个主要的试剂，即免疫吸附剂、酶结合物和底物。酶结合物具有生物活性，保存不当，极易失活；底物容易被氧化，产生颜色。因此，必须加强试剂的储存管理，防止试剂失活和氧化。

1.2 标本

血清是最常用的标本。酶联免疫吸附实验中标本的质量也是影响结果的关键因素之一，标本的干扰物质容易引起假阳性或假阴性的结果。干扰分为外源性和内源性。外源性干扰：细菌污染、溶血、凝固不全、反复冻融和标本相互污染等；标本放置4℃冰箱冷藏一般不超过5 d，如果保存过久，其中的蛋白质可能发生聚合，可使本底加深；冻结的标本要融化后充分混匀，为防止蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分轻轻混匀，避免产生气泡；浑浊或有沉淀的样本应先离心澄清后再检测；防止反复冻融，引起效价降低。内源性干扰：一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等，避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂。①标本溶血时释放大量具有过氧化物酶活性的物质，增加了非特异显色，干扰测定结果[2]；②标本被细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；③血清标本应充分离心，否则可因凝固不全、纤维蛋白原非特异吸附于微孔内而造成假阳性结果。

1.3 仪器

酶联免疫吸附实验中会用到移液器、水浴箱或恒温箱、洗板机、酶标仪等。移液器是一种比较精密的工具，要求比较高，必须定期对加样器进行维护和校准[3]。每次加样需更换吸嘴，以免交叉污染。水浴箱温度要准确恒定；洗板机要定期维护，检测残液量。

2 检测中

2.1 加样

在HIV抗体检测中加样3次，即加标本、加酶结合物、加底物。加样时要将所加物加入板孔底部，避免加在孔壁外部，产生气泡，吸取样品速度要均匀，保证加样量准确；加完样品要在微量振荡器上震荡1min以保证混合均匀。

2.2 温育的时间和温度

要力求保证温育的时间和温度，酶联免疫吸附实验属于固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相的表面发生，样品中的抗体并不是都有均等的机会与固相的抗原结合，而是最贴近孔壁的一层溶液中的直接与抗原接触，是一个逐渐平衡的过程，因此需要经过扩散才能达到反应的终点，要保证足够的温育时间，才能使产物生成达到顶峰，有的实验室为加快速度，提高反应温度，但盲目提高温度会影响酶的活性。

2.3 温育的方式

常采用温箱法、微波辐射法和水浴法。其中水浴法能较好地解决因受热不均衡所致周围孔与中央孔结果的吸光度差异（即边缘效应），可将ELISA板置于水浴箱中。无论温育还是水浴，反应板不可叠放，以保证各板的温度尽快达到平衡，反应板要贴近水面，温育时要防止挥发或水珠溅入影响结果。

2.4 洗涤

洗涤虽然不是一个反应步骤，但也影响实验的成败。洗涤的目的是分离游离和结合的酶标记物，通过洗涤来实现清除残留在板孔中的没能与固相抗原结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质，洗液的配制要按照要求，太浓会解离包被在固相的抗原，过低削弱洗涤效果。可以说洗涤是HIV抗体ELISA法检测的最主要的技术，操作者要严格按照要求洗涤，不能马虎，否则前功尽弃。洗涤包括仪器自动洗涤和手工洗涤。仪器洗涤要注意定期检测残余量，检测吸液针和注液针是否堵塞，及时更换洗液和废液，防止时间过长引起细菌污染和废液倒流；手工洗涤包括有浸泡式和流水冲洗式两种。手工洗板要注意孔间的交叉污染和洗涤间隔时间。

2.5 显色与比色

显色是ELISA法中最后一步温育反应，反应时间和温度仍是影响显色的因素。TMB受光照影响不大，但OPD底物受光照会自行变色，因此，显色反应应避光进行。显色的温度和时间要力求准确充分，并在规定的时间内比色，防止时间过长会褪色。比色时应尽量选用双波长进行比色，这样可以排除干扰，比色前要用吸水纸拭干板底附着的液体，防止孔内产生气泡，对测定结果产生干扰。

3 质量控制

3.1 开展室内质量控制（IQC）

室内质量控制程序，每次或每天之间不可能没有误差，决定允许的误差范围以临床上不造成误诊和漏诊为准，选择一个弱阳性的室内质量控制品，其S/CO值应该为2～4之间。利用L-J质量控制图，认真分析每次的失控的原因，要解决失控，必须分析造成失控是随机的还是系统的很重要，随机误差表现离散度增大，而系统误差逐渐产生，如漂移或者倾向性，如果是系统误差，再对系统误差进行分析。实验室每月、每一季度要对室内质量控制结果进行分析总结，对当月的均值、变异系数等进行比对分析，及时发现问题，及时采取纠正措施来提高检测结果的可靠性。

3.2 外部质量控制

积极参加室间质评能力验证活动，通过室间质评和能力验证，利用实验室间比对来确定实验室检测或校准能力的活动，判断和监控实验室内部质量控制方法，有效消除偏差，对分析结果起到校准和复核作用。有效地实施能力验证，在实验室质量控制中起着非常重要的作用。利用实验室间的比对和能力验证来不断提升实验室的能力。

3.3 加强人员培训

人员是实验室最宝贵的资源，一个实验室水平的高低很大程度上取决于人员的素质，尤其是关键的技术岗位人员，因此，有针对性地加强人员培训，对艾滋病初筛实验室是非常重要的[4]。

[参考文献]

[1] 于振喜，李连洁. 用ELISA法检测HIV抗体时如何避免“花板”[J]. 中国医药导报，2006，3（23）：56.

[2] 陈云钰. ELISA法检测HIV抗体需注意的影响因素[J]. 中国卫生检验杂志，2011，21（6）：1564-1565.

[3] 全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）[S]. 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，2009：1-5.

[4] 张斌. 实验室管理、认可与运作[M]. 北京：中国标准出版社，2005：162-164.

（收稿日期：2011-11-18）

间接酶联免疫吸附法 篇4

氯霉素是一种有旋光活性的酰胺醇类抗生素,具有优良的抗菌性,可大量生产,价格低廉,因此被广泛应用于畜禽疾病的预防治疗,但它对人体存在极大的毒副作用[1]。近年来,在畜禽产品中发现氯霉素的残留量很大,国际组织和世界上较多的国家和地区注意到氯霉素在动物体内残留的问题,并禁止在动物饲料中添加此类药品[2]。对氯霉素的检测方法有很多,酶联免疫吸附试验(ELISA)法是其中的一种[3,4]。试验旨在探究ELISA法在饲料中测定氯霉素的可行性。

1 材料

1.1 仪器设备

分析天平、离心机、微量振荡器、移液枪、酶标分析仪、氮吹仪、氯霉素试剂盒等,均由江西科技师范大学提供。

1.2 试验样品

豆粕、饲料样品,市购。

1.3 工作液的准备与试剂的配制

标准品:将各标准品从泡沫垫中取出,回温,备用。

酶标工作液:准确移取12 m L酶标物稀释液到酶标物浓缩液瓶内,混匀,使之充分溶解,并置于22~25℃条件下回温充分,备用。

样品稀释工作液:用去离子水按1∶10(1+9)的比例将10×样品稀释液稀释,备用。

清洗液:用去离子水按1∶20(1+19)的比例将20×清洗液稀释,备用。

显色剂:回温,备用。

终止液:回温,备用。

2 方法

2.1 样品的前处理

取20支大号的离心管编号(1~20号),分别称取0.5 g待检测的16份饲料样品以及4份做阳性添加试验的豆粕,在4支做阳性添加的试管中取1支作为空白对照,在其余的3支中分别加入0.2,0.4,0.6 m L的最高浓度(2.025 ng/m L)的氯霉素标准品。在20支试管中用移液枪分别加入5 m L的乙酸乙酯(在通风橱中进行添加试剂的操作),用微量振荡器振荡混匀10 min,将离心机调至5 000 r/min,室温条件下离心10 min。离心结束后用移液枪分别取500μL的上清液置于新编号(1~20号)的1.5 m L离心管中,用50℃氮吹仪吹干。在20支离心管中分别加入500μL的正己烷混匀30 s,使之充分溶解,再在20支离心管中用移液枪分别加入500μL的稀释工作液,充分混匀(此步骤防止乳化)。将含有正己烷和稀释液的离心管于室温条件下用离心机5 000 r/min离心10 min,离心后有明显的分层,用移液枪深入下层水相层取50μL用于检测。

2.2 检测过程

样品前处理完成后,试剂盒中的试剂以及酶标板均已回温充分,取试验所用微孔(双孔平行试验)移去多余的微孔,在微孔板上做好标注。用单道移液枪,在编号为A12~F12的各标准孔中加入50μL的氯霉素标准品,浓度分别为0、0.025 ng/m L、0.075 ng/m L、0.225ng/m L、0.675ng/m L、2.025 ng/m L,C34-H34中加入50μL的饲料样品提取液,在G12-B34中加入50μL阳性添加试验的豆粕提取液。用新的吸头配合8道移液枪和试剂槽,在所有孔中快速加入100μL酶标物工作液,注意要正确操作确保将吸头中的液体排空。22~25℃孵育10 min,在孵育过程中适度摇晃酶标板,以减少双孔试验误差,提高试验的准确度。孵育时准备好吸水纸巾以及清洗液,准确孵育10 min后去除微孔中的液体,在所有微孔中加入清洗液,轻敲反应板,然后倒掉微孔中的液体,重复此操作3次,共洗板4次,洗板完成后立即用吸水纸将微孔板拍干,彻底除去微孔中残留液体并对着光用洗耳球将气泡去除,立即用新的吸头配合8道移液枪和试剂槽,于每个微孔中加100μL显色剂,轻晃反应板,使之混匀(显色剂有刺激性,在加入显色剂时戴手套操作)。22~25℃显色10 min,显色完成,于每个微孔中加100μL终止液,微孔中的颜色由蓝色变成黄色,将酶标仪调至450 nm检测吸光度,结果要在10 min内读取才有效。

3 结果与分析

3.1 标准曲线

测得6个标准品的吸光度值,结果见表1。使用赛群分析软件绘制ELISA标准曲线,结果见图1。通过计算得出,标准曲线相关系数(R)为0.995,高于规定的0.98,同时标准品的离散系数(CV值)除了阴性标准外,均低于3.6%。说明本次试验标准曲线完全符合规范,试剂盒的试验操作正确。

3.2 样品中氯霉素含量

根据标准曲线计算样品中的氯霉素的含量,结果见表2。

参照农业部所指定的方法GB/T 8381.9—2005《饲料中氯霉素的测定》中规定的最低检测限为0.005 mg/kg,即测定结果小于5 ng/g时判定为阴性,检测结果均按未检出计。由表2可知,经计算,6个样品中氯霉素的含量均低于氯霉素的最低检测限,说明6个样品中氯霉素指标均为阴性。试验中共检测了16个饲料样品(其余10个样品的结果未列出),16个样品中的氯霉素均属阴性。说明所检测的饲料产品中没有添加氯霉素,饲料质量安全可靠。

3.3 回收率试验

结果见表3。

由表3可知,饲料在前处理过程中被稀释10倍,表中数值为提取液的测定浓度。通过提取液的测定浓度和加标的真实浓度进行计算,得到样品的回收率。空白试验的豆粕提取液中检测出氯霉素的含量为0.012 ng/m L,低于检测限表明未检出,其余加标样品的回收率均在90%以上,符合试剂盒中所规定的75%~95%,表明回收率达到要求,此次检测数据准确、可靠。

4 讨论

目前,氯霉素的检测方法主要有三大类:1)微生物测定方法。主要有棉签法、杯碟法、纸片法、TTC法、戴尔沃检测法、蓝黄检测法(BY法)、发光细菌法等[5]。2)免疫分析法。主要有ELISA法、放射免疫分析(RIA)法、常用来检测小分子农兽药痕量残留的免疫荧光分析(FIA)法、胶体金免疫层析(GICA)法等[6]。3)仪器分析法。主要有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱-质谱联用(GC-MS)法、液相色谱-质谱联用(LC/MS)法等[7]。每种方法都具有其自身的特性。微生物测定法的优点是:简单、快速、费用少;缺点是:易受干扰、检测限高且灵敏度不高。免疫分析法的优点是:操作简便、特异性强,可以成批检测,仪器化程度和成本低灵敏度高;缺点是:影响因素多,易出现假阳性。仪器分析法的优点是:结果准确,灵敏度高、特异性强,可操作重复性高;缺点是:仪器设备要求高,分析速度慢,样品处理过程复杂,成本较高。

ELISA法是一种较为成熟的检测方法,试验结果表明,采用ELISA法测定氯霉素回收率在95%左右,标准曲线相关系数为0.995,证明ELISA法测定饲料中氯霉素准确、可靠。但在具体操作中,需要注意相关事项,减少试验误差。1)在使用试剂盒前要注意查看保质期为12个月,应在有效期内使用,试剂盒未使用时应在2~8℃条件下储存,不得在室温以及0℃的冷冻室中保存;2)使用前在22~25℃条件下回温1 h以上,回温不充分会影响试验的准确性;3)试验操作过程中不要中断任何程序和改变试验操作步骤;4)孵育时间以及温度是试验操作的关键,要准确把握10 min的孵育时间和22~25℃的温度,添加试剂要迅速,尽量保证前后孔的孵育时间一致;5)试验中用到乙酸乙酯、正己烷以及显色剂和终止液时要在通风橱中进行并且要戴橡胶手套进行操作。

5 小结

氯霉素为一种较为常见的广谱抗生素,危害较为广泛,对氯霉素的检测任务较为重要,试验采用ELISA法不受荧光物质以及色素等干扰,并且一次可检测多个样品,且操作简便,表明采用ELISA法检测饲料中氯霉素含量的前景广阔。

参考文献

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[3]于徊萍,卢利军,周晓,等.流动注射化学发光法测定鸡肉、鸡蛋和鸡饲料中氯霉素[J].饲料研究,2007(8):18-20.

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[6]谢恺舟.兽药残留分析方法[J].中国家禽,2001,23(17):5-7.

间接酶联免疫吸附法 篇5

1 材料与方法

1.1 仪器设备

酶标读数仪 (配备450nm滤光片) , 分析天平, 离心机, 微型振荡器, 涡漩振荡器, 微量移液器, 恒温箱37℃。

1.2 试剂与材料

以下所有试剂, 除特别注明外, 均为分析纯试剂;水为符合GB/T6682规定的一级水。

(1) 庆大霉素检测试剂盒 (2~8℃保存) , 由北京望尔生物技术有限公司生产。 (2) 洗涤工作液:用水将20×浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释 (1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水) 用于酶标板的洗涤, 洗涤工作液在4℃环境中保存。 (3) 复溶工作液:用去水将2×浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释 (1份2×浓缩复溶液+1份去离子水) , 用于提取样本的复溶, 复溶工作液在4℃环境中保存。

1.3 样品制备及检测

取鲜牛奶至聚苯乙烯离心管中3000g以上, 离心10min, 移取上清液, 加入780µl复溶工作液混匀, 取50µl用于试剂盒El ISA检测。用r-biopharm数据分析软件对数据进行分析, 得出试料中庆大霉素的含量。

2 结果与分析

2.1 灵敏度的确定

为测定试剂盒本身的检测限, 按照农业部规定的方法:测定20份牛奶样品, 取其平均值, 加上3倍标准差来确定试剂盒的最低检测限。

(ng/Kg)

2.2 方法的准确度

取空白牛奶1.0ml, 添加添加1mg/L标准工作液20µl, 作为20µg/L空白添加试料。按上述测定方法、步骤进行测定, 每个浓度测定3个批次, 每个批次做5份样品, 并计算结果。

按上述测定方法、步骤进行测定, 每个浓度点做3个批次, 每个批次5份样品, 此方法的回收率都在90%~110%之间, 变异系数均在20%以内, 检测限为4.0ng/Kg。

3 讨论

(1) 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温 (20~25℃) 会导致所有标准的OD值偏低。

(2) 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况, 则会出现标准曲线不成线性, 重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

(3) 每加一种试剂前需要将其摇匀。

(4) 反应终止液为2M硫酸, 避免接触皮肤。

(5) 不要使用过了有效日期的试剂盒, 也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂, 掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

(6) 储存条件:保存试剂盒于2~8℃, 不要冷冻, 将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感, 因此要避免直接暴露在光线下。

(7) 试剂变质的迹象:发色试剂有任何颜色表明发色剂变质, 应当弃之。0标准的吸光度 (450/630nm) 值小于0.5 (A450nm<0.5) 时, 表示试剂可能变质。

(8) 在加入底物液A液和底物液B液后, 一般显色时间为10~15min即可。若颜色较浅, 可延长反应时间到20min (或更长) , 但不得超过30min。反之, 则减短反应时间。

(9) 该试剂盒最佳反应温度为37℃, 温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

参考文献

[1]中国兽医药品监察所.兽药残留检测标准操作规程[S].北京:中国农业科学技术出版社, 2009, 24.

[2]徐立松, 徐秋琴.药物学[M].杭州:浙江科学技术出版社, 2004.

[3]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二部[S].北京:化学工业出版社, 2000, 394.

间接酶联免疫吸附法 篇6

1 材料与方法

1.1 疫苗与免疫程序

1.1.1 免疫疫苗

猪O型口蹄疫灭活疫苗由政府统一采购自新疆天康畜牧生物技术股份有限公司, 由区县兽医主管部门统一下发。

1.1.2 免疫程序

规模养猪场采取仔猪28~35d首免, 免疫剂量为肌注1mL/头, 首免30d后加强免疫1次, 免疫剂量为肌注2mL/头;种公猪和母猪每4个月接种1次, 每次免疫剂量为肌注3mL/头;散养猪采用春秋两季集中免疫, 定期补免措施, 每次免疫剂量为2mL/头。

1.2 采样点选择

每季度随机选取市辖区规模养殖场15场 (次) , 屠宰场10场 (次) , 散养户30户 (次) 进行血液样品采集、分离血清。

1.3 采样要求

每季度, 每个规模养殖场随机采集血样20份, 每个散养户采集5~10份, 每个屠宰场采集20份, 并记录采集地点、猪场规模、免疫时间、免疫次数、疫苗品种、生产厂家、批号及猪群健康状况等资料, 每份样品采血量大于1.5mL。

1.4 样品采集数量

全年共采集猪血清3100份, 其中规模猪场商品猪血样1157份, 规模猪场种猪血样412份, 屠宰场血样723份, 散养户血样808份。

1.5 诊断试剂与方法

猪口蹄疫抗体监测ELISA试剂:购自深圳市真瑞生物有限公司, 诊断试剂在有效期内使用, 批号为2015101377;试验严格按照诊断试剂说明书的要求进行操作[4]。

1.6 结果判定

以空白对照调零用酶标仪于450nm (630nm作参比波长) 读取吸光度A值。PI (阻断率) >35%则判断为阳性;PI≤35%则判断为阴性。

2 试验结果

2.1 不同采集点抗体合格率

由表1可见, 全年平均免疫抗体合格率, 规模场商品猪合格率 (85.15%) >散养户 (74.71%) >屠宰场 (71.96) ;在规模场中, 种猪合格率 (92.08%) >商品猪 (85.15%) 。

2.2 四个季度抗体合格率状况

由表1、图1看出, 对不同季度采集的猪血清进行O型口蹄疫免疫抗体监测发现, 不同养殖类型的不同场点, 群体免疫抗体合格率均高于农业部规定的70%的要求。规模场商品猪及种猪各自所在群体四个季度的免疫抗体合格率差异不大, 并且抗体持续处于较高水平;散养户、屠宰场第二、四季度的抗体合格率均高于第一、三季度, 其中散养户第三季度抗体水平处于最低, 屠宰场相比规模场、散养户抗体水平较低, 且第一季度抗体水平处于最低;由表2得出, 规模场商品猪各养殖场在不同季度, 猪O型口蹄疫免疫抗体群体合格率均达到80%以上, 种猪多数场免疫抗体群体合格率达到了90%以上。

3 分析与讨论

(1) 我市要求猪口蹄疫应免群体免疫密度常年维持在100%, 从2015年监测的结果来看, 在抽取的3100份猪血清的猪O型口蹄疫免疫抗体合格率达80.98%, 超过了农业部规定的要求 (70%) , 说明我市始终坚持“规模养殖场按程序进行免疫, 散养畜禽实行春秋两季集中免疫、每月及时补免”的工作制度, 坚持“应免尽免, 不留空档”的工作标准, 把口蹄疫等重大动物疫病免疫放在防疫工作的突出位置, 成效显著。

(2) 全年监测数据来看规模场各季度猪O型口蹄疫免疫抗体群体合格率差异不大, 一直处于较高水平;散养户由于第一季度处于屠宰或出栏高峰期, 存栏数量、抽检数量均较少。第一季度在秋防结束后经过几个月, 抗体水平逐渐降低, 虽每月进行补免, 但屠宰季节多数散养户不进行疫苗免疫, 个别猪处于免疫空档期, 致使免疫抗体水平合格率相对较低。第三季度处于春、秋防过渡临界期, 抗体水平也相对处于较低水平。对部分散养户的调查了解, 畜主担心猪接种口蹄疫疫苗后导致猪过敏反应, 未按规定程序免疫猪口蹄疫疫苗[5]。调查发现, 个别养殖者认为口蹄疫是寒冷季节发病率较高的疫病, 所以仅注重第一、四季度的免疫预防, 导致口蹄疫抗体合格率在不同季节的差异较大。但总的合格率仍高于农业部规定的70%的要求。

(3) 由于国家拨付给村级防疫员的工资经费有限, 加之免疫注射工作量大, 有些村级动物防疫员只做春秋两季的集中免疫, 平时的月月补针不能及时到位, 存在应免未免、补栏不能及时补免等现象, 也是导致第一季度、第三季度散养户猪O型口蹄疫免疫抗体水平较低的原因之一。

(4) 农村散养户的猪舍通风不良, 卫生条件差, 猪群长期处于应激状态, 导致猪体免疫力下降。饲料变质发霉, 比如黄曲霉、褐曲霉等产生毒素抑制免疫应答。饲料中营养物质缺乏, 影响免疫抗体生成速度和数量[6]。

(5) 个别屠宰场的免疫抗体合格率低下, 存在免疫情况不清等问题, 可能与免疫期超过6个月、漏免或免疫未产生应答等原因有关[7]。

摘要：为切实了解、掌握遂宁市生猪口蹄疫免疫效果, 以科学有效预防该病, 2015年, 随机抽取全市部分规模场、散养户以及屠宰场猪血清3100份, 用酶联免疫吸附试验监测O型口蹄疫免疫抗体。结果表明, 猪O型口蹄疫免疫抗体整体合格率为80.98%, 其中抗体最好的是规模场, 四个季度的免疫抗体合格率差异不大, 各规模场商品猪在不同季度, 猪O型口蹄疫免疫抗体群体合格率均达到80%以上, 种猪多数场免疫抗体群体合格率达到了90%以上;散养户及屠宰场免疫抗体合格率分别为74.71%、71.96%。说明我市始终坚持“规模养殖场按程序进行免疫, 散养畜禽实行春秋两季集中免疫、每月及时补免”的工作制度, 坚持“应免尽免, 不留空档”的工作标准, 把口蹄疫等重大动物疫病免疫放在防疫工作的突出位置, 成效显著。

关键词：酶联免疫吸附试验,O型口蹄疫,抗体监测

参考文献

[1]王世若, 王兴龙, 韩文瑜.现代动物免疫学[M].吉林:吉林科学技术出版社, 1996:320-321.

[2]吴志明, 刘莲芝, 李桂喜.动物疫病防控知识宝典[M].北京:中国农业出版社, 2006:114-118.

[3]刘桂清, 侯喜林.几种猪口蹄疫疫苗免疫效果观察[J].中国兽医科技, 1999, 29 (12) :38-39.

[4]猪口蹄疫抗体 (IgG) 诊断试剂盒 (酶联免疫法) 说明书[Z].2010年.深圳市真瑞生物有限公司.

[5]朱玉华, 陈亮.生猪注射口蹄疫灭活苗引起免疫应激的防治[J].安徽农学通报, 2007, 13 (18) :223.

[6]谢翠松, 罗平, 龙清孟, 等.仔猪O型口蹄疫疫苗首免与二免抗体水平比较[J].中国畜牧兽医, 2009, 36 (5) :144-146.

间接酶联免疫吸附法 篇7

1 材料与方法

1.1 试剂

购自珠海丽珠试剂有限公司, 产品批号20080528, 有效期20090527。

1.2 质控血清

由上海市CDC性病艾滋病科HIV确认中心实验室统一制备发放于各区CDC, 按2周实验用量分装, 封口, 标记, -20℃冻存。血清不可反复冻融, 融化后应于2～8℃保存, 2周内使用。

1.3 仪器设备

美国宝特ELX-800酶标仪、ELX-50洗板机, 仪器操作按“使用手册”使用保养。所有移液器每年强检1次。1.4方法采用双抗原夹心法, 严格按说明书要求执行。设空白1孔, 阴性 (Nc) 对照3孔, 阳性 (Pc) 2孔, 外部质控 (K) 1孔, CUTOFF-Nc+0.15, 采用单波长450nm, 空白孔调零。 (本试剂盒要求阴性值低于0.08时, 按0.08计算) 。

2 结果

先计算前3次S/CO值、均值 (x) 、标准差 (s) , 然后再计算SI上、下限, 从第3次开始用“即刻法”对结果进行质控。当SI上下限

x=9.21, s=0.81;x±2s=10.74～7.50, x±3s=11.55～6.69;CV=8.87%。

3 讨论

室内质控是实验室内部对检测质量的各个环节进行系统控制。S/CO图法是目前国内采用的室内质量控制方法。建议由专人负责建立质控图, 长期、稳定地使用一种质量好的试剂盒。本实验综合了2种方法的优点, 克服了传统单一应用质控图法必须连续对同一质控血清进行20次测定后才能进入质控的缺陷, 在测定3次后即可进入质控, 21次后又可运用质控图的方法进行质控, 对基层实验室来说, 笔者认为此方法较切实可行, 具有较好的可操作性。

HIV抗体检测具有特殊性, 涉及到个人隐私, 关系到个人、家庭及社会的稳定。因此, 必须建立一套HIV抗体检测的质量保证体系, 加强实验室自身质量管理, 保证每次检测结果的准确可靠。

以S/CO为评判指标, 可增加结果间的可比性。该方法同样适用于其他ELISA检测, 如抗-HCV、HBsAg等的室内质控, 具有普遍的推广应用价值[1]。

关键词：即刻法—质控图法,抗-HIV,酶联免疫吸附测定,室内质控

参考文献

间接酶联免疫吸附法 篇8

1 酶联免疫吸附法的原理与应用

酶联免疫吸附法 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assays, ELISA) 1971年由瑞典学者Engvall和Perlman首次报道后, 由于具有快速、敏感、简便、易于标准化、对环境无害等优点, 而得到迅速的发展和广泛应用。

ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗体分子共价结合, 滴加底物溶液后, 底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型, 通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应, 显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定, 这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来, 使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

目前ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面, ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。NY/T 1460—2007 (饲料中盐酸克仑特罗的测定酶联免疫吸附法) 标准中规定了适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸克仑特罗的测定。

2“瘦肉精”的危害

“瘦肉精”是肾上腺类神经兴奋剂, 属β-兴奋剂类激素。既不是兽药, 也不是饲料添加剂, 它是一类药物, 而不是一种特定的物质, 目前, 被称为“瘦肉精”的主要有莱克多巴胺、盐酸克仑特罗、沙丁胺醇等。“瘦肉精”能够改变动物养分的代谢途径, 促进动物肌肉特别是骨骼肌中蛋白质的合成, 抑制脂肪的合成和积累, 从而改善胴体品质, 使生长速率加快, 瘦肉相对增加。

“瘦肉精”进入动物体内会在组织中形成残留, 尤其是在肝脏等内脏器官残留较高, 人吃了这种肉后, 易出现心跳加速、呼吸困难等症状, 严重的会有恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状, 特别对心脏病、高血压、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大。

3 ELISA在饲料“瘦肉精”检测中的应用

“瘦肉精”药物常被非法添加到饲料中饲喂猪、牛和羊等动物, 用于提高动物的胴体瘦肉率。而“瘦肉精”药物造成动物体内的药物残留, 可对消费者的健康造成伤害。因此, 对饲料中“瘦肉精”药物的测定非常必要。

国内有关动物源性饲料中“瘦肉精”的检测方法有高效液相色谱法 (HPLC) 、气相色谱质谱法 (GC—MS) 、液相色谱质谱联用法 (LC—MS) 、酶联免疫吸附法 (ELISA) 和胶体金免疫层析法等。由于HPLC、GC—MS、LC—MS对仪器设备、场地等的要求比较高, 因此ELISA和胶体金免疫层析法应用比较广泛。

酶联免疫吸附法利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用, 利用酶联免疫吸附法中的竞争法检测抗体。ELISA测定的基础是抗原抗体反应。单克隆抗体既能与CLB等结合, 也能与酶标记物结合。当样品中含有CLB等时, 它与酶标记物竞争性的结合单抗上的结合位点, 经过洗涤步骤后, 没有与单抗结合的酶标记物被洗去。加入基质和发色剂后, 结合的酶标记物把无色的发色剂转化为蓝色的产物, 颜色的深浅和样品中盐酸克伦特罗的浓度有关。加入终止液后, 蓝色转变为黄色, 然后用酶标仪进行吸光度的测定, 最佳波长为450 nm。ELISA操作简单, 对仪器设备的要求不高, 可为“瘦肉精”检测卡检测的假阳性进行初步筛选。

“瘦肉精”药品是国家明令禁止在畜禽饲料和饲养过程中使用的药品。使用“瘦肉精”不仅危害人民群众身体健康, 对养殖业的持续健康发展和社会安定也是很不利的。因此要完善饲料和畜产品质量监测体系, 严把生产、经营、使用三道关口, 对于“瘦肉精”的检测而言, 发展一种可靠、灵敏、快速、实现批量检测的检测方法尤为必要也更具现实意义。

参考文献

[1]李德安, 王世琴, 李宇晴, 等.动物源饲料中“瘦肉精”类药物的分析及检测方法.畜牧与饲料科学, 2013 (07) :55-56.

[2]文美英, 朱志盈.瘦肉精的危害、检测方法及控制.肉类工业, 2013 (02) :49-51.

[3]陆平.“瘦肉精”的危害及检测方法.畜牧与饲料科学, 2012 (03) :54-55.

间接酶联免疫吸附法 篇9

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月～2014年1月我单位行乙肝五项检测患者120例,其中男68例,女52例,年龄20～75岁,平均40.8±11.2岁。

1.2 检验材料和方法

检验材料[3]:乙肝五项酶联免疫吸附法检测诊断试剂盒(潍坊三维生物工程集团有限公司)。方法:所有患者清晨空腹静脉采血10mL,每份血液平分为5份,分别置于5支试管,其中一份行抗凝处理,一份不做抗凝处理,其余作标记,放入37℃水浴箱中分别静置20min、40min、60min;所有标本3000r/min离心10min,乙肝五项酶联免疫吸附法检测乙肝五项,观察结果。

1.3 统计学方法

所有计量资料以均值加减标准差()表示,两组间均值比较采用独立样本t/检验,所有计数资料以频数(f)表示,无序分类资料采用χ2检验,采用SPSS16.0进行统计分析。α=0.05。

2 结果

静置水浴20min后阳性23份(19.17%),静置水浴40min后阳性11份(9.17%),静置水浴60min后未见阳性;抗凝血清阳性62份(51.67%),不抗凝血清阳性31份(25.83%),抗凝血清明显高于不抗凝血清(P<0.05)。

3 讨论

乙肝病毒表面抗原是患者乙肝病毒感染的重要证据,能直观反应其是否存在感染,酶联免疫吸附试验对乙肝病毒表面抗原具有极高的敏感度,是乙肝病毒感染的重要检测方法。在酶联免疫吸附检验过程中,检验标本收集、处理、洗板、显色、比色及结果解读稍有不慎就会出现假阴性或假阳性结果,影响临床诊断的准确性。

研究表明,水浴静置时间越长,乙肝五项阳性检出率越低,甚至无阳性结果,提示标本静置水浴时间影响乙肝五项酶联免疫吸附法检测的乙肝五项结果。相关资料表明[4],血液静置水浴时间越长,对离心血清中过氧化物酶细胞成分及纤维蛋白含量的影响越大,这些成分附于酶标反应孔形成非特异性吸附酶,导致检测结果假阳性。此外,抗凝血清乙肝五项阳性检出率明显高于不抗凝血清(P<0.05),提示血清状态影响酶联免疫吸附法检测的乙肝五项检测结果。因此,酶联免疫吸附法检测乙肝五项需严格遵守相关操作规范,避免影响检测结果。

摘要：目的:探讨酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果的常见影响因素。方法:120例行乙肝五项检测患者使用酶联免疫吸附法,分析影响检测结果的因素。结果:静置水浴20min后阳性23份(19.17%),静置水浴40min后阳性11份(9.17%),静置水浴60min后未见阳性:抗凝血清阳性62份(51.67%),不抗凝血清阳性31份(25.83%),抗凝血清明显高于不抗凝血清(P<0.05)。结论:血清静置水浴时间及血清状态都会影响乙肝五项检测结果。

关键词：酶联免疫吸附法,乙肝五项,影响因素

参考文献

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