蒲公英提取液（精选四篇）
蒲公英提取液 篇1
1 材料
1.1 原料与主要试剂
蒲公英全草,购自长春市福百草大药房有限公司;牛肉(牛背最长肌),购自吉林省长春皓月清真肉业股份有限公司;壳多糖,购自生工生物工程(上海)股份有限公司;聚乙烯薄膜、托盘,购自上海恩宇实业有限公司;氯化钾、硼酸、盐酸、硫酸、乙酸、乙醇、氯化钠、磷酸二氢钾等常规试剂,购自天津市科密欧化学试剂有限公司;平板计数琼脂培养基,购自杭州微生物试剂有限公司。
1.2 主要仪器
微型粉碎机,购自上海京工实业有限公司;离心机,购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司;无菌操作台,购自苏州净化设备有限公司;旋转蒸发仪,购自上海亚荣生化仪器厂;酸度计,购自上海仪电科学仪器股份有限公司;电子天平,购自梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司。
2 方法
2.1 蒲公英提取液的制备
取粉碎后的蒲公英全草50 g,加到500 m L纯化水中,浸泡1 h后文火煎煮2 h;1 200 r/min离心15 min;取上清液,旋转蒸发浓缩至50 m L,蒲公英含量为1 g/m L,灭菌后于4℃储存,备用。
2.2 复合保鲜液的制备
根据蒲公英提取液添加量的不同配制4种保鲜液,保鲜液中蒲公英提取液的浓度分别为0 g/L、40 g/L、80 g/L和120 g/L。保鲜液的配制方法:将20 g壳聚糖溶解在1%乙酸溶液中,加入一定量的(0 m L、40 m L、80 m L或120 m L)蒲公英提取液,混合均匀后定容至1 000 m L,静置脱气,得到4种不同浓度的复合保鲜液。
2.3 样品的处理
将冷却排酸牛肉去除筋膜和多余脂肪切成100 g左右的小块,随机分为5组存贮。参照参考文献[4]中的方法,分别将牛肉块浸入4种保鲜液(根据保鲜液中蒲公英提取物浓度从低到高依次标记为A组、B组、C组和D组)和无菌纯化水(对照组)中1 min,筛网沥干后置托盘中,用聚乙烯保鲜膜包装,于(3±1)℃冰箱中冷藏,备用。
2.4 测定项目
在储藏后的第0,2,4,6,8,10,12天进行感官评价、p H值、TVB-N值和菌落总数的测定。
2.4.1 感官评价
参照GB/T 17238—2008《鲜、冻分割牛肉》中感观评价标准,采用5分制度,由6名肉类研究专业人员对牛肉的色泽、黏度、弹性和气味等指标分别进行评价,然后取平均值。5分为最新鲜,4分为次新鲜,3分为一般,2分为差,1分为极差[4]。
2.4.2 p H值
按照GB/T 9695.5—2008《肉与肉品p H值测定》中的方法进行测定。根据p H值大小将牛肉分为三个等级[5,6],5.8~6.2为一级鲜度,6.3~6.6为次鲜度,6.7以上为变质肉。
2.4.3 TVB-N值
按照GBT5009.44—2003《肉与肉制品卫生标准的分析方法》中半微量定氮法进行测定。根据TVB-N值的大小将牛肉分为三等,TVB-N值≤15 mg/100 g为一级鲜度、>15 mg/100 g~≤25 mg/100 g为二级鲜度、>25 mg/100g为变质肉[7]。
2.4.4 菌落总数
按照GB 4789.2—2010《食品微生物学检验菌落总数测定》中的方法进行测定。菌落总数以lg(cfu/g)表示,菌落总数对数值小于4.0为一级鲜度,菌落总数对数值介于4.0~6.0之间为二级鲜度,菌落总数对数值大于6.0为变质肉[8]。
2.5 统计学分析
采用SPSS 16.0统计学软件对试验数据进行方差分析,结果以“平均数±标准差”表示,P<0.05表示差异显著。
3 结果与分析
3.1 冷却牛肉贮藏过程中的感官评分
结果见图1。
由图1可知,随着贮藏天数的增加,各组感官评分不断降低,A组、B组、C组和D组感官评分的减少幅度均小于对照组,经统计学分析,除第0天外,各组的感官评分均显著高于对照组(P<0.05)。对照组感官评分于贮藏的第6天开始转变为差,A组和B组感官评分均于贮藏的第8天开始转变为差,C组感官评分于第10天转变为差,D组感官评分于贮藏的第12天转变为差。表明在保鲜液中添加壳聚糖和蒲公英提取液可提高冷却牛肉的感官质量,其中随着保鲜液中蒲公英提取液浓度的增加,冷却牛肉感官质量越好。
3.2 冷却牛肉贮藏过程中p H值的变化
结果见图2。
由图2可知,随着牛肉贮藏天数的增加,各组p H值逐渐增大,对照组增长最快,其次为A组和B组,C组和D组变化最为缓慢。对照组牛肉p H值在贮藏的第10天为6.74,大于6.7,为变质肉;A组在贮藏的第12天时p H值达到6.79,牛肉发生了变质;而添加蒲公英提取液的3个组,在贮藏第12天时,p H值为6.3~6.6,为次鲜度。C组和D组的p H值变化较为一致,经统计学分析,两组p H值差异不显著(P<0.05)。
3.3 冷却牛肉贮藏过程中TVB-N值的变化
结果见图3。
由图3可知,随着贮藏天数的增加,各组TVB-N值均不断增加,增加的幅度从高到低依次为对照组、A组、B组、C组和D组,添加蒲公英提取液的保鲜液降低了牛肉贮藏期间的TVB-N值。A组在第6天时,TVB-N为17.56,此时牛肉为二级鲜度,到第10天为变质肉;B组在第8天时为二级鲜度,第12天时为变质肉;C组和D组在第12天时仍为二级鲜度。
3.4 冷却牛肉贮藏过程中菌落总数的变化
结果见图4。
由图4可知,在贮藏过程中,冷却牛肉的菌落总数不断增加。经统计学分析,从贮藏的第4天开始,对照组菌落总数显著高于另外4个组(P<0.05),A组菌落总数显著高于C组和D组(P<0.05);从贮藏的第8天开始,A组菌落总数显著高于B组;贮藏期间C组和D组比较菌落总数差异不显著(P>0.05)。在贮藏期间,对照组出现变质肉的时间为第8天,A组为第10天,B组为第12天,C组和D组在第12天仍为二级鲜度。
4 讨论
壳聚糖具有较好的成膜性和稳定性,是一种理想的涂膜保鲜剂[2],在壳聚糖中添加具有抗氧化作用的保鲜剂可增加肉类的保鲜效果[2]。研究表明,蒲公英中含有黄酮、有机酸和多糖等多种成分[9],可有效抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌等,具有广谱抗菌、抗氧化、清热解毒等作用[3]。在壳聚糖保鲜液中添加蒲公英提取物,不但可提高保鲜效果,而且可减少化学合成防腐剂的使用,并防止病原菌抗药性的产生[2]。
在冷却牛肉贮藏过程中,由于细菌繁殖特别是嗜冷微生物的快速繁殖及脂肪氧化等原因,导致了牛肉的腐败,影响了牛肉的色泽、黏度、弹性、气味、p H值、TVB-N值和菌落总数等指标的变化,其中菌落总数可反映冷却肉的品质变化,TVB-N值可直接反映肉中脂肪的氧化程度[10]。本研究结果表明,在保鲜液中添加蒲公英提取物可提高冷却牛肉的保鲜效果,经壳聚糖和蒲公英提取液组成的复合保鲜液处理的冷却牛肉的感官评分、p H值、TVB-N值和菌落总数值均优于对照组和单一壳聚糖组,蒲公英中的抑菌成分抑制了细菌的生长繁殖,有效控制了冷却牛肉中p H值的升高,延缓了冷却牛肉的腐败变质,与王晓英等[2]的研究结果一致。不同浓度的蒲公英提取液保鲜液对冷却牛肉的保鲜效果不同,本研究发现,随着复合保鲜液中蒲公英提取液浓度的增加,冷却牛肉的保鲜效果得到了增强,但当保鲜液中蒲公英浓度为80 g/L和120 g/L时冷却牛肉保鲜效果差异不显著,即80 g/L为复合保鲜液中蒲公英的最佳浓度。
综合分析冷却牛肉贮藏过程中的感官评分、p H值、TVB-N值和菌落总数,用80 g/L的蒲公英提取液和2%壳聚糖的复合保鲜液处理的冷却牛肉与对照组相比可延长保质期约4 d,与壳聚糖保鲜液相比可延长保质期约2 d。
5 结论
添加蒲公英提取物的复合保鲜剂可提高冷却牛肉的保鲜效果,延长冷却牛肉的保质期,壳聚糖和蒲公英复合保鲜液中蒲公英提取液的最佳浓度为80 g/L。
摘要：<正>随着我国人民生活水平的提高和收入的稳步增加,畜产品消费结构实现了升级优化,牛肉作为高档食品,其需求和消费量逐渐增加,同时也对牛肉的品质提出了更高的要求~([1])。冷却牛肉由于经过了科学的排酸处理并全程0~4℃冷链储运,不但肉质柔软有弹性,而且安全、卫生、营养价值高,深受消费者喜爱~([2])。但是,由于冷却肉汁液流失少、营养丰富,在储运过程中极易发生腐败,货架期较短,不能满足市
参考文献
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蒲公英提取液 篇2
1 资料与方法
1.1 一般资料
入选病例符合慢性盆腔炎诊断标准, 均排除妊娠或近期准备妊娠的妇女;哺乳期妇女及合并心、肝、肾和精神疾病等严重疾患者;过敏体质或对多种药物过敏者;近期曾用同类药物治疗, 致药物疗效难以判断者。年龄21~45岁, 平均32岁, 病程6~96个月, 随机分成治疗组和对照组, 分别为45例及40例, 两组患者在年龄, 病程等方面无明显性差异 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 治疗方法
治疗组于月经干净后第3天开始, 用蒲公英提取液100mL (取蒲公英1000g, 先将蒲公英加水煎煮二次, 第一次1h, 第二次30min, 再合并煎液, 滤过, 滤液浓缩, 加乙醇处理三次, 第一次使溶液中含乙醇量为60%, 第二次为80%, 第三次为85%, 前二次每次放置48h后, 滤过, 回收乙醇, 浓缩, 第三次放置24h, 滤过, 回收乙醇, 浓缩, 加入适量注射用水, 冷藏24h, 滤过;调节pH值7.0~7.5, 加注射用水至1000mL, 滤过, 灌封, 灭菌, 即得黄色的澄明蒲公英提取液) 。加温38℃左右, 放入输液瓶内, 插入输液器, 取下前端针头, 排尽输液管内空气, 关闭调速器, 用石蜡油润滑输液管前端后插入肛门15~20cm, 打开调速器, 以100滴/分的速度滴入, 大约15min滴完, 患者卧床休息, 保留时间不少于1h, 每晚1次, 共10d, 为一疗程。经期停用, 共3个疗程。
超短波治疗:超短波治疗仪类型 (DL-C-BII) , 最大输出功率200W, 频率50~70WHz, 微热量 (80~100mA) , 板状电极于下腹部和腰骶部对置, 每次30min, 每天一次, 7d一疗程。共3个疗程。
1.3 疗效评定标准
(1) 治愈:临床症状及体征消失, 复查血常规, B超及妇科检查未见异常; (2) 显效:症状和体征基本消失, 妇科检查明显改善, B超显示包块或盆腔积液较原先减少2/3以上; (3) 好转:症状体征均好转, 妇科检查好转, B超显示包块或盆腔积液较原先减少不到2/3; (4) 无效:症状、体征、妇科检查及B超均没有明显改善。痊愈、显效与好转合计为总有效率。
1.4 统计学处理
计数资料采用χ2检验进行统计分析。
2 结果
两组治疗效果见表1, 治疗组痊愈率及总有效率均高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。
注:治疗组疗效好于对照组, 两组差异有统计学意义 (P<0.05)
3 讨论
盆腔炎亦称盆腔炎性疾病 (pelvic inflammatory disease, PID) , 包括子宫内膜炎, 输卵管炎和输卵管卵巢脓肿, 以及扩散后产生的盆腔腹膜炎等[1]。盆腔炎是妇科常见病, 其在发展中国家育龄期妇女中的发病率达40%, 盆腔炎分急性和慢性, 慢性盆腔炎容易反复发作, 严重影响妇女的生活和健康。临床上治疗慢性盆腔炎常使用抗生素[2]。但由于盆腔血流缓慢, 血循环差, 药物在盆腔难以达到有效浓度, 且由于急性期治疗不彻底, 不规则的用药或治疗时间不足, 细菌产生耐药性, 故治疗效果不理想[3]。中药保留灌肠配合局部理疗治疗慢性盆腔炎已成为一种常规疗法。慢性盆腔炎属祖国医学“症瘕”, “下腹痛”, “带下病”等范畴。湿热淤结, 气滞血瘀为本病的病理过程。我们拟运用中药蒲公英提取液灌肠配合超短波治疗慢性盆腔炎有较好疗效。蒲公英的药理特性有 (1) 抗菌:对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌有较强的杀菌作用;其提取液在一定浓度下对肺炎衣原体、结核杆菌、钩端螺旋体等病原体有抑制作用。 (2) 止痛及抗过敏:外敷治疗各种跌打损伤及乳腺肿痛, 有明显抑制肥大细胞释放组织胺作用。 (3) 调节平滑肌:低浓度时能提高兔离体十二指肠的紧张性并增加其收缩能力, 而高浓度时则有抑制作用, 对十二指肠平滑肌舒张作用明显。 (4) 抗黏膜损伤:蒲公英配伍的复方煎剂明显减轻大鼠胃、口腔、直肠、膀胱等黏膜损伤, 使溃疡发生率和溃疡指数明显下降, 其抗黏膜损伤作用可能与影响组织内源性PGE2的含量有关;也可能与蒲公英植株中提取的一种有葡萄糖、甘露聚糖等构成多糖物质 (是含微量蛋白质的化合物) 有关。 (5) 免疫调节:水煎剂在体外能显著提高人体的外周表淋巴细胞转化率, 有提高及改善小鼠细胞免疫和非特异性免疫功能的作用。 (6) 抗肿瘤:蒲公英根含有的三萜类化合物对小鼠皮肤二阶段致癌有显著的抗癌作用。 (7) 抗氧自由基作用:蒲公英提取液总黄酮能有效清除超氧阴离子自由基、轻自由基、抑制不饱和脂肪酸的氧化。另外, 蒲公英对女性甾体激素有影响, 可以调节女性内分泌功能。临床上已开展用蒲公英经胃黏膜吸收、塞肛、乙醇提取液经静脉注射等。可见用蒲公英提取液行灌肠治疗是安全有效的。超短波属于高频电场, 加热均匀, 穿透力强, 可到达组织深部[4], 改善血液和淋巴循环, 血管通透性增高, 减轻水肿, 避免组织水肿的损害;使忘状内皮系统和白细胞吞噬能力增强;改善局部的营养和代谢, 加速病灶的愈合。在超短波电场作用下, 给细菌造成不良生活环境, 抑制细菌的生长繁殖。对盆腔炎达到杀菌、消炎、镇痛、吸收积液的作用。
蒲公英提取液灌肠配合超短波治疗慢性盆腔炎, 二者结合疗效稳定, 优势互补, 作用叠加。此治疗方案在治疗过程中未出现任何不良反应, 具有安全、高效、价廉、无痛苦等特点, 值得临床推广。
参考文献
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蒲公英提取液 篇3
关键词：蒲公英,黄酮类物质,超声辅助溶剂提取法,分光光度法
0 引言
蒲公英 (Taraxacum monglicum) , 为菊科多年生草本植物, 主要分布于北半球, 在我国东北、华北、华中、西北、西南等地均有分布。蒲公英作为一种历史悠久的中药材, 受到人们的欢迎, 有关学者就蒲公英的药理及药效做了大量研究, 发现蒲公英内含多种营养物质, 包括蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖、蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素、维生素等[1,2], 对乳腺炎、皮肤护理等均有很好的疗效[3,4]。黄酮类物质是一类低分子天然植物成分, 广泛存在于各种植物和大型真菌中, 迄今, 已有数百种不同类黄酮类物质在植物中被发现。20世纪20年代, 槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后, 引起人们的广泛关注, 相当一部分具有显著的生理及药理活性, 例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性、改善记忆、抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等[5~7]。本文以蒲公英全草为研究对象, 采用超声辅助溶剂提取的方法, 对其进行黄酮类物质含量的测定, 为蒲公英黄酮类物质在医学及药理方面的研究提供理论参考。
1 材料与方法
1.1 实验材料
采集地点为抚顺市清原县 (东经124.9°, 北纬41.72°) , 用小铲子采挖蒲公英全草, 于2013年4月初开始采挖新鲜蒲公英全草。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 主要试剂
氢氧化钠 (上海中试化工总公司) ;芦丁标准品 (中国药品生物制品鉴定所) ;硝酸铝 (上海振兴试剂厂) ;亚硝酸钠 (上海申翔化学试剂有限公司) ;乙醇 (江苏彤晟化学试剂有限公司) 。
1.2.2 主要仪器
超声波清洗机 (东莞市洁康超声波设备有限公司) ;ME-2C真空泵 (巩义市予华设备有限公司) ;高速中药粉碎机 (广州市旭郎机械设备有限公司) ;电热鼓风干燥箱 (上海一恒科技有限公司) ;2100型紫外可见分光光度计 (上海美谱达公司) ;达电热恒温水浴锅 (上海秣马恒温设备厂) 。
1.3 实验方法
1.3.1 总黄酮的提取
(1) 蒲公英全草处理
将蒲公英全草放入40℃干燥箱内真空干燥24h, 用粉碎机粉碎, 过50目筛, 得蒲公英粉末。
(2) 最佳超声提取时间的确定
取3g蒲公英粉放入250mL锥形瓶中, 按1∶20料液比, 加入50%乙醇溶液。将烧瓶在40℃下于超声清洗机中进行超声提取, 分别设置提取时间为10、20、30、40、50 min, 提取结束后, 取出进行冷却, 抽滤的滤液待测吸光度。
(3) 最佳提取温度的确定
取3g蒲公英粉放入250mL锥形瓶中, 按1∶20料液比, 加入50%乙醇溶液。将烧瓶分别在30、40、50、60、70℃下于超声清洗机中进行提取, 提取30min后, 取出进行冷却, 抽滤的滤液待测吸光度。
1.3.2 标准曲线的绘制
分别移取0.1mg·mL-1的芦丁标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL于25mL容量瓶中, 加入3%亚硝酸钠溶液0.75mL, 摇匀, 放置8min, 加入5%硝酸铝溶液0.75mL, 摇匀, 再放置8min, 之后加入氢氧化钠溶液10mL, 用30%的乙醇溶液定容, 在510nm下测其吸光度, 得到标准曲线[8], 回归方程为:C=0.074 5A-0.000 320 (C=质量浓度, A=溶液吸光度) , 相关系数R=0.999 4, 线性范围0.1~0.7A。
1.3.3 黄酮类物质含量的测定
先后称取烘干粉碎后的蒲公英粉1.000g, 共称取6份 (编号为1~6) , 选择最佳提取条件, 对蒲公英黄酮类物质进行超声辅助溶剂提取, 吸取黄酮类物质提取液2mL, 放入25mL比色管中, 用体积分数为30%的乙醇溶液补充至10 mL, 加入0.7 mL5%亚硝酸钠溶液, 摇匀且放置5 min, 再加入0.7mL 10%硝酸铝溶液, 摇匀放置6min, 再加入5mL1mol·L-1的氢氧化钠溶液, 用30%乙醇定容, 放置10min后, 在波长为510nm下测量其吸光度[9]。按1.3.2中标准曲线计算样品中的黄酮类物质含量。根据以下公式计算蒲公英黄酮类物质的提取率:
此公式中, n:提取液稀释倍数;C:被测液中黄酮类物质浓度 (g·mL-1) ;V:提取液体积 (mL) ;m:蒲公英干粉的质量 (g) 。
2 结果与分析
2.1 黄酮类物质的提取
2.1.1 最佳提取时间的确定
在超声功率恒定、提取温度为40℃、乙醇体积分数为50%、料液比为1∶20 (g∶mL) 的条件下, 分别设置时间10、20、30、40、50min, 进行黄酮类物质的提取, 测量滤液的吸光度值, 根据1.3.2标准曲线计算滤液中黄酮类物质的浓度, 并根据公式 (1) 计算黄酮类物质提取率, 结果见图1。当提取时间在10~30min时, 黄酮类物质的提取率随提取时间的增加而不断提高, 当提取时间为30 min时, 黄酮类物质的提取率达到最高, 为3.0%;提取时间超过30min之后, 黄酮类物质的提取率开始下降。这可能是由于提取时间过长, 黄酮类物质在空气中的氧化时间增加, 促使黄酮类物质分解, 因此黄酮类物质的最佳提取时间为30min。
2.1.2 最佳提取温度的确定
在超声功率恒定、提取时间为30 min、料液比为1∶20 (g∶mL) 、乙醇体积分数为50%的条件下, 分别设置提取温度30、40、50、60、70℃, 在上述温度下进行蒲公英黄酮类物质的提取, 测量滤液的吸光度值, 根据1.3.2标准曲线计算滤液中黄酮类物质的浓度, 并根据公式 (1) 计算黄酮类物质提取率。结果表明:随着温度的不断升高, 黄酮类物质提取率也不断升高。当温度接近70℃时, 黄酮类物质含量达到最大值且趋于平缓 (见图2) 。由于温度过高会对溶剂的物理性质造成一定影响, 因而没有采用更高的温度;过高的温度也会对黄酮类物质的化学结构造成破坏, 因此, 确定70℃为蒲公英黄酮类物质提取的最佳温度。
2.2 黄酮类物质的含量
根据1.3.3中黄酮类物质含量测定方法, 在超声功率一定、提取时间为30min、料液比为1∶20 (g∶mL) 、乙醇体积分数为50%、提取温度为40℃的条件下, 进行黄酮类物质提取, 根据1.3.2标准曲线计算滤液中黄酮类物质的浓度, 并根据公式 (1) 计算黄酮类物质提取率, 即为黄酮类物质的含量。计算结果显示, 蒲公英中黄酮类物质含量为4.33%, 见表1。陈景耀、金京玲等[3,4]采用传统热回流法提取蒲公英全草中的总黄酮含量, 分3次提取, 测量结果为4.16%~5.33%。与本文中采用超声辅助溶剂提取法的结果相近, 这可能与所选用的蒲公英品种存在差异有关, 但不可否认, 超声辅助溶液提取法对于蒲公英黄酮类物质含量提取具有穿透力强、加热效率高、所需时间短等优势, 具备一定的推广应用价值。
3 结论
蒲公英是我国传统的药用植物, 黄酮类物质是蒲公英中重要的有效成分, 具有降血糖、降血脂、延缓衰老、增强心肌功能、提高人体免疫力、抗肿瘤等功效[10]。本文以蒲公英全草为研究对象, 采用超声辅助溶剂提取的方法, 对蒲公英黄酮类物质的最佳提取时间和最佳提取温度进行了探索, 并以最佳条件提取蒲公英内黄酮类物质并进行含量测定。结果表明, 在提取温度70℃、提取时间30 min的条件下, 蒲公英黄酮类物质的提取效果最佳, 蒲公英黄酮类物质的含量为4.33%。
参考文献
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蒲公英提取液 篇4
抗氧化剂按来源可以分为合成抗氧化剂和天然抗氧化剂两类。合成抗氧化剂如BHA (丁基羟基茴香醚) 、BHT (二丁基羟基甲苯) 和PG (没食子酸丙酯) 等。它们用于许多食品中以防止酸败和油脂类的氧化。由于合成抗氧化剂对健康的潜在危害, 如BHA在动物试验中是致癌的。因此, 在植物中找到安全的天然抗氧化物质及其应用是研究的趋势。不仅在食品领域, 在预防医学领域也很关注从植物材料中找到天然的抗氧化物。
许多植物长久以来一直作为中药材使用, 近来研究发现它们含有各种抗氧化成分, 大致可归纳为:黄酮类、花青甙、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类和其他类。我国的植物资源, 位居世界第三, 充分利用资源, 将天然原料直接加入食品中, 并研究天然抗氧化剂的抗氧化性能是众望所归。众所周知, 从茶叶中提取的茶多酚具有较强的抗氧化活性, 常喝绿茶可以起到延缓衰老的作用。还有抗坏血酸 (VC) 、维生素E也能起到抗氧化的作用。因此, 从植物中提取抗氧化物质, 找到安全、经济的抗氧化物有很重要的研究价值。
目前, 国内外对中草药抗氧化性的研究很多, 本文以相关文献的记载, 选用大黄、红景天、甘草、绞股蓝、菊花和田七这6种中草药为研究对象, 来分别研究其水提液和醇提液对油脂的抗氧化作用。通过对6种中草药水提液和醇提液对油脂的抗氧化活性的测定, 将提取的有效成分根据一定的比例加入猪油中, 每天定时测定油脂的过氧化值, 研究其作用效果, 并与VC的抗氧化活性进行了比较。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料
药品:大黄、红景天、甘草、绞股蓝、菊花和田七, 西安怡康大药房;抗坏血酸 (VC) , 天津市河东区红岩试剂厂;猪油, 市售猪板油熬制。
试剂:硫代硫酸钠, 分析纯, 西安化学试剂厂;碘化钾, 分析纯, 西安富力化学厂;可溶性淀粉, 分析纯, 西安延河化工厂;冰乙酸, 分析纯, 天津市天大化工试验厂;无水乙醇, 分析纯, 天津市红岩化学试剂厂。
1.2 仪器
YP202N电子天平, 上海精密科学仪器有限公司;HH-2数显恒温水浴锅, 常州国华电器有限公司;超声波清洗机, 宁波新芝生物科技股份有限公司;80-2B型离心机, 上海安亭科学仪器厂制造;粉碎机, 北京中兴伟业仪器有限公司;干燥箱, 中国重庆试验设备厂制造。
1.3 试验方法
1.3.1 油脂过氧化值 (POV值) 的测定
采用GB/T 5538-2005测定。在15mL乙酸和10mL异辛烷溶液中溶解试样2.0g, 用0.5mL的饱和碘化钾与试样反应, 然后立即加入30mL蒸馏水, 反应完成后加0.5%的淀粉指示剂1.5mL, 用0.002mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定试样, 用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定空白样。
式中:V1为用于测定试样消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积, mL;V0为用于空白的硫代硫酸钠标准溶液的体积, mL;C为硫代硫酸钠的滴定浓度, mol/L;m为试样的质量, g。
1.3.2 溶液的配制
(1) 硫代硫酸钠溶液的配制。配制0.10mol/L Na2S2O3溶液500mL:称取12.4g Na2S2O3·5H2O, 溶于500mL新煮沸的冷蒸馏水中, 保存于棕色瓶中, 放置一周后进行标定。标定后, 稀释至所需浓度 (0.01和0.002mol/L) 。
(2) 重铬酸钾标准溶液的配制。配制0.017mol/L K2Cr2O7标准溶液:精确称取2.499g K2Cr2O7固体于小烧杯中, 加入30mL蒸馏水溶解, 后定容至500mL。
(3) Na2S2O3溶液的标定。用移液管吸取20mL K2Cr2O7标准溶液于250mL锥形瓶中, 加5mL, 6mol/L HCl, 加入10mL, 100g/L KI。摇匀后盖上表面皿, 于暗处放置5min。然后用100mL水稀释, 用Na2S2O3溶液滴定至浅黄绿色后加入2mL淀粉指示剂, 继续滴定至溶液蓝色消失并变为绿色即为终点 (平行测定3次, 求平均数) 。
1.3.3 提取方法 (水提取和醇提取)
将中草药置于干燥箱中, 60℃干燥8h, 干燥后的药材置于粉碎机中粉碎, 保证粉末均匀一致, 备用。
(1) 水提取。采用水煎法, 称取药品5.0g, 加水50mL, 浸泡30min后文火煎煮, 煮沸后用4层纱布过滤后取水提取液, 残渣再加水20mL, 按上述方法进行再次操作后过滤提取液合并2次提取液, 文火蒸发浓缩后定容到25mL容量瓶。
(2) 醇提取。将药品称取5.0g, 取50mL无水乙醇放入超声波清洗机中超声振荡提取药品30min, 过滤除杂, 3 500r/min离心, 取清液为中药提取液, 置电热恒温水浴锅中, 蒸发回收大部分溶剂后定溶至25mL容量瓶。
1.3.4 试验方法
(1) 水提取。称取20g猪油各8份, 置于8个100mL具塞锥形瓶中, 其中1份加入5mL水作为空白, 其余6份分别添加各药品的水提取液5mL, 另1份加入5mL 0.1%的VC, 充分振荡, 置于65℃恒温干燥箱中, 在每隔24h做POV测定。
(2) 醇提取。称取20g猪油各8份, 置于8个100mL具塞锥形瓶中, 其中1份加入5mL无水乙醇作为空白, 其余6份分别添加各药品的醇提取液5mL, 另1份加入5mL 0.1%的VC, 充分振荡, 置于65℃恒温干燥箱中, 在每隔24h做POV测定。
1.3.5 测定方法
(1) 试样测定。将试样从干燥箱中取出, 称取油样约2g, 放入碘量瓶中。将10mL异辛烷溶液加入碘量瓶中, 盖上塞子摇动至样品溶解, 再加入15mL冰乙酸和0.5mL的饱和碘化钾溶液, 迅速盖好瓶塞, 混匀溶液1min, 在15~20℃避光静置5min。
加入30mL蒸馏水, 以0.5%淀粉溶液为指示剂, 用0.002mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定试样, 用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定空白样。
(2) 空白试验。将10mL异辛烷和15mL冰乙酸加入碘量瓶中, 再加入0.5mL的饱和碘化钾溶液, 迅速盖好瓶塞, 混匀溶液1min, 在15~20℃避光静置5min。
加入30mL蒸馏水, 以0.5%淀粉溶液为指示剂, 用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定空白。当空白试验消耗0.01mol/L硫代硫酸钠标溶液超过0.1mL, 应更换不纯的Na2S2O3试剂, 重新对样品进行测定。
2 结果与分析
2.1 水提取液对油脂的抗氧化研究
由图1可知:空白的POV值大于各个中草药, 说明这6种中草药的水提取液均对猪油有一定的抗氧化性。
各个试样的过氧化值交替上升。大黄和红景天的曲线变化最平缓, 它们的放置时间越长, 其抗氧化效果越优于VC, 说明它们抑制游离脂肪酸能力强其抗氧化活性稳定;菊花的曲线波动最大, 说明它抑制游离脂肪酸能力较弱, 抗氧化活性最不稳定。绞股蓝、甘草和田七的抗氧化性相比较差一些。
观察图1还可以发现, 大黄和红景天的提取物的抗氧化性在前4天时很好, 到第5天以后, 曲线上升幅度变大, 可能是由于蒽类衍生物、苷类化合物、酚类化合物及挥发油类等成分不同程度的被氧化和破坏, 导致抗氧化性下降。而绞股蓝、甘草和田七的曲线显示, 随时间的延长其过氧化值持续大幅升高, 可能是由于受空气, 光和热的作用与影响, 使三萜类化合物、黄铜类化合物和甾醇类等成分不同程度的被氧化和破坏, 导致抗氧化性下降。在试验开始阶段, 菊花提取物的抗氧化性较好, POV值很低, 到了五六天之后, 曲线则上升较快, POV值明显上升。可能是5天后, 受环境影响, 黄铜类化合物、菊甙和挥发油类等成分不同程度的被氧化和破坏, 导致抗氧化性下降。
它们的抗氧化能力顺序为:大黄>红景天>田七>甘草>绞股蓝>菊花。由此可见, 大黄和红景天的水提取物在短时间内有良好的抗氧化活性, 可以与VC相媲美。
2.2 醇提取液对油脂的抗氧化研究
由图2可知:空白的POV值大于各个中草药, 说明这6种中草药的醇提取液均对猪油有一定的抗氧化性。
各个试样的过氧化值交替上升。红景天、大黄和甘草的抗氧化性很好, 曲线变化最平缓, 它们的放置时间越长, 其抗氧化效果越优于VC, 说明它们抑制游离脂肪酸能力强其抗氧化活性稳定;田七的抗氧化性最差, 曲线变化波动较大。这6种中草药醇提取物的抗氧化性曲线均随时间的延长而不断上升。
前4天, VC的曲线处于最下方, 说明VC的抗氧化活性最好。从第4天以后, 大黄、红景天和甘草的曲线处于VC曲线的下方, 说明这3种中草药提取物的抗氧化性随时间的延长, 其抗氧化效果越优于VC。田七、菊花和绞股蓝提取物的曲线上升较快, 可能是由于受空气、光和热的作用和影响, 使三萜类化合物、黄铜类化合物、甾醇类和皂甙等成分不同程度的被氧化和破坏, 导致抗氧化性下降。
它们的抗氧化能力顺序为:大黄>甘草>红景天>绞股蓝>菊花>田七。由此可见, 大黄、甘草和红景天醇提取物的抗氧化性较好, 但是, 随时间的推移, 这6种中草药的抗氧化活性, 都受环境的影响而大幅下降。
3 讨论
3.1 油脂的氧化机理
油脂在储存或使用日久后受到空气中的氧气、水分、酶、金属离子和日照等因素影响会发生自动氧化, 油脂以RH表示不饱和成分, 受活性氧的作用生成游离基R·, 此游离基与氧分子作用, 生成过氧游离基ROO·, 过氧游离基在夺去不饱和油脂中氢后, 生成氢过氧化合物ROOH。氢过氧化物再受活性氧作用, 生成几种游离基。当游离基相互结合成各种聚合物时, 反应便告停止。
反应式为:
油脂发生过氧化反应从其化学本质来讲, 主要是油脂中含有不饱和脂肪酸, 尤其是亚油酸和亚麻酸上含有1, 4—戊二烯结构是他们对氧化的敏感性远远超过油酸中丙烯体系, 油脂一旦发生过氧化反应, 会产生大量的氧自由基, 并形成链式反应, 加速油脂的氧化酸败。
3.2 抗氧化剂的作用机理
其一是借助还原反应, 降低油脂内部及其周围氧的含量;其二是释放出氢离子, 使油脂在自动氧化过程中产生的过氧化物分解破坏, 从而不能产生醛或酮酸等产物;其三是与油脂氧化产生的过氧化物结合, 使油脂在自动氧化过程中的连锁反应中断, 从而阻止氧化过程进行;其四是阻止或减弱氧化酶类的活动, 阻止延缓了油脂的氧化。
3.3 中草药的抗油脂氧化机理
抗脂质过氧化, 维持细胞膜稳定性细胞中自由基对细胞的直接损伤作用主要是攻击细胞膜上的脂质, 自由基先和细胞膜上的磷脂或低密度脂蛋白 (LDL) 的不饱和脂肪酸反应, 该反应产物又攻击附近的不饱和脂肪酸, 最终导致链式反应的产生。过氧化程度多以其最终产物中丙二醛 (MDA) 为评价指标。近来有研究认为, 部分黄酮类化合物以氢键形式与细胞膜结合, 保护细胞膜上的不饱和键不与自由基接触, 抗脂质过氧化。
4 结论
食用油脂长时间储藏过程中, 由于光、热、空气中的氧以及油脂中的水和酶的作用常会发生变质腐败的复杂变化, 在氧化过程中生成氧化物和氢过氧化物等中间产物, 它们很容易分解而产生挥发性和非挥发性脂肪酸、醛、酮和醇。为防止氧化可添加一些抗氧化剂。
大黄、红景天、甘草、绞股蓝、菊花和田七的提取物与VC均为天然抗氧化剂, 都具有良好的抗氧化活性, 相比于一些人工合成的抗氧化剂, 更具有安全、无毒的优势。
在试验过程中, 利用水煮法和醇提法对中草药中的抗氧化物进行提取, 选取水和无水乙醇作为溶剂具有安全、无污染和廉价等优点。