小儿肺热平颗粒质控方法的研究

2023-01-21

小儿肺热平颗粒是由国家中药部颁标准第8册小儿肺热平胶囊经剂型改进制成的新药, 本品临床应用多年, 疗效确切, 主治清热化痰、止咳平喘、镇惊开窍。用于小儿肺热喘咳, 吐痰黄稠, 高热烦渴, 神昏谵妄, 抽搐, 苔黄腻者。为控制产品质量, 采用显微鉴别、薄层色谱法对方中冰片、地龙、黄芩及黄连进行鉴别。采用高效液相色谱法选择黄连中盐酸小檗碱作为指标性成份进行含量测定。具有简便、快速、准确、专属性强等特点, 可有效控制产品的质量。

1 样品来源、试药及仪器

小儿肺热平颗粒 (批号:2005 0815、20050817、20050819) 是由沈阳科瑞斯德医药科技有限公司提供;地龙对照药材 (批号为:0987-200204) ;黄连对照药材 (批号为:120913-200507) ;盐酸小檗碱对照品 (批号为:110712-200306) ;黄芩对照药材 (批号为:120955-200305) ;黄芩苷对照品 (批号为:110715-200503) 均由中国药品生物制品检定所提供。硅胶G (青岛海洋化工厂生产) ;试剂除乙腈色谱纯外均为分析纯;仪器:高效液相色谱仪 (LC—10ATVP型输液泵, 岛津。ANASTAR色谱数据处理系统) , 电子分析天平 (Sart.BP211D80g/0.01mg) 。

2 鉴别

2.1 冰片

取本品内容物少许, 进行微量升华, 升华物立即置显微镜下观察, 呈不定形的无色片状结晶。

2.2 地龙

取本品8g, 加氯仿30ml, 超声处理30分钟, 滤过, 滤液浓缩至1ml, 作为供试品试液。另取地龙对照药材0.5g, 同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5μl~10μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上, 以苯-乙酸乙酯 (9∶1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外灯 (365nm) 下检视。供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点。

2.3 黄芩

取本品8g, 加甲醇20ml, 超声处理30分钟, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇1ml溶解, 作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g, 同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品, 加甲醇制成每1ml含1mg的溶液, 作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各5μl, 分别点于同一以含4%乙酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上, 以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 (5∶3∶1∶1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以1%三氯化铁乙醇溶液显色。供试品色谱中, 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点。

2.4 黄连

取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液, 作为对照品溶液。取黄连对照药材50mg, 加甲醇5ml, 超声处理20分钟, 滤过, 滤液补足5ml, 作为对照药材溶液。吸取【鉴别】 (3) 项下供试品溶液及上述两种溶液各1μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上, 以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨试液 (12∶6∶3∶3∶1) 为展开剂, 在氨蒸气预饱和15分钟后展开, 取出, 晾干, 置紫外灯下 (365nm) 下检视。供试品色谱中, 分别在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点。

3 含量测定

3.1 色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液 (40∶60) 为流动相;检测波长为345m。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000。

3.2 溶液的配制

精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量, 加甲醇制成每1ml含20μg的溶液, 即得对照品溶液。

取小儿肺热平颗粒6袋, 混合均匀, 取1.0g, 精密称定, 置25ml量瓶中, 加盐酸-甲醇 (1∶100) 溶液15ml, 超声处理 (300w, 25KHz) 20分钟, 取出, 放冷, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得供试品溶液。

另按处方制备缺黄连的小儿肺热平颗粒, 同法制得阴性样品溶液, 备用。

3.3 干扰性试验

吸取流动相、盐酸-甲醇 (1∶100) 溶液各20μl注入液相色谱仪, 结果流动相, 盐酸-甲醇 (1∶100) 溶液均不干扰本品的含量测定。

3.4 专属性试验

取黄连阴性样品溶液。精密吸取20μl, 注入液相色谱仪, 结果黄连阴性对照不干扰本品含量测定。

3.5 精密度试验

取对照品溶液20μl注入液相色谱仪, 连续进样6次, 峰面积的RSD=0.19%。

3.6 供试品溶液稳定性试验

取供试品溶液室温自然光下放置8小时, 分别于0、2、4、6、8小时进样, 峰面积的RSD=1.08%, 表明供试品溶液在8小时内稳定性良好。

3.7 重复性试验

取样品五份, 每份1.0g, 精密称定, 按“2”项下方法制备供试品溶液, 分别精密吸取各溶液20μl进样, 记录峰面积, RSD=0.61%。

3.8 样品含量测定

取本品1.0g, 精密称定, 置25ml量瓶中, 加盐酸-甲醇 (1∶100) 溶液15ml, 超声处理 (300w, 25kHz) 20分钟, 取出, 放冷, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 作为供试品溶液, 精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量, 加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱40μg的溶液, 做为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl, 注入液相色谱仪, 测定, 即得。结果三批样品含量分别为2.82mg、2.92mg、2.84mg。

4 结语

本文在小儿肺热平胶囊部颁药品标准的基础上增加了地龙、黄芩及黄连的鉴别、黄连中盐酸小檗碱的含量, 文中方法简便、快速、准确、专属性强等特点, 可有效控制小儿肺热平颗粒生产、使用过程中产品的质量。

摘要：目的建立小儿肺热平颗粒的质量标准。方法采用显微鉴别、薄层色谱法对方中冰片、地龙、黄芩及黄连进行鉴别。采用高效液相色谱法选择黄连中盐酸小檗碱作为指标性成份进行含量测定。结果采用显微鉴别、薄层色谱法能较好的鉴别出方中冰片、地龙、黄芩及黄连;高效液相色谱法能较好检测出方中黄连中盐酸小檗碱的含量, 盐酸小檗碱在4～36μg呈良好的线性关系, r=0.9996, 平均加样回收率为100.26%, RSD为0.34%。结论此方法简单可行, 能快速准确地对小儿肺热平颗粒进行鉴别和含量测定。

关键词：小儿肺热平颗粒,薄层色谱法,高效液相色谱法