红霉素的自述

红霉素的自述

红霉素的自述 篇1

关键词：红霉素,含量,测定

红霉素是由红霉素链霉菌 (Streptomyces erythreus) 所产生的大环内酯 (macrolide) 系的代表性的抗菌素, 抗菌谱与青霉素近似。红霉素对葡萄球菌、化脓性链球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、布氏杆菌、军团菌、绿色链球菌、肺炎链球菌等均有抑制作用。现有的红霉素测定方法大多具有峰拖尾严重, 且流动相盐的浓度高, 易损坏色谱等缺点[1]。文采用高效液相法对红霉素中的红霉素A的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-100 (梯度配置) 高效液相色谱仪 (上海伍丰科学仪器有限公司) ;Phenomenex通用型保护柱 (广州菲罗门科学仪器有限公司) ;JULABO实验室温度控制器 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ;B8510E超声波清洗器 (上海恒奇仪器仪表有限公司) ;TU-1901双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) ;瑞士梅特勒-托利多MS精密天平 (梅特勒-托利多中国公司) 。

1.2 色谱柱

奥泰公司C18色谱柱 (220mm×4.6mm, 5μm) 。

1.3 对照品

红霉素A。

1.4 试剂

甲醇、乙腈为色谱纯;水为纯化水, 其它试剂均为分析纯。

1.5 试药

红霉素。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下。流动相:0.067m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.01) 为流动相, 检测波长:215nm, 流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按红霉素A峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取红霉素A对照品适量, 置容量瓶中, 加流动相制成每1ml含0.3mg的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的供试品精密称定, 研细, 精密称取 (相当于红霉素A3mg) , 置具塞锥形瓶中, 精密加入流动相10ml, 密塞, 精密称定重量, 超声处理 (240W, 40k Hz) 30min, 放冷, 精密称定, 用流动相补足重量, 摇匀, 滤过。取续滤液, 即得。

2.4 专属性试验

依照处方取除红霉素A, 按样品制备工艺制成阴性对照样品, 照供试品溶液的制备方法制成阴性液, 依上述方法测定, 结果在红霉素A出峰处阴性液无色谱峰, 结果阴性试验没有干扰, 表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验

精密称取红霉素A对照品适量, 加流动相使溶解, 制成浓度为0.3mg·m L-1的供试品溶液。照上述色谱条件, 精密吸取10μl, 连续进样6次, 记录峰面积。结果, RSD=0.85%, 表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察

精密称取适量红霉素A对照品, 加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL, 注人液相色谱仪, 依照2.1项下的色谱条件测定, 记录色谱峰。以峰面积 (Y) 为纵坐标, 对照品进样量 (X) 为横坐标, 绘制标准曲线。结果表明, 红霉素A在0.5~5.5mg·m L-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验

称取同一批的红霉素样品6份, 按测定方法项下的方法制备供试品溶液, 测定含量, 并计算样品的RSD值, 结果RSD为0.98%, 结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验

取对照品适量, 精密称取已知纯度的原料9份, 置量瓶中, 分别精密加入红霉素对照品, 按项下方法制备成80%100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验, 计算回收率为99.3%, RSD为0.86%。

2.9 最低检出限与定量

采用2.1项下色谱条件, 对样品测定, 当信噪比为10时, 定量限为2.5ng;当信噪比为3时, 最低检出限为0.6ng。

2.1 0 样品稳定性试验

取同一批红霉素样品, 分别制备供试品和对照品, 将供试品置室温下放置, 分别于第0、1、2、3、4、5小时, 精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中, 记录色谱图。测定红霉素A对照品和样品RSD分别为0.73, 0.89%。结果表明供试品和样品5小时内稳定。

2.1 1 样品含量测定

依照上述含量测定方法, 再按外标法以峰面积计算样品的含量, 结果三批样品的含量分别为标示量的99.9%、99.5%、100.2%。

3 讨论

3.1 流动相的选择

选取流动相中缓冲液浓度、三乙胺含量、乙腈用量为影响因素, 以红霉素色谱峰拖尾因子 (T1) 、保留时间 (t R) 、半峰宽 (W1/2) 及理论板数 (N) 为考察指标。分别考察0.067m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (50∶50:0.01) , 0.067m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.02) , 0.08m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.01) , 0.067m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.01) 不同比例的流动相, 结果以0.067m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.01) 为流动相为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用0.067m·l·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.01) 为流动相为流动相。

3.2 检测波长的选择

制备红霉素A对照品稀释液照紫外-可见分光光度法 (中国药典2010版一部附录ⅤA) , 于190~900nm波长范围内进行全波长光谱扫描, 记录吸收光谱。在215nm处有最大吸收峰, 故选用215nm为检测波长[2]。

红霉素分子量较大致色谱峰展宽, 因此, 国外多选用耐高温且p H范围宽的苯乙烯二乙烯苯共聚物为填料, 国内较少使用。本实验采用碳十八色谱柱分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好, 可用于红霉素中红霉素A的含量测定。

参考文献

[1]European Pharmacopoeia 6.0[S].Strasbourg:European directo-ratefor the quality of medicines, 2007:1801-1803.