药物化学实验论文提纲

论文题目：基于中药血清药物化学方法的防己黄芪汤药效物质基础研究

摘要：目的本实验以经方防己黄芪汤为研究对象,通过比较防己黄芪汤水提取物及其不同萃取部位和不同浓度乙醇提取物的抗炎镇痛作用,确定防己黄芪汤供试液的制备方法;建立防己黄芪汤全方与单味药材的HPLC-DAD指纹图谱,确定全方主要的化学成分及其药味归属;建立防己黄芪汤含药血清全方和单味药的HPLC-DAD指纹图谱,初步阐明防己黄芪汤血清中各成分的来源;通过UPLC-MS检测防己黄芪汤全方的化学成分及血清药物化学成分,确定防己黄芪汤的血液移行成分,初步阐明其抗风湿作用的药效物质基础。方法1.本实验分别采用水和20%、50%、75%、95%乙醇作为提取溶媒,并将水提取物用不同有机溶媒萃取得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇不同部位,比较其抗炎镇痛作用。以大鼠足肿胀度作为抗炎评定指标,热板法和醋酸扭体法规定时间内活动次数作为镇痛评定指标,采用SPSS19.0软件包进行统计分析,确定防己黄芪汤供试液的制备方法。2.采用高效液相色谱法,通过对流动相、检测波长、柱温等因素考察,建立防己黄芪汤全方及单味药的HPLC指纹图谱,确定共有峰的个数,利用国家药典委颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004 A版）》的“相关系数”法和“夹角余弦”法计算指纹图谱的相似度,对精密度、稳定性、重复性进行方法学考察,通过全方及单味药指纹图谱的比对,初步确定防己黄芪汤全方中的化学成分并对其进行药味归属。3.通过对血清样品的制备方法,血清处理方法、采血时间和天数的考察,确定出血清的处理方法为:SD大鼠,灌胃给药4.2g/mL（2mL/100g）,连续灌胃三天,每天2次,最后一次灌胃1h后腹主动脉取血,离心得血清。加入3倍量乙腈沉淀蛋白,取上清液用氮吹仪吹干溶剂,再用流动相复溶。建立防己黄芪汤血清中全方和单味药的HPLC指纹图谱,利用所建立的指纹图谱对大鼠含药血清进行入血成分分析。比较提取液、空白血清、含药血清的HPLC色谱图,初步确定全方中的化学成分并对其进行药味归属。4.利用UPLC-MS技术对防己黄芪汤进行血清药物化学研究,分别提取m/z在282-284、416-418、580-625的正离子、m/z在313-345、430-487、609-619、623-624、845-850、983-985的负离子,找出其中的血液移行成分以及代谢产物,阐明防己黄芪汤的入血成分及其抗风湿的药效物质基础。结果1.抗炎实验显示:75%、95%乙醇提取物对大鼠致炎30min后足肿胀度效果抑制作用更好。镇痛实验显示:水提取物、50%和75%乙醇提取物对热板所致小鼠舔足反应最好,水提取物和75%乙醇提取物对醋酸诱发的小鼠的扭体反应略好。综上所述:75%乙醇提取物效果最好。2.建立了防己黄芪汤全方和单味药提取液的HPLC-DAD指纹图谱,确定了28个共有峰,利用“相关系数法”和“夹角余弦法”计算指纹图谱的相似度,结果均大于0.90,并对共有峰进行了归属,5、6、7（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、10、12、14（.芒柄花素葡萄糖苷）、17（毛蕊异黄酮）、18、21（芒柄花素）、24号峰来源于黄芪,2、8、9（甘草苷）、11、13、15（异甘草苷）、16（甘草素）、19、20、22、23（甘草酸）号峰来源于甘草,25、27（防己诺林碱）、28（粉防己碱）号峰来源于防己。1、3、4、26未找见其归属,可能为新产生成分。白术单味药材的指纹图谱色谱峰峰形较好,防己黄芪汤全方提取物的指纹图谱色谱峰不明显。3.建立了防己黄芪汤含药血清全方和单味药的HPLC-DAD指纹图谱,检测到防己黄芪汤指纹图谱中19个共有峰,其中1、2、5、6（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、9号峰来源于空白血清,7、8、10、12、13号峰来源于黄芪,3、4、14、15号峰来源于甘草,17、18（防己诺林碱）、19（粉防己碱）号峰来源于防己,11、16在单味药材血清中未见,可能为代谢产物。4.利用UPLC-MS技术对防己黄芪汤进行血清药物化学研究。到目前为止,检测到防己黄芪汤提取物中30个化学成分,并鉴定出其中16个化学成分,分别是山奈酚-3-O-芸香糖苷（Kaempferol-3-O-rutinoside）、木兰剑毒碱（Magnocurarine）、甘草苷（Liquiritin）、毛蕊异黄酮-7-O-D-葡萄糖苷（Calycosin-7-O-D-glucoside）、轮环藤酚碱（phellodendrine）、芦丁（Rutin）、汉黄芪素（Wogonin qisu）、防己诺林碱（Fangchinoline）、芒柄花苷（Ononin）、异甘草苷（Isoliquiritin）、粉防己碱（Tetrandrine）、9,10二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D葡萄糖苷（9,10-Dimethoxyptercarpan-3-O-β-D-glucopyranoside）、毛蕊异黄酮（Calycosin）、甘草皂苷A3（LicoRicesaponine A3）、甘草酸（Glycyrrhizic acid）、黄芪皂苷Ⅱ（Astragaloside II）。大鼠含药血清中检测到21个化学成分,其中11个来自于防己黄芪汤,并鉴定出其中10个化学成分,分别为山奈酚-3-O-芸香糖苷（Kaempferol-3-O-rutinoside）、甘草苷（Liquiritin）、毛蕊异黄酮-7-O-D-葡萄糖苷（Calycosin-7-O-D-glucoside）、轮环藤酚碱（phellodendrine）、汉黄芪素（Wogonin qisu）、防己诺林碱（Fangchinoline）、异甘草苷（Isoliquiritin）、粉防己碱（Tetrandrine）、甘草皂苷A3（LicoRicesaponine A3）、黄芪皂苷Ⅱ（Astragaloside II）。另外10个可能为代谢产物。结论1.本实验确立了防己黄芪汤供试液的制备方法为75%乙醇回流提取2次,每次2小时。2.建立了防己黄芪汤全方和单味药的HPLC-DAD指纹图谱,该方法重复性好、稳定、可靠;并对指纹图谱中28个共有峰进行归属,其中10个来自黄芪,11个来自甘草,3个来自于防己,4个可能为新产生的成分。3.建立了防己黄芪汤全方和单味药血清的HPLC-DAD指纹图谱,检测到防己黄芪汤含药血清有19个共有峰,其中5个来源于空白血清,5个来源于黄芪,4个来源于甘草,3个来源于防己,2个可能为代谢产物。4.利用UPLC-MS技术对防己黄芪汤进行血清药物化学研究。检测到防己黄芪汤提取液中30个化学成分,并推测出其中16个化学成分;大鼠含药血清中检测到21个化学成分,其中11个来自于防己黄芪汤,并推测出其中10个化学成分。另外10个成分可能为代谢产物。

关键词：防己黄芪汤;血清药物化学;抗炎镇痛;HPLC;UPLC-MS;指纹图谱

学科专业：中药学

中文摘要

ABSTRACT

英文缩略词

前言

第一章 防己黄芪汤水提物与醇提物抗炎镇痛作用比较

1.实验材料

1.1 实验仪器

1.2 实验药材与试剂

1.3 实验动物

2.实验方法

2.1 防己黄芪汤供试液的制备

2.2 抗炎实验

2.3 镇痛实验

2.4 统计学方法

3.实验结果

3.1 抗炎实验结果

3.2 镇痛实验结果

第二章 防己黄芪汤全方及其单味药HPLC-DAD分析研究

1.实验材料

1.1 实验仪器

1.2 实验试剂

1.3 对照品

2.实验方法

2.1 色谱条件

2.2 流动相的选择

2.3 对照品溶液的制备

2.4 供试品溶液的制备

3.方法学考察

3.1 精密度考察

3.2 稳定性考察

3.3 重复性考察

3.4 数据处理

4.方法学考察结果

4.1 精密度实验

4.2 稳定性试验

4.3 重复性试验

5.指纹图谱的测定及技术参数

5.1 指纹图谱的测定

5.2 参照峰的选择

5.3 共有指纹峰的标定及均值相似度的计算

5.4 指纹图谱各峰来源归属

第三章 防己黄芪汤含药血清HPLC—DAD分析研究

1.实验材料

1.1 实验仪器

1.2 实验试剂

1.3 实验动物

2.实验方法

2.1 色谱条件

2.2 防己黄芪汤供试液的制备

2.3 空白血清及含药血清的制备

2.4 血清样品预处理方法考察

2.5 血清样品采血时间和给药天数的确定

2.6 血清样品的采取及处理

2.7 样品分析

3.实验结果

3.1 血清样品预处理方法考察结果

3.2 血清样品采血时间和给药天数考察结果

3.3 防己黄芪汤中血清成分标定

3.4 移行成分来源归属

第四章 防己黄芪汤及其含药血清UPLC-MS分析研究

1.实验材料

1.1 实验仪器

1.2 实验试剂

1.3 实验动物

2.实验方法

2.1 分析条件

2.2 对照品溶液制备

2.3 供试品溶液制备

3.实验结果

结论

讨论

参考文献

附录 综述

参考文献

致谢