生化分离技术笔记（通用5篇）
篇1：生化分离技术笔记
简答题
1、凝胶色谱原理：
小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。
2、在离子交换操作色谱中，怎样选择离子交换树脂？
对阴阳离子交换树脂的选择:正电荷选择阳离子交换树脂，负电荷选择阴离子交换树脂;离子交换树脂强弱的选择:较强的酸性或碱性，选用弱酸性或弱碱性树脂；对离子交换树脂离子型的选择：根据分离的目的，弱酸或弱碱性树脂不使用H+或OH-型。色谱操作中为何要进行平衡？
3流速平衡：流速是柱层析法操作中的主要因素，流速的快慢直接影响分离效果，流速过快，混合物得不到完全分离，流速过慢，整体分离时间要延长，所以在分离时要保证稳定的液体环境，为保证分离物质运动的均一性以及好的吸附分离效果，要进行液体环境平衡。
4、生化分离技术的基本涵义及内容：
于由自然界天然生成的或由人工经微生物菌体发酵、动植物细胞培养及酶反应等各种生物工业生产过程获得的生物原料，经分离、纯化并精制其中目的成分，并最终使其成为产品的技术，也称为生物下游技术
5.生化分离的基本原理: 主要是依据离心力、分子大学（筛分）、浓度差、压力差、电荷效应、吸附作用、静电作用、亲和作用、疏水作用、溶解度、平衡分离等原理对物料或产物进行分离、纯化。不同的分离对象需要采用不同的分离方法才能有效地分离。
6.何为等电点沉析法：
蛋白质在等电点的溶解度最低，根据这一性质在溶剂中加入一定比例的有机溶剂，破坏液面的水化层和双电层，降低分子间斥力，加强了蛋白质分子间的疏水作用，使得蛋白质沉淀下来。
7．过饱和溶液形成的方法：
(1)热饱和溶液冷却，适用于溶解度随温度升高而增加的溶解系，化不大的体系，或随问题升高溶解度降低的体系同时，溶解度随温度的变化幅度要适中。（2）部分溶剂蒸发发，适用于溶解度随温度降低变（3）真空蒸发冷却法，使溶剂在真空下迅速蒸发，并结合绝热冷却，是结合冷却和部分溶剂蒸发的一种方法（4）化学反应结晶，加入反应物产生新物质，当该新物质的溶解度超过饱和溶解度时，即有晶体析出。
8．盐析的原理以及影响因素：
原理：
1、亲水性大于蛋白质破坏水化层
2、带电离子中和蛋白质表面电荷 影响因素：
1、盐离子浓度
2、生物分子种类
3、pH值
4、温度 9.有机溶剂沉析的原理:降低了溶质介电常数，使溶质之间的静电吸引力增加，从而出现聚集现象导致沉析；由于有机溶剂的水合作用，降低了自由水的浓度，降低了亲水溶质表面水化层的厚度，导致退税凝聚。10.影响电泳分离的主要因素：
a、大分子的性质
b、电场强度
c、溶液的pH d、溶液的离子强度
e、电渗
f、温度
G支持物的影响
名词解释：
絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在的条件下，在悬浮粒子间发生桥架作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。
凝聚：在电解质的作用下，破坏细胞菌体和蛋白质分子等胶体粒子的分散状态，从而使胶体粒子凝聚的过程。
反相色谱:固定相的极性低于流动相的极性，在这种层析过程中极性大分子比极性小的分子速度快而先从柱中流出
萃取：利用两个互不相溶的液相中各组分溶解度的不同从而达到分离目的。
膜的浓差极化：是指当溶剂透过膜。而溶质留在膜上，从而使膜面浓度增大，并高于主体中浓度，这种盐浓度在膜面增加的现象叫做浓差极化。膜分离：利用莫得选择性（孔径大小），以莫得两侧存在能量差作为推动力，由于溶液中各组分的迁移率不同而实现的一种分离技术。
离子交换：利用粒子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的组分分离，依据电荷差异，依靠库仑力吸附到树脂上，然后用合适的洗脱剂把吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。分配系数：在一定温度压力下，溶质分子分布在互不相容的溶剂；里，达到平衡后，它在两相的浓度为一个常数称为分配系数。
盐析：是利用不同物质在高浓度的盐溶液中溶解度的差异，向溶液中加入一定量的中性盐，使原溶质沉淀析出的分离技术
等电点沉淀：等电聚焦是利用蛋白质和氨基酸等两性电解质具有等电点，在等电点的pH值下蛋白质呈电中性，不发生泳动的特点进行电泳分离的方法。
化学渗透破壁法:有些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。
填空题：
1、发酵液常用固液分离的方法有（离心）和（过滤）
2、常用的蛋白质沉析的方法有（等电点沉淀）（盐析）（有机溶剂沉淀）
3、阳离子交换树脂按照活性基团分类可以分为（强酸型）（弱酸型）（中等强度），阴离子交换树脂按照活性基团分类可以分为（强碱型）（弱碱型）（中等强度）
4、常用的化学细胞破碎方法有(渗透冲击）（酶消化法）（增溶法）(脂溶法)（碱处理法）
5、在结晶操作中工业常用的起晶方法（自然起晶法）（刺激起晶法）（品种起晶法）
6、超临界流体的特点是与气体有相似的（扩散系数），与液体有相似的（密度）
7、电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其（等电点）的不同
8、晶体质量主要是指（晶体大小）（晶体纯度）（晶体形状）
9、根据分离机理的不同，吸附法可分为（吸附色谱）（离子交换色谱）（凝胶色谱）（分配色谱）（亲和色谱）
10、蛋白质等生物大分子在溶液中呈稳定的分散状态，其原因是（分子表面电荷）（水化层）
11、结晶包括三个过程（过饱和溶液的形成）（晶核的形成）（晶体的 生长）
12、物料中所含水分可分为（结合水）（自由水）
13、根据膜结构的不同，常用的膜壳分为（对称性膜）（非对称性膜）（复合膜）
14、萃取从机理上可分为（物理萃取）（化学萃取）
15、过饱和溶液的形成方法有（饱和溶液冷却）（部分溶剂蒸发）（解析）（化学反应结晶）
16、影响结晶的因素（溶质种类）（溶质浓度）（温度）（PH值）
选择题
1、在液膜分离的操作中（表面活性剂）主要起到稳定液膜的作用
2、离子交换法是利离子交换剂作为吸附剂，通过（静电作用）将溶液中带相反电荷的离子吸附在一起
3、用来提取产物的溶剂叫（萃取剂）
4、凝胶色谱分离的依据是（各物质分子大小的不同）
5、洗脱体积是（与该溶质保留时间相对应的流动相体积）
6、吸附色谱分离的依据（固定相对各物质的吸附力不同）
7、依据离子价或水合半径的不同，离子交换树脂对不同离子的亲和力不同，树脂对下列离子的亲和力顺序排列正确的是（Fe3+＞Ca2+＞Na+）
8、（亲和层析）是根据酶分子专一性结合的纯化方法
9、分子筛层析纯化酶是根据（酶分子大小，形状不同进行纯化）的方法
10、颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度(越小)
11、HPLC是（高效液相色谱）的简称
12、盐析沉淀蛋白质的原理（中和电荷，破坏水层）
13、适合小量细胞破碎的方法是（超声破碎法）
14、蛋白质分子量的测定可采用（凝胶层析法）
15、氨基酸的结晶纯化是根据氨基酸的（溶解度和等电点）性质
16、人血清蛋白的等电点为4.64，在ph为7的溶液当中将血清蛋白溶液通电，血清蛋白分子向（正极移动）
17、蛋白质具有两性性质的原因是（蛋白质分子有多个羧基和氨基）
18、凝胶色谱分离的依据是（各物质分子大小不同）
19、（硫酸基团）是强酸性阳离子交换树脂的活性交换基团
20、结晶过程中，溶质过饱和度的大小（不仅会影响晶核的形成速度，而且会影响晶体的长大速度）
篇2：生化分离技术笔记
生化分离技术课程教学改革的探索与实践
根据生物技术专业办学定位的特点,对生化分离技术课程的教学改革进行探索.在明确课程定位的基础上,对教学内容进行优化;采用多媒体、互联网等辅助教学手段进行理论教学;建立了多层次、多环节特色的`实验教学体系,在教学实践中取得了良好的效果.
作 者：赵世光 杨超英 薛正莲 魏明 钱森和 作者单位：安徽工程科技学院生物化学工程系,微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽芜湖,241000刊 名：安徽农学通报英文刊名：ANHUI AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN年，卷(期)：200915(23)分类号：G642关键词：生物技术 生化分离技术 教学改革
篇3：生化分离技术笔记
1 资料与方法
1.1 一般资料
样本来自本院门诊就诊病人, 时间为2008年9月至2009年2月, 随机抽样60例, 其中男性29例, 女性31例;年龄12岁～81岁, 平均年龄42岁。采用血清分离胶真空采血管 (检测组) 与普通促凝干燥管 (对照组) 进行随机采样, 每位患者的血样标本采集静脉血6ml, 一针两管。
1.2 方法
血液采集到分离胶储血管后, 立即轻轻反复倒置3至5次 (使血液与速凝剂充分混合) , 待血液完全凝固后, (一般约18min左右) 将分离胶管置于离心机内, 离心机转速保证在3500转/min左右, 开机5min, 即可获得所需之血清。并可将此管直接置入自动生化仪内, 同时作血脂、肾功能、肝功能、血糖、酶谱、离子系列共37项试验。并对结果进行统计分析。标本测定前, 进行定标并测定质控品, 结果均在控时, 再进行标本检测, 重复测定三次取平均值。一次性真空采血管采用湖南安信医用高分子材料有限公司型号为 (XJPT-100) 分离胶管。各种生化项目试剂分别使用上海科化和北京中生试剂盒 (试剂盒均在有效期内) 。
2 结果
检测组与对照组经统计学处理, 在UA、Cr、CK、α-HBD、LDH、TBIL、AKP项目上存在显著差异 (P<0.05) 。与普通管相比Cr、α-HBD、LDH结果分别上升11.0%, 11.1%, 8.7%, 。检测组与对照组在UA、Cr、α-HBD、LDH、Na、Cl项目上存在显著性差异 (P<0.05) 。检测组与对照组在CK、α-HBD、LDH、GPT、TP、Na项目上存在显著差异 (P<0.05) 。
3 讨论
近年来, 随着全自动生化分析仪的使用, 可直接用分离胶真空采血管采血, 沿用原管上机检测, 方便高效, 被广泛使用[2]。促凝管常用的促凝剂有硅石粉、硅碳素等, 多为白色或乳白色细软粉末, 几乎不溶于水, 适量加人血液后, 为凝血因子充分提供接触异物的活性表面, 激活凝血因子XⅠ和XⅡ, 启动吸血系统, 缩短凝血时间。血清分离胶是聚烯烃、聚酯、丙稀等材料组成的惰性半固体, 具有触变性, 其比重为1.05。在离心力的作用下, 其内网结构被破坏, 变成黏度低的液体。当离心力消失后, 又重新形成网状结构, 由于其比重介于血细胞 (1.08) 及血清 (1.02) 之间, 所以离心后的分离胶在血清及血块之间形成隔膜[3,4]。
生化检验目前已经成为临床医师诊断疾病、观察疗效、判断病情的发展和预后不可或缺的手段, 但是几乎每个实验室均存在着影响生化检验的各种因素。随着近年来自动化程度的不断提高, 各医院检验科先后引进了各种类型的自动化生化分析仪, 提高了临床生化分析的精密度, 同时检测方法学的改进和校准品质量的提高, 使分析的准确度有很大程度提高, 但分析过程之外的影响因素常被临床医生和检验工作者所忽视, 尤其是分析前的质量控制。分析前质控是临床生物化学实验的首要环节, 不恰当地收集标本, 不注意影响标本成分变化的各种因素, 常是导致实验不可靠的主要因素, 且又不容易被发现, 因而必须加以重视[5,6]。
本实验表明, 血清分离胶试管与普通促凝干燥管所分离的血清在用于临床生化项目检测时, 分离胶真空管对结果是有影响的。但是这些显著性差异并不意味着检测值相差很大, 而是由于分离胶管引起上述项目均升高或均降低或以升高 (降低) 为主。
参考文献
[1]江传慧, 肖振州, 陈秀, 等.含分离胶样本原管冻存血清的可行性初探[J].国外医学临床生物化学与检验学分册, 2005, 26 (12) :944-946.
[2]朱忠勇.推广真空采血管势在必行17.临床检验信息导报, 1997, 4 (4) :104.
[3]徐志军, 童巧彼.临床检脸标本的采集与送检[M].武汉湖北人民出版社, 2000, 40.
[4]王峰, 陈瑜.不同真空采血管对38项生化检验项目的可比性分析[J].浙江临床医学, 2008, 10 (lO) :1380-1381.
[5]孔丽蕊.影响检验结果客观因素的分析[J].检验医学与临床, 2007, 4 (9) :870-871.
篇4：生化分离技术笔记
【关键词】 血清分离胶；检验；生化指标
【中图分类号】R446.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）05-0164-02
以往临床中分离血清主要采取手工法，操作步骤多、烦琐，且工作量大，血块收缩时间较长，血清内常常悬浮小的凝丝或者蛋白凝块，进而会给生化自动分析仪的检查结果产生影响，导致出现取样不准确、堵塞采样针的情况，给样本检验结果准确性和测定速度产生影响。近年来，随着我国科学技术发展的不断进步，血清分离方法也在不断增多。研究显示[1]，应用分离胶真空采血管对血清进行分离，能够避免以上缺点。但目前临床关于血清分离胶对检验结果中生化指标产生的影响的报道较少。本组研究对在我院体检的健康体检者的血清分别应用常规分离法与血清分离胶分离法进行分离，对其给检验结果中生化指标产生的影响进行探讨，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年7月至2014年8月在我院体检的100例健康体检者作为研究对象，将其平均分为观察组与对照组，每组50例，其中观察组男35例，女15例，年龄最小21岁，最大48岁，平均年龄（32.3±3.4）岁；对照组：男36例，女14例，年龄最小22岁，最大49岁，平均年龄（32.5±3.6）岁；两组的性别、年龄等一般资料对比无统计学差异（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 检测仪器与试剂 检测仪器：应用迈瑞公司生产的BS800自动化生化分析仪；试剂：均使用迈瑞（深圳）公司生产的试剂，使用时严格按照试剂说明书。
1.2.2 检测方法 观察组：应用分离胶真空采血管采集血液，采集12h前，嘱咐患者禁食、禁水，且保证空腹，于清晨抽取患者2ml静脉血，将其放置于温室里进行离心血清分离，分离时间15min； 对照组：对照组体检者均应用普通采血管采集2ml静脉血液，将其放置于37℃水中，对血清进行分离，分离时间半小时。注意所使用的采血管要干燥、无杂质，不会给检验结果产生影响。且检测后，将两组研究对象分离的血清保存于温度低的室内，经过0h、24h、48h后再次进行检测，对比两组稳定性。
1.3 观察指标 检测后，对两组患者的葡萄糖（Glu）、碱性磷酸酶、Ca2+、K+、淀粉酶（AMY）、碱性磷酸酶（ALP）、磷酸肌酸激酶（CK）、总蛋白（TP）以及碱性磷酸酶（ALP）等指标水平进行对比。
1.4 统计学方法 对本组实验研究数据应用SPSS19.0统计学软件进行处理，所得计量资料使用（x[TX-*2]±s）表示，采取t检验，所得计数资料使用（%）表示，采取χ2检验，如两组数据间对比结果P<0.05，则表明两组数据差异具有统计学意义。
2 结果
观察组Glu值高于对照组（t=4.0234，P<0.05）；观察组AMY、CK值低于对照组（t=4.0132，P<0.05）；两组K+、Ca2+、TP以及ALP等指标检验结果对比（t=0.0127，P>0.05），具体数值见表1。
3 讨论
临床中，采血检测为其中的重要环节，应用普通玻璃采血管采血，检验结果会存在误差，在医学检验中不能快速得到数据，且数据具有不准确性。血清分离胶主要包括硅橡胶、疏水胶以及大分子碳氢化合物等成分。分离胶管内壁的促凝剂成分能够使血液快速凝固，减少血液凝固所需时间；且不需要将其放置水域内，在室温下放置15min，即能够使血样本凝固，然后按照每分钟3000r的速度离心5～10min，最后分离出血清。将分离样本划分为界面平整三层，分别为血清层、分离胶层以及血细胞层，每一层均有平整界面，特别是血清层比较清澈，不含有混杂物。应用血清分离胶进行分离样本时，不需要将血清吸至样本杯内，可直接对其冷藏保存，并应用全自动生化分析仪测定[2]。
本组研究中，对普通玻璃采血管采血和分离胶真空采血管采血的检验结果进行分析，结果显示，观察组Glu值为（5.27±0.67）mmol/L，高于对照组的（4.87±0.66）mmol/L（P<0.05），究其原因，可能由于普通玻璃采血管采血时，将试管放置于37℃水的温度内，且放置时间过长，
增多细胞利用时间，进而降低Glu含量；观察组AMY值为（49.19±12.69）U/L、CK值为（157.20±92.30）U/L，明显低于对照组的（63.40±13.90）U/L与（163.70±94.80）U/L（P<0.05），原因还需进一步研究；两组K+、Ca2+、TP以及ALP等指标检验结果对比（P>0.05）。
临床检验过程中，为加快检查速度，会使用抗凝剂，常用抗凝剂为肝素钠。检验中应用抗凝剂会给检查结果产生影响，并给血浆电解质含量产生干扰，进而不能获得准确检验结果。即使肝素锂影响较小，也会导致血清发生变化。因此，为保证检验结果准确性，检验过程中不建议应用抗凝剂。另外，应用采血管时，要具有厂家技术资料和实验结果，应用前首先进行实验对比，确保能够达到血清检验质量要求，并为临床提供可靠、准确的诊断依据。
综上所述，采血时应用血清分离胶，不会给检验结果产生较大影响，且能够增强血液稳定性，可为临床提供准确、可靠的诊断依据。
参考文献
[1]牛爱军，任爱琴，王开森，等.分离胶真空采血管在医学检验自动化流水线中应用[J].中国现代医学杂志，2013，23（12）：73-77.
[2]李新平.血液分离胶采血试管在临床检验中的应用效果[J].中国保健营养（上旬刊） ，2013，23（02）：963-964.
篇5：生化分离技术笔记
(一)山楂原花色素的提取
(二)原花色素的测定（盐酸-正丁醇法）
原理
原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。
生理功能：
1.最好的心脏保护剂。抵御引发心血管病的诱变因素的冲击。强化血管，有消肿化瘀的功效。减少毛细血管的阻力和改善渗透性，使细胞更容易吸收养分与排除废物。
2.高校抗氧化能力。清除氧自由基的能力比其他天然抗氧化剂如胡萝卜，维生素C和E，儿茶素等强很多。
3.产生组胺的抑制剂，减轻炎症。抗过敏，皮肤保健，抗衰老。
利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附，洗脱得到原花色素。
D101树脂是一种球状，非极性教练聚合物吸附剂，具有相当大的比表面积和适当的孔径，对皂苷类，黄酮类，生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取泪滴性质的有机物质。
原花色素的检测方法：
1.紫外分光光度法：利用原花色素在波长280nm处具有最大吸收的特点。该方法简便易行，但提取物成分多样，标准难定。
2.香草醛检测法：原花色素在酸性条件下，其组成单元儿茶素的A环上的羟基和香草醛发生缩合反应，在浓酸的作用下形成的产物变为有色的正离子。3.铁盐催化比色法 4.薄层层析法 5.HPLC法
6.HPLC-MS质谱法
试剂：
1)1mg/ml原花色素标准品（实验室提供）
精确称取10.0mg原花色素标准品用甲醇溶解，与10.0ml容量瓶中定容至刻度。2)Hcl-正丁醇（自配）
取5.0ml浓盐酸加入95.0ml正丁醇中混匀。
3)2%硫酸铁铵：称取2.0g硫酸铁铵溶于100.0ml2.0mol/LHCl中。
4)样品液：将上次实验收集的样品溶液用甲醇稀释至一定浓度（1.0~3.0mg/ml）。
操作
1.称取新鲜山楂10.0g，剪成细小块状，置于锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，沸水浴45min，间期混匀。冷却后加入20ml蒸馏水，抽滤，滤液备用。2.取一根层析柱（1.5×20cm），洗净，竖直装好，关闭出口，加入蒸馏水约1cm高，用烧杯取一定量已处理好的大孔吸附树脂D-101，搅匀，严管内壁缓慢加入，待柱底积约1cm高时，缓慢打开出口，继续装柱至高度15cm（液面高于树脂约3cm）。3.平衡：用蒸馏水洗2倍体积的柱床体积（约30ml），控制流速在1ml/min左右,至流出液pH显中性。
4.滤液上样(约2ml/min)。上完样后，先用蒸馏水洗2倍柱床体积洗脱（1ml/min 约30min），然后换60%乙醇进行洗脱，控制流速在1ml/min。待有红色液体流出时开始收集，直至收集液无红色为止。
5.将收集液用60%乙醇定容至100ml，留作测定。
注意事项：
1.实验前应检查层析柱是否完好，有无堵塞或漏气现象。