卵巢移植（精选七篇）
卵巢移植 篇1
1 相关因素
目前影响卵巢储备力下降的相关因素主要有年龄、吸烟、体质量指数 (BMI) 、遗传、免疫、药物、放化疗、手术、感染及心理因素等, 其中BMI是由多基因决定的复杂性状[2], 近年来BMI对女性生育力 (包括卵巢功能) 的影响日益受到重视, 而Sathya[3]研究后得出增加妇女的BMI不会对IVF结局有不良影响, 研究发现BMI和胰岛素抵抗在IVF-ET是否取得成功上起着重要作用[4]。
2 监测指标
2.1基础激素水平
血清雌二醇 (estradial, E2) 和卵泡刺激素 (follicle stimulating hormone, FSH) :月经周期第2~3天的基础FSH水平是预测卵巢储备能力和妊娠的一种好方法, 卵泡发育不良常伴有卵泡期早期FSH升高。而E2水平与FSH水平有关, E2水平上升可以通过负反馈机制使FSH水平降低, 结合月经周期第3天的E2, 可以更好地了解卵巢储备功能, 并能提供区分那些卵巢反应性低下但FSH水平却正常的一种好方法。目前就FSH和E2水平用于判断卵巢储备功能下降的阈值尚无统一标准, 有研究提出对<35岁年轻妇女, 10 IU/L<基础FSH水平<15 IU/L, 基础E2>50 pg/ml, 部分患者增加Gn剂量能增加获卵数, 表明卵巢储备功能轻度下降。国内有关报道称当FSH>8.78 IU/L时获卵数最低, 而受精率和优质胚胎率最高, 可能与卵泡质量并未降低有关。谭丽等[5]通过研究得出基础FSH水平可以预测卵巢的储备功能和取卵数目, 但不能预测IVF-ET的临床结局。
基础FSH/黄体生成素 (luteinising-hormone, LH) 比值可用于预测IVF结局及卵巢储备功能。在生理状态下, 随着卵巢储备功能的下降, FSH和LH均上升, 但是FSH较LH升高较早, 基础FSH/LH>2时, 常提示患者对超促排卵反应不良, 在临床研究中, FSH/LH>3.6往往被作为评价卵巢功能下降的标志点。
2.2细胞因子检测
2.2.1基础抑制素B (inhibin B, INHB)
INHB是转化生长因子β超家族成员, 由中小窦状卵泡分泌, 与生殖有关, 主要的生理功能是对FSH的分泌发挥极强的负反馈作用, 对卵泡的发育成熟有促进作用。对于卵巢储备功能下降的妇女, INH下降可能是由于卵巢中早期窦卵泡数减少, 随后募集阶段的卵泡簇减少所致。Jee等[6]检测正在接受IVF治疗的妇女血清INHB水平, 发现它与成熟及未成熟卵母细胞数均有相关性, 且与未成熟卵母细胞数的相关性更大, 测定INHB值为预测卵巢储备功能的理想指标, 目前此检查在临床上并未广泛应用。
2.2.2抗苗勒管激素
(anti-Müllerian hormone, AMH) AMH是转化生长因子β超家族成员之一, 是由睾丸未成熟支持细胞和卵巢颗粒细胞产生的一种糖蛋白, 主要功能是通过抑制产前和窦状卵泡征募参与了卵泡形成的调控[7]。Van Dis seldorp等[8]提出血清AMH是衡量女性卵巢储备的可靠因子Sowers等[9]通过研究首次提出由AMH水平高低而分成的“年轻卵巢”和“老化卵巢”的月经周期模式, 且在月经周期2~7具有显著的变化。研究提出月经模式的变化是反映卵巢储备力下降、卵巢功能老化的敏感指标[10], 因此, 能更好地评估与年龄相关的生育能力下降。Singer等[11]通过检测正在接受IVF促超排卵妇女发现血清AMH与FSH呈负相关, 表明当随机AMH=0.5μg/L时即可预测b FSH=12.1 IU/L。Nardo等[12]得出在预测外源性促性腺激素过度刺激和不良反应中, AMH比基础FSH和基础窦卵泡计数 (antral follicle count, AFC) 显示出了优越性。
AMH是最早的随年龄增长发生改变的激素, 因此能更好地评估年龄相关的卵巢储备功能的下降。对于排卵正常的女性, 月经第3天的AMH比FSH、E2、INHB能更好地反映卵巢的窦卵泡数、生殖能力的下降和预测绝经期的即将到来。而对于异常排卵的女性, 高浓度的AMH可能是引起PCOS患者不排卵的主要原因, 而Park等[13]研究后提出较高水平的AMH可以增加处于青春期的PCOS患者卵泡数目。近几年卵泡液AMH (FF AMH) 的研究日益受到重视, Mashiach等[14]通过研究后提出血清AMH水平是反映PCOS患者的IVF结局的定量指标而FF AMH水平则是定性指标, 因为FF AMH水平可以反映PCOS患者的胚胎质量, 而与卵子成熟度和受精率无关。同时, Aflatoonian等[15]也证实了FF AMH水平与胚胎质量呈正相关。因此, FF AMH是预测IVF结局的一个很好的指标。
Barad等[16]对在研究中提出AMH比FSH能更好地预测IVF的妊娠结局。但因影响IVF的妊娠结局因素诸多, 故这一观点目前存有歧义。La Marca等[17]研究后也提出了质疑, 即单一的AMH指标是否能预测临床妊娠结局, 其作用还有待于进一步探索研究, 但能肯定的是其能预测卵巢的反应性。
2.2.3翼状螺旋/叉头转录因子2 (forkhead transcrip-tionfactor2, FOXL2)
FOXL2能早期预测卵巢储备功能, 是评估卵巢储备功能的一项直接指标。它是第一个被认定在维持卵巢功能方面发挥重要作用的人类常染色体基因, 是由定位于3q23长2.7 kb的单外显子基因组成, 归属于翼状螺旋/叉头状转录因子超家族 (forkhead/winged helix transcription factor, FOX) 成员。FOXL2在未分化的颗粒细胞中高度表达, 是一个已知的对卵巢颗粒细胞发育起关键作用的编码转录因子的基因[18], 通过促进、调节颗粒细胞的增殖和分化, 伴随颗粒细胞的成熟, FOXL2表达逐渐降低, 同时在眼睑、胚胎中有特异性表达。一旦发生突变可致睑裂狭小、上睑下垂、赘皮倒转综合征 (blepharophimosis-ptosis-epicanthus inversussyndrome, BPES) , 分为两型, 其中Ⅰ型同时存在眼睑异常和卵巢衰竭。FOXL2表达水平低下可导致颗粒细胞有丝分裂受阻而致在超促排卵过程中卵巢对促排卵药物反应性降低, 最终导致募集的卵泡数量减少[19]。Kim等[20]确定FOXL2的表达与雌激素受体 (ER) -α之间存在一个蛋白融合位点以调节卵巢发育及卵巢功能。FOXL2突变可表现出POF, 有研究发现在正常的中国汉族POF患者中, FOXL2的突变并非常见原因, 其发病需要进一步探索。
2.3超声检查
2.3.1基础窦卵泡计数 (antral follicle count, AFC)
多项研究提出, 月经周期第3天在阴超下测得的AFC是一良好的预测卵巢反应性和IVF结局的指标, 且AFC是评价卵巢储备功能的首要指标。AFC≤7或年龄≥38岁且AFC≤10是在控制性卵巢刺激的不孕症妇女中降低卵巢储备的合适的阈值[21]。AFC和年龄的结合是预测IVF的卵巢反应性的最佳预因素, 因AFC主要影响的是卵母细胞的数量, 而年龄则是影响卵母细胞的质量。
2.3.2卵巢体积 (ovarian volume, OV) 测定
在IVF治疗中年龄和OV是卵母细胞获得数的独立预测因素。研究发现OV越大, 窦卵数及获卵数越多, 然而也有研究认为, 尽管b FSH和E2水平正常, OV小 (平均OV<3 cm3) 也提示卵巢储功能已下降, 因此相对来说OV比FSH、E2水平对卵巢储备的预测价值更有意义, 但目前OV作为预测卵巢储备功能则存在较大的争议。
2.3.3卵巢血流
月经第3天阴超下测得的卵巢动脉血流是反映卵巢储备功能的重要指标, 也可预测卵巢对促排卵的反应情况。目前认为, 搏动指数 (PI) <0.65、阻力指数 (RI) <0.50或收缩期/舒张期流速比值 (S/D) <2.00时, 卵巢储备功能较好。RI和PI与获得的卵母细胞数均呈负相关, 但被抽吸的卵泡数与PI呈负相关, 而与RI无关。还有研究显示, S/D与卵巢储备功能呈负相关。
2.4卵巢刺激试验
目前基础性激素测定已常规用于ART。有人认为氯米芬刺激实验 (clomiphene citrate challengetest, CCCT) 能很好地预测IVF周期中卵巢促性腺激素的反应性, 但在预测IVF的结局方面, 基础FSH联合AFC更准确。近来有学者提出CCCT对评价IVF患者卵巢储备功能几乎没有特异性, 且对于预测IVF妊娠结果更是无意义。外源性FSH卵巢储备试验 (exogenous FSH ovarian reserve test, EFORT) 和Gn RHa刺激实验 (Gn RH agonist stimulation test, GAST) 基本原理类似, 均可间接评估卵巢储备功能。FSH刺激试验不仅可以预测卵巢低反应, 且可以估计IVF周期促性腺激素的用量。GAST是对卵巢储备功能性的检测, 是预测卵巢对刺激反应的敏感指标, 但对卵巢储备功能的预测并不优于AFC、FSH及INHB。此外, 研究发现, IVF治疗周期中患者对促性腺激素的初始反应性, 也反映了其卵巢储备状态[22]。
3 小结
综上所述, 任何单一检测指标对卵巢储备功能下降的评价都不是绝对的敏感和特异, 需要多个指标联合评价, 以便提高结果的可靠性。AMH和是FOXL2近几年研究的热点, 检测AMH直接应用于临床, 还需进一步扩大临床样本, AMH究竟能否预测妊娠结局目前还缺乏统一的观点, 是我们今后要深入研究的项目。FOXL2虽然是一种非常敏感和特异性的标志物, 但其作用的靶基因和信号传导通路及确切的在卵泡生长发育及卵巢早衰中作用机制目前尚未完全明了, 有待进一步探讨。在IVF-ET技术过程中, 联合多个指标正确地评价卵巢的储备功能进而预测卵巢的反应性尤为重要, 并可以指导选择促排卵方案, 调整促性腺激素的用量, 改善卵巢功能, 使更多的患者受益。
摘要：随着妇女生育年龄推迟及不孕症发病率的逐年升高, 辅助生殖技术 (assisted reproductive technology, ART) 的发展越加迅速, 如何正确评价妇女卵巢储备力对估计ART预后至关重要, 而在进行体外受精-胚胎移植 (in vitro fer-tilization and embryo transfer, IVF-ET) 前对卵巢储备力进行正确评价、预测有助于提高体外受精的成功率。现将近年来卵巢储备功能及与IVF-ET的关系进行综述。
卵巢移植可用于美容吗? 篇2
卵巢组织移植技术的出现为解决“不孕不育”又提供了一个渠道，然而很多人因为对此项新技术的不了解而产生了很多疑问：
卵巢移植属不属器官移植？
有人担忧，因目前该技术在国内属于前沿领域，无相关监管机制，若滥用则恐出现“无意间”的近亲结婚，破坏伦理。对此，大家不用担心，该技术与克隆治療技术、器官移植技术属同一等级，它在首次应用于临床前，必须经过卫生部组织的安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查，将按最高级别的第三类医疗技术对此进行加强管理。
卵巢移植可用于美容吗？
绝大多数年轻女性中早期肿瘤患者都可以被治愈，但是一些杀灭肿瘤的药物同时也杀死了她们卵巢里面几乎所有的卵子，不少人因此没有了月经，也丧失了生育的能力。
除了先天缺陷，癌症治疗也可导致卵巢早衰，而卵巢组织冷冻保存能够为这些女孩保留生育的希望。年轻的女性癌症患者只需在开始放化疗前将自己的卵巢皮质切下并冷冻保存，放化疗结束之后将卵巢皮质薄片解冻，并移植回卵巢髓质上。整个手术只需1～2天，患者身体恢复快，不会耽误放疗、化疗的时机。
至今世界上包括Dr.Silber在内的几位卵巢组织冷冻移植专家已经为淋巴瘤、乳腺癌等多种癌症患者进行了卵巢组织的冷冻以及移植，其中12位患者一共诞下17个新生儿。
在25岁时，如果她们接受了卵巢组织冷冻保存手术，那么到35岁的时候，她们仍然可以用自己25岁的卵子自然受孕，而她们的卵巢也和25岁时一样年轻。
除此以外，另一类能从卵巢组织移植技术中获益的人群还有那些为了工作的原因必须推迟生育计划的女性。
目前多数女性在50岁左右绝经，若按此技术理论，女性若在年轻时冷冻自己的卵巢组织，待卵巢功能出现衰退时，即可移植此前保存的组织，延长她们的卵巢寿命，达到“青春永驻”的效果。
对此，专家表示，上述说法，理论上确实成立，且技术上也能够达到，但“我们主要的目的还是希望帮助癌症患者保留生育能力，美容等这块不在考虑范围。”
卵巢组织移植与试管婴儿相比，有何区别？
两者同样可以解决不孕不育的问题，人们可根据自身的身体条件来选择。另外，因试管婴儿需在体外培养，时间较长，而卵巢组织移植手术则在数十分钟内即可完成，受孕过程也更自然，而且目前来看成功率也较高。
若是无血缘关系的异体卵巢组织移植，有何风险？
移植后可能会产生排斥。
卵巢组织移植后，供体的健康是否会受到危害？
若是切除了一半的卵巢，那可能会使供者的绝经期提前；但卵巢组织移植技术只是切取1/4~1/5的卵巢组织冷冻保存，不会影响供者健康。若其本来是50岁绝经，那切取后依然是50岁绝经。
卵巢组织移植后生下的孩子基因会否变异？
从目前看来，通过该技术生下来的小孩都是健康的，但基因则沿袭了供者那方。
在保生育功能方面，冷冻卵巢组织与冷冻卵子有何区别？
因为排卵需要周期，患者需等较长时间来获取一个个卵子，而且取出来的卵子质量未必好。而卵巢组织移植很快，而且只要供者卵巢功能好，卵巢里有许多卵泡，对受孕而言，成功几率更大。
若人年纪大后靠该技术保持了卵巢的青春，身体其他器官能否运作协调？
女人老了主要就是因为卵巢衰老，若能保持卵巢功能良好，则身体将更加健康。
该技术需多少费用？
卵巢移植 篇3
1 材料与方法
1.1 药物
百里醌和紫杉醇购自美国Sigma公司,百里醌用无水乙醇配制成10 mmol/L,-20℃冰箱保存,用时用RPMI-1640培养基稀释成所需浓度;紫杉醇用含30%DMSO(美国Sigma公司)的灭菌三蒸水配成5mmol/L母液,置-20℃保存,应用时加RPMI-1640培养基稀释成目标浓度(DMSO的终浓度<0.1%,该浓度无明显细胞毒作用)。
1.2 材料
胎牛血清(FBS)、含EDTA胰酶和RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司;MMP-9抗体购自美国Epitomics公司;Ki-67和CD34抗体购自北京中杉金桥生物技术公司;免疫组化SP试剂盒购自德国宝灵曼公司;人卵巢癌细胞株HO-8910PM购自ATCC,细胞在10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中37℃和5%二氧化碳条件下常规培养,取对数生长期细胞进行实验;4～6周龄健康BALB/c雌性小鼠购于中科院上海实验动物中心,饲养于SPF级屏障系统的洁净层流架内,控制室温在(25±1)℃,相对湿度40%～60%。
1.3 裸鼠卵巢癌原位移植瘤模型制备及实验干预
制备皮下移植瘤:2×106个对数生长期的HO-8910PM细胞行裸鼠皮下注射,待生长成1 cm×1cm×1 cm皮下移植瘤后取出,无菌条件下去除中央坏死组织,选取周围健康肿瘤组织剪成1 cm×1cm×1 cm的组织块;再制备裸鼠卵巢癌原位移植模型:氯胺酮[100 mg/kg体质量(BW)]腹腔麻醉裸鼠,取右侧下背侧切口,打开腹膜后腔,暴露右侧卵巢,术者佩戴手术放大镜(Leica公司,美国)后剪开卵巢外被包膜,将瘤块植入卵巢表面,0号线单层缝合卵巢被膜,逐层关腹,术后裸鼠继续饲养于SPF实验室。
共制备40只裸鼠,完全随机法随机分成对照组(Control)、低剂量百里醌组(L-TQ)、高剂量百里醌组(H-TQ)和紫杉醇组(PAC),每组10只。手术后第3周开始给药,对照组每只裸鼠1%乙醇0.2 m L灌胃;百里醌组裸鼠经灌胃给药,剂量分别为5 mg/kgBW和20 mg/kgBW,紫杉醇组裸鼠经灌胃给予紫杉醇40 mg/kgBW,每周一、三、六分别给药3次,连续3周。术后第10周处死老鼠,留取卵巢肿瘤、肠、肝脏、腹壁、肺和肾,标本连续切片,HE染色,确定转移范围。抑瘤率=1-治疗组与对照组肿瘤重量的比值。
1.4 免疫组织化学法检测Ki-67、CD34和MMP-9
所有标本均经10%甲醛常规固定、石蜡包埋,5μm厚度连续切片。按照免疫组化SP试剂盒说明书进行免疫组化染色,并以PBS代替一抗作为阴性对照。在高倍镜(×400)随机选择20个视野,计算镜下Ki-67阳性细胞所占比例,即为细胞增殖指数(PI);低倍镜(×100)下寻取血管密度最高的区域,然后高倍镜(×400)下随机选择20个视野,计数每个视野中CD34阳性细胞数,即为微血管密度(MVD);在高倍镜(×400)随机选择20个视野,计算镜下MMP-9阳性细胞所占比例,定量MMP-9在卵巢癌中的表达。
1.5 数据的统计处理
实验所得计量数据均以均数±标准差(x±s)的形式表示,采用SPSS 13.0统计软件进行t检验,定性资料间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 百里醌对卵巢癌裸鼠原位移植瘤生长的影响
卵巢癌裸鼠原位移植瘤模型建立全部成功,成瘤率达100%。实验结束后处死裸鼠解剖发现对照组裸鼠右侧卵巢增大变形,呈圆形、椭圆形或不规则型,质地硬,切面见多个大小不等灰白色融合性团块,完整分离卵巢肿瘤称重结果表明,与对照组(0.578±0.125)g相比,L-TQ(0.321±0.069)g、H-TQ(0.237±0.094)g和PAC(0.207±0.058)g均可明显抑制卵巢原位肿瘤生长,与对照组相比较,均差异有显著性(P<0.05),抑瘤率分别为44.5%、59.4%和64.2%。见表1。PAC组与H-TQ组相比较差异无显著性(P>0.05),而明显高于L-TQ组(P<0.05)。
2.2 百里醌对卵巢癌裸鼠原位移植瘤转移的影响
移植术后第10周,处死裸鼠解剖发现腹水出现率100%,对照组全部10只裸鼠腹腔内多脏器表面呈现细颗粒状、结节状、大小不等团块状的灰白色转移灶,多数种植在脏器表面,但部分向组织内浸润生长(由病理切片证实);转移发生部位分别为:对侧卵巢、盆壁腹膜、肠系膜、后腹膜、肝、脾脏、肾脏、肺等;L-TQ组裸鼠有9只发生转移,而H-TQ组和PAC组中分别有6只和5只裸鼠肿瘤转移至其他脏器,发生转移者转移灶局限于对侧卵巢和肠系膜等临近脏器,H-TQ组和PAC组裸鼠发生肿瘤转移的裸鼠与对照组裸鼠发生转移者相比较,差异均有显著性(P<0.05),而H-TQ组和PAC组相比较,差异无显著性(P>0.05)。见附表。
2.3 百里醌对裸鼠肿瘤组织Ki-67、CD34及MMP-9蛋白表达的影响
免疫组织免疫组化染色结果显示,Ki-67染色阳性细胞表现为胞浆不着色,胞核染成棕褐色,核固缩,染色质浓聚;CD34阳性表达于胞膜;MMP-9蛋白以细胞浆有棕黄色颗粒为阳性。镜下可见对照组肿瘤组织中大量细胞Ki-67、CD34及MMP-9阳性表达;而L-TQ组、H-TQ组和PAC组肿瘤组织中Ki-67、CD34及MMP-9阳性表达细胞均明显减少。见附图。与对照组相比较,均差异有显著性(P<0.05)。各组肿瘤组织切片经PBS代替特异性一抗作为空白对照,肿瘤组织切片镜下均无阳性表达。
注:1)与对照组相比较,P<0.05;2)与PAC组相比较,P<0.05
3 讨论
卵巢癌是一种恶性程度非常高的妇科肿瘤,早期诊断率低,中位生存期短。因此,这为临床上卵巢癌的治疗提出了严峻挑战:即寻求有效的手段能有效抑制卵巢癌转移从而更为有效治疗卵巢癌。研究表明,百里醌在体外可抑制多种恶性肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡,但百里醌对外科卵巢原位移植瘤生长和转移方面的研究却还未见报道。外科卵巢原位移植模型(SOI)较为真实地模拟了与人肿瘤生长和转移相似的微环境,其局部浸润生长以及转移途径均与人卵巢癌较为相似,为较理想的“拟人”卵巢癌治疗模型。因此,笔者建立起外科卵巢原位移植模型(SOI),观察不同剂量百里醌对卵巢癌裸鼠原位移植瘤生长和转移的影响,同时鉴于在以往的研究中已证实紫杉醇可抑制体内肿瘤转移[8]。因此,在本研究中选用紫杉醇作为本次研究的阳性对照。
本研究结果表明,原位移植8周后,低剂量百里醌组和高剂量百里醌组中裸鼠卵巢肿瘤的生长明显被抑制,与紫杉醇抑瘤效果相仿;同时百里醌还可显著抑制细胞增值因子Ki-67在卵巢肿瘤中的表达,表明百里醌可抑制卵巢癌裸鼠原位移植瘤生长。
肿瘤转移是一个多因素、多步骤的生物学过程。在肿瘤转移过程中,肿瘤细胞穿过细胞外基质从而实现肿瘤细胞侵袭,是肿瘤转移的重要环节。而金属蛋白酶家族(MMPs)在促进肿瘤细胞迁移、细胞外基质降解和肿瘤远处转移等生物学行为中过程中发挥了关键作用,其中Ⅳ型胶原酶MMP-9在降解细胞外基质蛋白中扮演着重要角色,从而在肿瘤侵袭和转移中发挥着重要作用[8]。因此,抑制MMP-9能有效抑制恶性肿瘤转移。在本实验中,紫杉醇对卵巢癌转移有一定抑制作用,同时还可抑制MMP-9的表达,与文献报道相符[8];而本研究首次报道低浓度和高浓度百里醌均可显著抑制体内卵巢癌转移,同时还可抑制MMP-9在卵巢肿瘤中的表达,表明抑制MMP-9在百里醌抑制卵巢癌转移中发挥了一定作用。
新生血管形成是由一系列步骤组成的生物学过程,包括内皮细胞增殖和迁移、血管管腔的形成与存活[9],在肿瘤侵袭和转移中扮演着极为重要的角色。在健康机体中,内皮细胞一般处于休眠状态。新生血管形成在伤口愈合、炎症反应和月经等生理过程中存在但被严格限制着。在肿瘤生长过程中,肿瘤大小超过1～2 mm就需要持续血供才能维系生长[10],一旦肿瘤细胞拥有诱导血管生长的能力,肿瘤生长变得极富有侵犯性,从而为肿瘤侵袭和转移提供便利。而通过抑制肿瘤血管生长、破坏肿瘤血供可抑制肿瘤生长和转移[11]。既往多个研究表明,百里琨可抑制多种血管内皮细胞增殖及其功能,具有抑制血管生长的生物学效应[12]。本研究中,通过MVD来评价卵巢肿瘤中血管生成程度,结果表明,相对于对照组,紫杉醇可显著抑制卵巢癌原位移植瘤中血管生长,而低浓度和高浓度百里琨组中卵巢肿瘤中MVD均显著下降,与紫杉醇组效果相仿。因此,可以推断抑制血管生长在百里琨体内抑制体内卵巢肿瘤生长和转移中发挥了一定的作用。
本研究不仅表明百里醌在裸鼠体内的抗卵巢癌原位生长和转移作用,其抑瘤效果与紫杉醇治疗效果相仿;而且也在分子水平上表明百里醌可以抑制裸鼠卵巢肿瘤组织中CD34和MMP-9的表达,表明百里醌可能通过下调CD34和MMP-9的表达从而抑制卵巢癌原位移植瘤生长和转移。
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卵巢移植 篇4
1 资料与方法
1.1 研究对象
选择2006年1月至2009年1月在我中心接受常规体外受精 (IVF) 或卵胞浆内单精子注射 (ICSI) 治疗后进行初次FET的PCOS患者127例。患者年龄23～38岁, 不孕年限1～12年。其中原发不孕96例, 继发不孕31例, IVF周期104例, ICSI周期23例。所有PCOS患者的诊断均依据鹿特丹标准。本研究均经患者及家属知情同意。
1.2 研究方法
1.2.1 研究分组
所有PCOS患者于取卵周期后3个月行FET, 术前复查雄激素水平。随机采用3种方法准备内膜进行FET。①HRT组:于月经第5天开始口服戊酸雌二醇 (补佳乐) 6～15 mg/d, B超监测内膜厚度≥8 mm后, 给予黄体酮40 mg/d, 支持黄体, 第4天行FET。根据血清雌二醇 (E2) 、孕酮 (P) 水平调整补佳乐和黄体酮用量。共47例。②HMG组:于月经第5天开始肌内注射HMG 37.5～75 U/d, B超监测卵泡发育和子宫内膜情况, 当主导卵泡直径达18 mm, 或尿LH阳性, 肌内注射绒促性素 (HCG) 1万U, 监测排卵后给予黄体酮40 mg/d, 支持黄体, 第3天行FET。共35例。③LE组:于月经第5天开始口服来曲唑5 mg/d, 共5天, 月经第10天开始B超监测卵泡发育和子宫内膜情况, 当主导卵泡直径达18 mm, 或尿LH阳性, 肌内注射HCG 1万U, 监测排卵后给予黄体酮40 mg/d, 支持黄体, 第3天行FET。共45例。
1.2.2 胚胎冻融方法及评分标准
新鲜周期剩余的可利用胚胎均采用快速玻璃化冷冻方法进行冷冻保存, 于FET日上午复苏胚胎, 胚胎培养4～5小时后移植。解冻后胚胎存活的细胞数>50%总细胞数, 认为胚胎存活, 可进行移植。复苏后的胚胎分4级:Ⅰ级胚胎, 卵裂球大小均匀, 无细胞死亡, 碎片<10%;Ⅱ级胚胎:卵裂球大小比较均匀, 死亡卵裂球或碎片在10%～20%;Ⅲ级胚胎:碎片或死亡卵裂球在20%～50%的胚胎;Ⅳ级胚胎:碎片或死亡卵裂球大于50%的胚胎。Ⅰ～Ⅱ级, 且细胞数≥6的胚胎为优质胚胎。
1.2.3 妊娠判断及监测
移植后14天检查尿HCG或血β-HCG阳性, 移植后5周B超检查未见孕囊, 血β-HCG下降者为生化妊娠, 见妊娠囊及原始心管搏动确定为临床妊娠。
1.3 统计学处理
采用SPSS 11.0计软件包进行统计学分析, 计数资料采用卡方检验, 计量资料采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 3种用药方案患者一般情况比较
3组患者在年龄、体重指数、不孕年限、血清睾酮水平等方面的差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。
2.2 3种用药方案临床妊娠结局比较
127个FET周期, 移植周期117个, 取消周期10个, 周期取消率7.9%, 种植率19.2%, 生化妊娠率8.5%, 临床妊娠率35.0%, 早期流产率12.2%, 活产率29.1%。
HRT组47例, 移植周期43个, 1例因服药期间阴道流血, 3例因内膜薄取消周期。HMG组35例, 移植周期32个, 1例因多卵泡发育, 2例因无优势卵泡发育取消周期。LE组45例, 移植周期42个, 3例因无优势卵泡取消周期。3组周期取消率差异无统计学意义。3组子宫内膜厚度、平均移植胚胎个数、复苏后胚胎存活率、移植优质胚胎率、生化妊娠率、临床妊娠率、早期流产率、活产率差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表2。3组均无异位妊娠发生。
3 讨 论
多囊卵巢综合征 (PCOS) 是育龄期妇女的常见内分泌疾病, 是无排卵性不孕的主要因素。一些PCOS患者经过生活方式调整、口服避孕药及诱导排卵治疗可以获得成功妊娠。但仍有一些患者多次诱导排卵失败, 或合并有输卵管性因素和 (或) 男性因素, 则需采用IVF-ET/ICSI治疗[1]。一些PCOS患者为了避免重度OHSS而取消新鲜周期移植, 或新鲜周期未妊娠者, 需进一步行FET助孕。FET周期的妊娠率与多种因素有关, 子宫内膜是很重要的方面[2], 内膜准备的关键在于内膜与胚胎发育同步化, 提高内膜的容受性, 以利于胚胎的种植。对排卵障碍患者FET周期的内膜准备, 多采用HRT或HMG诱导排卵方案[3]。近年来, 芳香化酶抑制剂LE逐步应用于PCOS患者的诱导排卵治疗, 并取得了良好的临床效果[4], 由于LE与氯米芬 (CC) 和其他促排卵药物相比, 在促进卵泡发育及增强子宫内膜容受性方面有一定优势[5], 我们将其用于PCOS患者FET周期的内膜准备, 并与其他两种常规方案比较, 探讨适合PCOS患者的内膜准备方案。
3.1 HRT方案
使用外源性雌激素促进内膜生长, 服药方便, 对内膜的监测简单, 可以灵活掌握使用孕激素的时间, 便于安排临床工作。对有无规律月经的患者均可使用, 有较好的临床妊娠率[6]。但由于PCOS患者特殊的内分泌特点, 一些患者可能对外源性雌激素反应不良, 虽然使用了大剂量雌激素, 但内膜厚度仍然不理想, 有的则由于用药期间内膜脱落, 而不得不取消周期。本组研究中有4例因内膜原因取消周期。另外, 激素替代周期妊娠后, 仍需要较长时间的外源性雌、孕激素补充至自身胎盘黄体功能建立, 许多患者必须忍耐较长时间的黄体酮注射。
3.2 HMG方案
对于排卵障碍、卵泡发育异常的患者是一种可选择的方案, 也是PCOS患者常用的诱导排卵方案, 是HRT方案的补充。陈士岭等[7]报道53例排卵障碍或对外源性雌激素反应不佳的患者, HMG诱导排卵方案的临床妊娠率和种植率分别为34.0%和14.7%, 与HRT组比较差异均无统计学意义, 且无一例发生OHSS。田辉等[8]比较HMG诱导排卵与激素替代方案, FET周期的临床妊娠率 (31.25%/32.14%) 和胚胎种植率 (13.19%/15.48%) 差异无统计学意义。但HMG诱导排卵, 存在用药时间长, 肌内注射不方便等弊端。在应用时要注意起始量要小, 严密监测卵泡发育, 及时调整剂量, 最好能达到单卵泡发育, 预防多卵泡发育及OHSS的发生, 如出现多卵泡发育, 则需取消周期。本组资料中有1例因多卵泡发育取消周期, 2例因无优势卵泡发育取消周期, 临床妊娠率、种植率、流产率、分娩率与HRT组无差异, 与上述文献报道一致。
3.3 LE方案
LE是具有高度特异性、高效性的第三代芳香化酶抑制剂, 可有效阻断雄激素向雌激素的转化, 通过中枢和外周两方面促使卵泡生长发育, 可缩短诱导排卵时间, 显著降低促性腺激素 (Gn) 用量, 有较高的排卵率和临床妊娠率[9]。另外, LE不消耗内膜雌激素受体 (ER) , 卵泡晚期雌激素与ER结合, 可促进子宫内膜上皮细胞和间质的增生, 改善子宫内膜的血流, 到排卵时能达到受精卵种植所需的足够内膜厚度, 为胚胎的种植提供良好的子宫内环境。Cortinez等[10]的研究发现LE诱导排卵周期子宫内膜厚度和三线征与自然周期无差异, 排卵后胚胎着床期子宫内膜胞饮泡的形成与自然周期一致, 认为LE对子宫内膜的厚度、形态及容受性均无不良影响。本研究中, LE方案有3例因无优势卵泡发育取消周期, 无多卵泡发育, 有良好的诱导排卵效果。子宫内膜厚度与其他两组比较差异无统计学意义, 有较高的临床妊娠率和种植率。LE口服方便, 也是其诱导排卵准备内膜的优势之一。由于LE半衰期短, 在卵泡早期短期应用不增加胎儿的畸形率, 相对来说是安全的[11]。由于应用于临床的时间还不长, 仍需关注其对母体和子代的远期影响。我们的资料中除激素替代周期组1例新生儿耳廓轻度异常外, 其他新生儿均正常。
总之, PCOS患者FET周期3种子宫内膜准备方案均能获得良好的妊娠结局, 来曲唑诱导排卵可作为PCOS患者FET周期内膜准备方案之一。不同用药方案各有利弊, 相互补充, 如一种用药方案效果不佳, 可考虑尝试其他用药方案, 应遵循个体化、治疗费用最优化及临床安全性的原则[12], 选择适合的用药方案以获得良好的妊娠结局。
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卵巢移植 篇5
1 材料与方法
1.1 材料
人卵巢癌SKOV3细胞株 (哈尔滨医科大学遗传教研室赠) ;BALB/c-nu小鼠16只[上海斯莱克实验动物有限公司提供, SCXK (沪) 20070005], 雌性, 鼠龄4～6周, 体重14～16g左右, 在无特殊病原体 (SPF) 级条件下饲养;白桦酯醇 (标准品) :上海融禾医药科技发展有限公司提供 (批号081219) 。免疫组化试剂:Bcl-2兔抗鼠多克隆抗体 (工作浓度为1∶120) , Bax兔抗鼠多克隆抗体 (工作浓度1∶100) , P53兔抗鼠多克隆抗体 (工作浓度1∶50) , TUNEL试剂盒 (工作浓度1∶25) , 免疫组化二步法试剂盒 (北京中杉金桥) 。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
卵巢癌SKOV3细胞株, 常规方法复苏, 接种于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中, 置于37 ℃, 饱和湿度, 含5%CO2培养箱中培养, 隔日换液, 2～3天0.25%胰酶消化传代1次, 取对数生长期细胞进行实验。
1.2.2 实验过程
将白桦酯醇放于消毒的研钵加少量的吐温-80湿润做助悬剂, 再加入以0.9%氯化钠液配制的0.5%的羧甲基纤维素钠碾成混悬液备用。
制备单细胞悬液, 调整细胞浓度至3×107/ml, 在超净镜台内进行动物实验, 0.2ml/只, 接种于裸鼠背部皮下。20天后皮下移植瘤形成后, 随机将16只裸鼠分为对照组和白桦酯醇组, 每组8只。白桦酯醇组按143.5mg/ kg·d剂量以白桦酯醇混悬液灌胃, 0.2ml/天·只, 对照组以体积相当的0.9%氯化钠液灌胃, 隔日给药, 共10次。
1.3 观察指标
1.3.1 生长检测
接种后每天观察肿瘤形成及有无红肿、破溃。成瘤后, 检查移植瘤的表面形态及活动度, 于末次给药后24小时处死裸鼠, 用游标卡尺测量肿瘤结节的最长径 (a) 及最短径 (b) , 根据下列公式计算肿瘤体积=0.52ab2, 求其平均值。计算抑瘤率, 抑瘤率= (1-白桦酯醇组瘤重/对照组瘤重) ×100%。
1.3.2 电镜观察
处死裸鼠后取新鲜瘤组织, 按制备透射电镜要求制备切片, 醋酸双氧铀和构椽酸铅染色, 透射电镜观察细胞器、细胞核形态变化及凋亡小体的形成情况。其余瘤组织石蜡包埋后待用。
1.3.3 检测裸鼠组织中凋亡指数表达 (TUNEL法)
石蜡组织切片, 常规脱蜡, 按TUNEL检测系统说明书制备标本。凋亡细胞核固缩呈圆形或椭圆形、蓝黑色, 染色体沿核膜形成半月状或新月状, 部分核凝固成致密小圆球形。光镜下随机选取5个以上高倍视野, 每个视野不少于1000个细胞, 按阳性细胞占细胞总数的比率作为凋亡指数。
1.3.4 检测裸鼠组织中凋亡基因P53、Bcl-2、Bax蛋白的表达
采用抗生素-生物素过氧化酶复合物 (S-P) 免疫组化法制备标本。P53蛋白阳性反应位于胞核中表达;Bcl-2, Bax蛋白阳性反应位于胞浆内表达, 呈棕褐色或棕黄色。在全片上、下、左、右、中各随机选取一个400倍视野, 观察每个视野中阳性细胞的染色强度及该强度细胞占视野中所有癌细胞的百分率。
免疫组化染色分级:按阳性细胞占总细胞数的百分率分4级, I级:5%～25%;II级:26%～50%;III级:51%～75%;IV级>75%。≥5%作为阳性标准, <5%作为阴性标准。
阳性细胞的染色强度分为4级:1级: (±) ;2级: (+) ;3级: (++) ;4级: (+++) 。各阳性对照片的染色强度定为4级作为参照。一个视野的免疫组化染色得分[1]=该视野中的各种染色强度与该强度阳性细胞的百分率级别的乘积之和, 即染色强度为1级的阳性细胞百分率级别×1+染色强度为2级的阳性细胞百分率级别×2+染色强度为3级的阳性细胞百分率级别×3+染色强度为4级的阳性细胞百分率级别×4。该组织的免疫组化染色综合得分=5个视野的免疫组化染色得分之总和/5。
1.4 统计学方法
以SPSS 17.0软件进行统计学分析, 数据用undefined表示, 进行t检验。
2 结 果
2.1 白桦酯醇对皮下移植瘤的影响
两组裸鼠在给药期间状态佳, 饮食、活动正常, 均无死亡。白桦酯醇治疗组肿瘤生长缓慢, 治疗20天后, 肿瘤体积明显小于对照组 ( P<0.01) , 见表1, 抑瘤率= (1-0.721/1.533) ×100%=52.97%, 说明白桦酯醇对裸鼠皮下移植瘤的生长有抑制作用。
2.2 裸鼠肿瘤组织透射电镜下观察结果
电镜下观察, 白桦酯醇组可见典型凋亡细胞形态学改变 , 凋亡细胞表现为细胞浆浓缩、典型的凋亡小体形成。见图1。
2.3 TUNEL检测凋亡指数
两组肿瘤细胞均有不同程度的凋亡, 但白桦酯醇组可见较多的阳性染色细胞, 而对照组只可见个别细胞着色。白桦酯醇组肿瘤的凋亡指数 (0.44±0.07) 高于对照组凋亡指数 (0.04±0.01) ( P<0.01) 。见表2。
2.4 裸鼠肿瘤组织P53、Bcl-2、Bax的表达
白桦酯醇组和对照组P53蛋白免疫组化染色综合得分分别为1.98±0.19、0.32±0.07, 两组比较差异有高度统计学意义 ( P<0.01) 。白桦酯醇组和对照组Bax蛋白免疫组化染色综合得分分别为2.63±0.18、0.50±0.10, 两组比较差异有高度统计学意义 ( P<0.01) 。白桦酯醇组和对照组Bcl-2蛋白免疫组化染色综合得分为0.42±0.08、0.56±0.13, 两组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。对照组肿瘤组织P53、Bax呈低表达;白桦酯醇组肿瘤组织P53、Bax表达量明显上调, 与对照组比较差异有高度统计学意义 ( P<0.01) 。对照组肿瘤组织Bcl-2表达量与白桦酯醇组Bcl-2表达量比较无明显变化, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。见表3。
白桦酯醇组较对照组可见细胞核碎裂, 边集, 凋亡小体形成, 空泡增多
3 讨 论
白桦酯醇存在于酸枣仁、天门冬、石榴树皮和叶、白桦树皮和叶、柿蒂、大枣等植物中[2,3], 白桦酯醇与白桦酯酸 (BA) 具有相同的五环三萜骨架。Pisha等[4]研究发现BA具有抗黑素瘤活性。后来又相继有人研究发现BA对其他肿瘤, 如神经内胚层脑肿瘤、神经胶质瘤等同样具有药理活性;另外在抗HIV-1感染方面也显示了很高的生物活性[5]。近年来有研究发现白桦酯醇能抑制PC-3 (前列腺) , MCF7 (乳腺) , DLD-1 (大肠) , A549 (肺) [6], EPG85-257 (胃) 和EPP85-181 (胰腺) [7]肿瘤细胞株的生长, 并且能够诱导A549肿瘤细胞株凋亡[8]。但国内外很少有研究其对卵巢癌的作用。
本实验初步研究了白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用, 诱导细胞凋亡可能是白桦酯醇抑制肿瘤生长的机制之一。细胞凋亡 (apoptosis) 是细胞在一定生理或病理条件下, 遵循自身的程序, 自我结束生命的过程。它是一个主动的、高度有序的、多基因控制的、一系列酶参与的过程。而P53, BCl-2, Bax是与凋亡最相关的调控基因。P53基因为抑癌基因, 存在于正常细胞核中, 对细胞损伤分化有抑制作用, 具有促进细胞凋亡的作用。P53编码多功能的抑癌蛋白P53, 主要功能是检测基因组损伤、启动修复损伤基因组, 从而维持基因组稳定, 在抑制或阻止细胞转化、诱导基因组损伤的细胞凋亡等方面起到决定性的作用, 从而能够抑制肿瘤的发生、去除衰老的细胞等[9]。Bcl基因家族是重要的凋亡调控基因, 包括凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl和促凋亡基因Bax、Bak、Bcl-xs等[10]。在细胞凋亡的信号转导途径中, Bcl-2家庭成员的构成比例是凋亡调控的关键因素, 在外界因素刺激下, 细胞的生死最终取决于Bcl-2和Bax两种调控因子的平衡结果。Bax的高表达不但具有拮抗Bcl-2的抑制凋亡的作用, 而且有直接促进细胞凋亡的功能。
本实验结果显示, 白桦酯醇对裸鼠卵巢癌细胞移植瘤有显著的抑制作用, 电镜下可观察到凋亡小体明显增多, 白桦酯醇治疗后均未见瘤组织Bcl-2表达率的明显变化, 而Bax、P53表达却明显提高, 瘤组织Bax、P53蛋白阳性标记指数升高与凋亡指数的升高是一致的, 提示上调Bax、P53蛋白表达、控制Bcl-2的表达, 进而诱导卵巢癌细胞凋亡, 。然而白桦酯醇怎样调节凋亡相关基因如Bax、P53、Bcl-2而发挥作用的机制仍不明确, 需要我们进一步通过相关实验来证明。
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卵巢移植 篇6
1 材料与方法
1.1 细胞及细胞培养
人卵巢癌COC1细胞系购于武汉大学中国典型物保藏中心。用RPMI-1640(含10%新生牛血清)培养基于37℃、5%二氧化碳及饱和湿度条件下培养。
1.2 药物与试剂
5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFM-Ch R)参照文献[9]合成。性状:黄色晶体;纯度:99.0%。分子式:C19H14O4F2,分子量:344。PRMI1640培养基为美国Gibco公司产品;新生牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司;甲基亚砜(DMSO)为美国Amresco公司产品;顺铂为齐鲁制药有限公司产品,批号为50001740B。
1.3 仪器
流式细胞仪为美国Coulter公司生产的Epics XL型;结果用Multicycle软件分析。
1.4 动物
突变系SPF级Balb/c-nu小鼠共20只,4～6周龄,雌性,体重14～18g。提供单位:北京维通利华实验动物技术有限公司;合格证号码:0093102;许可证编号:SCXK(京)2007-0001。饲养于无菌屏蔽环境(百级无菌室)中。
1.5 人卵巢癌CoC1裸鼠皮下移植瘤模型治疗实验
裸鼠背部皮下注射Co C1细胞,细胞数为2×106个/只。待移植瘤体积为75 mm3左右时(接种后30 d),按瘤体积和荷瘤鼠体重均衡原则将20只成瘤裸鼠随机分成5组:Ⅰ组,生理盐水(NS 0.1m L/10 g)模型对照组;Ⅱ组,阳性药物顺铂(DDP 2mg/kg)对照组;Ⅲ组,低剂量ADFMChR(6 mg/kg)实验组;Ⅳ组,中剂量ADFMChR(18 mg/kg)实验组;Ⅴ组,高剂量ADFMChR(54 mg/kg)实验组。以上各组均隔日腹腔内注射给药1次,共计8次。给药期间每4日用游标卡尺测量移植瘤最长径和最短径,计算皮下移植瘤体积(V=L×W2×0.52),绘制移植瘤的生长曲线,每4d称取裸鼠体重1次,绘制裸鼠体重生长曲线。末次给药48h后,摘除眼球取血处死。切取皮下移植瘤,称取瘤重,按公式:瘤重抑制剂率(%)=(1-实验组瘤重均值/对照组瘤重均值)×100%,计算瘤重抑制率。
1.6 细胞凋亡率测定
取瘤组织约10 mm3,用预冷的PBS清洗2次。用眼科剪反复剪碎组织块后,300目尼龙网过滤2次,制成单细胞悬液;计数后,取1×106细胞,PBS清洗2遍,离心弃PBS,加入预冷的75%的乙醇固定,混匀,4℃冰箱固定过夜;离心去上清,PI避光染色30 min;过滤;上机检测。
1.7 统计学处理
各组实验数据均用表示,采用SPSS13.0统计软件包进行数据处理,One Way ANOVA方式行方差分析,两两比较采用Students-t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 ADFMChR对人卵巢癌CoC1裸鼠移植瘤生长曲线的影响
ADFMChR(6,18和54 mg/kg)处理后16 d,DDP组和ADFMChR(6,18和54 mg/kg)各组的肿瘤体积差异均有显著性(P<0.01,P<0.001)。ADFMChR能显著抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,呈时间和剂量依赖性,见图1。
2.2 ADFMChR对荷人卵巢癌CoC1裸鼠体重的影响
ADFMChR(6,18和54 mg/kg)治疗前后裸鼠体重与NS组比差异无显著性(P>0.05),DDP(2mg/kg)治疗后裸鼠体重明显降低,与NS组比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。提示ADFMChR对裸鼠无毒性表现,见表1。
注:覮与NS对照组比较,P<0.001,
2.3 ADFMChR对人卵巢癌CoC1裸鼠移植瘤重量的影响
给药后16 d处死裸鼠,切取皮下移植瘤,称取移植瘤重量,ADFMCh R(6,18和54 mg/kg)实验组的皮下移植瘤重量显著低于生理盐水模型对照组,差异均有显著性(P<0.05或P<0.01),ADFMChR(54 mg/kg)组移植瘤重量低于DDP(2 mg/kg)组(P<0.05)。见表2。
注:F=12.119,P=0.000;1)与NS(control)比较,P<0.05;2)与NS(control)比较,P<0.01,3)与DDP(control)比较,P<0.05
2.4 ADFMChR对人卵巢癌裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响
PI染色流式细胞术检测表明,ADFMChR(6、18和54mg/kg)对人卵巢癌Co C1裸鼠移植瘤细胞都具有诱导凋亡的作用,凋亡率分别为(28.2%±2.67%),(40.1%±3.36%)和(52.4%±4.93%),与NS对照组凋亡率(3.64%±1.01%)比较差异均有显著性(P<0.01)。ADFMChR(54 mg/kg)组细胞凋亡率较DDP(2 mg/kg)组细胞凋亡率(41.6%±3.84%)高(P<0.05)。但ADFMChR对细胞周期阻滞不明显。见图2A～F。
3 讨论
近年来,白杨素抗肿瘤作用引起了国内外学者的浓厚兴趣,但因其在肠道吸收甚少及5,7位羟基被迅速糖基化而致活性较低,限制了它的临床应用。通过对其结构进行改造或修饰,以合成生物利用度高、生物活性强、毒性较低的靶分子,已成为新药创制的重要途径之一。其中5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)是新合成的一种白杨素衍生物,它具有比白杨素更强的亲脂性和膜通透性,从而提高其在生物体内的吸收和跨膜转运。白杨素具有抗肿瘤药理活性,能显著抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡[10,11]。
本研究显示,ADFMChR(54 mg/kg)组瘤重抑制率比DDP(2 mg/kg)组肿瘤瘤重抑制率(73.47%)高。由此认为ADFMChR对人卵巢癌CoC1细胞裸鼠移植瘤生长有显著抑制作用。
恶性肿瘤的发生与肿瘤细胞凋亡的减少有密切关系[12]。细胞凋亡又称程序性死亡,是生物界重要的生命现象之一。1972年,KERR[13]首先提出细胞凋亡(apoptosis)是细胞的一种主动自杀过程,是一个非常复杂的生理和病理过程,是细胞在自身基因调控下,在一定条件激活自身的核酸内切酶,降解核酸所引起的自主性的细胞死亡。细胞凋亡后形成的凋亡小体被巨噬细胞吞噬,不引起炎症反应。而肿瘤细胞常呈凋亡不足[14],有关细胞凋亡的研究使我们意识到,应以诱导细胞凋亡为目标来寻找治疗肿瘤的新途径,有效的抗肿瘤治疗应是诱发肿瘤细胞凋亡,而不是单纯抑制细胞增殖或使用毒性药物来杀死肿瘤细胞,因为这些药物在杀死肿瘤细胞的同时,也会不同程度地杀伤正常细胞。因而诱导细胞凋亡成为目前肿瘤治疗的一个新热点。本研究采用FCM法检测细胞凋亡情况,发现ADFMChR(6、18和54mg/kg)组的凋亡率明显高于NS对照组。ADFMChR(54 mg/kg)组凋亡率高于DDP(2 mg/kg)组。说明ADFMChR具有诱导人卵巢癌CoC1裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用,推测ADFMChR通过诱导细胞凋亡发挥抑制人卵巢癌CoC1裸鼠移植瘤生长作用。
卵巢移植 篇7
1 资料与方法
1.1 研究对象
回顾性分析2010年8月1日至2011年7月31日于北京大学第三医院生殖医学中心行IVF-ET的卵巢储备功能低下、应用促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂方案的患者共231例。入选标准:卵巢储备功能低下者,在治疗前至少3个月未接受促排卵和IVF-ET治疗,受精方式均采用传统IVF技术,除外卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期。卵巢储备功能低下[2,3]:月经周期第2～3天血清FSH>10 U/L,和(或)血清雌二醇(E2)>294 pmol/L,同时基础窦卵泡数<5。231例患者中,添加LZ组(Gn+LZ组)59例,单纯应用Gn组(Gn组)172例。两组患者的年龄、体重指数(BMI)、不孕年限、原发不孕率、基础雌二醇(B-E2)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),基础卵泡刺激素(B-FSH)水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
1.2 方法
月经周期第2天当血清FSH<15 U/L,E2<280 pmol/L,超声检查卵巢未见直径超过1 cm的卵泡,可以开始促排卵治疗。
Gn+LZ组用药方案:在月经周期第2～6天给予LZ 5 mg/d,于周期第5天开始加用Gn,Gn起始剂量为150～225 U/d。Gn组用药方案:在月经周期第2天开始应用Gn,Gn起始剂量为300～450 U/d。两组均在月经周期的第7天开始应用GnRH拮抗剂醋酸西曲瑞克(思则凯)0.25 mg/d,直至HCG日。
所有患者均在月经周期第7天开始经阴道超声进行卵泡监测及子宫内膜的测量。于月经周期第7天及HCG日测定血清黄体生成素(LH)、E2和孕酮(P)水平。当至少有3个卵泡直径≥18 mm时,给予重组人绒毛膜促性腺激素(HCG,默克雪兰诺公司)250 μg,皮下注射。注射HCG后36小时经阴道取卵。取卵后4～6小时常规受精。取卵后2～3天行胚胎移植。从取卵日开始每日肌内注射黄体酮60 mg。
ET后14天检测血β-HCG水平,血β-HCG≥30 U/L确定为妊娠。ET后30天经阴道B超检查看到妊娠囊(伴或不伴胎儿心管搏动)确定为临床妊娠。单纯血β-HCG升高,B超检查未见到妊娠囊,为生化妊娠。
1.3 观察指标
Gn剂量及用药时间、促排卵治疗后性激素水平、HCG日子宫内膜厚度、优势卵泡数、获卵数、受精率、着床率、临床妊娠率、周期取消率、继续妊娠率等。
早发LH升高指HCG注射日LH ≥10 U/L[4] 。继续妊娠指妊娠超过孕12周。受精率指受精卵数与获卵数之比。周期取消指没有进行ET。
1.4 统计学方法
应用SPSS 17软件包,应用t检验和卡方检验对相关数据进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 两组患者Gn剂量、用药时间及对促排卵治疗的反应的比较
见表2。Gn+LZ组59例患者,共63个周期,Gn组172例患者,共177个周期。Gn+LZ组使用的Gn总量显著低于Gn组(P=0.000)。两组促排卵治疗后性激素、HCG日子宫内膜厚度、优势卵泡数比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。Gn+LZ组有3个周期因HCG日LH达27.0～48.7 U/L而在给予HCG后24小时取卵。Gn+LZ组HCG日孕酮水平显著低于Gn组,Gn+LZ组有2个周期在HCG日孕酮升高,分别为17.1 nmol/L和6.39 nmol/L(均未受精),Gn组有6个周期HCG日孕酮升高(≥6.0 nmol/L),其中2例未受精,1例因孕酮高未移植。
2.2 两组IVF结局的比较
Gn+LZ组有2个周期因卵泡提前破裂而放弃取卵,6个周期未取到卵。Gn组有2个周期因卵泡提前破裂而放弃取卵,7个周期未取到卵。两组的周期取消率分别为38.1%和20.3%(P=0.005)。Gn+LZ组平均获卵数、平均移植胚胎数和受精率均低于Gn组,但着床率显著高于Gn组。两组每移植周期的HCG阳性率、临床妊娠率和继续妊娠率差异均无统计学意义。见表3。
在拮抗剂方案中添加LZ的患者,未发现有LZ导致的副反应。
①2PN率:每受精形成100个胚胎中,两原核胚胎所占的百分率
3 讨 论
由于本研究是回顾性分析,所以患者所使用的方案是根据不同医生的习惯来决定的,对于卵巢储备功能低下的患者,应用大剂量Gn或应用Gn+LZ方案都是可以的。在我们中心,较多的医生喜欢用大剂量Gn方案,因此使得两组病例数差异较大。
本研究中,Gn+LZ组周期第7天和HCG日的E2水平显著低于Gn组,这与LZ抑制雄激素向雌激素的转换相关,也与大剂量Gn组募集到的卵泡更多有关。文献报道,当应用相同剂量的Gn时(无论是大剂量还是小剂量),添加LZ组的E2水平与Gn组相似[5,6],或显著低于后者[7,8]。
本文中Gn+LZ组周期第7天LH水平显著高于Gn组,与Lee等[7]的结果相似,这种现象与低的雌激素水平解除了对垂体的负反馈机制,导致FSH和LH的升高有关。但Lee等[7]发现在第8天后,LH水平降至与Gn组相似,而在本研究中,虽然两组均在周期的第7天开始应用GnRH拮抗剂,但Gn+LZ组在HCG日的LH水平仍显著高于Gn组,早发LH升高率也显著高于后者。有文献报道,31例女性应用LZ+FSH+GnRH拮抗剂方案,早发LH升高率为19.4%[9],而FSH+GnRH拮抗剂方案早发LH升高率仅为2.8%[10]。本研究中Gn+LZ组HCG日E2水平显著低于Gn组,而低的E2水平应该可以有效抑制提前出现的LH峰,因此很难解释Gn+LZ组早发LH升高率较高的原因。
本文Gn+LZ组的平均获卵数显著低于Gn组,可能与后者的Gn起始剂量高有关。文献报道[5],当加大Gn+LZ组的Gn起始剂量时,其获卵数明显高于Gn组。LZ通过增加卵巢局部的雄激素,从而增加卵泡对FSH的敏感性[1]。
另外,由于本文是回顾性分析,虽然两组患者均为卵巢功能低下者,但Gn+LZ组基础FSH水平(13.8±5.1 U/L)高于Gn组(12.2±4.5 U/L),这是否是引起两组获卵数不同的原因之一,尚有待确定。有文献报道,同为卵巢低反应者,组间基础FSH水平差异较大(>5 U/L)时,获卵数是有差异的[11]。
本研究中Gn+LZ组的着床率显著高于Gn组,与Garcia-Velasco等[5]的结果一致。文献报道超排卵导致的雌激素水平的过高影响子宫内膜的接受性。由于Gn+LZ组血清E2水平显著低于Gn组,避免了高水平的激素对内膜的不良影响,这可能是Gn+LZ组着床率增高的原因。
虽然Gn+LZ组的着床率高于Gn组,但两组每移植周期的HCG阳性率、临床妊娠率以及继续妊娠率并没有差异,这与Gn+LZ组移植的胚胎数显著低于Gn组有关。
本研究中Gn+LZ组周期取消率显著高于Gn组,与文献报道的结果不同。本文采用了LZ+小剂量Gn的方案,而对于卵巢低反应者,文献多采用LZ+大剂量Gn的方案,周期取消率为11.4%～54.3%[5,8,12,13]。推测本研究中小剂量Gn+LZ组获卵数和受精率均显著低于单纯大剂量Gn组,是其周期取消率升高的主要原因。Yarali等[13]发现,当Gn+LZ组与单纯Gn组应用相同的给予HCG的标准时,前者MII卵率显著低于后者,作者认为Gn+LZ组可能应该在主导卵泡直径达到20 mm时再给予HCG。本文中Gn+LZ组和单纯Gn组都是在主导卵泡直径≥18 mm时给予HCG,本研究由于只选择常规IVF的患者,没有对卵子的成熟度进行评价,但不能除外由于MII卵率下降导致受精率低下的可能。