二氯乙酸（精选三篇）
二氯乙酸 篇1
1 材料与方法
1.1 主要仪器和试剂
1.1.1 仪器
Agilent7890A气相色谱仪 (美国Agilent公司) , μ-ECD检测器, 7693 Autosampler, DB-5毛细管柱 (30 m×0.320 mm×0.25μm) , 恒温水浴箱 (美国Poly Science) , 50 ml离心管 (美国康宁) 。
1.1.2 试剂
标准品DCAA、TCAA (农业部) , 内标1, 2-二溴丙烷 (1, 2-DBP, 美国Accu Standard) 。
1.2 样品的采集
将5 mg氯化铵晶体加入到50 ml采样瓶中, 取满水样, 24 h内分析, 4℃冰箱保存不超过7 d。
1.3 样品处理
取5.00 ml水样倒入50 ml离心管中, 加入0.5 ml浓硫酸, 摇匀;迅速加入0.6 g无水硫酸铜, 摇匀。再加入约2 g无水硫酸钠, 拧紧盖子摇匀;然后加入5.00 ml含内标300μg/L的甲基叔丁醚, 振荡, 静置5 min, 取上清液2.00 ml至另一离心管中, 加入新鲜配置的硫酸-甲醇溶液1.0 ml, 50℃水浴加热120 min后取出, 冷至室温, 逐滴加入4 ml饱和碳酸氢钠溶液, 振荡并不断放气;最后, 取上清液待测, 1μl进气相色谱分析。
1.4 色谱条件
柱箱采用程序升温方式, 35℃保持7 min, 5℃/min升到70℃, 30℃/min升到250℃, 保持5 min。进样口温度200℃, 不分流进样口。检测器温度250℃。载气流速1.0 ml/min, 恒流模式。进样体积1μl。
1.5 标准曲线
配制DCAA、TCAA工作曲线, 质量浓度分别为:DCAA 5、10、20、40、80μg/L, TCAA 3、6、12、24、48μg/L, 按照样品前处理萃取、衍生、分析。分别绘制标准曲线以保留时间定性, 内标法定量。
2 结果与讨论
2.1 分离效果
DCAA、TCAA和1, 2-DBP在设定的条件下能够得到很好地分离。见图1。
注:DCAA—二氯乙酸;TCAA—三氯乙酸;1, 2-DBP—1, 2-二溴丙烷 (内标物) 。
2.2 线性关系和检出限
以标准物质峰面积和内标峰面积比值为纵坐标, 标准物质浓度为横坐标得到DCAA、TCAA的工作曲线和回归方程。按照取水5.00ml计算, 以10倍噪声值表示方法的定量检出限, 结果见表1。
2.3 回收试验和精密度试验
向所采水样中加入DCAA、TCAA标准混合溶液, 配置高低2个不同浓度, 共6个加标样品平行测定, 分别计算DCAA、TCAA的含量, 回收率、相对标准偏差 (RSD) , 结果见表2。
2.4 样品分析
2013年7—9月, 我实验室采用该方法对秦皇岛、承德、保定3个地市所采集的127份饮用水, 其中包括出厂水、末梢水、二次供水, 其中DCAA检出率为10.23%, TCAA检出率为14.96%, 但测定值均小于标准值 (生活应用水卫生规范) , 合格率均为100%, 为饮用水的安全监管提供了有力的技术支撑。
3 结论
我国生活饮用水卫生标准规定水中DCAA的最高容许浓度为0.05 mg/L, TCAA的最高容许浓度为0.1mg/L[6]。本实验室通过实际样品分析, 改进了前处理过程中的样品量和实验器具, 缩短了前处理时间, 该方法快速、简便、准确, DCAA、1, 2-DBP和TCAA能够得到很好地分离。在实际样品检测分析中, 结果令人满意。
参考文献
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[3]蒙成华, 孙卓然, 张海燕, 等.呼和浩特市生活饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸含量测定[J].中国卫生检验杂志, 2013, 23 (2) :288-289.
[4]刘序铭, 邓静怡.气相色谱法测定饮用水中的二氯乙酸、三氯乙酸[J].广东化工, 2012, 39 (5) :323-324.
[5]金永高、符展明.顶空-GC法测定尿中的三氯乙酸的研究[J].中国卫生检验杂志, 2005, 15 (7) :820-821.
二氯乙酸 篇2
二氯乙酸钠 (DCA) 在猪精液保存中的应用研究较少, 因此本研究在传统稀释液的基础上添加了DCA, 以分析此种试剂对猪精子冻后质量的改善有无作用。
1材料与方法
1.1主要材料与设备N-乙酰半胱氨酸 (NAC) 、MLT购自Sigma公司, DCA购自武汉一化工有限公司, 三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 由Amersco公司分装, 新鲜精液由广西科达畜禽改良有限责任公司提供;自动化精液冷冻仪由法国IMV卡苏科技股份有限公司生产。
1.2试验步骤
1.2.1精液采集、稀释与平衡用手握法采精, 选用精子活力60%以上的精液。将精液放入离心机内, 以2 000 r/min离心5 min。去掉适量上清液, 吹打均匀, 待用。用试管取离心后的精液适量, 按1∶1比例分两次 (间隔15 min) 加入冷冻稀释液 (配方见表1, 参考李刚等[3]及魏世宝[4]的资料来配制) , 吹打均匀, 用0.25 m L塑料细管分装, 作好标记, 放入冰箱中5℃下平衡4 h。
1.2.2精液的冷冻与解冻将细管取出, 检查平衡后活力, 放入精子程序降温仪内冷冻:开始温度为5℃, 降至-5℃的降温时间约为3.8 min, 降温速度约为2.6℃/min;从-5℃下降至终止温度-134℃的降温时间约为5.2 min, 降温速度约为24.8℃/min;程序运行结束后, 马上将细管投入液氮。至少5 min之后, 将细管放入电子恒温水浴锅内解冻 (40℃, 4~6s) , 镜检。
1.2.3精子的畸形率、顶体完整率检查参照江一平等[5]报道的方法用考马斯亮蓝R250染色液对精子进行染色, 然后在1000×显微镜下检查精子畸形率和顶体完整率。每个处理抹片2张, 每片记数200个以上的精子。
1.3试验设计按二氯乙酸钠 (DCA) 在稀释液中的浓度分为0、1、0.1、0.01 mmol/L 4组, 试验重复5次。检测指标为冻后精子的畸形率及顶体完整率。
1.4数据处理试验数据用Excel软件进行处理, 然后用SPSS13.0软件ANOVA法进行方差分析, 用Duncan法进行多重比较, 检验差异的显著性。
2结果与分析
从表2可见, 当DCA浓度为1 mmol/L时, 冻后精子的畸形率和顶体完整率与对照组相比差异不显著 (P>0.05) ;当DCA浓度降低时, 这两个指标显著差于对照组 (P<0.05) 。说明在冷冻稀释液中添加DCA对冻后精子的畸形率和顶体完整率没有改善作用。
注:同一列肩标不同小写字母表示差异显著 (P<0.05) 。
3讨论与结论
3.1 DCA的作用近来有研究发现, DCA作为一种廉价的用于治疗新陈代谢紊乱的药物, 可以杀死癌细胞并对肿瘤的生长有一定的抑制作用, 还可通过促进乳酸氧化、降低血液乳酸水平、改善机体的代谢平衡来治疗一些代谢性疾病, 如先天性或代偿性乳酸酸中毒。在组织缺氧情况下 (比如激烈运动造成的组织缺氧及高乳酸水平) , DCA可通过增加氧摄取、激活丙酮酸脱氢酶复合物, 促进乳酸氧化来补充能量供应, 从而改善缺氧组织的能量代谢状况。目前已经作为药物进行研究的二氯乙酸盐, 包括其钠盐、二异丙胺盐、二氯乙酸酯和离子化合物, 用于临床的只有DCA。已报道的二氯乙酸盐代谢产物包括:乙氯乙酸、乙醛酸、乙醇酸、乙二酸、二氧化碳和甘氨酸。
临床研究显示, 与碳酸氢钠相比, DCA不但能够缓解酸中毒, 而且能够改善血液动力学指标, 降低外周血管阻力, 并对脑出血有保护作用。DCA还能提高氧的利用度, 毒副作用的发生率不高。在已经进行的各项临床试验中, 不管使用DCA的剂量大小或时间长短, 均未见有关致癌、致突变的报道。正常细胞的能量供给主要来自于葡萄糖代谢, 通过线粒体依赖的糖氧化和糖酵解两种方式供应三磷酸腺苷。恶性肿瘤细胞在氧充足的条件下, 糖酵解代谢同样非常活跃, 肿瘤细胞可以从活跃的糖酵解代谢中获益[7]。糖酵解过程可产生大量乳酸, 导致肿瘤细胞微环境酸化, 酸化的微环境对肿瘤细胞可能造成生长抑制, 但肿瘤发生发展是一个不断变异选择的过程, 当耐酸的肿瘤细胞株优势选择形成, 酸化的微环境则对肿瘤细胞有着保护作用。研究发现, 糖酵解酶具有拮抗细胞凋亡的功效, 可导致恶性肿瘤对化疗和放疗等促凋亡作用的耐受。如己糖激酶能与线粒体特异结合, 发挥生物学作用, 激活的己糖激酶从细胞质转移到线粒体膜, 与线粒体膜交互作用, 抑制了一些线粒体依赖的细胞凋亡的关键部分, 从而增加细胞对凋亡的抵抗。近来有研究表明, 这种过多的糖酵解很可能造成细胞对凋亡的抵抗。
3.2作用机理DCA为丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂, 由于抑制作用, 使更多的丙酮酸进入线粒体, 增加正常的线粒体氧化, 抑制了糖酵解。线粒体的重构会引起线粒体氧化磷酸化过程的损伤, 可导致糖酵解代谢增高。其机制可能是线粒体中存在一些促细胞凋亡的介质, 当线粒体转运孔打开时, 这些因子就会释放到细胞质中诱导凋亡。线粒体的去极化以及ROS的增加可能会造成线粒体的重构, 抑制MTP开放, 使凋亡诱导因子不能释放, 最终导致对细胞凋亡的抵抗。线粒体还能调节一些重要的钾离子、钙离子等离子通道, 如一些肿瘤细胞中的Kv通道因为线粒体的重构而受到抑制, 如果Kv通道被抑制, 就可能造成细胞对凋亡的抵抗。已有研究表明, DCA可以降低线粒体膜电位, 增加线粒体的过氧化氢, 激活肿瘤细胞中的Kv通道, 且不影响正常细胞, 进一步介导细胞凋亡, 抑制肿瘤生长。
徐静等研究表明, DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞的凋亡具有抑制作用。通过观察心肌细胞凋亡形态学特征并检测心肌细胞凋亡率, 结果得出10-3 mmol/L DCA在缺氧和复氧情况下相同时间内的凋亡率较其他组及对照组显著低, 鉴于此理论基础上我们把DCA添加到冷冻稀释液中看是否对精子同样具有抗凋亡作用。
3.3结论本试验中冻后精子的畸形率和顶体完整率基本与徐静等研究的结果相符, 其具体的作用机制尚不清楚, 需要进一步研究, 但是从试验结果整体来看, 在冷冻稀释液中添加DCA对冻后精子的畸形率和顶体完整率没有改善作用。
摘要：本研究采用手握法采集成年种公猪精液, 预处理后用添加了不同剂量二氯乙酸钠 (0、1、0.1、0.01 mmol/L) 抗凋亡试剂的稀释液进行稀释, 观察试剂对猪精子冷冻后的畸形率和顶体完整率的影响。结果表明:在冷冻稀释液中添加二氯乙酸钠对冻后精子的畸形率和顶体完整率没有改善作用。
关键词：二氯乙酸钠,猪精液,冷冻保存
参考文献
[1]Polge C.Artificial insemination in pigs[J].Vet Rec, 1956, 68:62-76.
[2]禚艳书.猪精液冷冻保存的研究[D].南京:南京农业大学, 2006.
[3]李刚, 李青旺, 张树山, 等.猪精液冷冻保存试验效果初报[J].中国农学通报, 2005, 21 (5) :70-75.
[4]魏世宝, 金一, 苗婷婷.稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响[J].黑龙江动物繁殖, 2007, 15 (2) :1-3.
二氯乙酸 篇3
在生产头孢他啶的工艺中, 使用了上述的有机溶剂。因此控制其残留量非常重要, 采用外标法顶空自动进样, 更加快速准确的检验残留溶剂的含量。
1 实验部分
1.1 仪器及试剂。
Agilent7890型气相色谱仪, 附火焰离子化检测器 (FID) 。OPGU-2000型高纯氢气发生气, GN-500A高纯氮气发生器, GA5000A型低噪音空气泵 (北京中兴汇利科技发展有限公司) 。丙酮 (色谱纯) 上海化学试剂研究所。二氯甲烷 (色谱纯) 上海化学试剂研究所。乙酸乙酯 (色谱纯) 上海化学试剂研究所。
1.2 色谱条件。
气相色谱条件:色谱柱:DB-1 (30m×0.53mm×5μm) 毛细管柱;柱温:80℃保持7.8min;进样口温度:150℃;FID检测器温度250℃;分流比10:1;压力采用程序升压:23.7Kp保持4.5min, 再以29.4Kp/min的速率升到80Kp, 保持1min;顶空平衡温度80℃, 平衡时间30min。
1.3 样品测定。
1.3.1 对照溶液:
精密称定二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯适量, 用纯化水溶解并稀释成每1ml水中含丙酮约200μg、含二氯甲烷约100μg、含乙酸乙酯约200μg的溶液。精密量取5.0ml置顶空瓶中, 密封瓶口, 作为对照品溶液。
1.3.2 供试品溶液:
取头孢他啶约0.1g, 精密称定, 置于顶空瓶中, 加入0.01g碳酸钠, 加入5ml纯化水使溶解, 密封瓶口, 作为供试品溶液。
1.3.3 测定:
按照上述气相色谱条件, 进对照品溶液和供试品溶液各1ml, 按外标法计算各个溶剂的含量。
2 结果与讨论
2.1 为了确定最佳的平衡条件, 在选定顶空平衡温度80℃时, 对平衡时间对峰面积的影响作了如下试验:
其中保留时间, 2.27为丙酮, 2.72为二氯甲烷, 4.53为乙酸乙酯
其中保留时间2.27为丙酮, 2.72为二氯甲烷, 4.53为乙酸乙酯
制备含丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三种组分的溶液, 使每1ml溶液中含含丙酮约200μg、含二氯甲烷约100μg、含乙酸乙酯约200μg。精密量取5ml置于20ml顶空瓶中, 密封瓶口, 分别平衡10min、13min、15min、17min、20min、25min、28min、30min、35min、40min后进样, 以平衡时间与峰面积做图, 如下图3。
在20min后基本达到平衡, 选定30min作为平衡时间。
另外, 对平衡温度和头孢他啶助溶剂作了选择试验, 平衡温度80℃, 加入0.01g碳酸钠助溶时效果较好。
2.2 线性范围的测定:
分别制备含丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三种组分7个浓度水平的溶液进行测定, 使丙酮在 (24～480μg/ml) ;二氯甲烷在 (13～263.0μg/ml) 、乙酸乙酯在 (20～408μg/ml) 浓度范围内。以测得的信号作为被测组分的函数作图, 观察是否呈线性, 再用最小二乘法进行回归, 计算相关系数。
2.3 精密度的测定:
分别制备含丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三种组分三个浓度水平的溶液, 每个浓度水平测定6次, 按峰面积计算相对标准偏差。测定结果列于表2。
2.4 回收率的测定:
在已知残留溶剂浓度的样品中, 分别加入高、中、低已知浓度的丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯, 进行六次重复测定, 结果列于表3。
3 结论
不同的色谱柱柱温、检测器温度以及载气流量对分离效率、分析时间及灵敏度都具有一定的影响。因此我们按实验步骤进行了色谱最佳条件的选择。实验结果表明丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三组分在毛细柱DB-1分离良好。且采用外标法[3]顶空自动进样重现性好, 定量准确易于操作, 易于实现自动化。非常符合药品中残留溶剂的检测要求, 有利于药品质量的控制。此方法可以应用于企业的顶空气相色谱法测定头孢他啶中的残留溶剂丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯的检测。
摘要：目的:建立一种气相色谱法同时测定头孢他啶中丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯有机溶剂残留量的。方法:采用外标法顶空自动进样, 在非极性弹性石英毛细柱[1]上进行各组分分离, 效果良好。结果:平均回收率丙酮98.6%102.3%;二氯甲烷99.3%102.6%;乙酸乙酯97.6%99.5%;变异系数丙酮2.6%;二氯甲烷2.5%;乙酸乙酯3.2%。结论:方法重现性好, 定量准确, 便于操作。
关键词：顶空气相色谱法,头孢他啶,残留溶剂
参考文献
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