土牛膝水煮液对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影响

土牛膝, 别名倒扣草, 《中国药典汇编》对土牛膝有如下记载:药性:苦、凉。归肺、脾、肝、膀胱经。药效:败毒抗癌、逐淤除痹, 消炎利尿。现代医学研究证明, 土牛膝具有改善机体微循环, 调整新陈代谢, 改善免疫功能等作用。具有明显的抗炎抗菌、镇痛、抗衰老作用等[1~3]。近年来有研究表明与牛膝含有成分的齐墩果酸、牛膝多糖具有治疗糖尿病的功效[4~6], 但土牛膝水煮液在治疗糖尿病方面的研究尚无报道。以本地野生土牛膝为原料经过水煮浓缩、过滤得到土牛膝水煮液, 观察土牛膝水煮液对正常小鼠以及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影响如果能确定土牛膝也具有降糖作用, 将对糖尿病的治疗具有重要意义。

1 材料

(1) 土牛膝水煮液, 取干燥土牛膝 (湖南郴州郊外野生) , 用冷水浸泡20min后取出, 置煎锅中, 加水500m L, 大火加热至沸腾, 改小火再煎50min, 将水煮液倒入收集烧杯中, 再加水适量同法煎煮3次, 将药汁合并过滤, 用水浴加热浓缩至60m L, 临用前用生理盐水配成所需浓度。

(2) 动物昆明种小鼠, 体重20~25g, 雄性, 湘南学院医学动物实验中心提供。

(3) 试剂和仪器, 四氧嘧啶 (Alloxan) 北京恒业中远化工有限公司;生理盐水 (自制) ;肝素钠, 天津药业焦作有限公司;盐酸苯乙双胍 (Phen-formin) 25mg/片, 山东仁和堂药业有限公司, 批号:080612;邻甲苯胺, 海宁市通元化工厂;其余试剂均为市售分析纯。电子天平, 上海精密仪器仪表有限公司;离心机, 江苏牡丹离心机制造有限公司;722型分光光度计, 上海天翔光学仪器有限公司;小鼠用灌胃针头。

2 方法与结果

2.1 有效剂量的换算

参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》[7], 通过人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值来进行换算, 通过计算每只小鼠的保守有效剂量是1.82g·kg-1。

2.2 土牛膝水煮液剂量组配制

分别取土牛膝水煮液用生理盐水稀释, 配制低 (2g·kg-1) 、中 (4g·kg-1) 、高 (6g·kg-1) 3个剂量组。

2.3 实验性糖尿病模型的制作

将四氧嘧啶用生理盐水配成浓度为0.7%的溶液。取昆明种小鼠, 试验前禁食12h, 腹腔注射四氧嘧啶0.12g·kg-1, 第2天同样在禁食12h后腹腔注射四氧嘧啶0.1g·kg-1, 72h后从小鼠眼眶或尾静脉取血, 用邻甲苯胺法测血糖, 选给药后血糖值>13.8mmo L·L-1者作为糖尿病模型小鼠。

2.4 对正常小鼠血糖的影响

取30只昆明种小鼠, 随机分成3组, 每组10只, 即土牛膝水煮液中等剂量组 (4g·kg-1) ;阳性对照组 (盐酸苯乙双胍0.1g·kg-1) ;阴性对照组 (生理盐水) ;均按20m L· (kg·d) -1体积灌胃给药, 连续14d, 于末次给药前禁食12h, 给药后1h小鼠眼眶或尾静脉取血, 用邻甲苯胺法测定血糖值, 所得数据进行组间t检验。由表1可见, 空白对照组的血糖值即为小鼠的正常血糖, 而正常给药组的血糖值比空白组的略高, 但仍处于正常范围内, 并无降糖作用 (P>0.05) :而阳性对照组的血糖比空白组略低, 但也处于正常范围内, 无明显的降糖作用。这表明土牛膝水煮液对正常小鼠血糖无明显影响, 有利于开发成为降糖中药制剂。

2.5 对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响

将糖尿病模型鼠随机分为5组, 每组10只, 分别为模型对照组 (生理盐水) , 土牛膝水煮液3个剂量组 (2g·kg-1, 4g·kg-1, 6g·kg-1) 阳性对照组 (盐酸苯乙双胍0.1g·kg-1) , 给药方法均同前, 连续给药14d。在末次给药前12h禁食, 给药1h后眼眶或尾静脉取血, 用邻甲苯胺法测定血糖值, 所得数据进行组间t检验。由表2可见, 与糖尿病模型组比较, 土牛膝水煮液低剂量组能够降低血糖, 中剂量组有明显的降血糖作用、高剂量组能显著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖 (P<0.05) , 与对照组 (盐酸苯乙双胍) 具相似降糖效果。与参考文献[6]中的结果基本相符。

3 讨论

实验结果表明土牛膝能够降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖水平, 对糖尿病小鼠有较好的治疗作用, 降血糖作用和剂量相关。另外, 对正常动物血糖影响较小, 有利于今后开发成为低毒的降糖中药制剂。降糖组分及降糖机理还有待于进一步的深入研究。

摘要：目的 研究了土牛膝水煮液对正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影响。方法 采用正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病模型小鼠, 用邻甲苯胺法测定血糖值。结果 土牛膝水煮液对正常小鼠空腹血糖无明显降低作用, 能降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的空腹血糖水平。结论 土牛膝水煮液对糖尿病小鼠有较好的降糖作用。

关键词：土牛膝水煮液,四氧嘧啶,血糖

参考文献

[1] 史玉芬, 郑延彬.牛膝抗炎、抗菌作用的研究[J].中药通报, 1988, 13 (7) :44～47.

[2] 陆兔林, 毛春芹, 张丽.牛膝不同炮制品镇痛抗炎作用研究[J].中药材, 1997, 20 (10) :507～509.

[3] 马爱莲, 郭焕.怀牛膝抗衰老作用研究[J].中药材, 1998, 21 (7) :360～362.

[4] 唐黎明, 吕志钧, 张小萍, 等.牛膝多糖药效学研究[J].中成药, 1996, 18 (5) :31～33.

[5] 郝志奇, 王瑛.齐墩果酸对小鼠的降血糖作用[J].中国药科大学学报, 1991, 22 (4) :210.

[6] 李海泉.牛膝多糖降糖作用实验研究[J].安徽医药, 2004, 8 (5) :326～327.

[7] 徐叔云, 卞如濂, 陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社, 2002, 1 (3) :202～204.