肺纤维化中药研究

肺纤维化中药研究（精选十篇）

肺纤维化中药研究 篇1

肺纤维化改变是几乎所有间质性肺疾病 (interstitial lung disease, ILD) 的共同病理特点。初发期表现为急性肺泡炎症过程, 在较晚期逐渐形成肺纤维化。ILD在肺泡炎期各种炎症细胞浸润肺泡壁, 不同病因的肺间质病常以某种炎症细胞的突出表现为特征, 有些间质病的肺泡炎还具有病理特点。随着肺泡炎病变的持续发展, 肺泡炎时具有鉴别意义的炎症细胞特征逐渐消失, 经过一段时间后, 也不再有肉芽肿性病变的病理表现, 形成肺纤维化。目前对于肺纤维化的治疗及逆转其病理变化的发展还缺少可靠的药物。本实验探讨中药肺宁对肺纤维化的治疗作用及其对病理学的影响。

1 材料和方法

1.1 材料

昆明成年小鼠60只, 雌雄各半, 体质量 (30±2) g, 由本校动物中心提供。博莱霉素粉针由日本株式会社生产, 批号:740130;强的松片由西安利君沙制药股份有限公司生产, 批号:20050110;肺宁由第四军医大学第三附属医院药剂科研制, 主要成分为龙胆苦苷和三七总苷, 1g肺宁稠膏相当于0.8521 g龙胆花生药, 三七总苷含量为0.0762 g。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立

60只动物随机分为6组, 每组10只, 雌雄各半。采用博莱霉素 (BLM) 诱导实验性肺纤维化, 按文献[1]方法略作改进。每只小鼠以200g/L乌拉坦 (5 mg/kg) 腹腔内注射麻醉后固定于鼠板上, 消毒后做颈部正中切口, 暴露气管, 经穿刺向气管内缓慢注入博莱霉素5 mg/kg (浓度10 g/L) 或等量的生理盐水 (正常对照组) , 注射后迅速使动物直立并轻轻旋转, 使药液在肺内均匀分布, 缝合伤口, 消毒, 待动物清醒后常规饲养。

1.2.2 治疗

建模后第2日各组动物进行治疗:①正常对照组 ②模型组:生理盐水灌胃;③肺宁 (1 g/kg) 低剂量组;④肺宁 (2 g/kg) 中剂量组;⑤肺宁 (4 g/kg) 高剂量组;⑥强的松组:将强的松片研成粉末, 加蒸馏水溶解, 参照文献按6 mg/kg进行灌胃;所有实验动物每只灌胃量均为0.2 ml。

1.2.3 观察指标

分别于造模后三个月脱臼处死各组动物, 迅速取肺, 左叶肺投入40 g/L甲醛中固定, 常规包埋, 切片, 进行HE染色、MASSON染色, 光学显微镜下观察。病理半定量结果多组间比较, 用Kruskal-Wallis秩和检验, 组间两两比较用Nemenyi法检验。

1.2.4 病理学评价方法

取大鼠的左上肺以10% 中性福尔马林固定, 酒精梯度脱水, 石蜡包埋, 制成5 mm 的切片, 作HE, MSSON 染色。在光学显微镜下观察, 依据Szapiel等[2]的方法确定。肺泡炎和肺纤维化的程度分为4级:无肺泡炎 (-) ;轻度肺泡炎 (+ ) ;中度肺泡炎 (+ + ) ;重度肺泡炎 (+++) 。肺纤维化分级标准:无纤维化 (-) ;轻度纤维化 (+) ;中度纤维化 (+ +) ;重度纤维化 (+ + +) 。

2 结果

2.1 大体标本

空白对照组:肺表面光滑, 呈粉红色, 弹性良好。模型组:肺呈暗红色, 体积增大, 弹性较差, 表面凸凹不平。有散在斑点或斑片状实变灶, 部分肺切面可见小囊形成。肺宁、强的松治疗组程度略轻, 各剂量组差异不明显。

2.2 HE 切片观察

①对照组:肺组织轻度充血, 肺泡内可见少量炎性细胞;肺泡间隔略增宽伴轻度充血、水肿。②模型组:肺泡结构紊乱, 肺泡间隔显著增厚, 部分肺泡腔扩张呈囊状, 肺泡壁断裂, 部分肺泡腔萎陷, 腔内可见渗出物淤积, 水肿及炎性细胞浸润。③强的松、大剂量组:肺泡间隔略增宽伴轻度充血水肿, 肺泡内可见少量炎性细胞, 纤维组织增生不明显。④中剂量组:肺泡间隔可见充血、水肿, 少量纤维组织增生。⑤小剂量组:肺组织明可见充血水肿, 有炎性细胞浸润;肺泡间隔增宽, 中度纤维增生。

2.3 MASSON 染色观察

① 正常对照组:肺泡间隔无明显胶原纤维增生。②模型组:可见支气管、血管周边大量纤维增生, 肺泡腔内分布纤维化病灶, 有明显的间质纤维化。③强的松、大剂量组:肺泡间隔中可见少量胶原纤维增生。 ④ 中剂量组:肺泡间隔中可见少量—中等量胶原纤维增生。⑤小剂量组:多数肺泡间隔中可见少量——中等量胶原纤维增生。

各组标本肺泡炎及间质纤维化程度, 见表1。

aP<0.05 vs control ;bP<0.01 vs control;cP<0.05 vs BL;dP<0.01 vs BL

3 讨论

肺纤维化改变是几乎所有ILD的共同病理特点, 是以肺泡炎、间质性肺炎、肺泡上皮受损及成纤维细胞增生, 胶原纤维异常聚集为特征。初发期表现为急性肺泡炎症过程, 这种肺泡炎改变多认为是损伤因子导致肺泡壁毛细血管内皮通透性增加的结果, 此期主要病理变化为体液和血浆蛋白的渗出及巨噬细胞游出。随着肺泡炎的发展和延续, 肺泡炎时具有鉴别意义的炎症细胞特征逐渐消失, 经过一段时间后, 形成肺纤维化, 严重的肺纤维化使肺组织呈弥漫性扭曲和收缩, 形成囊腔或蜂窝肺。

目前对于肺纤维化的治疗及逆转, 其病理变化的发展还缺少可靠的药物。糖皮质激素虽作为首选药物, 但毒副作用严重。中药肺宁的主要成分是龙胆苦苷和三七总苷。龙胆苦苷具有促进胃液分泌、抗炎、保肝、利胆等作用。三七总皂苷对急性炎症的毛细血管通透性增加、炎性渗出、组织水肿有抑制作用。李学军等[3]证明三七总苷具有抗肺纤维化的作用。在先前的实验中发现, 肺宁水煎液在1 g/kg剂量下连续灌胃给予肺纤维化模型大鼠28天, 对肺纤维化病变的病理和生化指标有较好的改善作用, 并且无毒副作用[4]。

BLM肺纤维化模型的病理演变能较好的再现人类间质性肺纤维化病情进展的全过程, 是目前国内外研究肺纤维化的理想模型[5,6]。本实验成功地复制了大鼠肺纤维化模型, 模型组病理组织切片可见明显纤维增生, 肺泡结构破坏, 其病变过程与文献报道基本一致。从模型制作后第2天即给予中药肺宁治疗, 可以观察其从急性肺损伤期开始, 对纤维化的发展是否有阻抑作用。实验结果显示:肺宁中、高剂量组、强的松组肺泡炎程度较模型组有显著差别 (P<0.05, 强的松组P<0.01) ;肺宁高剂量组、强的松组肺纤维化程度较模型组有显著差别 (P<0.05, 强的松组P<0.01) 。由此说明肺宁治疗组能够减轻博莱霉素诱导的大鼠肺急性损伤期的炎症反应, 并可抑制其诱导的肺纤维化进程。

实验连续灌胃肺宁给予肺纤维化模型小鼠56天, 可抑制其BLM诱导的肺纤维化进程, 减轻肺纤维化程度;先前的实验证明肺宁能使早期肺损伤大鼠肺组织匀浆中TNF-α水平下调, 可减轻脂质过氧化反应, 清除自由基, 削弱炎症反应, 减少炎症细胞的渗出。说明肺宁可削弱炎症反应, 减少炎症细胞的渗出, 抑制肺纤维化, 能在肺纤维化形成的过程中发挥治疗作用。

摘要：观察中药肺宁对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的治疗作用。以博莱霉素气管内注入建立肺纤维化模型, 次日始分别给予中药肺宁和强的松灌胃治疗, 于给药后56天处死动物, 对肺组织行病理组织学检查。与模型组相比, 肺宁高、中剂量组肺泡炎症程度显著降低 (P<0.05) , 肺宁高剂量组肺纤维化等级明显减轻 (P<0.05) 。肺宁可减轻肺损伤小鼠的炎症反应, 能够对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化起到治疗作用。

关键词：肺宁,博莱霉素,肺泡炎,肺纤维化

参考文献

[1] Kai Z H, Mehrnaz G K, Bridget Mc, et al.TNF-alpha-mediatedlung cytokine networking and eosinophil rec-ruitment in pulmonary fi-brosis.Immunol, 1997;158 (2) :954—959

[2] Szapiel S V, Elson N A, Fulmer J D, et al.Bleomycin-induced in-terstitial pulmonary disease in the nude, athymic mouse.AmRev Re-spir Dis, 1979;120 (4) :893—897

[3]李学军, 崔社怀.三七总甙及甲泼尼龙对实验大鼠肺纤维化的干预作用及机制的初步探讨.中华结核和呼吸杂志, 2002;25 (9) :520—523

[4]卫张蕊, 田琼, 陈健康, 等.中药肺宁对实验性肺纤维化的保护作用.第四军医大学学报, 2005;26 (7) :625—627

[5]侯显明, 于润江.间质性肺病学, 北京:人民卫生出版社, 2003:40—44

特发性肺间质纤维化的中医研究论文 篇2

【关键词】特发性；肺间质纤维化；中医治疗；运用效果

特发性肺间质纤维化疾病的主要特征是弥漫性肺泡炎、纤维化等，对患者进行肺间质损伤。人体肺脏的间质组织本身是由胶原蛋白、弹性素以及蛋白糖构成的，该疾病主要是通过对患者肺部成纤维细胞进行损伤，然后通过胶原蛋白的分泌来修补间质组织，从而患者肺部组织失去正常的功能，转化为纤维化。

1中医对于特发性肺间质纤维化疾病的认知

特发性肺间质纤维化疾病属于一种先到医学名称，而从中医学的角度上来讲，根据患者患病不同时期的不同症状而进行不同的归属，根据患者病情症状的演变，患者临床症状为咳嗽，则在中医学中的命名则是“喘证”；患者临床症状为肺胀，在中医学中的命名则是“肺痹”、“肺萎”；根据对国内外医学文献中对于特发性肺间质纤维化疾病患者临床症状相关调查得知，患者发病早期属于“肺痹”痹，而晚期则属于“肺萎”，两则在疾病的发展过程当中互相影响。而对于该疾病的中医学病因病机而言，在《黄帝内经》当中有所描述”痹者，闭也，风寒湿三气杂至，则壅闭经络，气血不行而病为痹”，张炜等[1]人研究当中证实了肺痹发病的条件必然是外邪袭表犯肺。而苏鑫等[2]人提出，肺热络瘀是肺痹的早期发病病因。根据以上专家学者对于特发性肺间质纤维化疾病的中医发病病因研究可以得知，肺痹的早期发病原因是由于风寒湿诸邪侵袭脏腑经络，营血运行不畅所导致的。而“肺萎”的中医学病因则与之不同，在《金匮要略》中有所描述，肺萎的发病原因主要是肺热叶焦、津血不足，久之缠身、由气及血、由肺及肾、肾肺两虚、气血不足、络虚不荣、络虚则萎。

2中医对于特发性肺间质纤维化疾病的治疗

2.1活血化瘀通络

特发性肺间质纤维化疾病的早期发病比较急，并且病程较短，主要是肺泡的炎症渗出，从中医学的角度上来讲应当以通络为主，在《金匮要略》中对于该疾病的治疗方法有着讲述，如采用苇茎汤和葶苈大枣泻肺汤治疗，可以对患者起到通肺络的治疗作用。凤等[3]人研究当中，对特发性肺间质纤维化疾病早期患者20例进行中医治疗，采用化纤破痼汤联合泼尼松治疗方法，持续治疗90d，患者临床症状与肺功能指标均有所改善，并且在治疗过程中起到了抗纤维化的作用。在本次研究当中，对特发性肺间质纤维化疾病患者10例采用中医治疗方法，具体方法为采用三七粉3g给予患者冲服，采用炙水蛭3～5g给予患者煎服，患者治疗有效例数为10例，总有效率为100%。

2.2补肺健脾益肾

特发性肺间质纤维化疾病的晚期状态，患者肺部属于纤维化的状态，并且病程较长，从病理分期来说已经属于迁延期，所以治疗当中应当以补为主，在《金匮要略》中对于该疾病的治疗方法有着讲述，张晓雷等[4]人的研究当中，对10例肺萎患者采用中医治疗方法，遵循养阴益气、调补肺肾、纳气平喘的治疗方法，并且在其治疗的基础上运用活血化瘀的治疗方式，对10例患者采用肺萎冲剂治疗，10例患者治疗60d后，其生活质量、治疗效果、肺功能指标均有着明显的改善，特别对于患者呼吸困难的症状改善较为明显。在本次研究中，对5例患者采用四君子汤治疗方法达到益气健脾的效果。具体配方为人参9g；白术9g；茯苓9g；炙甘草6g，取水煎服，根据患者不同症状加减治疗，患者治疗总有效率为100%。

3讨论

特发性肺间质纤维化疾病属于多种肺部疾病发证的最终结果[5]，其病因病理目前而言仍然尚未明确，但是其发病机制表现主要为侵犯肺泡壁以及肺泡腔等，将患者肺泡的间隔增厚，并且晚期发展为肺间质的纤维化。对于其治疗方法而言，西医治疗虽然能从患者的临床症状方面对患者疾病进行缓解，但是无法从抗纤维化方面对患者进行治疗。而中医治疗方法则可以在缓解临床症状的基础上进行抗纤维化治疗。从特发性肺间质纤维化疾病的治疗方面而言，中医研究当中取得了一定的进展，但是在对于疾病的预防与延缓发展方面却需要进一步研究。

参考文献

肺纤维化中药研究 篇3

【关键词】大鼠；肺纤维化；雷帕霉素；博来霉素

【中图分类号】R-0【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）08-0381-01

肺纤维化是肺间质性疾病的一种类型，典型的特征是在肺间质上，沉积着大量的细胞外基质蛋白。相关研究发现，致使出现这一症状的原因在于，被免疫细胞和炎症细胞激活的细胞因子和生长因子诱导纤维细胞增殖，从而产生大量的胶原蛋白[1]。常规的治疗方案是使用环磷酰胺、糖皮质激素等进行免疫抑制，但是，这些药物的毒副作用强烈，治疗效果不佳。作为大环内酯药物的一种，雷帕霉素对于淋巴细胞和非淋巴细胞都有很高的抵抗增殖作用，能够抑制生长因子和细胞因子的细胞信号转换[2]。因此，雷帕霉素已经在肝纤维化的治疗中应用。本文对大鼠的肝纤维化采用雷帕霉素进行干预，取得了良好的效果。具体结果报告如下：

1.资料与方法

1.1基本资料15只大鼠体重在200g左右，体质健康，均为SPF级雌性大鼠。抗体TGFβ1来自于santa cruz公司；二抗抗体购于DAKO公司，货号为K5007；博来霉素由天津太和制药有限公司生产，规格每支4mg；雷帕霉素由上海源叶生物科技公司生产，货号为53123-88-9。

1.2操作方法将15只大鼠随机分为对照组（5只）、观察1组（5只）、观察2组（5只）。对照组使用气管注入生理盐水，剂量按照大鼠的体重进行控制，为每千克5mg。观察组首先使用气管注入博来霉素，从而对肺纤维化模型进行复制。3天后对观察2组的大鼠使用雷帕霉素进行灌胃处理，剂量为每天每千克1mg，将这一过程持续10天。28天之后配置浓度为6%的水合氯醛，对大鼠进行腹腔注射麻醉，剂量控制为每千克1mg。在大鼠的左侧肺下叶提取相同的肺组织，然后常规包埋，并且进行石蜡切片。取材结束后，对大鼠进行放血处死。

1.3肺组织切片染色和免疫组织检查石蜡切片的厚度控制在5μm，第一步使用苏木素染色液对细胞核进行3分钟的染色，完成后使用流水冲洗。第二步使用盐酸乙醇进行分化处理，完成后使用流水冲洗。第三步使用氨水着蓝色30秒，完成后用蒸馏水冲洗，在显微镜下观察染色情况。第四步使用酒精伊红染细胞质15秒，完成后用酒精进行脱水处理，并使用中性树胶封片。第五步，使用显微镜观察肺间质的厚度，观察肺纤维化的范围大小，并检测TGF-β1的肺组织表达。

1.4观察项目完成石蜡切片和染色以后，应用Ashcroft评分标准对肺纤维化程度进行评估。对染色完成的切片在显微镜下进行拍照取图，利用专业分析软件计算积分光密度，最后取平均值作为蛋白表达的强弱指标。

1.5统计学处理Ashcroft评分标准使用总体分布统计学方法进行分析，TGF-β1的积分光密度使用随机样本方差分析方法，组间对比使用LSD-t检验。P＜0.05，说明具有差异统计学意义。

2.结果

2.1在肺组织病理学变化上的比较 观察1组大鼠的肺泡结构遭破坏，小气道周围的炎性细胞产生明显浸润现象，并且形成纤维化。观察2组大鼠的炎性细胞也产生浸润现象，但比观察1组症状要轻，且没有形成纤维化。在Ashcroft评分上，观察2组的评分（2.91±0.58）明显高于观察1组（0.29±0.56），但低于对照组（5.78±1.66），对比差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2在TGF-β1表达情况上的比较观察2組TGF-β1的表达量（5521.00±1615.63）明显高于对照组（3368.00±1476.89），但小于观察1组（7778.00±1520.34）。三组TGF-β1表达水平差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。

3.讨论

3.1 TGF-β1TGF-β1在肺纤维化的形成和发展中起到关键作用，能够加快纤维细胞的增殖，使其向成肌纤维细胞转变。而成肌纤维细胞与细胞外基质蛋白的沉积有密切关联，在肺纤维的发病中作用十分重要[3]。在本次研究中，观察组中的大鼠TGF-β1的表达量都在增高，但应用雷帕霉素的一组TGF-β1表达量要比应用博来霉素的低。这就说明，雷帕霉素能够抑制TGF-β1的过度增殖，降低肺纤维化的发展速度。

3.2雷帕霉素雷帕霉素能够抑制多种T细胞的增殖发展，因此目前被广泛应用在免疫疾病和抗排斥反应的治疗中。相关研究表明，雷帕霉素还能够对纤维细胞产生作用。当下国内外的研究中，普遍使用雷帕霉素对肺纤维化的大鼠进行干预，从而得出雷帕霉素在抑制肺纤维化中的作用。至于雷帕霉素的抑制原因，主要是因为它能够和细胞受体FK506蛋白结合成复合物，这种复合物能够抑制蛋白激酶的活性，从而减弱磷酸化作用，阻断生物信号向下游传递[4]。这其中，就包含了TGF-β1因子。

综上，将雷帕霉素应用在肺纤维化的治疗上，TGF-β1的表达量明显降低，能够抑制TGF-β1的过度增殖，炎性细胞的浸润现象比较轻，且不会形成纤维化。因此，雷帕霉素对于肺纤维化具有明显的抑制作用。

参考文献：

[1]黄莺,徐芳,万勇,等. 雷帕霉素对肺间质纤维化大鼠IL-17、IL-2、TGF-β和IL-6及调节性T细胞的影响[J]. 安徽医药,2014,03（09）:423-427.

[2]熊伟,程金湘,章翔. 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白研究进展[J]. 中华神经外科疾病研究杂志,2011,01（13）:85-88.

[3]李进,邹祥. 雷帕霉素及其衍生物开发现状、作用机制及生物合成研究进展[J]. 中国抗生素杂志,2011,11（02）:806-813.

[4]穆云龙. 雷帕霉素研究进展[J]. 河北化工,2010,01（08）:21-23.

青蒿素抗肺纤维化的研究进展 篇4

关键词：青蒿素,肺,纤维化,激素

肺纤维化是一种弥慢性肺炎性疾病，主要累及肺间质，是肺组织损伤后过度修复的一种重要表现，其机制不明且发生过程极其复杂。近年来肺纤维化的发病有升高趋势，病死率高。而肺纤维化的治疗以传统使用激素和免疫抑制剂为主，效果并不理想。青蒿素是我国药学工作者开发的一个倍半萜内酯类化合物，具有独立知识产权。双氢青蒿素是青蒿素的一个重要衍生物，是合成青蒿琥酯，蒿甲醚，蒿乙醚的重要中间体和主要活性代谢产物[1]。近年来学者研究发现，青蒿素及其衍生物除了抗疟疾作用外，还有抗组织纤维化，免疫调节及抗炎作用[2]，在抗肺纤维化方面也有一定作用。现就对其抗肺纤维化作用予以综述。

1 肺纤维化的诊治现状

间质性肺疾病后期多改变为肺纤维化，其病因多样，已知的如感染、药物、粉尘、放射线等，部分病因不明者称为特发性肺纤维化。肺纤维化发生机制现多倾向于对细胞因子的研究[3]，包括炎症介质介导，多种细胞因子如转换生长因子-β（TGF-β），成纤维细胞生长因子（FGF）及炎性因子的生成、释放、迁移，以及成纤维细胞、肌成纤维细胞的增殖活化。可见肺纤维化的发生与炎性反应密切相关。而Suveer等[4]的研究表明，在肺纤维化中循环自身抗体，如抗核抗体（抗ANA抗体）、抗双链DNA抗体（抗Ds-DNA抗体）、抗细胞角蛋白8抗体和免疫复合物水平升高，表明肺纤维化可能是一种自身免疫病。也有文献报道[5]肺纤维化的发生与体内氧化和抗氧化失衡有关。目前肺纤维化的发生机制尚不明确。

另一方面，肺纤维化的治疗仍为世界性难题。不论是明确病因所致，或者特发性肺纤维化，去除病因后的治疗，如应用一些干扰胶原蛋白的合成的药物：吡非尼酮，干扰素γ-1B，干扰素β-1a，秋水仙碱和青霉胺已经在临床对少数患者进行试验治疗[6]，结果示虽然部分患者的肺功能得到改善或稳定，但是死亡率并没有明显下降。有临床试验[7]显示，激素和（或）免疫抑制剂治疗为主的治疗方案中，治疗组和非治疗组的中位生存期的差异没有统计学意义。

2 青蒿素抗肺纤维化的证据和可能机制

2.1 抑制成纤维细胞增殖并诱导其凋亡

青蒿素抗纤维化作用与其抑制成纤维细胞增殖、降低胶原合成并促进其分解有关。肺纤维化的病理特征表现在是肺泡上皮损伤、成纤维细胞灶的形成以及细胞外基质的过度沉积，最终导致了肺组织结构的异常重塑及肺纤维化发生。测定成纤维细胞表达对研究肺纤维化意义重大。Wang等[8]用1mg/L, 10mg/L, 100mg/L三个剂量组青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞，结果发现青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖；且青蒿琥酯可通过上调Fas, FasL, Caspase-3 mRNA的表达，抑制人胚肺成纤维细胞增殖并促进其凋亡，发挥抗肺纤维化作用。孔恒等[9]初步证实了青蒿琥酯在30～240mg/L浓度作用来源于肺和皮肤的成纤维细胞时，光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆，突起变短变少，胞浆颗粒增多，甚至核浓缩、核碎裂，对以上两种细胞的的增殖具有抑制作用。

而瘢痕疙瘩也是成纤维细胞过度增生的结果，青蒿素衍生物抑制成纤维细胞增殖在增生性瘢痕的治疗中也有体现。冯登超等[10]通过实验建立兔耳创面瘢痕动物模型，在兔耳创面上皮化后给予双氢青蒿素[180mg/（kg·d）]灌胃治疗，结果发现双氢青蒿素组真皮层厚度及成纤维细胞数目较对照组明显减少；胶原纤维致密度下降，排列较规则；推测其机制可能是青蒿素通过直接抑制成纤维细胞的生长、增殖或诱导其凋亡而抑制瘢痕成纤维细胞的增殖，减少胶原的合成和分泌，从而抑制瘢痕的增生。在临床上，贺光照[11]等用青蒿素乳膏局部治疗50例增生性瘢痕，总有效率达88%，治疗后瘢痕皮肤色泽好转，其厚度及硬度均明显降低。这就提示青蒿素可能对瘢痕疙瘩也有治疗作用。

2.2 防治放射性肺纤维化

放射性肺炎往往发展为肺纤维化而影响肺功能。Ward等[12]以60CoY为照射源，15Gy剂量组照射大鼠，发现1个月后大鼠肺组织内发生肺部炎症性改变，主要为肥大细胞、中性粒细胞等浸润，肺水肿明显，且发现随着时间的延长胶原纤原逐渐增多，照射5个月时可出现双肺组织纤维增生和胶原化改变，呈现放射性纤维化病理模型。基于此，戴夕超等[13]通过γ射线15Gy的剂量全肺照射，建立大鼠放射性肺纤维化模型，并使用60 mg/（kg·d）的双氢青蒿素治疗，发现单纯照射组大鼠肺组织炎症渗出及纤维化征象严重，而治疗组大鼠肺较单纯照射表面光滑、充血水肿减轻，肺组织的炎性渗出减轻，肺纤维化征象较轻。推测青蒿素及其衍生物有望用于肿瘤放疗的辅助治疗。

2.3 防治硅沉着病

硅沉着病的发生是由于吸入粉尘，如二氧化硅导致成纤维细胞增生，胶原合成增多后肺内胶原沉积所致，是明确的肺纤维化病因。孙顺仙等[14]发现青蒿素对实验性硅沉着病有明显的治疗作用。其建立硅沉着病大鼠模型，观察到经使用青蒿素治疗后硅沉着病鼠的肺重、肺中矽及全肺胶原蛋白含量明显降低，病理可见矽结节减少，融合程度减轻，肺纤维化程度减轻。在临床工作中，有学者[15]使用用青蒿浸膏片治疗硅沉着病23例长达2年，发现其主要症状改善明显，X线胸片改变稳定，血清铜蓝蛋白及羟脯氨酸较治疗前明显下降，较大程度降低硅沉着病纤维化指标，而达到抗纤维化作用，且不良反应少见。

2.4 免疫调节作用

肺纤维化的发生可能为自身免疫的结果[4]。Ouyang等[16]通过动物实验证据表明，青蒿琥酯具有免疫调节特性可能用于治疗自身免疫性疾病治疗。其通过建立MRL/IPR小鼠狼疮模型，观察到青蒿琥酯能改善狼疮小鼠的症状，并显著减少小鼠血清抗ANA抗体和抗Ds-DNA抗体，延缓疾病进展甚至逆转狼疮性肾炎的病理病变，显著提高存活率，和环磷酰胺（CTX）组相比治疗效果有统计学意义。此为青蒿素治疗系统性红斑狼疮提供了实验依据。这在Yang等[17]证明青蒿琥酯可以放大动物对绵羊红细胞的延缓型过敏反应和抗体生成反应的报道也有一定体现。

3 抗炎作用

肺纤维化发生机制现多被认为是炎症介质介导一系列炎性细胞和细胞因子之间炎性反应级联放大的结果[3]。青蒿素被证明具有抗炎作用可能可以用于肺纤维化治疗。白细胞介素-6 (IL-6）作为一种细胞因子，可诱导肺内纤维蛋白原合成释放C反应蛋白等急性期蛋白，以促进非特异性的炎性反应。有学者[18]研究发现，青蒿素可显著抑制脂多糖刺激的巨噬细胞系RAW264.7分泌IL-6。这在Li等[19]的研究中也得到证实。提示青蒿素在机体非特异性的炎性损伤方面可能有一定应用价值，尚需进一步证实。

其他方面，周红等[20]发现双氢青蒿素与抗菌药应用可抑制细菌生长，增强抗菌药物的抗菌能力。而金慧玲等[21]通过体外研究证实，青蒿琥酯浓度在0.6%时对白喉杆菌、0.9%时对绿脓杆菌、白色念珠菌，12%时对金黄色葡萄球菌、红色毛癣菌，均有抑制作用。以上表明青蒿素及其衍生物可能和抗菌药物有共同的药理作用，可用于抗炎症性损伤的治疗。

肺纤维化中药研究 篇5

【关键词】 关节炎，类风湿；肺功能；脾气亏虚；健脾化湿通络法；新风胶囊；述评

doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2014.01.001

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性滑膜炎症为主要特征的自身免疫疾病，关节炎症的刺激可导致关节内软骨和骨的破坏，反复迁延多年，最终导致关节畸变及功能丧失[1-2]。然而RA病变并非局限于关节局部，常伴有关节以外的其他脏器病变，甚至可引起主要脏器的血管炎而危及生命[3]。因肺组织含有丰富的结缔组织和血管，所以，RA肺部受累的几率比其他组织增加，且随着RA病程延长，肺受累的机率逐步增高。研究显示[4]，约有11%的RA患者会继发肺间质纤维化改变，最终出现肺功能的降低。既往研究发现[5-8]，

RA肺功能损伤中医证候呈现脾虚湿盛、虚实夹杂的特征[9]。笔者治疗RA肺功能损伤依照“从脾论治”的原则，采用具有健脾化湿通络功效的中药复方“新风胶囊”，取得了良好的临床效果，并经实验研究证实，新风胶囊治疗RA肺功能损伤患者和佐剂关节炎（AA）大鼠肺功能降低均有一定疗效。现将临床和实验研究结果，总结报告如下。

1 “脾虚”是RA肺功能降低的发病基础

RA中医证候中，“脾虚”在疾病发生发展过程中占有重要地位。脾胃虚弱，气血不足，湿浊内生，痹阻经络，发为痹证。脾胃虚弱，气血亏虚，机体失于濡养，营卫不和，抗邪、防御、适应能力低下，外邪乘虚侵及，更致气血不足。日久导致肺气失养，脾土不能生养肺金，肺的宣发和肃降功能失调，脾气虚损，则可致肺气不足，出现咳嗽、自汗、气短等症状。临床上RA患者除出现关节晨僵、关节重着、大便稀溏、食欲减退、食后腹胀外，还出现咳嗽、咳痰、痰多气喘、上气烦满、胸背痛等症状。说明脾的运化功能失常，湿停中焦，阻滞经络关节，可出现晨僵、肿胀、痰饮、便溏等症状。同样，脾虚失运，水液停滞，痰湿内生，则聚而生痰成饮，上干于肺，影响肺的宣发肃降及通调水道的功能，肺失治节，可见咳嗽、痰多，胸满憋闷，喉中痰鸣有声、烦满、胸背痛，迁延不愈，甚而喘促等症状。因此，脾胃虚弱，痰瘀互结，肺络阻滞亦是RA肺功能降低的中医证候学特征。

2 RA肺功能变化特点及相关性分析

2.1 RA肺功能变化特点 采用肺功能检测仪对120例RA患者肺功能检测，肺功能参数有深吸气量（VC）、最大通气量（MVV）、用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、用力呼吸1秒率（FEV1/FVC）、25%肺活量位的最大呼气流量（FEF25）、50%肺活量位的最大呼气流量（FEF50）、75%肺活量位的最大呼气流量（FEF75）和最大呼气流量（PEF）等。研究结果显示，RA患者中，肺功能降低占所有病例的68.2%。与NC组比较，RA患者MVV、FVC、FEV1、FEF25、FEF50、FEF75、PEF均明显低于健康对照组（P < 0.05

或P < 0.01）[10]。

2.2 RA肺功能与关节局部、全身整体及肺部症状体征的相关性 RA患者肺功能参数FEV1、FEF25、FEF50、FEF75、PEF与关节疼痛呈负相关

（r = -0.425，r = -0.378，r = -0.507，r = -0.439，r = -0.382），FEV1/FVC与关节肿胀、DAS28呈负相关（r = -0.348，r = -0.403）。FEV1/FVC、FEF75、PEF分别与干咳积分、胸闷积分呈正相关

（r = 0.504，r = 0.431）；FEF75与干咳积分、胸闷积分、气短积分呈负相关（r = -0.410，r = -0.409，

r = -0.503，r = -0.368）。FEV1/FVC 与少气懒言呈正相关（r = 0.447）；FEV1、FEV1/FVC、FEF75分别与少气懒言呈负相关（r = -0.425，r = -0.433，r= -0.427，r = -0.501，P < 0.05或P < 0.01）[11-12]。

2.3 RA肺功能参数与红细胞CR1、CD59及调节T细胞（Treg）等实验室指标的相关性 RA患者肺功能参数FEF50与CR1、RBC呈正相关（r =

0.482，r = 0.496），VC与C3呈正相关（r = 0.398），FEF50、FEF75与CD59呈正相关（r = 0.415，r = 0.473），VC、FEV1、FEF50、FEF75与CD4+CD25+CD127-Treg呈正相关（r =0.528，r = 0.405，r = 0.473，r = 0.490），FVC、FEV1与IgA呈负相关（r = -0.433，r = -0.391），FVC、FEV1、FEF50、FEF75与C4呈负相关（r =

-0.401，r = -0.423，r = -0.470，r = -0.456，r =

-0.399）， MVV、FEF50、FEF75与ESR呈负相关（r =

-0.502，r = -0.425，r = -0.467，r = -0.493，P < 0.05或P < 0.01）[13-14]。

3 新风胶囊改善RA肺功能的临床研究

3.1 新风胶囊对RA肺功能损伤患者的临床疗效 将120例RA肺功能降低患者随机分为实验组（60例）和对照组（60例），实验组采用新风胶囊治疗，对照组采用雷公藤多苷片治疗。两组患者在年龄、病情、病程等方面比较，差异无统计学意义

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（P > 0.05）。观察两组药物对RA的临床疗效。结果显示[15]，实验组有效率占85.9%，对照组有效率占86.7%，两组有效率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；实验组显效率（82.5%）优于对照组（70.2%）（P < 0.05）。

3.2 新风胶囊对RA肺功能损伤患者关节局部及全身症状的影响 药物治疗后，两组临床症状及体征均有明显改善，关节疼痛积分、关节肿胀积分、关节压痛积分、晨僵积分、症状总积分明显降低（P < 0.05

或P < 0.01），倦怠乏力积分、关节重着积分降低

（P < 0.05）；实验组双手握力明显增加，食欲减退积分、少气懒言积分、食后腹胀积分、大便稀溏积分减低（P < 0.05），而对照组治疗后与治疗前比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；其中关节疼痛积分、关节肿胀积分、食欲减退积分、少气懒言积分、食后腹胀积分、症状总积分等部分指标，实验组较对照组改善程度更明显（P < 0.05）[16]。

3.3 新风胶囊对RA肺功能的影响 治疗前，实验组肺功能异常数为25例，对照组异常数为20例。治疗后，实验组肺功能异常数为9例，肺功能异常率为25.0%，肺功能异常降低例数为16例；实验组肺功能异常数为13例，肺功能异常率为43.3%，肺功能异常降低例数为7例。与对照组比较，对照组治疗后肺功能异常率降低显著（P < 0.05）。

与治疗前比较，实验组治疗后，FEV1、FVC、MVV、FEF50、FEF75均明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。与对照组治疗后比较，实验组治疗后FVC（81.64±8.39）、MVV（79.30±7.57）、FEF50（83.07±9.32）改善程度更明显（P < 0.05或P < 0.01）[17]。

3.4 新风胶囊对RA患者肺部症状的影响 依据卫生部《新药（中药）临床研究指导原则》，将RA患者干咳、咳痰、胸闷、气短、气急及呼吸困难进行评分，观察两组药物对RA肺部症状体征的影响。结果显示，治疗前，两组RA患者肺部临床症状体征积分，差异无统计学意义（P > 0.05）。治疗后，实验组干咳积分、胸闷积分、气短积分均明显降低（P < 0.05或

P < 0.01），对照组干咳积分、咳痰积分、胸闷积分降低（P < 0.05）。实验组治疗后胸闷积分、气短积分均显著低于对照组（P < 0.05）[13，15-17]。

3.5 新风胶囊对RA肺功能患者实验室指标的影响 通过对实验组和对照组患者实验室指标检测，结果发现，治疗前，两组RA患者实验室指标比较，差异无统计学意义（P > 0.05）[18-20]。治疗后，实验组红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞CR1、红细胞CD59、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127-Treg均明显升高（P < 0.05或

P < 0.01），PLT、ESR均明显降低（P < 0.05或P < 0.01）；对照组Hb、红细胞CR1、红细胞CD59、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127- Treg明显升高（P < 0.05或P < 0.01），IgG、RF、ESR明显降低（P < 0.05或P < 0.01）。其中，实验组Hb、红细胞CD59、CD4+CD25+CD127-Treg较对照组升高（P < 0.05或P < 0.01）。

4 新风胶囊改善RA肺功能的实验研究

4.1 新风胶囊对AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的影响 将大鼠随机分为5组：正常对照（NC）组，模型对照（MC）组，甲氨蝶呤（MTX）对照组，雷公藤多甙片（TPT）对照组，新风胶囊（XFC）治疗组，每组24只。除NC组外，向每只动物右后足跖皮内注射FCA 0.1 mL致炎，复制成AA模型，造模成功后分别于致炎前、给药前、末次给药后1 h

测量各组大鼠右后足容积；致炎后第12天开始观察并计录各组大鼠关节炎指数。观察各组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数和肺功能的变化。结果显示，与MC组比较，XFC可明显抑制模型大鼠的足跖肿胀程度，降低关节炎指数，提高大鼠体质量[21-23]。

4.2 新风胶囊对AA大鼠肺功能的影响 末次用药24 h后，各组随机取大鼠，用小动物肺功能仪测定大鼠肺功能。测定指标有FVC、FEV1、FEV1/FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF等。观察各组大鼠肺功能的变化。结果发现，与MC组比较，XFC治疗组FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF均显著升高（P < 0.01）。与MTX对照组比较，XFC治疗组FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF均明显升高（P < 0.05

或P < 0.01）；与TPT组比较，XFC治疗组FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF明显升高

（P < 0.05或P < 0.01）[21-26]。

4.3 新风胶囊对AA大鼠血清细胞因子的影响 末次用药24 h后，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，行腹主动脉采血，离心，取上清液，采用ELISA法测定肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）、γ干扰素（IFN-γ），以IFN-γ与IL-4含量的比值作为Th1/Th2。观察各组大鼠血清细胞因子的变化。结果显示，与NC组比较，MC组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、Th1/Th2细胞明显升高，而IL-4、IL-10明显降低（P < 0.01）。与MC组比较，各治疗组大鼠血清TNF-α、IL-1β、Th1/Th2细胞降低，血清IL-4、IL-10升高（P < 0.05或P < 0.01）。

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与MTX对照组比较，XFC治疗组Th1/Th2细胞降低，IL-10升高（P < 0.05）；XFC治疗组与TPT对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）[23]。

4.4 新风胶囊对AA大鼠肺部高分辨率CT（HRCT）

的影响 NC组大鼠肺轮廓清晰，肺纹理分布均匀，肺小叶间隔、间质及小叶结构正常，胸膜正常，交界面规则，无高密度影，血管支气管束走行自然，边缘锐利，并且由内向外逐渐分支而细。MC组大鼠肺轮廓欠清晰，肺部血管影扩张，边缘模糊且不规则，两肺有索条状密度增高影，邻近胸膜轻度肥厚。MTX对照组大鼠肺部可见沿着肺纹理分布的斑片状密度增高影，肺血管纹理模糊，边缘不清楚。TPT对照组大鼠两肺可见多发性结节状及斑片状密度增高影，境界欠清晰。XFC治疗组大鼠肺轮廓清晰，肺纹理分布均匀，部分肺组织显示斑点状密度增高影[24]。

4.5 新风胶囊对AA大鼠肺泡Ⅱ型细胞、肺组织病理的影响 末次用药24h后，观察各组大鼠肺泡Ⅱ型细胞、肺组织病理的变化。XFC治疗组大鼠肺纹理分布均匀，部分肺组织显示斑点状密度增高影，肺部影像学改变明显轻于MC组、MTX对照组、TPT对照组；XFC治疗组电镜下肺泡Ⅱ型细胞结构完好，线粒体大部完好，少数线粒体轻度肿胀，少数板层小体有排空现象，优于MC组。光镜下肺内细支气管粘膜纤毛柱状上皮大部完好，黏膜内及粘膜下见少数淋巴细胞及泡沫细胞浸润，肺泡大部结构完整，无破坏，部分肺泡间隔内见少量灶性泡沫细胞及淋巴细胞，肺组织病理学改变均明显轻于MC组及TPT对照组[27]。

4.6 新风胶囊对AA大鼠肺组织TGF-β1/Smads的影响 末次用药24h后，各组动物同时处死，取肺脏组织，采用免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达。结果显示，与NC组比较，MC组肺泡炎积分及肺组织TGF-β1、Smad3表达明显升高；肺组织Smad7表达明显降低。与MC组比较，MTX对照组、TPT对照组、XFC治疗组肺泡炎积分及肺组织TGF-β1、Smad3表达明显降低（P < 0.01）[25]。

4.7 新风胶囊对AA大鼠肺组织Notch信号传导通路的影响 末次用药24h后，各组动物同时处死，取肺脏组织，采用聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组大鼠肺组织Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 mRNA及Jagged1、Jagged2、Delta1 mRNA的表达。与模型组比较，XFC治疗组大鼠肺组织Notch1、Jagged1、Jagged2 mRNA升高， Notch3、Notch4、Delta1 mRNA降低。与MTX对照组比较，XFC治疗组Notch1、Jagged1 mRNA升高（P < 0.05或P < 0.01）[26]。

4.8 新风胶囊对AA大鼠外周血调节T细胞、肺组织Foxp3 mRNA及Foxp3蛋白的影响 末次用药24 h后，取各组大鼠新鲜血液100 mL，按每106个细胞/管分别加入CD4 0.25 ug、CD25 1.0 ug，

避光20～30 min；加红细胞裂解液1 mL，避光15～25 min；用PBA洗两遍，离心弃上清，流式细胞仪检测；采用RT-PCR法检测大鼠肺组织Foxp3 mRNA的表达，Western免疫印迹法检测大鼠肺组织Foxp3蛋白表达。观察各组大鼠外周血调节T细胞、肺组织Foxp3 mRNA及Foxp3蛋白的变化，结果显示，与模型组比较，XFC治疗组CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA和Foxp3蛋白表达明显升高。与MTX对照组比较，XFC治疗组CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA及Foxp3蛋白表达升高（P < 0.05）[25]。

5 健脾化湿通络中药新风胶囊治疗RA肺功能降低的作用机制

5.1 诱导免疫抗炎作用 新风胶囊能显著降低AA大鼠足跖肿胀度，关节炎指数，同时改善其肺功能，说明新风胶囊通过调节细胞免疫反应，减轻关节局部及肺组织的炎症反应，加之改善微循环，促进局部供氧，促进单核巨噬细胞系统的功能、增强细胞免疫及体液免疫功能，降低肺组织细胞胞膜的通透性，减少炎症渗出，降低炎性细胞对肺组织刺激，改善RA肺功能。

5.2 抑制血小板介导的炎症反应 新风胶囊通过下调血小板计数，调节血小板参数，抑制体内血液中血小板数量的过度聚集，阻止血小板-中性粒细胞间相互作用，降低血小板介导的炎症反应，从而控制体内过度的免疫反应，控制RA病情，同时减少了中性粒细胞向肺部聚集的数量，降低肺组织血管通透性，增加肺泡壁微血管开放数，提高了肺部气体交换率，延缓肺血管炎的产生，改善RA肺功能。

5.3 调节补体免疫平衡 新风胶囊通过下调免疫球蛋白、激活C3、C4补体系统，上调CR1、CD59表达，调节体液免疫、细胞免疫双重功能，抑制过亢的体液免疫，调节体内过亢的自身免疫反应，减少补体对自身细胞的攻击损伤，促进巨噬细胞吞噬能力，降低补体系统对肺组织的损害，延缓或减少肺组织炎性细胞的聚集，综合调节机体免疫功能，改善RA肺功能。

5.4 提高肺组织细胞新陈代谢 新风胶囊通过提高骨髓对红细胞生成素的反应，改善铁代谢，抑制骨髓对贫血的反应、减少红细胞寿命等各个环节的影响，使患者贫血得到改善，进一步上调和刺激血红蛋白的合成，从而增强红细胞免疫功能，改善RA患者病情。增强肺和组织之间O2和CO2的交换，提高肺泡通气/换气功能，提高肺部气体交换率，改善肺组织局部血流供应和血液循环，改善RA肺功能。

5.5 维持细胞因子免疫平衡 新风胶囊通过下调TNF-α、IL-1β、IL-6，上调IL-4、IL-10的表达，调节Th1/Th2细胞平衡，调节细胞因子和趋化因子网络，抑制细胞因子的促炎效应，增强其抗炎效应，降低肺组织细胞膜的通透性，减少炎性介质对肺组织细胞的损伤，从而延缓对肺和关节等组织脏器的损伤，改善RA肺功能。

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5.6 激活TGF-β1/Smads信号通路 新风胶囊通过上调Smad7蛋白的表达，下调TGF-β1、Smad3蛋白的表达，调控TGF-β1/Smads信号通路，降低纤维原细胞分化、增殖和积聚，抑制基质蛋白酶沉积，抑制肺组织局部成纤维细胞的大量增殖，阻止炎性反应的持续发生，抑制免疫复合物在肺组织中的沉积，阻止了炎性反应的持续，降低肺泡炎症反应，改善RA肺功能。

5.7 调控Notch信号传导通路 新风胶囊通过上调Notch1、Jagged1、Jagged2的表达，下调Notch3、Notch4、Delta1的表达，调节Notch信号传导通路表达，调控T淋巴细胞发育和激活T细胞，调节肺T细胞的免疫应答能力，抑制呼吸道、肺泡上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞及肺间质细胞的进一步增殖分化，降低肺组织的损伤，提高肺泡表面张力，降低肺泡萎陷和基底膜增厚程度、改善RA肺功能。

5.8 增强调节性T细胞的表达 新风胶囊通过上调外周血CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127- Treg和肺组织Foxp3表达，促进调节性T细胞的发育、增殖、分化，维持外周免疫耐受，维持体内的免疫稳态，调控细胞因子的分泌，抑制淋巴细胞、中性粒细胞浸润和炎性介质的过度分泌，降低炎症对肺（或关节）组织器官的刺激，降低免疫复合物的沉积，从而改善关节症状和肺部病变，提高RA肺功能。

总之，RA肺功能损伤与“脾气亏虚”有关，脾虚在RA肺功能降低中占重要作用，中药新风胶囊不但能改善RA关节症状，还能明显改善RA患者肺部症状和全身症状，提高肺功能水平。因此，采用“健脾化湿通络”治法也将为RA肺功能降低的治疗提供新途径和思路。

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收稿日期：2013-10-16；修回日期：2013-12-27

中草药抗肺纤维化作用机制的研究 篇6

1 中医病名

中医学对肺纤维化的描述散见于“咳嗽”、“短气”、“喘证”、“肺胀”等篇章中,关于以“肺痿”还是“肺痹”作为本病的中医病名一直有较大分歧。曹世宏教授认为肺纤维化属“肺痿”范畴,病机多为肺燥津伤或肺气虚冷,津气亏损,失于濡养,以致肺叶枯萎[2]。崔红生[3]从络病理论出发,明确指出肺纤维化特别是继发性应归于“肺痹”范畴,肺为邪痹,气血不通,络脉瘀阻,并存在着由肺痹—肺痿的临床演变过程,肺纤维化病程日久,肺叶萎弱不用,气血不充,络虚不荣,则可属“肺痿”。其实,“肺痹”与“肺痿”均可作为肺间质纤维化的中医病名诊断,肺痹言肺为邪痹,气血不通,络脉瘀阻,从邪实而言;肺痿言肺之萎弱不用,气血不充,络虚不荣,从本虚而言。二者反映了肺纤维化发生发展的不同时期阶段的病机特点,但肺痹与肺痿在一定条件下又可相互影响,互患为病。一般来说,肺纤维化存在着由肺痹—肺痿的临床演变过程,即因实致虚。但“至虚之处,便是留邪之地”,肺痿病变又常见到肺络痹阻之征,即因虚致实。总之,肺纤维化常可见到痹中有痿(因实致虚),痿中有痹(因虚致实)的复杂病理状态,即“病变轻重不一,新老病变并存”。故临证当正确处理二者之间的辩证关系,详审肺痹与肺痿之虚实主次、轻重缓急,如此方可圆机活法,取效上佳。

2 病因病机

肺纤维化的病机较为复杂,难以用单一病机来阐释,在不同的病理阶段,本病所表现出来的病机也不尽相同。在疾病早期,本病临床症状多表现为刺激性干咳或有少量黏痰。多伴关节疼痛、低热、乏力,究其病机以痰、密、热、毒等阻滞肺络最为常见,起病急骤,病程较短,中医辨证多属实证。随着病情的进展,肺络不通,肺气受损,患者会表现出由实致虚,虚实夹杂的病理特点,此为慢性迁延期。在疾病晚期,由于病情缠绵不愈,肺气进一步虚损,并可由气及血,由肺及肾,在病机上以气血亏虚,络虚不荣为主,络脉痹阻厨时存在,以虚为主,虚实夹杂。由此可见,在本病不同的病理阶段存在着不同的病机,因此治疗原则和方法也不同[4]。

本病发病原因种类繁多,病理演变错综复杂,病理性质虚实并见,对病因病机阐释见仁见智,下面简要介绍有代表性的几种观点。

杨超等[5]认为其病机特点为本虚标实证,本虚以肺肾气阴两虚为主,标实指痰瘀蕴肺,而本虚为发病的关键,这一观点也为学者公认。张天嵩[6]认为肺肾亏虚为发病之本,因肺主行水,肺气亏损,津气散布失调,潴为痰饮。又肺主治节,朝百脉,肺气虚损则肺中之血凝而留止,产生瘀血。痰浊瘀血既是病理产物又是病情加重因素,而外邪侵袭是疾病恶化的因果。杨和春[7]指出肺纤维化可以用上盛下虚来概括病机。上盛下虚病位主要在肺与肾,涉及到脾,病机重点在虚和痰两方面,可表现为阴虚痰热、阴虚痰浊等证候。王海彤等[8]根据临床表现以进行性的呼吸困难为主症,指出该病病位在肺,而与多脏有关,尤以肺肾更为主要。病机总以虚瘀为关键,可向寒热两方面转化。陈玉柱认为粉尘“燥毒”劫伤肺阴,粉尘燥毒郁阻肺内,损伤肺络,造成肺内气滞血瘀,络脉郁阻;且燥毒灼津为痰,血瘀也造成津停为痰,痰瘀互相加重,阻于肺脏之内,肺气宣降日渐困难。粉尘毒热闭郁,气郁化火,风火相煽,流窜全身,毒害其他脏器和组织。而外邪侵袭,肺失宣降,久病及肾,肺肾两虚。

3 辨证分型论治

刘伟[9]根据本病的主要病机和临床表现,将该病分为4型:①干咳无痰或神疲畏风者为肺气虚弱型,治宜补益肺气,宣肺定喘止嗽,药用黄芩、防风、太子参等。②久咳不愈气短无力,干咳无痰或少痰,口干咽燥,偶有咯血者为气阴两虚,气滞血瘀型,治宜益气养阴,行气活血,药用沙参、太子参、黄芪等。③咳嗽日久胸中满闷、消瘦、下肢水肿、形寒肢冷、小便清长者为脾肾阳虚、气血凝滞型,治宜温里助阳、活血化瘀,药用金银花、黄芪、款冬花等。④五心烦热、面色晦暗、唇舌发绀、杵状指、肝肿大、颈静脉充盈等症状为阴阳俱虚的表现,治宜阴阳双补、活血化瘀、定喘止咳,药用补骨脂、熟附子、生地黄等。通过临床应用,发现该种分型方法对改善症状和体征疗效明显。孔祥文[10]从该病的整个病程着眼,将其分为3型:①早期急性起病多表现为痰热郁肺型,此时治予泻肺化痰平喘,给予桑白皮汤加鱼腥草、瓜蒌皮、射干、葶苈子等;②痰瘀互结型为慢性起病的IPF的一个过渡过程,治宜活血通络、平喘化痰,方用血府逐瘀汤、丹参饮合二陈汤加减;③该病发展至晚期,主要为肺肾气虚型,以平喘固本汤及补肺汤加减。孟磊等[11]将本病辨证分为8型,治疗上在将活血祛瘀贯通全程的基础上,再进行以下治疗:①寒邪闭肺证佐以散寒宣肺,药用川芎、姜黄、丹参等;②痰热遏肺型佐以清泻痰热,药用赤勺、丹参、郁金等;③痰浊壅肺型佐以化痰降逆,药用川芎、丹参、毛冬青等;④心肺气虚型佐以补益心肺,药用当归、川芎、赤勺等;⑤气阴两亏型佐以益气养阴,药用沙参、麦冬、甘草等;⑥脾肾阳虚型佐以温阳利水,药用赤勺、川芎、丹参等;⑦肺肾两虚型佐以补肺纳肾,药用桃仁、川芎、水蛭等;⑧阴阳两虚型佐以回阳救逆,药用丹参、赤勺等。金鸿斌等[12]按病程分期辨证治疗肺间质纤维化18例,取得满意疗效。早期辨证为风燥伤肺,方以桑杏汤加减;中期辨证为气阴两伤,方选保真汤加减;晚期辨证为痰热郁肺,以桑白皮汤加减。孔祥文[13]将IPF归纳分型为:痰热郁肺型,以急性呼吸道感染为首发症状,治以泻肺化痰平喘,以桑白皮汤加鱼腥草、栝楼皮、射干、葶苈子;痰瘀互结型为慢性起病的IPF的过渡过程,治以活血通络、平喘化痰,方用血府逐瘀汤、丹参饮合二陈汤加减;肺肾气虚型为所有IPF的晚期表现,治宜补肺纳肾、降气平喘,以平喘固本汤及补肺汤加减。岳会杰[14]将IPF分为3期6型。夹感发作期的气虚风寒犯肺型,治以止嗽散合玉屏风散加减,同时静脉滴注参芪扶正液及川芎嗪注射液:阴虚燥热伤肺型,治以清燥救肺汤或桑杏汤加减,同时静脉滴注清开灵针或复方丹参针。慢性迁延期的气阴两虚痰喘型,以三子养亲汤合二陈汤加减,同时静脉滴注沐舒坦或肿节风及川芎嗪针;气阴两虚瘀喘型,以保肺汤加减。重症多变期的阳虚水泛型,以真武汤合补肺汤加减,同时静脉滴注参附针及脉络宁针;阴阳两虚型以参蛤散合右归饮加减,同时静脉滴注参麦针及成诺针。孟磊等[15]以活血祛瘀法为主结合辨证治疗IPF。寒邪闭肺型,佐以散寒宣肺;痰热遏肺型,佐以清泄肺热;痰浊壅肺型,佐化痰降逆;心肺气虚型,佐以补益心肺;气阴两虚型,佐以益气养阴;脾肾阳虚型,佐以温阳利水;肺肾两虚型,佐以补肺纳肾;阴阳两虚型,佐以回阳救逆。陈玉柱将病人分期论治,分成4期:①未成形期:此阶段多为热毒壅肺、血瘀血热、阴虚火旺的状态,应用清热解毒、凉血活血、滋阴降火药物,如银花、连翘、公英、白花蛇舌草、虎杖、生地、玄参、麦冬、黄柏、黄芩、丹皮、白茅根、丹参、蜂房等,多可以把肺纤维化消灭在萌芽状态。②热毒闭肺期:泻火解毒,养阴润肺为主,配合活血、化痰、通络。此期肺内毒火旺盛,血瘀、痰凝、络阻的病态产物已经形成,用公英、银花、生地、玄参、虎杖、麻黄、防己、杏仁、麦冬、白芨、海藻、昆布、三棱、莪术、丹参等,经过3个月以上治疗者,效果十分明显,不但主症减轻或消失,而且肺纤维化程度也会有相当下降。③并发症期:急性肺部感染、肺结核、肺性脑病、肺心病心功能衰竭、关节炎、肾炎等明显痛苦症状发生时,必须以治疗并发症为主,辅以宣肺化痰、解毒化瘀、活血通络,虚损明显者祛邪与扶正并行。④肺肾两虚期:补益肺肾,辅以剔除内生、外感邪气。此为尘肺病发展的终末期,虚实错杂,寒热互见,治疗上若有外邪引发的咳喘痰憋为主,则以祛邪为主,补益肺肾为辅;若以肺肾虚衰为主,外邪为次,则在补益肺肾的基础上,酌加宣肺、化痰、化瘀、通络、止咳、祛邪之品;若正虚很重、外邪也很重的情况下,则组方时需要扶正祛邪并重。

综上所述,肺纤维化是一个缓慢的进行性的过程,其发病机制尚未被人们所完全了解,且一旦形成就很难治愈。由于对肺间质纤维化病因病机认识的深入,中医药治疗肺纤维化的临床研究也日益增多,并取得了不少鼓舞人心的成就,为肺纤维化的治疗开辟了一条新路。但对其中存在的问题和解决方法,归纳起来主要有:①中医临床研究缺乏统一规范的辨证分型标准及量化的疗效评价标准,肺纤维化的中医病名不统一,以一方一药统贯疾病治疗全过程的现象也不少见。疾病的发生发展是一个动态的变化过程,在不同的发展阶段,中医证型不同,所采用的治疗方法及原则也不同,所谓“同病异治”、“异病同治”即是如此。因此,首先应确定中医病名归属;更重要的是,在客观辨证的同时,应注意吸收现代理化检查手段,将其作为传统中医四诊的延伸,有机地与中医辨证结合起来,进行微观辨证,进而规范辨证分型标准,建立统一量化的疗效评定体系及选方用药标准,以便客观地评定效果及选药。②严格按照循证医学要求,开展多中心、大样本、随机对照、双盲的药物研究,并对结果进行系统评价,增加可信度,对疾病机制、选方用药的研究将有更大裨益。③目前,中医药治疗肺纤维化的临床研究主要集中在益气、养阴、补肾、活血、通络等方面,随着现代医学对其病因、病理机转的认识加深,必将发现更为切实有效的治疗肺纤维化的药物。

肺纤维化中药研究 篇7

1 转化生长因子β

TGF-β1主要由肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞等分泌,是肺纤维化形成的关键因子,它能诱导肺泡上皮细胞发生上皮间质转化,刺激成纤维细胞增殖,促进肌成纤维细胞形成以及胶原的产生。TGF-β1的作用有:促进成纤维细胞和肌成纤维细胞合成胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型;趋化并促进成纤维细胞分裂增殖及成熟分化;抗炎作用;促进损伤的修复[1]。张亚丹等[2]在研究中发现羟基红花黄色素A(HSYA)可能通过TGF-βII型受体(TGF-βtype II receptor,TGF-βRII)起到缓解TGF-β1从细胞膜受体水平上阻断TGF-β1导致小鼠成纤维细胞NIH/3T3细胞损伤的作用。TGF-β1第1步是与细胞膜上TGF-βII型受体结合,诱发其磷酸化,进而引发Smad和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)等信号系统的活化、促进细胞外基质合成的异常增加[3,4]。李雪飞等[5]实验发现,肺泡炎症、胶原纤维沉积和TGF-β1mRNA表达在应用AG490(JAK/STAT6信号通路的抑制剂)后皆有减轻,表示百草枯促进肺纤维化的形成机制可能是通过激活蛋白酪氨酸激酶/信号转导子和转录活化子1(JAK/STAT1)信号转导通路来增加肺组织TGF-β1的表达来实现的。曹振东等[6]研究表明,TGF-β介入了整个肺纤维化形成的过程,促进炎症因子的激活及趋化、成纤维细胞的分裂与增殖、胶原蛋白合成,并抑制胶原酶降解,引起细胞外基质沉积而形成纤维化。Estrada KD等[7]研究显示,肺损伤后肺巨噬细胞活化而产生TGF-β1,并与肺成纤维细胞膜上的转化生长因子β受体I(TβRI)、转化生长因子β受体Ⅱ(TβRII)受体结合形成三聚体复合物,细胞内TGF-β1的下游信号通路Smads家族蛋白信号转导通路被激活,Smad2/3(p-Smad2/3)被磷酸化,活化的Smad2/3与TβRI受体分离转而同Smad4结合形成复合体,携带信号传入细胞核内,转录蛋白被激活,胶原蛋白的信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)转录被开启,在胶原蛋白合成增多的同时胶原蛋白的降解减少而终致肺纤维化的形成。祖金池等[8]研究表明,TGF-β1可促进肺成纤维细胞增殖、分化为肌成纤维细胞进而产生大批基质蛋白,在肺间质和肺泡间过度集聚而导致肺纤维化发生与进展,是TGF-β1/Smad信号通路中具有关键作用的调控因子之一。刘伟[9]研究发现,抗炎素-1(Antiflammin-1,AF-1)能够经由子宫珠蛋白(UG)受体抑制TGF-β1诱导的A549细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)改变。AF-1通过UG受体激活下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,对TGF-β1诱导EMT产生抑制作用。

蔡健等[10]研究表明,黄芩总黄酮减轻肺纤维化的机制可能在于它能够调控TGF-β1/Smad信号通路,减少细胞外基质蛋白的沉积。管淑红等[11]研究表明,柴胡皂苷D(Saikosaponin-D,SS-d)能抑制人胚肺成纤维细胞的TGF-β1分泌,中止成纤维细胞增殖。刘辰等[12]研究表明,三七总皂苷可抑制实验性肺纤维化大鼠肺组织中胶原沉积和TGF-β1的极度增高,抑制重组人结缔组织生长因子的增加和Smad2/3表达而有抗肺纤维化作用。任周新等[13]研究证实了三七总皂苷有较强降解细胞外基质功用,可有效抑制体外培养的人肺泡上皮细胞A549的上皮间质转化,剖析了肺泡上皮细胞是其作用的靶细胞,其作用机制与TGF-β1信号转导通路有关。曾玉兰等[14]认为,大蒜素干预肺纤维化进展的机制是下调组织TGF-β1和成纤维细胞α-SMA基因的表达。王永生等[15]证实了黄芪甲苷能使组织中羟脯氨酸的含量和TNF-α和TGF-β1的表达下降,干预早期肺纤维化进度。齐杰等[16]研究表明,银杏叶总黄酮能降低肺组织中胶原蛋白和TGF-β1含量,减轻肺纤维化程度。杨长福[17]研究证明了莪术油能干预肺纤维化上皮细胞转分化。肺泡上皮细胞通过上皮再生来修复受损的肺泡结构,抑或通过凋亡、EMT促使纤维生成。丁辉等[18]研究认为,丹参注射液能调低TGF-β及MMP-9 mRNA的表达。陈媛媛等[19]实验表明,丹参联合川芎嗪注射可能是通过抑制和减轻炎性细胞浸润、TGF-β1的合成和分泌而减少成纤维细胞的活化和增殖、胶原合成与沉积来延缓肺纤维化进度的。李玉花等[20]认为大黄素可调控TGF-β1的Smad3/7信号转导蛋白表达而减缓博莱霉素致大鼠肺纤维化的进度。

2 早期生长反应基因1

早期生长反应基因1(early growth response gene-1,Egr-1)是即刻早期反应基因之一,在多个系统控制细胞的增长、分化和凋亡、调节一系列生长因子、细胞因子和黏附分子的表达,这个过程大多是通过TGF-β1这个靶基因完成[21]。

3 肿瘤坏死因子-α

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种具有广泛生物学效应的细胞毒细胞因子,可促进炎症反应和间质细胞增殖分化,导致肿瘤出血、抑制甚至杀伤体外培养的肿瘤细胞,还可以通过与其他细胞因子的相互作用,在某种程度上直接或间接促进细胞外基质的合成。刘理静等[22]实验结果显示,大黄素可明显降低肺纤维化大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-17浓度,且高剂量干预组显效优于低剂量组,表明大黄素抗肺纤维化的重要机制之一可能是抑制炎症反应。

4 趋化因子(CF)

趋化因子(CF)是一类具有趋化白细胞作用的细胞因子。当前研究的趋化因子主要有单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、干扰素诱生蛋白10(IP-10)等。李利华等[23]研究初步证明,趋化因子受体7(Chemokine receptor 7,CXCR7)的表达水平主要在博莱霉素处理后0~20天期间显著升高,显示CXCR7可能主要参与了肺纤维化的早期病变,CXCR7介导了博莱霉素诱导的肺纤维化,抑制CXCR7的作用可以明显减缓肺纤维化病理进程。C-C趋化因子又称B趋化因子,包括单核细胞趋化蛋白(Monocyte Chemoattractant protein-1,MCP-1)、MCP-2、MCP-3,正常T细胞表达和分泌的活性调节蛋白(Regulated upon acti-vation normal T cell expressed and secreted factor,RANTES)和巨噬细胞炎性趋化蛋白1α(GCP-1α)、巨噬细胞炎性趋化蛋白1β(GCP-1β)等,它能诱导单核细胞的分化,调节细胞因子的产生和黏附分子的表达,还能激活炎性细胞,并使其趋化和移行。MCP-1和人巨噬细胞炎性蛋白1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)是该因子与肺纤维化形成关系最为密切的因素。娄克俭[24]研究证实了白细胞聚集的减少是抗单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)抗体的效果,MCP-1能活化和维持博来霉素(BLM)介导的肺损伤[25]。

5 白细胞介素

白介素-1(Interleukin-1,IL-1)由单核巨噬细胞分泌合成,在局部或全身炎性反应中起着核心作用[26],它是一种前炎性因子,对其他炎性细胞因子、趋化因子、黏附因子等的合成有诱导作用,对嗜中性粒细胞、巨噬细胞有趋化作用。IL-1能上调黏附分子的分泌使白细胞进入肺间质,促进肺成纤维细胞产生胶原和氨基多糖,诱导靶细胞产生细胞因子并表达相应的受体。抑制IL-6、IL-17这些促炎介质的产生也可明显延缓肺纤维化[27,28]。IL-1可以调节辅助T淋巴细胞的活性,并使中性粒细胞从骨髓中释放引起中性粒细胞增多,诱导白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)、C反应蛋白(C-reactionprotein,CRP)、TNF-α、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)等从不同的细胞中合成和释放,趋使淋巴细胞、粒细胞及巨噬细胞的聚积,导致炎症反应的发展[29]。积雪草苷是通过降低IL-4、TNF-α和TGF-β1的表达,提高腺苷A2A受体(A2A receptor,A2AR)的表达水平来抑制肺组织炎症和基质累积,改善平阳霉素诱导的间充质性肺纤维化[30]。

6 γ-干扰素

γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)是至关重要的抗纤维化因子,它能够通过人体支气管上皮细胞上的特异性受体遏制支气管上皮细胞的增殖、减少成纤维细胞的胶原合成。IFN-γ作为一种激活的T细胞产物在体内外可以抑制Fb的增殖分裂和胶原蛋白合成,并能调节TGF-β的产生。其调节TGF-β的作用机制是:信号传导蛋白与细胞内Smad7结合,竞争性抑制TGF-β信号传导通路,从而阻断合成胶原蛋白的信号传导。宋康等[31]研究发现,虎杖作用于肺泡炎和肺纤维化是通过抑制IL-4的分泌、促进IFN-γ的分泌来调节辅助性T淋巴细胞亚群(Helper T lymphocyte subgroup,Th1/Th2)细胞因子失衡,使病症减轻。

7 核因子

核因子κB(NF-κB)是一个转录因子蛋白家族,是调控炎症反应的重要转录因子,与炎症性疾病密切相关。在静息状态下,NF-κB抑制蛋白1-κB与之结合,表现出无活性,1-κB磷酸化后就失去了与NF-κB结合的能力,NF-κB被激活,从而引起一系列级联放大反应而调整基因转录[32]。抑制NF-κB激活,对肺纤维化大鼠有保护作用[33]。当归能够减少大鼠弥漫性肺间质纤维化胶原蛋白含量,降低肺泡巨噬细胞NF-κB活性,降低TGF-βmRNA表达及其蛋白水平[34]。丹参煎液灌胃可明显抑制平阳霉素所致的肺纤维化,使肺重、肺系数明显减少。丹参通过抑制NF-κB的活化减少炎症递质的合成和释放,改善微循环和减少Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维含量,促使胶原纤维降解和重吸收,改善肺部氧化等作用,从而抵抗肺纤维化损伤[35]。

8 细胞间黏附分子-1

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)存在于细胞表面,是由细胞产生的、介导细胞与基质间或细胞之间相互接触和结合的一类分子,黏附分子在一系列重要生理和病理过程起着不可或缺的重要作用:参与细胞的信号传导与活化、生长与分化、炎症与创伤愈合等。ICAM-1在放射性肺损伤的早期阶段大量表达,可引起炎性细胞的黏附,并参与放射性肺损伤的发生和进展。Haston CK[36]研究结果显示,野生型同类小鼠发生放射性肺损伤的概率高于摘除ICAM-1基因的小鼠。陈媛媛等[37]研究发现,与BLM组比较,丹参和川芎嗪复合制剂中剂量和大剂量组肺组织蛋白酪氨酸激酶1(JAK1)、信号传导与转录活化因子1(STAT1)表达水平明显降低,提示中剂量、大剂量丹参联合川芎嗪腹腔注射抑制BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,可能与其抑制肺组织JAK1、STAT1表达有关。丹参联合川芎嗪可能是通过减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,降低STAT1、ICAM-1、JAK1从而达到减轻肺纤维化程度的目的。

9 结语

肺纤维化是一种慢性进行性呼吸系统疾病,肺的呼吸功能受损会逐渐加重,患者的生活质量持续下降,最终因呼吸衰竭而死亡。随着近年来汽车排放尾气,工厂排放废气等的增多,大气污染的加剧,雾霾天气正是一种大气污染状态,人长时间处于雾霾中,可引起或加重气管炎、肺炎、哮喘等肺部及气管疾病,导致肺纤维化发病率持续上升。肺纤维化发生机制十分复杂,目前,肺纤维化发生机制的分子层次研究方兴未艾,单味或复方中药对不同通路的多靶点的协同治疗将成为肺纤维化治疗的新趋势。

摘要：肺纤维化是以肺成纤维细胞增殖及细胞外基质过度聚集为特征的病变,其发病机制至今仍不十分清楚,也无理想的预防、治疗方法。肺纤维化发生与多种细胞生物因子的异常表达有一定关系。对近年来肺纤维化发病机制的细胞因子研究进展进行了综述。

中药复方防治肾纤维化研究进展 篇8

关键词：肾纤维化,终末期肾病,中药复方,研究进展

慢性肾脏病的发病率随着我国人口老龄化以及糖尿病、高血压患病人数的增加而逐年上升。无论是原发性还是继发性的肾脏疾病, 肾纤维化 (renal fibrosis, RIF) 是各种慢性肾脏疾病进展过程中存在的共同病理演变途径[1]。现代医学主要是应用血小板源性生长因子 (PDGF) 受体阻断剂、骨形成蛋白-7 (BMP-7) 增效剂、血管紧张素转化酶抑制剂 (ACEI) 、血管紧张素受体拮抗剂 (ARB) 等治疗措施抗肾纤维化, 但效果并不理想。中医药治疗肾脏病具有明显优势, 其在防治RIF方面具有良好的应用前景, 本文就中药复方防治RIF做一综述。

1 补肾化瘀汤

补肾化瘀汤由熟地黄、巴戟天、补骨脂、山茱萸、当归、制大黄等组成, 全方寒温并用、补泻兼施, 共奏补肾化瘀降浊之功。宋朝功等[2]采用单侧输尿管结扎 (UUO) 大鼠实验模型, 实验中模型组大鼠出现α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA) 表达增强, 而补肾化瘀汤组和代文组α-SMA表达较模型组中有不同程度的下降 (P<0.01) 。提示α-SMA表达增加参与肾纤维化过程, 且补肾化瘀汤通过抑制α-SMA的表达, 从而抑制成肌纤维细胞的形成是该方可能的抗RIF作用机制。张立红[3]用补肾化瘀汤治疗慢性肾衰竭, 发现该方可改善患者临床症状, 明显降低血尿素氮 (BUN) 肌酐 (Cr) 值, 甚至恢复到正常范畴, 认为该方能改善肾纤维化, 延缓慢性肾衰竭的进展。

2 健脾清化方

健脾清化方由党参、生黄芪、草果仁、苍术、黄连、制大黄等药物组成, 有健脾益气、清热化湿之功。马晓红等[4]采用5/6肾切除大鼠模型 (Platt法) , 通过测定比较各组血BUN、Cr水平;肾组织HE染色及Masson染色, 观察肾脏病变;采用逆转录-多聚酶链反应 (RT-PCR) 测定抑制转化生长因子β1-mRNA (TGF-β1-mRNA) 及结缔组织生长因子mRNA (CTGT-mRNA) 水平, 发现健脾清化方治疗组血BUN、Cr水平、肾间质纤维化程度及TGF-β1-mRNA, CT-GT-mRNA的表达均低于模型组 (P<0.01) 。证明健脾清化方对肾纤维化有积极的治疗意义, 其机制可能是通过抑制TGF-β1-mRNA水平从而抑制CTGT-mRNA表达, 影响细胞外基质 (ECM) 合成途径而实现的。

3 解毒复肾逐瘀方

解毒复肾逐瘀方由黄芪、党参、丹参、赤芍、路路通、川芎、山茱萸、车前子、牛膝、石韦、白花蛇舌草、大黄组成。研究显示, 解毒复肾逐瘀汤可抑制ECM的合成沉积。可能的机制有两个:一方面通过抑制TGF-β1的产生, 减少CTGT的合成, 以抑制ECM的沉积, 从而达到预防和治疗肾纤维化的作用[5];另一方面通过调节基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶抑制酶 (MMP/TIMP) 的平衡以防治肾纤维化[6], 但MMP和TIMP之间相互影响的机制尚未明确。

4 抗纤灵冲剂

抗纤灵冲剂由丹参、制大黄、桃仁、全当归、牛膝组成。王东等[7]应用抗纤灵冲剂治疗Platt大鼠, 发现肾组织中Ⅰ型胶原 (ColⅠ) 、α-SMA水平较模型组下降 (P<0.01) , 表明抗纤灵可明显降低肾间质成纤维细胞α-SMA的表达, 减少肌成纤维细胞的活化与形成, 继而使细胞外基质Ⅰ型胶原生成减少, 从而延缓慢性肾衰大鼠肾纤维化进程, 保护肾功能。符强等[8]研究表明抗纤灵冲剂可降低肾小球硬化模型大鼠肾组织核转录因子-κB (NF-κB) 表达及抑制血管紧张素Ⅱ受体活性, 进而起到抗RIF作用。何立群等[9]实验发现该方能通过抑制肾组织肿瘤坏死因子α (TNFα) 、PDGF的mRNA表达, 降低血清TNFα, 减少TNFα、PDGF对肾组织细胞的增生作用, 从而减轻了肾小球和间质ECM的沉积, 改善RIF, 延缓肾功能恶化。临床研究表明抗纤灵冲剂可明显改善肾功能, 同时显著降低了血清层黏连蛋白 (LN) 、Ⅲ型前胶原 (PC-Ⅲ) 、Ⅳ型胶原 (Col-Ⅳ) 和提高血浆型纤维连接蛋白 (PFN) 从而减轻肾组织纤维化[10]。

5 六味地黄汤

六味地黄汤由熟地黄、山茱萸、芍药、泽泻、牡丹皮、泽泻组成。实验研究[11,12]表明六位地黄汤可使模型大鼠血BUN、Scr及24h尿蛋白值降低, 肾脏病理可见淋巴细胞侵润、肾间质胶原纤维沉积、肾小球系膜增生、肾小管萎缩等情况较模型组明显减轻;可降低5/6肾切除12周后大鼠肾组织中ColⅠ、ColⅢ的蛋白表达水平, 改善细胞外基质集聚;能降低肾切除12周后大鼠肾组织缺氧诱导因子1α (HIF-1α) 、CTGT蛋白及mRNA表达水平。提示六位地黄汤可能通过改善缺氧从而抑制HIF-1α的表达, 进而下调CTGF的蛋白水平, 防止ColⅠ、ColⅢ等ECM的沉积, 从而减轻肾间质纤维化。隆献等[13]通过实验研究显示六味地黄汤可诱导Platt大鼠肝细胞生长因子 (HGF) 在肾小球系膜、基底膜及肾小管上皮细胞的胞浆表达, 同时促进肝细胞生长因子特异性受体c-Met蛋白于肾小管上皮细胞胞膜和肾间质中表达, 促使肾小管上皮细胞的增生和修复。提示六味地黄汤能有效促进HGF/c-Met系统上调, 促进细胞有丝分裂和损伤修复, 从而有助于保护肾脏的结构和功能, 抑制肾间质纤维化的产生。

6 真武汤

真武汤由炮附子、白术、生姜、茯苓、芍药组成。有文献[14]报道真武汤可降低UUO大鼠血BUN、Scr及血管紧张素Ⅱ (Ang-Ⅱ) 、整合素链激酶 (ILK) 蛋白的含量, 并且在肾脏组织HE染色中可见炎性细胞侵润、肾小管萎缩、间质纤维化程度均较模型组减轻, 免疫组化检测真武汤组肾组织中FN、MMP-9的表达受到抑制。推测其机制可能是真武汤通过下调Ang-Ⅱ的蛋白表达, 从而抑制ILK的蛋白表达, 继而降低FN和MMP-9的蛋白含量, 从而减缓肾间质纤维化的发展。韩凌等[15]在动物实验中发现该方可显著减轻肾间质的病理损伤, 降低尿中肾损伤分子1 (KIM-1) 、Clusterin (CLU) 、骨桥蛋白 (OPN) 含量, 且以真武汤高剂量组作用明显, 提示真武汤可通过降低KIM-1、CLU、OPN含量而达到延缓肾功能下降保护肾脏的作用, 但该作用机制尚待进一步明确。李莎莎等[16]通过实验证明真武汤可提高UUO大鼠总超氧化物酶 (T-SOD) 的活力, 增强肾脏组织细胞的抗氧化能力, 从而缓解肾纤维化的进展。

7 肾复汤

肾复汤由熟地黄、山茱萸、淮山药、泽泻、牡丹皮、茯苓、大黄、猫须草、芡实、黄芪组成。黄仁发等[17]运用肾复汤治疗慢性肾脏病3~4期患者62例, 观察治疗前后血BUN、Scr、24h尿蛋白定量、血清LN、血清胶原纤维Ⅳ (CV-Ⅳ) 、血清SOD、血清丙二醛 (MDA) 的变化, 并监测肝功能和心电图等安全性指标。结果发现肾复汤能减少慢性肾脏病患者尿蛋白的排泄, 降低BUN和Scr水平, 改善肾功能, 增高血清FN水平, 降低血清CV-Ⅳ水平, 而肝功能和心电图指标两组无统计学差异 (P>0.05) , 提示肾复汤具有良好的抗肾RIF作用。且肾复汤可降低血清MDA水平、增高血清SOD水平, 提示肾复汤的抗RIF作用与抗氧化应激有关, 但有待多中心、大规模的临床对照研究进一步证实。

8 肾毒宁冲剂

肾毒宁冲剂由制大黄、制黄精、黄芪、丹参、桃仁、仙灵脾、沉香粉等组成。朱致军等[18]通过Platt大鼠实验认为肾毒宁冲剂能抑制TGF-β1的表达, 从而抑制TGF-β1诱导的下游因子CTGT的合成与分泌, 减少对肾小管上皮细胞的刺激, 降低上皮细胞转化为肌成纤维母细胞 (MFB) 发生。还可降低肾衰大鼠血内皮素 (ET) 水平, 使ET促进肾小球硬化及慢性肾衰竭进展的因素明显减低, 以达到抗RIF的作用。还有研究[19,20]显示, 肾毒宁冲剂能明显降低肾衰竭大鼠Ang-Ⅱ水平, 使Ang-Ⅱ通过激活CTGT促肾纤维化作用得到抑制, 进而减少Ⅰ、Ⅲ型胶原、FN等ECM的合成, 从而起到延缓慢性肾脏病进展, 改善肾纤维化的作用。

9 止血通脉宁

止血通脉宁主要由黄芪、生地黄、鬼箭羽、夏枯草、莪术、大黄、三七等药物组成。马新换等[21]观察止血通脉宁药物血清干预TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞 (HK-2) CT-GT、纤溶酶原激活物抑制物-1 (PAI-1) mRNA、MMP-9mRNA的表达, 发现HK-2经TGF-β1诱导后CTGT、PAI-1mRNA的表达显著上升, 再次证实了TGF-β1与肾纤维化发生的相关性。但经止血通脉宁药物血清干扰后, CT-GT、PAI-1mRNA的表达逐渐下降, MMP-9mRNA的表达逐步上升, 与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 说明止血通脉宁具有调控纤维化细胞因子网络的作用, 可防治肾纤维化的发展。同样的实验方法张玉梅等[22]研究表明, 该方可通过下调纤维化细胞因子血管内皮生长因子 (VEGF) mRNA的表达达到防治肾间质纤维化的目的。杨丽霞等[23]发现正常的HK-2细胞只表达E-钙黏蛋白 (E-cadherin) , 不表达α-SMA。经TGF-β1诱导后, 免疫组化染色显示大量细胞表达α-SMA, 且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌也明显增多, 而E-cadherin的表达几乎消失。在经该方血清干预后, 随着药物浓度增加, 逐渐抑制了α-SMA的表达, 并恢复上皮细胞标志性蛋白E-cadherin的表达, 同时ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌逐渐减少, 说明止血通脉宁在一定程度上具有抗RIF的作用, 其机理可能是抑制肾小管上皮细胞转分化。

肺纤维化中药研究 篇9

关键词：肺纤维化/中医药疗法,@降纤颗粒/治疗应用,大鼠

肺间质纤维化( pulmonary fibrosis,PF) 是多种原因引起的肺部弥漫性疾病,主要病理表现为肺泡炎症性损伤、肺内间质细胞增生、细胞外基质(Extra Cellular Matrix,ECM)大量沉积和广泛的肺实质重建,导致肺远端有效换气面积减少,多数患者最终死于气道损伤和低氧性呼吸衰竭[1]。基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinases, MMPs) 及其抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs) 是调节ECM降解平衡的重要体系[2]。降纤颗粒是根据传统方剂止嗽散化裁而成,在临床治疗肺纤维化有良好效果。本研究在前期相关研究基础上进一步观察降纤颗粒对肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶系统表达及肺组织超微结构改变的影响。

1材料

1.1 药品与试剂

降纤颗粒(紫菀10g、桔梗6g、地龙10g、蛇床子10g):由上海市第六人民医院药剂科提供。博莱霉素A5:日本化药株式会社,批号:640110;地塞米松片:上海信谊药厂有限公司,批号:120122。逆转录及PCR试剂盒:美国Invitrogen公司;SYBR Green Supermix:日本东洋公司;兔抗大鼠MMP-2单克隆抗体试剂盒、羊抗大鼠TIMP-2单克隆抗体试剂盒:Santa Cruz Biotechnology INC;引物由上海英骏生物科技有限公司合成,序列见表1。

GAPDH: glyceraldehyde phosphate dehydrogenase.

1.2 动物

雄性SD大鼠,SPF级,体质量(260±20)g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证号为SCXK(沪)2009-0005。

2方法

2.1 肺纤维化大鼠模型制备、分组与给药

将实验大鼠3%戊巴比妥钠(30mg/kg)ip 麻醉后,无菌操作下行颈部正中切口,分离气管。模型组与治疗组气管内注入博莱霉素A5(5 mg/kg),正常对照组注入等体积生理盐水,缝合切口并消毒处理,将大鼠直立旋转3分钟,使药液在肺中分布均匀[3]。大鼠随机分为5 组(每组10只),分别为正常对照组、模型组、降纤颗粒治疗组、地塞米松阳性对照组、地塞米松联合降纤颗粒治疗组,降纤颗粒根据《中药药理学研究方法学》计算出人鼠等效剂量为3.5g/kg;地塞米松人鼠等效剂量为0.875mg/kg,各药物组按等效剂量给药,每日ig 给药1 次,连续28天。正常对照组和模型组ig等体积蒸馏水。

2.2 病理学观察

末次给药12小时后处死大鼠,迅速取右肺下叶,切取一块经4%多聚甲醛固定,制备石蜡切片,进行苏木精-伊红( HE) 染色、Masson 三色染色。参照文献[4,5]进行肺泡炎和肺纤维化程度分级。另取一块经25g/L戊二醛中固定,按电镜常规进行标本制备,日本JEM-1230型投射电镜观察超微结构变化。

2.3 大鼠肺组织MMP-2及TIMP-2基因表达的测定

提取大鼠左下肺组织总RNA;采用分光光度法测定提取的总RNA含量及纯化;用RT试剂盒对总mRNA进行逆转录,合成cDNA,进行实时PCR反应。反应体系为25μl:cDNA和上下游引物各0.5μl,SYBS green supermix 12.5μl,去离子水11μl。循环条件:95 ℃预变性3分钟,95 ℃变性 30秒,62℃退火45秒,72℃延伸45秒,60次循环,55 ℃10分钟。实时收集荧光信号,数据采用仪器自带软件,计算出MMP-2、TIMP-2 mRNA的相对表达量。

2.4 统计学处理

应用SPSS 18.0软件进行分析,各组计量资料以undefined表示,用单因素方差分析,两两比较用LSD-t法;等级资料采用Kruskall-Wallis法或Mann-Whitney法检验。

3结果

3.1 各组大鼠肺组织病理形态学变化

3.1.1 光镜观察

HE染色显示:正常组肺组织结构清晰,毛细血管正常,肺泡腔完整。模型组可见大面积肺间质中单核巨噬细胞浸润,肺泡间隔明显增厚,毛细血管明显增生,病变部位广泛。各给药组较模型组肺泡间隔增宽,极个别肺组织中见到肺泡腔中有单核巨噬细胞浸润及出血,程度均较轻。

Masson染色显示:正常组肺组织结构清晰,无明显纤维组织增生。模型组较正常组肺组织结构破坏,重度炎性细胞浸润,大面积大量胶原纤维沉积呈束状而造成肺泡壁明显增厚及肺泡形态改变,支气管、血管周边广泛大量胶原沉积,有明显的间质纤维化,纤维化评分明显较正常组增高,差异具有统计学意义。与模型组相比,各给药组可见肺泡壁增厚,炎性细胞浸润减少,肺组织损害减轻,有少量胶原纤维沉积,纤维化评分降低,差异具有统计学意义,见图1,表2。

与正常组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较△P<0.05,△△P<0.01;与地塞米松组比较▲P<0.05,▲▲P<0.01(下同)

3.1.2 电镜观察

正常组:肺泡上皮结构完整,Ⅰ型上皮细胞胞质扁平,其基膜与毛细血管基膜贴敷紧密,由肺表面活性物质层、肺上皮细胞及其基膜、间隙、血管内皮细胞及其基膜组成的整个呼吸膜连续、较厚;Ⅱ型细胞形态正常,表面具有绒毛,内含嗜锇性分泌颗粒,为板层状;细胞间连接比较紧密,间质中有少量纤维,排列松散而稀疏,气血屏障正常。模型组:肺组织整体结构比较疏松,呼吸膜出现分层、扭曲甚至破坏;Ⅱ型细胞绒毛减少甚至消失,板层小体大部分缺失呈空泡状;部分Ⅰ型上皮细胞线粒体肿胀,嵴消失呈空泡;血管内皮细胞核变形,核膜皱折,腔内有大量红细胞、中性白细胞,部分胞质空泡变性;成纤维细胞增多,肺间质大量纤维不规则堆积,排列紧密而凌乱。各给药组呼吸膜偶见分层或扭曲,连续性良好;Ⅱ型细胞绒毛基本正常,板层小体有较多残留;肺间质存在少量纤维。见图2。

3.2 各组大鼠肺组织MMP-2与TIMP-2基因表达的测定 见表3。

模型组大鼠肺组织MMP-2及TIMP-2较正常组均明显增加,但以TIMP-2增加更加明显,各药物组大鼠MMP-2较模型组明显增加而TIMP-2明显降低 (P<0.05, 0.01)。见表3

4讨论

肺纤维化多表现为肺阴不足,久病入络,甚至肾不纳气之证。降纤颗粒源于《本草图经》,该方以紫菀润肺下气、化痰止咳为君;桔梗为臣,加强化痰止咳作用;地龙清肺定喘、通行经络;蛇床子温肾壮阳、燥湿祛风、杀虫为佐。现代药理研究证实,四药均有止痰化痰平喘作用,且地龙有溶栓及抗凝作用。蛇床子有抗变态反应及性激素样作用。四药合用,彰显润肺化痰、通络益肾之功。

博莱霉素是一种抗肿瘤药,其不良反应之一是引起肺纤维化。用博莱霉素复制肺纤维化动物模型,已成为国内外公认的肺纤维化造模方法[6,7],可用于研究肺纤维化的发病机制及药物筛选[8,9,10]。本研究也采用博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,观察了实验大鼠肺组织的病理学变化。正常对照组大鼠的肺组织结构正常,未见明显炎症及纤维化病灶,而模型组大鼠的肺组织则出现不同程度的肺泡炎症变化,肺泡间隔增厚,肺泡腔破坏,成纤维细胞增多,肺间质大量胶原纤维不规则堆积,排列紧密而凌乱,与文献报道的肺纤维化病变一致[6,7,8,9,10]。经过降纤颗粒治疗后,博莱霉素诱导的肺纤维化模型大鼠肺泡炎及肺纤维化程度明显减轻,表明降纤颗粒能减轻肺纤维化过程中的炎症反应及纤维化程度。

ECM 过度沉积是各种器官纤维化的共同表现,肺纤维化也不例外。ECM的过度沉积既是ECM合成过多,更大程度上是由于降解的减少引起的[11]。MMP s家族是一簇锌依赖性蛋白酶,其主要功能是降解细胞外基质成分,其中MMP-2主要参与基底膜Ⅳ型胶原的代谢,而TIMP-2对其有明显的抑制作用[12,13]。当有过量的ECM产生时,会被MMPs降解,同时TIMPs又适当抑制着MMPs的活性,不至于损伤正常肺组织,如此,两者共同维护着肺细胞微环境的稳态[14]。一旦有各种致病因子打破这种统一,则使两者失衡,从而导致肺纤维化的发生、发展[15]。

止嗽散为临床治疗慢性支气管炎的有效方剂[16],降纤颗粒是在此方基础上加减化裁而成。本实验结果显示,模型组MMP-2和TIMP -2的表达较正常组明显增强,且TIMP-2的增加更加明显,从而增加了胶原纤维的积累并促进肺纤维化的发展。与模型组相比,降纤颗粒可显著升高肺组织中MMP-2的表达,降低TIMP-2的表达,从而证明降纤颗粒通过提高MMP-2、抑制TIMP-2 而产生抗纤维化的作用。与地塞米松组相比,降纤颗粒组未表现出明显差异,而降纤颗粒与地塞米松联合应用显示出明显优势。

肺纤维化中药研究 篇10

1 实验研究

1.1 单味活血化瘀中药的研究

心肌胶原主要包括Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维，成年人心肌中Ⅰ型胶原占胶原总量80%～85%，其伸展和回弹性较小，而僵硬度较大，主要聚合成粗纤维，Ⅲ型胶原纤维约占11%，其伸展和回弹性较大，形成典型的细纤维。因此，少量的Ⅰ型胶原增加即可增加心肌的僵硬度，而Ⅲ型胶原增加则可提高心室的顺应性，胶原表型的改变对舒张功能的影响比胶原的总量更重要[2]。唐忠志[3]应用丹参治疗自发性高血压大鼠 (SHR) ，结果发现丹参能显著减少心肌间质和心肌血管周围的胶原总量和Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量，且Ⅰ型胶原减少更明显，Ⅰ/Ⅲ型胶原比值降低，使心肌细胞间质和冠状动脉周围纤维化减轻。推测其作用机制可能与抑制心脏局部醛固酮作用有关。丹参酸乙可逆转大鼠心脏成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA的表达[4]。并且丹参不仅可以抑制心肌成纤维细胞的增殖和胶原的合成，拮抗AngⅡ的促心肌细胞肥大作用，还能拮抗心肌细胞的Ca2+内流，具有Ca2+拮抗剂的特点。张冬梅[5]研究发现，川芎嗪能在转录水平上阻断AngⅡ诱导的人α1 (I) 胶原基因启动子活性增加，阻滞和延缓心肌纤维化的进展。川芎嗪抑制心肌细胞总蛋白含量及直径增加及成纤维细胞增加的效果与AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦相似[6]。

1.2 活血化瘀复方药物研究

沈雁[7]研究提示，温阳活血化痰法可能通过抑制RAAS的异常激活，降低活化后大量释放血浆AngⅡ、ALD水平，有效减少了Ⅰ型胶原蛋白大量蓄积，阻止心肌间质重构，进一步改善心肌舒缩功能。黄飞翔[8]研究发现，具有益气活血化瘀作用的健心颗粒可以降低SHR大鼠MF、血浆中AngⅡ及心钠素 (ANP) 、脑钠素 (BNP) 水平，从而减轻MF，改善心功能。吴天敏[9]研究发现，复方丹参滴丸与福辛普利联用时可降低血浆AngⅡ、ALD及局部心肌AngⅡ浓度 (P<0.01或P<0.05) ，提示复方丹参滴丸与福辛普利联用可改善心肌纤维化。王华军[10]研究提示，通心络可以改善SHR心肌纤维化，大、小剂量组通心络治疗均能在一定程度上改善SHR左心室肥厚 (P<0.05) ，并使心室内、外膜及心肌小动脉周围的胶原减少，同时血浆AngⅡ浓度较SHR组下降，其中大剂量组各指标均较SHR有统计学意义 (P<0.05) ，表明通心络对SHR的心肌纤维化有显著的抑制作用。

2 临床研究

几乎所有类型的心血管疾病，在发生发展的过程中，均伴随着心肌、血管的纤维化病变，最终导致心脏的舒缩功能障碍，引起心力衰竭。刘泽银等[11]选择原发性高血压患者作为研究对象，治疗组在西药对照组的基础上给予灯盏细辛注射液治疗，结果表明治疗组在症状疗效、舒张早期与舒张晚期峰值流速的比值 (E/A) 、舒张早期流速的减速时间 (DT) 、等容舒张期 (IRT) 等指标改善上均优于单纯西药对照组。提示西药加用灯盏细辛注射液对高血压早期左室舒张功能不全具有保护作用。推测与灯盏细辛注射液能够减轻高血压患者心肌细胞肥大变性，减少心肌胶原面积、含量和胶原容积积分有关。王健[12]以益气活血合剂治疗冠心病患者，治疗后血清Ⅲ型前胶原、层粘连蛋白含量较治疗前明显降低，与治疗前比较差异有统计学意义 (P<0.05, P<0.01) ，说明冠心病心肌纤维化程度减低，提示益气活血方在改善冠心病患者心肌纤维化方面起一定的作用。