HPLC法（精选十篇）
HPLC法 篇1
1实验材料
1.1 仪器
LC-2010A HT高效液相色谱仪 (日本岛津公司) 、KQ-500B型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 、METTLER AE240型十万分之一分析天平 (瑞士METTLER) 、FAl004B电子天平 (上海精密科学仪器有限公司) 。
1.2 药材与试剂
药材:生品菟丝子A购于毫州药材市场, 产地内蒙古;生品菟丝子B购于河南药材市场, 产地河南;生品菟丝子C购于山西双鹤药材公司, 产地山西。
对照品:金丝桃苷 (购自中国药品生物制品检定所) , 槲皮素 (购自中国药品生物制品检定所) , 山奈酚 (购自中国药品生物制品检定所) 。
1.3 供试品制备
三种菟丝子饮片各20 g, 分别粉碎, 过65目筛后备用。
2实验
对照品溶液制备:分别称取金丝桃苷、槲皮素、山奈酚对照品0.816 mg、0.16 mg、0.176 mg, 精密称定, 置10 ml量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 得浓度分别为0.0816 mg/ml、O.016 mg/ml、0.0176 mg/ml的混合对照品溶液。
供试品溶液制备:分别称取2.1项下粉末各1 g, 精密称定, 精密加入90%甲醇20 ml, 30℃下超声提取30 min, 放冷, 过滤, 至25 ml容量瓶中, 加90%甲醇至刻度, 摇匀, 过0.45 μm微孔滤膜, 即得。
色谱条件:色谱柱:Kromasil C18 (4.6 mm×200 mm) ;流动相:甲醇-0.15 %磷酸溶液, 梯度洗脱 (见附表1) ;检测波长:365 nm;流速为1.0 ml/mim, 进样量为15 μl。
测定方法:分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5 μl、15 μl, 注入液相色谱仪, 每份样品测定3 次, 测定峰面积, 由线性方程计算得金丝桃苷、槲皮素、山奈酚的含量。不同产地生品菟丝子比较结果见表2。
由表2可知, 内蒙古产的菟丝子生药A, 各有效成分含量均为最高。其所含金丝桃苷可达0.2771%。比河南产的菟丝子生药B高13.7%, 比山西产菟丝子生药高6.2%;所含槲皮素可达0.0089%, 分别比生药B高48.3%, 比生药C高64.0%。所含山奈酚可达0.0391%, 分别比生药B高27.9%, 比生药C高57.0%。由结果综合可知, 来源于内蒙古的菟丝子生药A在各项成分指标上优于其他各组, 其有效成分的含量远高于其他两种来源生药。
3讨论
本实验采用HPLC法, 以金丝桃苷、槲皮素、山奈酚的含量为指标, 通过对不同产地的生品菟丝子的比较, 优选最佳地域生品菟丝子。结果表明:金丝桃苷的含量:菟丝子A (内蒙古) >菟丝子B (河南) >菟丝子C (山西) ;槲皮素的含量:菟丝子A (内蒙古) >菟丝子B (河南) >菟丝子C (山西) ;山奈酚的含量:菟丝子A (内蒙古) >菟丝子C (山西) >菟丝子B (河南) 。综合分析表明, 生品菟丝子选择菟丝子A (内蒙古) 为宜。本实验仅仅通过对药典所示的三种有效成分对不同来源的菟丝子进行检测, 对于其临床效果, 尚需进一步的药理及临床实验验证。
参考文献
[1]卫生部药典委员会编.中国药典.一部.人民卫生出版社, 2010:290-291.
HPLC法 篇2
氯丙嗪是吩噻嗪类代表药物,为中枢多巴胺受体的阻断剂,作用于中枢神经系统,常被用作催眠、镇静剂,在运输过程中使用可以明显减少动物的死亡率.这种药主要在肝脏代谢,易产生药物残留,对人们的身体健康造成很大影响.
作 者：董小海 胡京枝 赵光华 作者单位：河南省农科院农业质量标准与检测技术研究中心,郑州,450002 刊 名：农业质量标准 英文刊名：AGRICULTURAL QUALITY & STANDARDS 年，卷(期)： “”(1) 分类号：Q95 关键词：
HPLC法 篇3
关键词：内源激素；高效液相色谱；板栗（Castanea mollissima Bl.）
中图分类号：S-3文献标识码：A文章编号：1674-0432（2011）-03-0076-1
植物的内源激素与植物生长发育的基本规律和代谢过程的调节控制都密切相关[1]。果树的许多生命活动过程都与激素息息相关，对激素的定性、定量研究是调控果树生长发育、开花结实的一种十分重要的途径和手段[2]，但是植物激素的含量很少，用传统的方法无法实现精确的研究，随着现代仪器的快速发展使我们对植物激素含量的定性、定量研究成为现实，尤其是色谱仪器的快速发展，几乎成为植物激素测定的必备设备，这为我们从宏观上用植物生长调节物质进行调控植物花芽分化、生长发育、开花结果、落叶休眠奠定了重要的基础[3]。
使用高效液相色谱法测定植物内源激素比较准确，在植物痕量测定方面起着重要作用[4]。用高效液相色谱法测定植物内源激素，提取方法和色谱条件是关键，通过反复实验，获得测定板栗（Castanea mollissima Bl.）枝条顶芽内源激素合适的实验条件、纯化方法和色谱条件。
1 采样方法
采用完全随机区组试验设计，三次重复，每株采八个不同方位枝条上的顶芽，每次50个，包入锡箔纸中，进行标记，放入液氮罐中，带回试验室，放入-60℃超低温冰箱中备用。
2 液相仪器分析条件
2.1 主要仪器和试剂
主要仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪。
主要试剂：色谱用甲醇、高纯水、0.1M冰醋酸和其他化学分析试剂。
2.2 色谱条件
色谱柱：Waters C18 3.9×150mm，4.5um；
流动相：甲醇：水：冰醋酸=46.0：53.5：0.5；
柱温：36℃；进样量：15uL；流速1.0mL/min；
标样：ZR、IAA、GA3、ABA均为Fluka產品。
采用外标峰面积定量方法，梯度洗脱，洗脱条件如表1：
表1IAA、GA3、ABA和ZR梯度洗脱条件
3 板栗顶芽内源激素提取纯化方法
首先，从超低温冰箱中取出样品，用精确度为0.1mg的化学分析天平迅速准确称取0.5g样品，在研钵中加入冰醋酸研磨直至成为浆状，研磨好的浆状物倒入准备好的小烧杯中，用甲醇冲洗研钵数遍，保证浆状物全部洗入烧杯中。研磨时注意避光，需要在研钵中加入少量抗氧化剂，用锡箔纸封住烧杯口，放入恒定3℃冰箱中浸提过夜。
其次，从冰箱中取出烧杯，加入不溶PVP(聚乙烯聚吡咯烷酮)，进行搅拌，大约8min左右，进行抽提、弃残渣、过滤，将过滤液倒入浓缩瓶中，加入几滴氨水，用旋转蒸发仪器进行浓缩（温度不要超过40℃，然后用试管定容在5ml，放入冰箱中冷冻过夜（温度在-18℃以下）。
再次，取出样品，放入离心机中进行离心，离心前用水配平，转速在4500转以上，离心15min左右，离心后取出试管，倒出上清液于烧杯中，调ph值大约为2.8左右，定容至10ml试管中，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，取出上清液倒入浓缩瓶中，在38-40℃温度下用旋转蒸发仪浓缩至干。
第四，浓缩后的浓缩瓶用流动相溶液溶解，然后定容到1ml青霉素管中，放入高效液相仪器中测定样品中激素含量。
4 实验结果与讨论
在上述色谱条件和样品提取纯化方法下，样品中IAA、GA3、ABA、ZR激素可以获得比较好的分离效果，从图1中可以看出，基线比较平直，峰型好，拖尾少，能够获得比较好的色谱图；从图2中可以看出标样中GA3、IAA、ZR和ABA激素的峰高、峰型和保留时间，同图1中样品混合液中峰1、峰2、峰3和峰4比较符合，说明样品混合液中峰1、峰2、峰3和峰4分别是IAA、GA3、ABA和ZR，因此，本实验采用的色谱分离条件和样品提取纯化方法适用于板栗顶芽内源激素定量和定性测定。
注：1-GA3(赤霉素)；2-IAA（生长素）；3-ZR(玉米素)；4-ABA（脱落酸）。
参考文献
[1] 王沙生,高荣孚,吴贯明.植物生理学[M].北京:中国林业出版社,1991.
[2] 黄卫东.温带树花芽孕育激素调控的研究进展.园艺学进展.
1994,(2):37-45.
[3] 张立民.板栗花芽分化规律及其调控研究.北京林业大学硕士论文.2007,10-11.
[4] 河北农业大学.果树栽培学[M].北京:中国农业出版社,1987
(2).
HPLC法测定肾炎片中芦丁的含量 篇4
关键词：肾炎片,芦丁,高效液相色谱法
肾炎片处方由一枝黄花、车前草、马鞭草、白前、白茅根、葫芦壳六种药材组成, 具有清热解毒、利水消肿的功效。用于急慢性肾炎和泌尿道感染等症。现行质量标准为部颁标准《中药成方制剂》第6册WS3-B-1152-92-2005, 无含量测定项。为更好控制产品质量, 对本品中芦丁进行含量测定方法的研究。参考目前同类制剂测定芦丁含量的方法[1,2], 本文采用HPLC对肾炎片中芦丁含量进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪 (Agilent 1100) , UV2401 PC型紫外-可见分光光度计, C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5μm Agilent) 。
1.2试药
肾炎片来源于江苏康缘药业股份有限公司, 芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈、甲醇为色谱纯, 水为自制超纯水, 冰醋酸、95%乙醇、无水甲醇、无水乙醇为分析纯。
2 方法学考察与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Phenomenex luna C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液 (16:6:78) [3];检测波长360 nm;柱温30℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品2.931 mg, 置100 ml容量瓶中, 加甲醇溶解, 并稀释至刻度, 摇匀, 即得, 浓度为29.31μg/ml。
2.3 供试品溶液的制备[3]
精密称取3 g, 置250 ml平底烧瓶中, 精密加入50%乙醇50 ml, 水浴回流30 min提取, 放冷, 再称定重量, 用50%乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。
3 方法学验证
3.1 准确度
取已知含量的样品 (芦丁含量:0.48 mg/g) 9份, 每份1.5 g, 精密称定, 置烧瓶中, 第1~3份分别加入对照品1.15 mg, 第4~6份分别加入对照品1.44 mg, 第7~9份分别加入对照品1.73 mg, 制备供试品溶液, 依法测定, 计算芦丁的平均回收率为99.6%, RSD为1.5%, 该方法准确度良好。
3.2 重复性
取样品, 按供试品溶液制备方法制备, 平行制备6份, 测定其含量结果分别为0.168, 0.172, 0.168, 0.172, 0.168, 0.170, 计算6个测定结果的相对标准偏差RSD为1.2%, 试验结果表明, 该方法重复性良好。
3.3 精密度
取对照品溶液重复进样6次, 计算其峰面积RSD为0.4%, 结果表明精密度良好。
3.4 专属性验证
取按处方及制备工艺制备不含一枝黄花的阴性供试品, 按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。取对照品溶液、阴性供试品溶液与供试品溶液同时测定, 结果表明, 本方法专属性良好, 阴性无干扰。见图1。
3.5 线性关系考察
精密称取芦丁对照品10.15 mg, 置100 ml量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密吸取上述溶液1、2、5、6、7、10 ml, 分别置20 ml容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀。在已确定的色谱条件下, 分别吸取上述7份对照品溶液进样10 ul, 测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标, 芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线, 计算得回归方程:Y=9.8605X-0.4489, r=1。表明芦丁在5.075~101.5μg范围内线性关系良好。见图1。
3.6 稳定性考察
取供试品溶液, 室温放置, 依上述方法分别在0、2、4、8、12、24 h测定6次。结果芦丁峰面积的RSD为0.4%, 表明供试品溶液在24 h内基本稳定。见图1。
4 讨论
4.1检测过程中通过查阅参考文献及对照品溶液的全波长扫描效果, 对检测波长进行选择, 以溶剂为空白在200~400nm范围内绘制吸收光谱图。实验表明, 芦丁在360 nm具最大吸收, 当采用360 nm为检测波长时, 芦丁检测灵敏度高, 杂质峰较少, 基线较平稳, 且杂质均不干扰测定, 故选择360nm为其检测波长。
4.2本试验采用水浴回流法提取, HPLC测定肾炎片中芦丁的含量, 方法简便、快捷、准确, 适合该制剂的含量测定。
参考文献
[1]赵海云, 康君慧.HPLC法测定肾复康胶囊中芦丁的含量.陕西中医学院学报, 2008, 31 (3) :59-60.
[2]孙秋, 高莹莹, 常波.痔速宁片中芦丁的含量.中国医药指南, 2011, 9 (34) :304-305.
HPLC法 篇5
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【摘要】目的 建立测定益肝灵片中水飞蓟宾含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Dikma Diamonsid C18柱，甲醇?1%冰醋酸(体积比49∶51)为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长288 nm，柱温为30 ℃。结果 水飞蓟宾的质量浓度在20.68～82.72 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.999 9;平均回收率为97.5%，RSD为2.8%。结论 本文方法简便、快速、准确可靠，可用于益肝灵片的质量控制。
【关键词】益肝灵片;水飞蓟宾;高效液相色谱法
益肝灵片为保肝药，主要成分为水飞蓟素，属于黄酮类化合物，由水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟丁3种同分异构体组成[1]。现行国家标准采用紫外分光光度法，以水飞蓟宾计算益肝灵片中水飞蓟素的含量，测定结果是水飞蓟素(总黄酮)的含量[2]，结果受颜色变化等因素影响较大，并不能准确测定水飞蓟宾的含量。为进一步评价益肝灵片的质量，本文建立了益肝灵片中水飞蓟宾含量测定的高效液相色谱法，并与紫外分光光度法进行比较。本文方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。
1 仪器与试药
DIONEX高效液相色谱仪(戴安公司)，UVD170U型可变波长检测器,P680A四元梯度泵, Chromeleon化学工作站;紫外分光光度计(日立U3210);SK7200H型超声波清洗器(上海科导超声仪器厂)，工作频率59 kHz，输出功率350 W。
水飞蓟宾对照品(中国药品生物制品检定所，0856-03)，益肝灵片(广州白云山制药总厂，批号：4050001，4060001，070303，规格：38.5 mg/片)。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为高纯水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥3 h后的水飞蓟宾对照品约10.34 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(质量浓度为206.8 μg·mL-1)。
2.1.2 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于水飞蓟宾10 mg)，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀;精密吸取上清液5 mL至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.1.3 阴性对照液的制备 根据处方配制阴性对照品，按“2.1.2”项方法处理得阴性对照液。
2.2 测定方法 由于水飞蓟宾对照品和供试品中都同时含有水飞蓟宾和异水飞蓟宾，因此按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积之和计算。
2.3 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱为Dikma Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司);流动相：甲醇?1%冰醋酸溶液(体积比49∶51);流速：1.0 mL·min-1;检测波长：288 nm ;柱温：30 ℃。分别取对照品溶液(水飞蓟宾质量浓度为12 μg·mL-1)、供试品溶液和阴性对照溶液20 μL注入色谱仪，理论板数以水飞蓟宾计算应不低于4000;水飞蓟宾的拖尾因子为0.94，保留时间约为25 min，水飞蓟宾和异水飞蓟宾与其相邻色谱峰的分离度大于1.5;阴性样品不干扰样品测定，见图1。
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线的制备 分别吸取一定量的水飞蓟宾对照品贮备液，加甲醇稀释成水飞蓟宾质量浓度为20.68、31.02、41.36、51.70、62.04、82.72 μg·mL-1的溶液。依次进样20 μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积(A)对对照品溶液质量浓度(ρ)进行回归，得水飞蓟宾回归方程为A =667.95ρ+0.11，r=0.999 9。表明水飞蓟宾质量浓度在20.68～82.72 μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。
2.4.2 精密度试验 取质量浓度为41.36 μg·mL-1的水飞蓟宾对照品溶液20 μL，连续测定5次，其峰面积的RSD值为2.0%，表明仪器精密度良好。
2.4.3 稳定性试验 取供试品溶液(批号：070303)在0、2、4、6、8、12、24 h 分别进样20 μL，记录峰面积，结果峰面积的RSD为1.1%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.4.4 重复性试验 取同一批号(批号：070303)样品6份，照“2.1.2”方法处理并测定，结果水飞蓟宾平均含量为 6.45 μg·mL-1，RSD为1.5%，表明分析方法精密度良好。
2.4.5 加样回收试验 精密称取同一批号样品(批号：070303)共6份，精密加入水飞蓟宾对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果水飞蓟宾平均回收率为97.5%，RSD为2.8%，表明本方法准确可靠，见表1。表1 水飞蓟宾回收率试验结果
2.5 样品测定
取益肝灵片3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液(12 μg·mL-1)与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算样品中水飞蓟宾的含量，结果见表2。表2 样品中水飞蓟宾测定结果
3 讨 论
3.1 最大吸收波长的选择
取对照品溶液在200～400 nm范围内进行扫描，结果在288 nm处有最大吸收，故确定检测波长为288 nm，见图2。
3.2 流动相的.选择
曾试用甲醇?0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液(0.2 moL/L磷酸调节pH值4.0)[3]、甲醇?0.02%冰醋酸溶液[4]和甲醇?1%冰醋酸溶液[5]为流动相，并比较不同比例流动相对分离的影响，结果以甲醇?1%冰醋酸溶液(体积比49∶51)为流动相时的峰形较好，分离度较高。
3.3 提取时间的考察
考察超声提取10、15、20、25、30 min对提取率的影响，结果表明，超声提取20 min含量达稳定，时间增加，含量不会增加。因此选择甲醇为溶剂，超声提取20 min。
3.4 2种含量测定方法比较
HPLC法 篇6
【关键词】HPLC；烟酸；苦荞麦
荞麦含有生物活性成分黄酮类化合物，具有降低毛细血管脆性，改善微循环，提高人体免疫力等作用。烟酸是荞麦中的重要成分，近些年发现烟酸具有降血脂、血糖和胆固醇的作用［1-2］，是治疗高血压、心血管病、糖尿病的重要辅助药物。
1试验方法
1.1材料与仪器苦荞为库伦旗基地产品；烟酸对照品（中国药品生物制品检定所100434-200301）；乙醇，甲醇，磷酸二氢钠，磷酸等为优级纯，超纯水。LC-10ATVP高效液相色谱仪（日本）；N3000色谱工作站。
1.2烟酸的提取①超声法：称取苦荞心粉1.0004g、置于磨口瓶中，加70%乙醇30mL超声30min过滤，将滤液定容到50mL容量瓶。②回流法：称取苦荞心粉1.0003g、置于磨口瓶中，加70%乙醇回流5h过滤，将滤液定容到50mL容量瓶。
1.3烟酸的纯化预先处理好的硅胶，装入玻璃柱中，分别吸取两种方法提取的烟酸溶液10.0mL，进行柱层析分离，洗脱液为甲醇60mmol/L磷酸二氢钾的缓冲溶液，收集50mL洗脱液，定容。得到两种供试品溶液待测。
1.4HPLC条件SpherisorbC18（250mm×4.6mm，5um）色谱柱；流动相为甲醇；60mmol/L磷酸鹽缓冲液=1：9；流速为0.5mL/min；进样量为10μL；检测波长为266nm。
1.5线性关系的考察精密量取对照品溶液2、4、6、8、10μL，按上述色谱条件，分别进样以峰面积Y为纵坐标，质量为横坐标，进行线性回归。回归方程为Y=226003x-15902，r=0.9997。同时测定了平均回收率为99.02-99.61%，RSD为0.38-0.47%，在0.25-1.25μg/mL范围内烟酸呈良好的线性关系。
1.6样品烟酸含量测定取“1.3”节中样品溶液10μL在上述色谱条件下对2种供试品溶液进行含量测定。超声和回流提取法烟酸含量分别为20.75μg/g和18.95μg/g。
2结果讨论
烟酸分布于细胞的线粒体内，是动物不可缺少的营养成分，苦荞因其含有一定量烟酸，作为医药产品它不但对降血糖、血脂有辅助作用，还可以在烟酸的补充以及皮肤、消化系统等方面的疾病得到应用；苦荞中还含有其它有效成分，所以新的用途不断被开发，应用领域不断拓宽，具有广阔市场开发前景的粮食。
参考文献
［1］裴亭.高效液相色谱法测定茶叶中烟酸的含量［J］.茶叶科学，2006，27（8）：124-128.
HPLC法测定吲哚美辛肠溶片含量 篇7
1 仪器与试药
SCQ-K001空气超声波清洗器 (上海声彦超声仪器有限公司) ;Vertex Sti P5000高效液相色谱仪 (上海禾工科学仪器有限公司) ;XYF-H帕恩特超低有机物型超纯水机 (北京湘顺源科技有限公司) ;Biotage全自动氮吹浓缩仪 (拜泰齐贸易 (上海) 有限公司) ;Waters XBridge C18液相色谱柱 (150*4.6mm, 5un) (上海楚定分析仪器有限公司) ;FA1204B电子分析天平 (上海精科天美贸易有限公司) ;Chemvak无油真空泵 (北京桑翌实验仪器研究所) ;UV4501双光束紫外可见分光光度计 (天津港东科技发展股份有限公司) ;HI98103型便携式酸度计 (北京宝云兴业科贸有限公司) 。吲哚美辛对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈 (济南金贵林化工有限公司) 、甲醇 (重庆华东化学材料有限公司) 、冰醋酸 (青岛新滕光源化工有限公司) 。
2 含量测定
2.1 色谱条件:
依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下[6,7,8,9,10,11]。色谱柱为Waters XBridge C18液相色谱柱;甲醇-水-冰醋酸 (60∶40:0.1) 为流动相;检测波长为228nm;流速1.0m L·min-1;柱温:30℃。理论板数按酒吲哚美辛峰计算应不得低于2000。
2.2 提取方法确定
2.2.1 提取溶媒的选择。
分别选用了稀乙醇、50%甲醇、流动相对吲哚美辛肠溶片进行提取, 结果表明采用稀乙醇提取时吲哚美辛含量最高。
2.2.2 提取时间的选择。
取吲哚美辛肠溶片适量, 研碎, 精密称定, 用稀乙醇超声波振荡分别提取20、25、30分钟, 含量结果表明:三种提取时间结果无明显差异, 为保证提取完全并缩短处理时间, 采用超声提取25分钟。
2.3 供试品溶液的制备。
取吲哚美辛肠溶片适量, 研细, 精密称取 (约含吲哚美辛10mg) , 置50m L量瓶中, 加稀乙醇适量, 超声处理提取25分钟, 放置至室温, 加稀乙醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45μm) 滤过, 即得。
2.4 对照品溶液的制备。
精密称取吲哚美辛对照品约10mg, 置50m L容量瓶中, 用加稀乙醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每1m L溶液中含吲哚美辛0.2mg) 。
2.5 阴性干扰试验:
取除吲哚美辛的辅料, 按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂, 用供试品溶液制备的方法, 制成阴性对照溶液, 用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制, 观察在与吲哚美辛相同的保留时间处是否存在吸收峰, 结果表明:在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与吲哚美辛相同保留时间处不存在吸收峰, 因此说明选定的条件测定吲哚美辛无干扰, 具有较强的专属性。
2.6 标准曲线的制备。
制备浓度为50、100、150、200、250、300、350μg·m L-1的对照品溶液, 分别精密吸取10μL注入HPLC, 记录色谱图。以峰面积积分值A (μg) 为横坐标, 进样量为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。试验表明, 吲哚美辛对照品在50~350μg·m L-1范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验。
依照2.4项下制备对照品溶液, 精密吸取吲哚美辛对照品溶液10μL重复进样6次, 测定峰面积积分值, 对照品峰面积积分值的RSD为0.82%。结果表明, 本实验精密度良好。
2.8 重现性试验。
分别称取同批吲哚美辛肠溶片样品6份, 分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品, 按质量标准含量测定项下方法测定含量, 并计算样品的RSD值为0.61%, 结果表明, 此含量测定方法的重现性良好。
2.9 稳定性试验。
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液, 分别在0, 2, 4, 8, 10h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪, 进样测定, 供试品吲哚美辛峰面积积分值的RSD为0.65%。结果表明吲哚美辛至少在10h内稳定。
2.1 0 回收率试验。
采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分精密添加一定量的吲哚美辛对照品, 按供试品制备所述方法制备供试品溶液, 测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%, RSD为0.66%。
2.1 1 样品含量测定。
依照上述含量测定方法, 测定吲哚美辛肠溶片三批样品中吲哚美辛的含量, 结果三批样品的含量分别为标示量的99.5%、100.3%、98.1%。
3 讨论
分别考察甲醇-水-冰醋酸 (60∶40:0.1) , 乙腈-四氢呋喃-三乙胺磷酸缓冲液 (25:15:60) , 甲醇-水-冰醋酸 (60∶40:0.1) , 甲醇-乙腈-冰醋酸 (60∶40:0.1) 不同比例的流动相, 结果以甲醇-水-冰醋酸 (60∶40:0.1) 为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用甲醇-水-冰醋酸 (60∶40:0.1) 为流动相。本方法简单、快捷、准确。实验表明此方法可用于吲哚美辛肠溶片中吲哚美辛的含量测定。吲哚美辛肠溶片中吲哚美辛的含量为标示量的95%-105%。
参考文献
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HPLC法 篇8
1 仪器与试药
Waters 600高效液相色谱仪;UV996紫外检测器;AD-2型百万分之一电子天平;BP210S型万分之一电子天平;AS3120型超声波清洗器;胆酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号: 100078-200414) ;甲醇 (色谱纯) ;水 (重蒸水) ;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
采用反向高效液相法测定本品中的胆酸含量[4,5]。色谱柱:Shim Pack CLC ODS C18柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:乙腈-水-磷酸 (38:62:0.1) ;检测波长:208nm;柱温:25℃;流速:1.0mL×min-1;进样量:20μL。在此条件下进行样品分析, 供试品溶液中的胆酸与其他杂质峰分离良好, 保留时间在25min左右, 分离度大于1.5。
2.2 线性范围考察
精密称取胆酸对照品适量, 加甲醇制成4.105mg/mL的对照品溶液, 分别精密吸取1.25、2.50、5.00、7.50mL, 置10mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液。依法测定, 峰面积积分值分别为:84 466、166 931、343 615、506 738、691 137。以胆酸峰面积为纵坐标, 进样浓度为横坐标, 得回归方程为Y=168277X-4080.6, r=0.9998。结果表明, 胆酸浓度在0.513～4.105mg/mL范围内与峰面积之间呈良好线性关系。
2.3 供试品溶液的制备
取本品20片, 研细, 取约0.5g, 精密称定, 置50mL量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理 (功率300W, 频率50Hz) 30min, 放冷, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。
2.4 干扰试验
取处方中除粗胆酸外的全部药味, 按成品工艺及供试品溶液的制备方法制备空白对照品溶液, 按正文拟定方法进行测定, 结果表明:在胆酸保留时间处, 无其他成分干扰。见图1。
2.5 仪器精密度考察
精密吸取同一份供试品溶液 (批号:091201) , 重复进样, 结果峰面积积分值依次为:351 280、354 819、355 865、353 464、350 060, RSD为0.68%。结果表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性考察
取同一份供试品溶液 (批号091201) , 分别在制备后0、2、4、6、8h后依法测定胆酸的峰面积, 结果峰面积积分值依次为:362 473、361 279、363 010、355 794、348 026, RSD为1.77%。结果表明:供试品溶液在8h内基本稳定。
2.7 重复性试验
取同批样品 (批号091201) , 依法平行制备5份供试品溶液, 分别进行测定, 计算胆酸的含量, 结果测得含量分别为61.13mg/片、59.63mg/片、60.37mg/片、59.00mg/片、60.68mg/片, 平均含量为60.16mg/片, RSD为1.41%。结果表明:该方法的重复性良好。
2.8 加样回收率试验
采用加样回收方法, 精密称取重现性样品6份, 每份0.25g, 精密称定, 分别置50mL量瓶中, 分别精密加入一定量的胆酸对照品, 再加甲醇适量 (约40mL) , 超声处理30min, 放冷, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液, 依法测定, 计算回收率, 结果见表1。
结果表明:正文拟定方法具有良好的回收率。
2.9样品的测定
取三批样品, 分别依法测定, 计算胆酸的含量, 结果胆酸含量分别为60.16mg/片、57.53mg/片、53.39mg/片。
3讨论
3.1测定波长的选择
精密称取胆酸对照品102.63mg, 置25mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液 (每1mL含胆酸4.105mg) , 用岛津UV-240可见紫外分光光度计在300～190nm波长范围进行光谱扫描[1], 结果在200nm和208nm处有最大吸收, 由于在200nm处溶剂干扰大, 故选择208nm为测定波长。
3.2供试品溶液的制备
胆酸可溶于甲醇、乙醇, 由于本片为片剂, 含有一定量的淀粉, 故选用对淀粉溶解性较小的甲醇提取胆酸。在确定供试品溶液的制备方法时, 对回流提取和超声提取两种方法进行了比较, 并对提取时间进行了考察, 结果发现, 超声提取30min不仅方法简便且提取完全, 故最后确定供试品溶液的制备选择用甲醇超声30min。
参考文献
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HPLC法测定乳酸卡德沙星的含量 篇9
关键词：高效液相色谱法,乳酸卡德沙星,含量测定
卡德沙星 (Caderofloxacin) 为氟喹诺酮类抗生素, 卡德沙星作用机理与其他氟喹诺酮类抗菌药一样, 通过抑制细菌DNA拓扑异构酶的活性, 抑制细菌DNA合成, 产生抗菌作用。卡德沙星对革兰阳性菌的体外抗菌活性与左氧氟沙星、环丙沙星相似;对耐药金葡菌及革兰阴性菌的抗菌活性优于左氧氟沙星、司帕沙星、妥舒沙星;对厌氧菌的活性优于环丙沙星和左氧氟沙星。体内试验显示本品对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌引起的小鼠全身感染的保护效果优于环丙沙星和左氧氟沙星。卡德沙星适用于治疗有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、摩氏卡他菌、金黄色葡萄球菌、肺炎支原体、肺炎衣原体或嗜肺军团菌引起的传染性肺炎;有大肠杆菌、肺炎克氏杆菌或奇异变形菌引起的简单尿路感染;有大肠杆菌、肺炎克氏杆菌或奇异变形杆菌引起的复杂尿路感染;由大肠杆菌引起的肾盂肾炎;由淋病奈瑟球菌引起的简单尿道和宫颈淋病及女性急性简单直肠感染。笔者采用HPLC法测定乳酸卡德沙星的含量, 测定结果准确、可靠。
1 实验部分
1.1 仪器与实验
安捷伦1200高效液相色谱仪;G1311A输液泵;G1314B紫外检测器;G1322A脱气机;G1329A自动进样器;METTLER AE240型电子分析天平;甲醇为色谱纯试剂, 乙腈为色谱纯试剂, 三乙胺为分析纯试剂, 柠檬酸为分析纯, 水为超纯水。卡德沙星对照品由中国药品生物制品检定所提供; (对照品含量为100%) ;样品由哈药集团制药总厂提供。
1.1 色谱条件
色谱柱:Inertsil ODS-3 5um 4.6*150mm;流动相:0.01mol/l柠檬酸溶液 (用三乙胺调节PH值至5.0) -乙腈-甲醇 (84:16;10) ;流速为1.0 ml/min;检测波长327nm;进样量10ul。理论板数按卡德沙星峰计算应不低于3000。
1.2 实验方法
取本品约25mg, 精密称定, 置50ml量瓶中, 加流动相溶解并用流动相稀释至刻度, 摇匀, 精密量取10ul注入液相色谱仪, 记录色谱图;另取卡德沙星对照品适量, 同法测定, 按外标法以峰面积计算供试品中卡德沙星的含量。
2 实验结果
2.1 线性关系
精密称取10.50mg卡德沙星对照品, 置于50ml量瓶中, 加流动相适量使溶解后, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液。分别精密量取1、1.5、2、2.5、3ml卡德沙星对照品溶液置于10量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 在色谱条件下分别进样测定, 记录色谱图, 以峰面积为横坐标, 以质量浓度为纵坐标, 得到一个基本通过原点的直线。可得出结果, 在20ug/ml~60ug/ml范围内, 峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。线性方程为Y=2.2864E-5X+1.9273E-3, 线性相关系数r=0.9999, 结果参见表1。
2.2 回收率试验
取本品约25mg, 精密称定, 置50ml量瓶中, 加流动相适量使溶解, 并用流动相稀释至刻度, 摇匀。其中三份分别加入对照溶液5、10、15ml, 按1.3实验方法进行测定, 计算回收率为99.1%。
2.3 精密度试验
取同一对照品溶液, 连续测定5次, 结果见表2, RSD为0.024%, 表明精密度较好。
2.4 重现性试验
取同批号样品6份, 按1.3实验方法进行测定, 结果见表3。
平均含量为81.19%, RSD为0.22%, 表明重现性较好。
2.5 样品分析
按本文色谱条件, 测定3批样品, 所得结果见表4。
3 结论
HPLC法测定板蓝根中腺苷的含量 篇10
1.仪器与试剂
1.1仪器。SPD-LC10A型高效液相色谱仪 (日本岛津) ;BP210S电子天平 (德国Sartorius公司) ;SPD—10A型紫外检测器 (日本岛津) ;N2000 (浙大智达) 数据处理系统。
1.2材料及试剂。板蓝根 (陕西省老百姓大药房 , 产自甘肃, 经鉴定均为正品板蓝根) ;腺苷对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号896-200909, 质量分数>98%) , 色谱纯甲醇, 水为重蒸水, 其他试剂为分析纯和色谱纯 (国药集团化学试剂有限公司) 。
2.方法与结果
2.1色谱条件。色谱柱:Diamonsil C18, 250mm×4.6 mm, 5μm, 流动相:甲醇-水 (10∶90) , 流速:1.0mL/min, 检测波长:260nm, 柱温:45℃。理论塔板数按腺苷计算不低于4000。
2.2腺苷对照品溶液的配制。精密称取腺苷对照品3.2mg, 置50 mL量瓶中, 加10%甲醇适量使溶解, 并稀释至刻度, 摇
摘要：本文采用HPLC测定板蓝根提取物腺苷含量, 以提高板蓝根的质量标准, 方法为将板蓝根醇提液挥去乙醇, 经氯仿萃取, 然后用HPLC测定, 得出色谱柱:Diamonsil C18, 250mm×4.6mm, 5μm, 流动相:甲醇-水 (10∶90) , 流速:1.0mL/min, 检测波长:260nm, 柱温:45℃。结果表明腺苷含量在0.1880.940μg范围内, r=0.9998, 平均回收率为96.45%, RSD为3.05% (n=5) , 线性关系良好。可见本方法简单灵敏, 准确可靠, 重现性好, 可完善现行的质量标准, 为提高板蓝根的质量控制方法提供实验数据, 对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。
关键词：板蓝根,腺苷,高效液相色谱法,质量标准
参考文献
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