子宫颈腺癌中ILK与E-Cadherin蛋白表达的关系

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一, 在发展中国家妇女中其发病率居第一位。有资料显示, 年轻妇女的宫颈腺癌发病率呈上升趋势, 其比例已占宫颈癌病例总数的19.4%[1]。但由于病理特点和生物学行为不同于宫颈鳞癌, 致使其5年和10年生存率低于鳞癌, 这主要是与其侵袭性强和易发生转移有关。因此, 寻找敏感而特异的肿瘤标志物对宫颈腺癌的早期诊断、治疗方法的合理选择和患者的远期生存率的提高至关重要。作者采用免疫组织化学SP法检测了宫颈腺癌、和正常宫颈腺上皮中ILK与E-Cadherin的表达情况, 以帮助揭示宫颈腺癌的发病机制, 并探讨其与宫颈腺癌的组织学分级、临床分期及淋巴结转移的关系。

注:G3与G比较, *P<0.05, 透明细胞腺癌与子宫颈内膜腺癌及子宫内膜样腺癌比较, *P<0.05

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取5家医院病理科1999~2009年保存的子宫颈腺癌石蜡标本106例, 患者年龄27~77岁, 平均51.6岁, 全部病例均经病理专家复诊证实。组织学类型:子宫颈内膜腺癌65例, 子宫内膜样腺癌16例, 透明细胞腺癌19例, 肠型腺癌6例。病理分级:1级34例, 2级41例, 3级31例。另取22例慢性子宫颈炎组织作为正常对照。所有标本经10%福尔马林固定, 石蜡包埋, 4μm厚切片。

1.2 实验方法

SP法抗ILK单克隆抗体 (美国Upstate Biotechnology Lake Placid NY公司) 、抗E-Cadherin单克隆抗体 (Santa Cruze) 和SP免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。染色步骤参照试剂盒说明书进行。抗ILK (1:100) 和E-Cadherin (1:50) 经高压修复预处理, 抗原修复液为PH6.0柠檬酸缓冲液。经DAB染色后, 苏木素对比染色, 中性树胶封片。以已知阳性片作阳性对照, 以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

ILK蛋白阳性染色位于细胞质, 偶见于细胞核, 以细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性信号。E-Cadherin以细胞质内有棕色颗粒为阳性;每例均随机观察5个高倍视野 (x400) , 用半定量积分法判断结果, 阳性细胞率5%为0分, 6%~25%为1分, 26%~50%为2分, 51%~75%为3分, >75%为4分;阳性强度黄色为1分, 棕黄为2分, 棕褐色为3分。两者积分相乘, 0分为阴性 (-) , 1~4分为弱阳性 (+) , 5~8分为中度阳性 (++) , 9~12分为强阳性 (+++) 。以中度阳性和强阳性为过表达 (++~+++) 。 (+~+++) 均为阳性。

1.4 统计学处理

所有数据均用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析, 用χ2检验或四格表确切概率检验, 两者相关性用非参数Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1不同子宫颈组织中ILK与E-Cadherin的表达

106例子宫颈腺癌组织, ILK阳性表达率为86.8% (92/106) , 高于慢性子宫颈炎组织31.8% (7/22) , 2者比较差异有显著性 (P<0.01) ;106例子宫颈腺癌组织, E-Cadherin阳性表达率为58.5% (62/106) , 低于慢性子宫颈炎组织81.8% (18/22) , 2者比较差异有显著性 (P<0.05) 。ILK、E-Cadherin阳性颗粒均呈棕黄色, 主要位于肿瘤细胞的胞质或细胞膜, 阳性表达呈弥漫或灶性分布。

2.2子宫颈腺癌不同病理分级和组织学类型中ILK与E-Cadherin的表达 (表1) ILK在子宫颈腺癌中的表达随肿瘤恶性程度的增加而增强, 在G3组阳性表达率均明显高于G1组 (P<0.05) 。E-Cadherin在子宫颈腺癌中的表达随肿瘤恶性程度的增加而不断减弱, 但无统计学意义。ILK在不同子宫颈腺癌组织中的表达有差异, 但无统计学意义。

注:rs=-0.234, P<0.05

2.3子宫颈腺癌组织中ILK与E-Cadherin表达的关系 (表2)

经Spearman等级相关分析示随着ILK的阳性表达的增强, E-Cadherin的阳性表达逐渐减弱, 二者在子宫颈腺癌中的表达呈负相关 (P<0.05)

3 讨论

ILK是一种59kUr的包含锚蛋白重复序列的丝/苏氨酸蛋白激酶, ILK一方面作为分子支架与多种蛋白结合, 构成粘着斑的主要成分, 为诸如整合素一类的跨膜受体与肌动蛋白丝之间提供关键的物理连接, 调节细胞的粘连、播散、迁移和运动;另一方面它还作为丝/苏氨酸蛋白激酶调节整合素、Wnt等多种信号传导途径[2]。目前已有的关于ILK在多种恶性肿瘤中的研究均认为ILK具备癌基因的性质[3~6]。

E-cadherin基因定位于16q22.1, E-cadherin是一种介导同型细胞连接的钙依赖性的跨膜糖蛋白, 是上皮细胞间粘合及信号转导功能单元的重要组成分子[7~8]。肿瘤恶性程度越高, 细胞分化越差, E-cadherin表达下降或缺失的比率越高, 其基理可能由于E-cadherin表达下降使其不能与胞质内的catenin形成Cad-catenin复合物, 从而不能与细胞骨架肌动蛋白丝相连, 使肿瘤细胞丧失接触抑制, 导致细胞无限制增殖, 失去分化, 细胞间连接松散, 易于局部脱落, 发生局部浸润和远处转移[9~12]。

本研究结果发现, 106例子宫颈腺癌组织, ILK阳性表达率为86.8% (92/106) , 高于慢性子宫颈炎组织31.8% (7/22) , 2者比较差异有显著性 (P<0.01) ;E-Cadherin阳性表达率为58.5% (62/106) , 低于慢性子宫颈炎组织81.8% (18/22) 。ILK在子宫颈腺癌中的表达随肿瘤恶性程度的增加而增强, 在G3组阳性表达率均明显高于G1组 (P<0.05) ;E-Cadherin在子宫颈腺癌中的表达随肿瘤恶性程度的增加而不断减弱。笔者发现在宫颈腺癌组织中随着ILK表达水平的上调, E-cadherin水平反而下降, 两者在子宫颈腺癌中的表达呈负相关 (P<0.05) 。

有学者在结肠癌细胞系的研究中也指出, ILK能激活E cadherin的抑制物S-nail, 使E-cadherin下调, 结果导致细胞间粘连丢失、锚基不依赖性生长、促进肿瘤形成、侵袭和转移, 阻断ILK表达则Snail水平下调, E-cadherin表达回升, 肿瘤细胞的恶性表型发生逆转[10]。

总之, 肿瘤的形成和转移是多种相关因子和信号通路共同作用的结果, 而ILK和E-cadherin两者在蛋白转录及细胞信号转导之间以及在宫颈腺癌进展过程中的机制, 尚有待进一步研究。

摘要：目的探讨子宫颈腺癌组织中整合素连接激酶 (ILK) 与E-Cadherin的表达关系。方法采用免疫组织化学方法检测106例子宫颈腺癌组织中和22例慢性子宫颈炎组织中ILK与E-Cadherin的表达。结果106例子宫颈腺癌组织ILK的阳性表达率为86.8%, 高于慢性子宫颈炎组织 (P<0.01) ;E-Cadherin蛋白表达率为58.5%, 低于慢性子宫颈炎组织81.8% (P<0.05) 。ILK在子宫颈腺癌病理分级, G3组阳性表达率均明显高于G1组 (P<0.05) 。E-Cadherin表达与子宫颈腺癌组织类型有关, 透明细胞腺癌阳性表达率低于子宫颈内膜腺癌和子宫内膜样腺癌 (P<0.05) 。ILK阳性表达强度与E-Cadherin的阳性表达强度呈负相关 (P<0.05) 。结论ILK与E-Cadherin在子宫颈腺癌组织中的表达密切相关, E-Cadherin低表达与ILK增强表达在子宫颈腺癌的发生发展中起重要作用, 三者可能作为子宫颈腺癌恶性化的分子标志。

关键词：子宫颈肿瘤,腺癌,ILK,E-Cadherin,免疫组织化学

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