公文的种类及应用

公文的种类及应用（精选8篇）

篇1：公文的种类及应用

1、公布令。公布令也称作发布令、颁布令。它是国家领导机关和有关部门用来公布法律、发布行政法规和规章的命令。它一经发布，就要求全体公民、有关单位和人员无条件地遵照执行，具有极强的规定性和支配力，不容违抗和抵制。这类命令之后，随着就附上法律、法规和规章的全文，即“令出法随”，公布令也就成了这些法规文件的运行载体，是一种载体性公文。

2、行政令。行政令是国务院及其各部门、县以上地方各级人民政府宣布施行重大强制性行政措施时发布的命令。

3、嘉奖令。嘉奖令是领导机关或领导人为嘉奖有关人员或有功集体而发布的命令。嘉奖令正文一般由嘉奖原因、嘉奖内容和嘉奖希望构成，具有极强的号召力。

由于命令(令)是极具庄重性的公文名称，惩戒令一般很少使用。领导机关对有关人员的惩戒往往使用通报或决定等文种行文。

以上所述是命令(令)的主要种类，此外，还有动员令、戒严令、特赦令等。

篇2：公文的种类及应用

(1)标题

直接标明什么命令(令);也可在命令(令)的前面标明发布命令(令)的机关名称或领导人的职务。

(2)正文

命令的正文多由“原因”和“使命指挥”构成。前者说明为什么要发布该项命令，后者要说明命令所属机关必须遵照执行的事项，生效与执行的时限。

(3)签署

标示签发此项命令的机关或法定作者，签发的日期，并盖上印章。

篇3：水生花卉的种类及应用

1水生花卉的种类

根据水生花卉的生存习性与形态差异,可将水生花卉的种类分为以下几种类型。

a.挺水型水生花卉(包括湿生、沼生水生花卉)。该类水生花卉种类繁多,植株高大,绝大多数有明显的茎叶之分,茎直立挺拔,仅下部或基部沉于水中,根扎入泥中生长,上面大部分植株挺出水面;还有些种类具有根状茎,或根部有发达的通气组织,生长在靠近岸边的浅水处,如荷花、千屈菜、菖蒲、香蒲等,此类观赏植物多用于湿地、水景园的岸边浅水处布置。

b.漂浮型水生花卉。该类水生花卉种类较少,植物的根不生于泥中,植株漂浮在水面上,在没有大量水体时,也能生长于湿地上,多数以观叶为主,观花为辅,常用于水面景观的布置,主要有凤眼莲、大漂等。

c.浮叶型水生花卉。浮叶型水生花卉种类繁多,茎细弱不能直立,有的无明显地上茎。植株体内通常贮藏有大量的气体,叶片或植株能平稳地漂浮于水面上。根状茎发达,常具有发达的通气组织,生长于水体较深的地方,花大而美丽,多用于水面景观的布置,如玉莲、睡莲、芡实等。

d.沉水型水生花卉。该类水生花卉种类较多,多为无根或根系不发达,整株植物沉没于水中,通气组织特别发达,利于在水下空气极为缺乏的环境中进行气体交换。叶多为狭长或丝状,植株各部分均能吸收水体中的养分。此类植物花较小,花期短,以观叶为主,开花时同样能起到观赏作用。沉水型水生花卉主要定植在比较深的水域中,配置在浮叶植物相间或挺水植物与浮叶的空隙处,以增加水生花卉的景观层次。

2水生花卉的配置原则

a.因地制宜根据当地气候条件、土壤条件、水质、选择水生花卉的种类,依山畔湖种植水生花卉。如乡土植物具有不可替代的优势,不仅在引种过程中成活率比较高,取材极方便,营造出的景观具有浓烈的乡土气息,经济适用。

b.合理搭配水是园林景观设计中的灵魂,是构成景观的重要因素。一是要“留白”,留出较多的水面体现水景所营造的园林之美。水生花卉在水面布置中,要考虑到水面的大小、水深适应性,在植物品种上可加大数量,形成规模,保证不同季节的观赏效果。二是要注意种植比例,选用适宜种类,协调周围环境。做到疏密有致,栽植的方法有疏有密,多株、成片或三五成丛,或形式自然,孤植。留出必要的景观视线,保证水面的倒影及水体本身的美学效果。

c.功能兼顾在景观设计中运用水生花卉造景时,既要考虑景观的视觉效果,同时又要兼顾有效净化水质的效果。

3水生花卉在园林绿化中应用时应注意的问题

a.要了解水生花卉的不同类型。如千屈菜既是挺水植物,又可适应湿生以及中生环境。其次,要注意水生花卉的种植季节要求。夏天是种植和引进各种热带水生花卉的最佳季节。秋天则是花卉种植的淡季,在天气变冷前,必须将南方引进的热带水生花卉全部搬进温室大棚里。

b.要因地制宜。种植面积占水面的30%~50%为好,不可满池、塘、湖种植,影响园林景观效果。种类也要多样化,应在水下修筑图案各异、大小不等、疏密相间、高低不等及适宜水生花卉生长的定植池,以防止各类植物相互混杂而影响植物的生长发育。

c.要与水面绿化布景的角度及要求相一致。应选择有一定经济价值的、观赏价值高的水生花卉配置于水面,使其形成水天一色,四季分明,静中有动的景观效果。

4发展前景

篇4：观赏草的种类及应用价值

1 种类

观赏草的种类非常丰富，根据经典分类可分六大类，第一类为禾本科类，如芦竹、凌风草、虎尾草、狼尾草等；第二类为灯心草科类，如小花灯心草、羽毛地杨梅等；其余为莎草科、帚灯草科、花蔺科、香蒲科。此外，还有很多科属植物亦可作为观赏草，如百合科的沿阶草等。

2 生物学特点

2.1 适应性广

观赏草种类繁多，适合在不同条件下栽培，既可在肥水条件优越的沃土中生长，也能在贫瘠干旱的土壤中定植。

2.2 抗病虫能力强

绝大部分观赏草具有很强的抵抗病虫害能力，在生长过程中，基本上不用喷施农药。在种植初期浇水，以后完全靠自然降水就能正常生长。

2.3 管护成本低

观赏草在生长过程中几乎不需特别管护，除了在早春平荐一次外，以后不需修剪就能长期保持其美感，大大减轻了由于修剪所耗费的人力和能源。

3 观赏草的美学价值

观赏草属禾本科，该类植物中有700个属，7000个种类，其中有些种类具有很高的观赏价值，目前已引起园艺学家的关注。

3.1 植株及叶片形态多种多样

观赏草的植株及叶片形态多种多样。有的高大挺拔，如芦竹；有的短小刚硬，如蓝羊茅；有的则柔软飘逸，如苔草。这些丰富多姿的形状本身就有很高的美学价值。

3.2 叶片色彩变化诱人

观赏草叶片颜色丰富多彩，除了最常见的绿色，还有自然古朴的黄色、尊贵壮观的金色、浪漫多情的红色、高贵典雅的蓝色等，即使在绿色中，也有浅绿、深绿甚至黑绿色。一些珍贵的观赏草品种的叶片还有浅色条纹、斑点等花色，大大提高了其观赏价值。观赏草叶片的颜色随季节而变化，从春季的淡绿到冬季的金黄，使其魅力无穷。

4 观赏价值

4.1 形状

观赏草在不同的栽培条件下形状可能会有所变化，光照下直立生长的草放到荫蔽处后叶片可能会下垂，不同季节观赏草可能形成不同的形状，但基本分为以下几种类型：

①丛状叶，从草丛轴心处直挺地向外斜伸，呈尖锐状，如欧洲异燕麦；②甸状叶，从草丛轴心处向外散出，叶形较松软，呈草甸状，如狼尾草、沿阶草等；③直立状茎秆，若无明显茎秆则叶片直立挺拔。如羽毛芦竹和红叶白茅、木贼等，一般较大型的观赏草多属于此种形态；④喷泉状，一般是弧形叶、直立花轴和下垂呈弧形的花序的复合体，匐状大针茅的花轴伸长后高出草丛1米多高，花穗下垂，构成一幅美丽的喷泉画；⑤瀑布状，弧形叶和直立茎秆的组合体，如芒；⑥焰火状，花轴从草丛中心向四周直伸，花序如焰火喷射，如覆叶拂子茅。

4.2 高度

观赏草的高度有很大差别，矮的只有几厘米，高的有6米。对于同一种观赏草来说，在一个生长季节中的高度也可能有不同的变化。较矮的观赏草用于花坛、路边，中等大小的观赏草用做绿蓠，高大的作为花坛背景。

4.3 色彩

4.3.1 叶色 ①绝大多数观赏草的叶色是常绿色的，如针茅；②其他常叶色：金色和赤褐色；蓝绿色和灰色；红色；银色；斑斓的条纹。另据新闻报道，一种四季常青的观赏草——美国哈特种子公司研发并培育成功的转基因蓝色羊茅草在-28℃时比松柏还绿,而进入5～6月份时，会渐渐变成湖蓝色，该草现已在山西广泛推广。

4.3.2 花(花序)色 ①红(紫)色：丽色画眉草，圆锥花序紫色，疏花山麦冬，花穗为深紫色，叶黄；弯芒蔗茅，穗状花序狭长，红色或紫褐色。②褐色：灯心草，花序褐色，芒，花序红褐色。③银色：短毛野青茅，花序银色。④白(粉)色：芦竹，圆锥花序，大，白(粉)色。⑤其他：沙生蔗茅，羽状花序，白中带紫。

4.3.3 茎(花梗)色 羊茅，6月初花梗呈深紫色。

4.3.4 变色 叶色和花色会随着季节的变化而变化。春夏季多呈绿色，且呈多种深浅不同的绿色。随着秋天到来，叶色多了桔黄色、栗色、褐色、金色等色调，有的夹杂些粉色、白色、乳白色等，还有的是独特的铜褐色叶色。例如，紫色画眉草花序的颜色和形态从开花到结实到种子成熟都发生变化；垂穗假高粱独特的蓝绿色，秋天变黄；狼尾草叶绿色有光泽，弧形，秋天叶变为黄色或橙色等等。

4.4 质地

观赏草有不同的质地，每一种质地都有独到的欣赏之处。不同质地的观赏草协调搭配其他植物可以给人以触觉和视觉上的冲击。有的观赏草茎叶细致有光泽，光滑，如灯心草；有的观赏草叶片质地较厚，较光滑，如宽叶香蒲；有的观赏草叶表粗糙有毛，如玉簪属。

4.5 质感和力感

观赏草独特的气质和质感的是半透明，尤其在逆光和侧光下，观赏草的叶片和花序都有出色的表现。质地细腻的叶片在光下如同丝丝发缕，最典型的是墨西哥针茅，其丝发般的叶在侧光或逆光下飘拂显得轻盈秀美；穗状花序的边缘在光下泛着金光，犹如一道道亮眉。

5 在园林景观中的配置应用

5.1 组建观赏草花园

将多种形状、质地、色彩及高矮不同的观赏草组合搭配，可创造出精致美丽的花园，其观赏价值不低于花卉组成的花园。

5.2 与观叶植物配置

虽然观赏草的观赏部位主要在叶片，但其仍然能与其他观叶植物进行配置，丰富视觉效果。如在一簇簇玉簪周围种植浅黄色的苔草，在叶片平展的常春藤中点缀叶片垂落的观赏草，都能起到丰富植物种类、改变单一形状的效果。

5.3 与花配置

花与草是两类截然不同的园林植物，但二者的合理搭配仍然能产生出脱俗不凡的美丽景观。在色彩艳丽的鲜花中点缀一些观赏草，既可烘托花的美丽，又能缓和不同色彩花朵之间的强烈反差。

5.4 与灌木配置

灌木是园林景观中不可缺少的植物，观赏草与灌木配置也能产生奇妙的观赏效果。如在秋季，卫茅的叶片与荻配置，可产生出浓浓的秋意；蓝羊茅与黄杨搭配种植，可以巧妙地遮盖黄杨下半部的光秃。

5.5 作为过渡带

观赏草还可作为过渡带进行栽植，起引导不同景观的作用。如在树林和草地之间种植观赏草，可以产生很好的林草过渡效果。

篇5：常见公文种类及

一、通知：是运用最为广泛的下行文，行政公文和党的机关公文都把它列为主要文种。格式内容：

通知的写作形式多样、方法灵活，不同类型的通知使用不同的写作方法。

（一）印发、批转、转发性通知的写法。标题由发文机关、被印发、批转、转发的公文标题和文种组成，也可省去发文机关名称。正文须把握三点：对印发、批转、转发的文件提出意见，表明态度，如“同意”、“原则同意”、“要认真贯彻执行”、“望遵照执行”、“参照执行”等；写明所印发、批转、转发文件的目的和意义；提出希望和要求。最后写明发文日期。

（二）批示性通知的写法。标题由发文机关、事由和文种组成，也可省去发文机关名称。正文由缘由、内容包括要求等部分组成。缘由要简洁明了，说理充分。内容要具体明确、条理清楚、详略得当，充分体现指示性通知的政策性、权威性、原则性。要求要切实可行，便于受文单位具体操作。

（三）知照性通知的写法。这种通知使用广泛，体式多样，主要是根据通知的内容，交代清楚知照事项。

（四）事务性通知的写法。通常由发文缘由、具体任务、执行要求等组成。会议通知也属事务性通知的一种，但写法又与一般事务性通知有所不同。会议通知的内容一般应写明召开会议的原因、目的、名称，通知对象，会议的时间、地点，需准备的材料等

（五）任免、聘用通知的写法。一般只写决定任免、聘用的机关、依据，以及任免、聘用人员的具体职务即可。

××厂关于召开计划生育工作会议的通知 所属各单位：

为了总结交流经验，研究分析存在的问题，进一步贯彻落实省、市计划生育工作会议精神，做好今年计划生育工作，经研究决定召开计划生育工作会议。现将有关事项通知如下：

一、会议内容：……

二、参加人员：……

三、会议时间、地点：……

四、要求：……

××厂

×年×月×日

关于转发中共中央组织部《关于在纪念抗日战争胜利50周年期间开展走访慰问老干部、老党员及有关活动的通知》的通知 主送：略

经省委领导同意，现将中共中央组织部《关于在纪念抗日战争胜利50周年期间开展走访慰问老干部、老党员及有关活动的通知》转发给你们，并结合我省实际，作如下通知：

一、各地各部门要认真按照《通知》要求，组织好多形式的走访慰问活动。要结合贯彻全国、全省离退休干部工作会议精神，在走访慰问中认真听取老干部、老党员意见，重点解决好拖欠离休费、医药费问题和一些老干部、老党员的特殊困难。

二、对抗日战争时期及其以前参加革命工作的老干部发放慰问金标准是：1942年12月31日以前参加革命工作的老干部，一次性发给慰问金200元；1943年1月1日至1949年9月2日期间参加革命工作的老干部，一次性发给慰问金100元。所需经费由各单位解决。

三、从1995年8月1日起，对抗日战争时期及其以前参加革命工作，年龄不满70周龄的离休干部给予护理费补贴。标准是：地厅级离休干部（含享受待遇的）护理费补贴每人每月61元；其他离休干部每人每月50元。增加的护理费补按原经费渠道列支。中共四川省委组织部.一九九五年八月十五日

二、请示：适用于向上级机关请求批准、请示用。格式内容：

1.标题。一般写成“关于xxx的请示”。

2.主送机关（只写一个）。

3.请示的原因（理由尽量充分）。

4.请示的事项。

5.结语。范例参考：

关于暂缓调高旅游专项资金在交通建设附加费中分配比例的请示 市人民政府：

今年4月7日，xx市委、市政府《关于加快发展旅游业的决定》（x字［xx］8号），同意建立旅游建设发展专项资金，其部分资金来源于交通建设附加费的分配，并将此分配比列从原来的5％调高到10％。对此，我委认为该措施无疑有利于筹集资金，促进旅游业发展。但当初决定征收旅业交通建设附加费的目的，主要是筹集地铁资金，现要提高旅游专项资金往交通建设附加费中的分配比例，必然减少地资金的来源。地铁工程建设投资高达30亿元，筹资任务十分艰巨，而今年地铁资金缺口更大，需开拓更多的资金来源。因此，任何减少筹集地铁资金的做法都会异致工期拖长和投资增大，不利于工程建设。

鉴此，我委建议在地铁建设期内，暂缓调高旅游专项资金在交通建设附加费中的分配比例，仍执行旅游专项资金在交通建设附加费中占5％的分配比例不变。

专此请示，请批复。

Xx市计委

Xx年x月x日

三、报告：是向上级机关汇报工作，反映情况，提出意见和建议，答复上级机关的询问的公文。格式内容：

1．标题。一般写成“关于xxx的报告”。

2．原由。说明根据而报告。

3.报告事项。应条理清楚、重点突出。4．结语。用“专此报告”表达。范例参考：

关于清理“六•二三”彩色冲印部特大火灾现场和受毁楼房装顶加固的情况报告

市政府办公厅：

去年6月23日凌晨3时45分左右，因xx区劳动服务公司所属“xxx彩色冲印部”起火酿成了特大火灾事故。事发后，我区常务副区长xxx同志、主管副区长xx同志，立即赶赴现场，并组织区房管局、区环卫局、xx街道党委、xx街道办事处、派出所、xx房管站，全力以赴投入救灾抢险和善后工作。去年7月开始，我们组织力量清理了火灾场马路面、废杉什物、余泥，保证了交通畅通，并得到西区供电局xxx副局长的支持，把住户被切断的电源接好，保证了居民照明用电。1月26日对火灾现场的余泥什物进行清理，对被烧毁损坏的楼房进行了装顶加固排危，并在火灾场正面，砌了两米多高的围墙，保证了马路行人安全。

我区房管局曾多次与xx区劳动服务公司联系，要求赔偿抢险费、清场费，租金损失费、房屋修复费、住户居民损失费。但该劳动服务公司一拖再拖，至今仍未作出妥善处理。恳请市政府督促xx区劳动服务公司尽快作出处理。

Xx区人民政府

Xx年x月x日

四、请柬：是邀请他人参加某种会议，宴席、聚会活动的书面邀请书。采用请柬方式邀请显示举办者或主人的郑重态度。

格式内容：

各种请柬内容不同，形式各有区别，但都必须将举办活动的名称、时间、地点、主办人、被邀请人写明白。

范例参考：

请 柬 XXX:

兹订干200X年XX月XX日至XX月XX日，在xx华侨大厦召开xx名酒展销会，并于XX月XX日中午XX时XX分假座华桥大酒家举行开幕典礼，敬备酒宴恭候。请届时光临。

Xx电器有限公司敬约

Xx年x月x日

五、工作汇报：是工作人员向上级汇报工作的书面材料。

格式内容：

1.应按照重点工作多讲。非重点少讲的原则安排内容。

2.应按先主后次的顺序排列。

3.语言应简洁。

4.不要面面俱到。范例参考：

消防与安全管理工作汇报

（一）12月由于新进驻的多家企业进行内部装修，在对施工的工程队加强巡视检查和提醒注意安全施工外。安全员带领保安员多次清理了上门找短工的民工等闲杂人员出大院，对于民工清理运送的余泥做到跟踪督促检查，要求不得使用电梯，不得影响其他单位正常办公，搬运完后要立即清担场地，由于运送余泥的杂物多在晚上进行，实全员做到运送完余泥不清扫干净场地不放过的原则和多次要求清洁工配合，均未影响第二天进驻企业的正常办公秩序。

（二）、由于服务公司与保女中队和自行车、摩托车保管站的续约未明确，他们已多次询问有关的情况未有答复，原两名车辆管理员已辞职另找工作，保管站现临时招用了xx、xxx顶岗。保安员的工作情绪也很不稳定，有的保安员也辞职，保安中队对派驻的保安员进行调整，12月新进的保安员有xxx、xxx。望领导能尽快给予确立与xx保安中队和自行车、摩托车保管站承包者xxx的关系。

（三）12月14日xx区市建科通知，服务公司在今年10月申请“占道经管汽车保管站”许可证己批复，经领导决定，办公室并于12月31日前办理有关手续并将“许可证”和“占道经营许可证牌”取回中心，“许可证”交由档案室保管，“占道经营许可证牌”交综合管理部树立在大院车场内。

（四）、12月28日办公室安排好2002年元旦中心节日值班表，并报送xx局办公室、人事处和xxxx街派出所。元旦值班人员为xxx、xxx、保安员xxx、xxx。1月3日在中心晚上值班员xxx休息一天，当天晚上的值班工作由安全员xxx负责顶岗。

（五）下月的工作计划:

（1）出一期消防安全内容的墙报。

（2）春节前对xx全体职工进行一次安全学习教育。

（3）对多次要求配臵灭火器至今未落实的企业根据“消防法”第五章“隐患整改”发出书面通知。

（4）对新进驻企业任命“安全防火责任人”。

（5）对消防设施进行一次全面的检查。

Xx区保安服务公司

Xx年x月x日

六、答复：下级机关请示事项的公文，叫批复，是上级对下级机关来文所提出的请示而表明态度或作出明确回答的公文，是一种下行文。格式内容： 1．标题。一般写成“关于xxx的批复”。2.原由。一般写成 “xx[xx]xx号文收悉”。3．批复事项。4．落款。范例参考：

中国证券监督管理委员会关于xx新华期货经纪有限公司的批复 证监期审字 [XXXX]XX号 xx新华期货经纪有限公司:

经审核，你公司符合期货经纪公司的标准，请持本批复到国家工商局申请注册登记，经管范围为:国内期货经纪业务，期货投资、信息咨询服务业务、期货从业人员培训业务。在完成该哦尼斯注册登记手续后，请持营业执照副本原件及复印件、法人授权委托书和领取人身份证原件及复印件到我会领取《期货经纪业务许可证》。

XXXX年XX月XX日

七、拒绝信：是明确表示对他人不合作，或对他人观点不支持的一种态度，态度和立场非常鲜明。写断交信措词应得体，不要谩骂、侮辱、诽谤他人，应表现出一种胸怀和气度。当然拒绝信也可以写得婉转一些，以免激怒他人。范例参考： xx仁弟:

来信送到时，我客居练市，回家又值石湾盛灯，来客满座，无暇作复，今始书答。你的《唐诗》和《白香谱》要我作插画，我实不能邂命。因古人诗词我自在《子恺漫画》中试描数幅之后，未曾再写。为的是古代人物风情，不能空想。杜造往往有误。(《子恺漫画》古诗句部，曾因此点受人批评，)若要认真画，非费数年穷考古代器物图谱不可。此事在极忙的我不能胜任。如你所说，大东世界皆有石印木，此书销售有把握，或者所见不错。但无插画亦可，成木反而更轻。倘大使馆与开明接洽好了，我为你画一封面可也。

今将原稿两册挂号寄返，请检收。蒙汇寄二十三元余，并转信件，费心。履善女士索书。稍缓写寄。

我近来极忙，预早允人之稿件，堆积心中。为作客和看灯，又旷费多日，甚憾。你手写如许原稿，努力实在可佩。草草，余后谈。

祝你进步。

篇6：常用的公文种类有

一、决议。经会议讨论通过的重要决策事项，用“决议”。

二、决定。对重要事项或重大行动作出安排，用“决定”。

三、公告。向内外宣布重要事项或者法定事项，用“公告”。

四、通告。在一定范围内公布应当遵守或周知的事项，用“通告”。

五、通知。发布规章和行政措施，转发上级机关、同级机关和不相隶属机关的公文，批转下级机关的公文，要求下级机关办理和需要周知或共同执行的事项，任免和聘用干部，用“通知”。

通报。表扬先进，批评错误，传达重要精神、交流重要情况，用“通报”。

七、报告。向上级机关汇报工作、反映情况、提出建议，用“报告”。

八、请示。向上级机关请求指示、批准，用“请示”。

九、批复。答复下级机关的请示事项，用“批复”。

十、条例。用于制定规范工作、活动和行为的规章制度，用“条例”。

十一、规定。用于对特定范围内的工作和事务制定具有约束力的行为规范，用“规定”。

十二、意见。对某一重要问题提出设想、建议和安排，用“意见”。

十三、函。不相隶属机关之间相互商洽工作、询问和答复问题，向有关主管部门请求批准等，用“函”。

篇7：党政机关公文格式的种类

根据公文载体的不同，分为文件格式、信函格式、电报格式、命令格式、纪要格式等。

文件格式 信函格式

命令格式 纪要格式 公文格式的基本要求： 1.公文用纸：一般使用纸张定量为60g/㎡～80g/㎡的胶版印刷纸或复印纸。纸张白度80%～90%，横向耐折度≥15次，不透明度≥85%，pH值为7.5～9.5。

2.纸张大小：A4型纸：210mm×297mm。

3.版面：公文用纸天头（上白边）为37mm，公文用纸订口（左白边）为28mm，版心尺寸为156×225mm。

4.字体：如无特殊说明，公文各要素一般用3号仿宋体字。特定情况可作适当调整。

篇8：公文的种类及应用

关键词：色谱分离,亲和层析,发展方向

亲和层析是利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合作用而进行分离的一种层析技术。可以选用生物化学、免疫化学或其他结构上吻合等亲和作用而设计的各种层析分离方法。如用寡脱氧胸苷酸-纤维素分离纯化信使核糖核酸;用DNA-纤维素分离依赖DNA的DNA聚合酶;用琼脂糖-抗体制剂分离抗原;用金属螯合柱分离带有成串组氨酸标签的重组蛋白质等。

1 亲和层析的类型

亲和层析柱中被固定的配体是决定亲和层析成功的关键因素。根据配体与生物大分子之间相互作用体系不同, 可以把亲和层析分为以下几种类型。1.1生物亲和层析。生物亲和层析是利用自然界中存在的生物特异性相互作用物质对的亲和层析。通常具有高的选择性。典型的物质对有酶-底物、酶-抑制剂、激素-受体等。1.2免疫亲和层析。利用抗原抗体中的一方为配体, 亲和吸附另一方的分离系统, 称免疫亲和层析, 免疫亲和层析应用相当广泛, 许多典型的亲和层析纯化蛋白质的过程已经使用了单克隆抗体作为亲和配体, 目前, 利用抗体-抗原模式, 有可能得到每一种目标蛋白的单抗, 然后以单抗为配基, 通过亲和层析技术分离纯化目标蛋白质。此种方法的纯化倍数活性回收率非常高。蛋白A和蛋白C作为抗体结合蛋白已被应用于免疫亲和层析技术。1.3固定化染料为层析剂进行亲和层析的方法[1]。活性染料是一类合成化合物。由于其中有一些与生物大分子物质能够产生可逆的、转移性结合, 因此它们在生物亲和层析技术发展中有着重要的意义。活性染料与生物大分子物质的亲和关系是一个偶然发现。在凝胶过滤法中要用到一种高分子量的可见标记物——蓝色葡聚糖, 以量度柱中空隙的体积。在酵母丙酮酸激酶的凝胶过滤分离中, 发现这种蓝色标记物的存在会使凝胶过滤的预期结果出现异常。分析后发现, 丙酮酸激酶完全为蓝色葡聚糖所吸附。因此发现了利用合成活性染料作配基用于亲和色层分离的方法。

2 亲和层析的应用[2]

亲和色谱分离技术在生物制品分离和分析领域有宽广的应用开发前景。由于其具有简便、快捷、专一和高效等特点, 亲和色谱的应用十分广泛, 已普及到生命科学的各个领域。亲和色谱主要用来纯化生物大分子, 适用于从组织或发酵液中, 分离杂质与纯化目的物间的溶解度、分子大小、电荷分布等物化性质差异较小, 相对含量低、其他经典手段分离有困难的高分子物质。尤其是对分离某些不稳定的高分子物质, 更具优越性。

2.1分离纯化各种生物分子。2.1.1干扰素的提纯。干扰素自从发现以来, 由于其产量特别低, 提纯一直十分困难。细胞在诱导后能产生许多种蛋白质, 而干扰素只占其中极小一部分。因此, 在蛋白质类杂质多的情况下要分离干扰素就极为困难。在研究了干扰素的性质后, 发现干扰素是一种糖蛋白。1976年, Davey利用植物凝集素伴刀豆球蛋白A可以和糖蛋白专一结合的原理, 把伴刀豆蛋白A偶联在琼脂糖凝胶的层析柱上, 制成亲和柱, 可以达到分离干扰素的目的。2.1.2酶的分离。酶与底物能发生特异性的结合, 利用这一性质, 可以采用亲和色谱对结构复杂的酶进行分离。例如, 利用亲和色谱可以纯化醇脱氢酶和磷酸果糖激酶;当部分纯化的人血清制剂通过伴刀豆蛋白A-琼脂糖柱时, 蛋白质出现在外体积中, 其中包含大量血清白蛋白。2.1.3 r RNA的分离。用赖氨酸-琼脂糖4B可以把r RNA样品液中的几种r RNA按分子大小分开。2.1.4抗原和抗体的分离。如果把抗原固定化, 制成免疫吸附剂, 便可用来分离抗体。常用的载体仍然是琼脂糖凝胶。假如抗原是蛋白质, 在固定化时要注意保持它的三级结构, 以维护其生物活性。抗原-抗体复合物的解离常数是很低的。解离手段要使p H降至3以下。洗脱液通常是甘氨酸-盐酸缓冲盐酸、乙酸、20%甲酸或1mol/L丙酸, 甚至用高浓度蛋白变性剂如尿素或盐酸胍等。2.1.5绒毛生长激素的提纯。在抗HCS-琼脂糖柱上, 以正常人血清提纯人绒毛膜生长激素 (HCS) 。以放射免疫测定法测定, 发现在非阻留组分中没有激素, 99%的激素在胍洗脱液中, 几乎定量回收。2.2分离纯化各种功能细胞、细胞器、膜片和病毒颗粒。亲和色谱为分离和纯化不同功能的细胞提供了可能性。由于组织中各类细胞的物理特性彼此重叠, 用亲和色谱分离纯化细胞不能用常规方法实现。亲和色谱分离时要考虑许多因素。例如, 如何选择最合适的不溶性基质, 如何防止细胞非特异性吸附等。Sephadex 6MB是一种专为细胞亲和色谱而设计的层析介质, 能使细胞的物理捕获减至最小程度, 有良好的流过性且可迅速而有效的与敏感的生物分子欧联。2.3用于各种生化成分的分析检测。亲和色谱技术在生化物质的分析检测上也已广泛应用。例如, 利用亲和层析可以测定羊抗DNP抗体。2.4与亲和色谱相关的特殊技术应用。亲和色谱技术还可用于酶动力常数的测定, 目前已建立起许多有关亲和层析的理论模型。实验表明, 用色谱法推导出来的解离常数和平衡常数与其他方法在自由溶液中测得的数据十分相似。

3 亲和层析技术的展望[3]

与其它生化分离方法相比, 亲和层析技术具有高收率、高纯度、能保持生物大分子天然状态等优点, 广泛的应用于生物大分子的分离纯化, 特别是对含量极少的基因工程产品的一步纯化更显示出这一技术的优越性。正是因为亲和层析技术的高度特异性, 才能制备出高纯度的生物大分子, 不仅用于大规模生产而且用于动力学研究和结构测定 (亲和标记核磁共振X射线衍射等) 。此外亲和层析与分子生物学相结合是一种很好的技术手段, 如Mason等。利用该方法发现两个大肠杆菌抗转录终止因子即Nus B和核糖体蛋白S10能相互作用, 将S10偶联到Affi-Gel载体上, 大肠杆菌粗提物通过层析柱用不同的条件洗脱, 收集洗脱蛋白进行SDS-PAGE分析用抗Nus B抗体进行Western blotting进一步证实Nus B能与S10相互作用, 但是亲和层析技术也有一些缺点, 主要是载体 (如琼脂糖Sepharose) 价格昂贵、机械强度低 (易压床) 、配基的制备困难、偶联条件激烈、需要使用剧毒的活化剂 (如CNBr) 等。为了更好的克服这些缺点, 便形成了亲和层析技术发展的两大趋势。3.1新型载体的开发。商品化的亲和层析载体种类有限, 且价格昂贵远不能满足科研工作的需要, 在实际应用中往往需要对载体, 进行修饰改性或自制新的载体, 使其更有利于亲和吸附的进行以满足大规模工业生产的需要。在我国壳聚糖 (Chitosan) 被广泛用于亲和层析载体, 其特点是没有非特异性吸附作用, 配基偶联方法简单。此外Dommimic C.N.等以聚苯乙烯二乙烯基苯 (PSDVB) 珠为载体用聚乙二醇 (PVB) 修饰其表面, 制成了新的亲和层析载体, 这种载体具有良好的机械强度, 且PVA涂层消除了疏水相互作用避免了非特异性吸附的发生, 因此研制价格低廉、机械强度高、活化效率高的新型载体是亲和层析的一大热点。3.2利用多肽文库制备和筛选亲和多肽配基。应用组合化学的方法建立多肽文库, 然后利用多肽文库来筛选与目的蛋白特异性结合的多肽配基, 这一观点的提出大大促进了亲和层析筛选及合成配基, 技术的发展, 多肽文库的最新发展提供的一种合理高效快速的方法, 从成千上万的多, 肽中筛选出用于目的蛋白分离的配基, 20世纪90年代初以来国外学者利用多肽文库筛选亲和配基的研究层出不穷, 并有许多成功的例子, 然而在我国利用多肽文库筛选配基的技术仍未见报道, 不过从此方法的巨大优点来看它将是亲和层析研究的另一热点。

参考文献

[1]顾芝莲.生物工艺学[M].上海:华东理工大学出版社, 389-399, 413-414.

[2]辛秀兰.生物分离与纯化技术[M].北京:科学出版社, 165-166.