桔梗皂苷

桔梗皂苷（精选四篇）

桔梗皂苷 篇1

关键词：桔梗,桔梗皂苷,提取,质量控制

桔梗Platycodon grandiflorum (Jacq.) A.DC.为桔梗科Campanulaceae桔梗属植物桔梗的根。始载于《神农本草经》, 列为下品, 为我国传统常用中药材。《神农本草经》记载, 桔梗性平, 味苦, 辛。具有化痰止咳、利咽开音、宣畅肺气、排脓消痈的功效。现代药理学研究表明桔梗有免疫调节、抗炎、祛痰、保肝等作用[1]。桔梗中主要含有皂苷、黄酮、甾醇、多聚糖、酚类、聚炔、脂肪油、脂肪酸、氨基酸、无机元素、挥发油等成分[2]。其主要活性成分为皂苷类, 桔梗的皂苷类成分均属于齐墩果烷型五环三萜衍生物, 可分为3类:桔梗酸类、桔梗二酸类、远志酸类[3]。《中国药典》2005版一部以总皂苷含量作为桔梗的质量评价标准。本文就目前桔梗总皂苷的提取及桔梗质量控制的最新进展进行了综述。

1 桔梗皂苷的提取

桔梗的主要活性成分为皂苷类成分, 易溶于甲醇、乙醇、水饱和的正丁醇等溶剂, 桔梗皂苷的提取方法很多, 但传统的桔梗皂苷制备方法溶剂消耗大、生产周期长、产品纯度低, 难以满足现代化生产的需求, 亟待研究应用新的快速有效的提取方法。目前用于桔梗皂苷提取的新技术新方法主要有:超声波法、大孔吸附树脂法、超临界CO2萃取法等。

1.1 超声波法

超声波是一种高频机械波, 频率范围在15~60MHz的超声, 常被用于过程强化和引发化学反应。超声波在有机物降解和天然物的有效成分提取等方面已有了一定的应用。吴敬涛[4]等采用水作为溶剂, 利用超声波法制备桔梗总皂苷, 建立了超声波-水提法制备桔梗总皂苷的方法, 该法提取桔梗总皂苷, 快速、高效, 结合甲醇、乙醚纯化, 采用比色法测定其纯度, 经测定其产率为4.2%, 纯度为58.9%。和传统方法相比, 不仅产率倍增, 还能大大减少工作量、节约成本, 是一种适合工业提取的方法。

1.2 大孔吸附树脂法

大孔吸附树脂是一种不含交换基团, 具有大孔结构的高分子吸附剂, 其本身由于范德华力或氢键的作用具有吸附性;又因其具有网状结构和很高的比表面积而有筛选性能[5]。大孔吸附树脂技术在皂苷类化学成分分离纯化方面的应用比较成熟[6]。杨献文等[7]为研究桔梗总皂苷的提取分离工艺, 于室温下采用70%乙醇浸提, 浸提物经浓缩和脱脂等处理后, 再用ZTC-1大孔吸附树脂吸附, 利用水和20%、3 0%、4 0%、5 0%、9 5%的乙醇溶液洗脱提纯桔梗总皂苷, 结果平均得率为2.05%。该法操作简单, 得率高, 成本低, 为桔梗总皂苷的工业化生产提供了新的方法, 但尚存在提取周期过长等问题, 因此杨献文等[8]进一步研究探索用水提—大孔吸附树脂柱色谱分离制备桔梗总皂苷的方法, 并系统研究了影响水提取桔梗总皂苷的各种因素, 据此建立水提大孔吸附树脂柱色谱制备桔梗总皂苷的方法, 结果平均得率为1.603%。该法操作简单、快速且成本低, 适于工业化生产。

1.3 超临界CO2萃取法

作为一种新型提取分离技术, 超临界CO2萃取技术已成为中药现代化的关键技术之一。超临界CO2萃取中药有效成分, 与传统方法相比, 具有提取率高、操作温度低、中药有效成分不被破坏、无有机溶剂残留和工艺简单等优点[9~10]。中药有相当一部分品种完全可以单独采用超临界CO2萃取技术, 关键是如何根据目标产物选择好夹带剂的问题。卢朝国等[11]研究了超临界CO2萃取桔梗中有效成分的工艺, 以桔梗总皂苷的产率为考察指标, 对比了无水乙醇、甲醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯等5种夹带剂, 分析了萃取温度、萃取压力、萃取时间以及夹带剂用量等4种因素的影响。通过正交实验, 确定了最佳萃取工艺条件, 平均萃取率为0.363%。

1.4 其他提取方法

随着新提取分离技术的发展, 微波提取、超滤、新型吸附剂电泳和色谱分离、膜分离、半仿生提取法、分子蒸馏等技术用于中药有效成分的提取, 为中药现代化重点推广的技术, 这些高新技术也为桔梗有效成分的提取分离提供更多可行的方式。但目前如超滤、膜分离等某些新方法尚未应用于桔梗皂苷的提取研究中。

2 桔梗的质量控制研究新进展

中国药典2 0 0 5版一部采用显微鉴别和薄层鉴别进行桔梗的定性分析;采用重量法测定桔梗总皂苷, 作为桔梗的定量指标, 操作繁琐, 难以判断药材的真伪优劣。研究者不断开展新方法的研究, 以更好进行质量控制。现阶段在这些新方法中应用较多的主要有:色谱法、光谱法、质谱法、分子生物学方法。

2.1 色谱法

色谱法中应用最多的为高效液相色谱法, 高效液相法的分离效能高、分析速度快等特点正好适应中药成分的多样性、复杂性等特点, 且其不受样品挥发性的限制, 所以H P L C法在中药化学成分分析方面得到了迅速的发展和应用[12]。

2.1.1 针对单一成分分析

桔梗皂苷主含桔梗皂苷D, 为桔梗镇咳主要活性成分, 桔梗质量评价方面报道最多的是桔梗皂苷D的含量测定。通常采用反相C18柱进行皂苷类的分离分析, 许传莲等[13]用反相高效液相色谱分析方法, 对东北、华北、华中3个地区1 0个产地样品中的桔梗皂苷D含量进行了定量分析, 为桔梗质量标准规范化研究提供科学依据。朱丹妮等[14]首次采用高效液相-蒸发光散射检测器色谱法, 以C18为色谱柱测定桔梗皂苷D含量。通过对8种不同来源的桔梗材料和20个四倍体株系桔梗皂苷D含量的测定说明此法是测定桔梗皂苷D的较佳方法, 可作为桔梗质量控制和评价的一种可靠的技术。

2.1.2 高效液相指纹图谱法

李喜凤等[15]研究桔梗药材的高效液相指纹图谱。采用RP-HPLC法, 测定了25个不同桔梗样品。色谱条件为Hypersil C18柱 (250mm×4.6mm, 5μm) , 流动相为乙腈-0.05mo L/LH3PO4系统, 梯度洗脱, 流速为0.5m L/min, 检测波长为210nm, 柱温30℃。结果共找到17个共有峰, 建立了桔梗的高效液相指纹图谱。该方法简单, 重现性好, 可以用于桔梗药材的鉴定与评价, 为控制桔梗药材的质量提供可靠的科学依据。

2.2 光谱法

对桔梗中无机元素进行分析, 发现含有17种以上无机元素, 包括Cu、Zn、Ni、Mn、Cr、Sr、Fe、V等8种必需微量元素, 其中Cu、Zn、Mn含量均较高。薛国庆等[16]分别采用湿法、干法和先灰化再用硝酸-高氯酸 (φ, 4∶1) 常压微沸条件下消解桔梗样品, 用火焰原子吸收法测定栽培桔梗中的金属元素K、Mg、Ca、Cu、Zn、Mn、Fe、Co、Ni、Cd、Cr和Pb含量。研究了不同消化方法对测定栽培桔梗中的金属元素含量的影响以及测定不同元素的仪器最佳工作条件, 并做了方法的准确度和精密度考察。该方法所用仪器设备简单, 操作步骤简便, 是研究中药材中金属元素含量的可靠方法。

2.3 质谱法

徐保军等[17]对桔梗皂苷的化学成分进行了提取分离与纯化, 利用电喷雾质谱仪对桔梗皂苷类成分进行跟踪分析鉴定。通过对单体化合物各级激发产生碎片峰进行纵向分析及不同单体的横向对比分析, 寻找桔梗皂苷类的结构规律, 从而鉴定已知结构的皂苷成分, 并为未知结构的成分提供信息。而后徐宝军等[18]改进了桔梗皂苷D的提取、分离及鉴定方法。利用大孔树脂脱糖脱色及薄层硅胶作色谱系介质和电喷雾质谱对目标化合物进行跟踪分析, 使高纯度的目标化合物的分离和鉴定工作得以简化。

2.4 分子生物学方法

随着现代分子生物学的迅猛发展, 分子生物学方法已在农、林、医学及动、植物和微生物学的各个领域得到了广泛应用。用于桔梗鉴别的分子生物学方法主要有:随机扩增多态D N A技术、聚丙烯酰胺凝胶电泳法。

2.4.1 随机扩增多态DNA (RAPD) 技术

随机扩增多态DNA (random amplified polymorphic DNA简称RAPD) 是运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段, 用以作为分子标记的一种分子生物学研究手段, 具有快速、简便等优点[19]。严一字[20]等对取自中国、日本、韩国和朝鲜等东亚地区的2 4个桔梗种质资源, 利用RAPD-PCR (聚合酶链式扩增反应) 标记方法, 分析了其遗传变异和遗传关系。结果表明:用11个引物扩增出131条谱带, 平均每个引物扩增出11.9条谱带, 并扩增出61个多态性谱带, 平均每个引物扩增出5.5条多态性谱带, 显示出了相对高的多态率 (46.6%) ;得到的RAPD数据的遗传相似性范围为0.668~0.994, 并以遗传相似系数0.78为标准, 将24个桔梗种质资源分为7个类群, 地理分布不同的桔梗种质资源之间也有差异。为桔梗的分类、鉴定, 以及杂交育种的亲本选择提供重要参考依据。

2.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 法

植物类中药细胞内普遍含有受遗传基因控制的蛋白质分子, 且具有种的特异性和稳定性, 用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamide gel electrophoresis简称PAGE) 技术进行蛋白质分析可以达到中药品质的鉴别, 已显示出广阔的应用前景[21]。石俊英等[22]对不同产地的桔梗进行聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱的鉴别研究。分别对蛋白质 (Pro) 、过氧化物酶同工酶 (POD) 、酯酶同工酶 (EST) 进行PAGE指纹图谱分析。结果不同产地桔梗的Pro-PAGE图谱差异极小;POD-PAGE与EST-PAGE图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异, 分别具有各自的鉴别谱带。POD-PAGE与EST-PAGE指纹图谱可作为鉴别不同产地桔梗的有效方法。

3 结语

桔梗主要分布在东亚及俄罗斯的远东地, 在我国数省市均有栽培, 资源非常丰富, 为常用的药食两用植物。桔梗的传统应用可认为是药材全成分的应用, 而桔梗皂苷提取物只能作为桔梗的一个活性部位发挥某方面的医疗作用, 而不能作为桔梗的替代品。因此, 对桔梗的提取研究, 可以根据不同的应用目的, 研究不同的提取工艺, 制备各种不同有效部位 (群) 的标准提取物, 为桔梗的持续深化研究提供稳定的物质基础。

桔梗皂苷 篇2

1 仪器与试药

Waters2695-2424型高效液相色谱仪,CPA225D电子分析天平(德国赛多利斯公司),9860A型超声仪(费纳米科技发展有限公司),桔梗皂苷D对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111851-201204);复方桔梗止咳片(新乡佐今明制药股份有限公司,批号:20130301,20130304,20130501)乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,甲醇、正丁醇、三氯甲烷均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件:

Waters C18(4.6 mm×250 mm;5μm)为色谱柱;乙腈-水(28∶72)为流动相;柱温:28℃;流量:0.9 m L/min;漂移管的温度:70℃,气体的流速为3.0 SLPM/min。桔梗皂苷D峰的理论板数不低于4000。

2.2 溶液的制备:

精密称取一定量的桔梗皂苷D对照品,加甲醇溶解制成含0.5 mg/m L的对照品溶液。精称样品20T,至研钵中研细,取3.2068 g,置具塞锥形瓶中,精加50%甲醇50 m L,称重,超声处理(260 Hz,40 W)30 min,放至室温,再称重,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25 m L,置水浴上蒸干,残渣加水20 m L,微热使溶解,用水饱和的正丁醇30 m L振摇提取,分取正丁醇液,再重复上述操作2次,每次20 m L,合并正丁醇提取液,用50 m L氨试液洗涤,弃去氨液,再用正丁醇饱和的水50 m L洗涤,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇3 m L使溶解,加硅胶0.5 g拌匀,置水浴上蒸干,加于硅胶柱[100~120目,10 g,内径为2 cm,用三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液湿法装柱]上,以三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液50 m L洗脱,弃去洗脱液,再用三氯甲烷-甲醇-水(60∶20∶3)混合溶液100 m L洗脱,弃去洗脱液,继用三氯甲烷-甲醇-水(60∶29∶6)混合溶液100 m L洗脱,收集洗脱液,低温蒸干,残渣用少量甲醇溶解,并定容至5 m L量瓶中,摇匀,即得供试品溶液。称取不含桔梗的其他几味药材,按处方工艺制备阴性样品,作为阴性对照溶液。

2.3 方法学考察:

(1)阴性干扰实验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,在上述色谱条件下测定,结果见图1。可见该色谱条件下桔梗皂苷D峰形良好,阴性对照色谱在此处无干扰,表明其他组分对测定无干扰。(2)系统适应性试验:分别精密吸取浓度为0.5 mg/m L的桔梗皂苷D对照品溶液1、5、10、15、20μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。以桔梗皂苷D的进样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得线性回归方程为Y=30205.9X+19474.1(r=0.9996)。结果在0.513~10.26μg范围内桔梗皂苷D进样量与峰面积有良好的线性关系。(3)精密度试验:精密吸取精密吸取浓度为0.5 mg/m L的桔梗皂苷D对照品溶液10μL,连续进样6次,记录峰面积积分值[2]。结果桔梗皂苷D的RSD为0.34%(n=6),说明仪器精密度良好。(4)重现性试验:取批号为20130301的样品6份,分别依法处理后测定。结果的RSD为0.98%,表明该方法重复性良好。(5)稳定性试验:取同一供试品溶液(批号为20130301)10μL,按上述色谱条件,分别于0、2、4、8、12、24 h内测定,记录峰面积积分值,按峰面积积分值计算,结果桔梗皂苷D的RSD为0.85%。说明桔梗皂苷D在24 h内是基本稳定的。(6)回收率试验:精密称取批号为20130301的样品(桔梗皂苷D:0.1046 mg/g)6份,每份1.6 g,精密加入桔梗皂苷D 0.1654 mg,按供试品溶液方法制备,测定含量并计算回收率,见表1。

2.4 样品含量测定:

取3批样品(批号为2 0 1 3 0 3 0 1、2 0 1 3 0 3 0 4、20130501),按供试品溶液方法制备,分别进样10μL,依法测定,采用外标两点法计算样品中桔梗皂苷D的含量,含量分别为0.0261、0.0207、0.0198毫克/片。

a、对照品;b、供试品;c、阴性对照溶液

3 讨论

3.1

桔梗为处方中君药,原标准未对其进行质量控制,由于桔梗的活性成分桔梗皂苷D只有一个C=C双键,在紫外几乎无吸收,所以本文采用HPLC-ELSD法对其进行定量分析[3]。

3.2 色谱条件和ELSD参数的选择:

本实验以乙腈-水(28∶72)为流动相、流速降为1.0 m L/min与0.9 m L/min、ELSD漂移管温度为50℃与70℃、载气流速为3.0 SLPM/min进行了比对,结果以乙腈-水(28∶72)为流动相、流速降为0.9 m L/min、ELSD漂移管温度为70℃、载气流速为3.0 SLPM/min时样品中桔梗皂苷D峰与其他组分无干扰,分离度>1.5[4]。

摘要：目的 建立一方法来测定复方桔梗止咳片中的桔梗皂苷D。方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(28∶72),流速为0.9 m L/min,ELSD漂移管温度为70℃,气体流速为3.0 SLPM/min。结果 在0.51310.26μg线性范围内桔梗皂苷D进样量与峰面积呈良好的线性关系良好(r=0.9996),平均回收率99.44%,RSD=1.2%(n=6)。结论 该方法准确,重复性好,可有效的控制复方桔梗止咳片的质量。

关键词：复方桔梗止咳片,桔梗皂苷D,高效液相色谱法-蒸发光散射检测器

参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:259.

[2]彭善贵,文永盛.高效液相色谱法-蒸发光散射检测器法测定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量[J].中国药业,2012,21(19):28-29.

[3]笔雪艳,刘晓风,张清波,等.桔梗药材及饮片的质量标准研究[J].中医药信息,2011,28(6):69-71.

桔梗皂苷 篇3

1 材料与方法

1.1 实验动物模型及分组

纯系Wistar大鼠50只, 清洁级, 体重180~220g, 雌雄各半。同室分笼饲养于标准环境, 自由进水饮食, 12h光照周期。正常饲养1周后, 按体重随机分为2组:正常对照组 (NC组) 10只饲以普通饲料, 糖尿病组 (DM组) 40只饲以高糖、高脂饲料。喂养4周后DM组大鼠隔夜空腹尾静脉一次性注射小剂量STZ (15 mg/kg) , NC组仅注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液, DM组继续饲以高糖、高脂饮食4周。8周末DM组禁食12h后取血测FBG, >16.7mmol/L为造模成功。将成模大鼠随机分为糖尿病对照组 ( DM-C组) 和桔梗总皂苷治疗组 (DM-R组) 。

1.2 给药方案

从第9周起DM-R组给予桔梗总皂苷水溶液200mg/kg·d灌胃, 每日1次;NC组和DM-C组给予等体积蒸馏水灌胃。药物干预10周, 治疗期间DM-C组及DM-R组均继续高糖、高脂饮食直至实验结束。整个实验共持续18周。

1.3 留取标本及检测指标

18周末称量所有大鼠体重, 隔夜空腹处死动物后, 打开腹腔充分暴露肝脏, 取出整个肝脏, 称量湿重, 计算肝指数 (肝脏指数=肝脏湿重/体重) ;收集血液保存在-20℃冰箱中待测定FBG、TG、TC、HDL、LDL、ALT、AST。

1.4 检测试剂

STZ为美国Sigma公司产品;FBG、TG、TC、HDL、LDL、ALT、AST试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。

均采用全自动生化分析仪。

1.5 统计学分析

所有数据以undefined表示;组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用q检验, P<0.05为差异有统计学意义, 所有数据均采用SPSS13.0统计软件处理。

2 结果

2.1 各组大鼠血糖及肝重指标变化

见表1。

*#注:与NC组比较*P<0.05, **P<0.01;与DM-C组比较#P<0.05, ##P<0.01;表2同。

2.2 各组大鼠血脂及肝功表达

见表2。

3 讨论

糖尿病性肝病系指糖尿病引起的肝脏组织学和功能变化的病变, 是糖尿病的一种慢性并发症。病理组织学及超微结构的研究显示糖尿病人的肝脏病变中存在着肝纤维化。糖尿病引起的肝脏损害主要有以下表现: (1) 肝糖原沉积, 胞浆糖原明显增多, 核内出现糖原空洞, 电镜下核内也出现了少量糖原颗粒; (2) 脂肪肝:肝内出现脂肪滴明显增多, 且多为轻度脂肪变性; (3) 肝硬变:早期糖尿病肝损害甚至在轻度脂肪变性时即有胶原纤维增生; (4) 非特异性的细胞变性, 如肝细胞水肿、嗜酸性变性等; (5) 微血管病变、脂肪肉芽肿, Mallary小体等改变[2]。近年来, 作为药食同源的传统中药, 桔梗在免疫调节、抗炎、祛痰、保肝、降血脂等方面的药理作用已引起了广泛关注。桔梗中含有大量的三萜皂苷, 是主要的药理活性成分。本文通过桔梗总皂苷对糖尿病血糖、血脂、肝功的影响发现:它能很好的降低血糖、血脂, 改善肝功水平, 为糖尿病肝病治疗的研究提供了又一新方向。

参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典, 部[S].北京:化学工业出版社, 2005, 196

桔梗皂苷 篇4

1材料与方法

1.1仪器与试药

1.1.1仪器AGILENT 1100 LC高效液相色谱仪 (美国) ;AGILENT CHEMSTAT ION工作站 (美国安捷伦科技公司) ;检测器:AGILENT DAD;色谱柱:Phenomenex-C18柱 (250 mm×4.6 mm, 粒度5μm;迪马公司) ;KQ-250B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;梅特勒ME215S十万分之一电子天平;梅特勒CP224S万分之一电子天平;超声波清洗仪SD3200 (昆山市超声仪器有限公司) ;LK-COOA摇摆式高速中药粉碎机。

1.1.2试药桔梗皂苷D对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号为:111851-201204, 含量94.9%) ;乙腈:色谱纯;甲醇, 甲酸∶分析纯 (川东化工集团有限公司化学试剂厂) ;超纯水 (自制) 。桔梗药材样品采自大别山区鸡公山不同海拔高度, 见表1。共12批, 同一海拔地区横向间隔100~150 m采一次样, 将12批样混合均匀, 粉粹干燥至恒重备用。并经重庆万州食品药品检验所方应权教授鉴定为桔梗科桔梗属植物桔梗Platycodon grandiflorμm (Jacq.) A.DC.的根。

1.2方法[4,5,6]

1.2.1色谱条件色谱柱:Kinetex C18色谱柱 (4.6 mm×100 mm, 5μm) ;流动相:流动相乙腈 (A) -0.1%甲酸溶液 (B) , 梯度洗脱。见表1。流速:0.4 ml/min;进样量:20μl。

1.2.2溶液的制备

1.2.2.1对照品溶液的制备精密称定桔梗皂苷D对照品5.65 mg, 置于10 ml量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 过0.45μm微孔滤膜滤过即得, 进样20μl。见图1。

1.2.2.2供试品溶液的制备取桔梗药材粉末 (过二号筛) 精密称定2 g, 置锥形瓶中, 精密加入50%甲醇25 ml, 超声提取30 min, 放冷, 再称定重量, 用50%甲醇补足重量, 滤过, 取续滤液, 过0.45μm微孔滤膜滤过即得, 进样20μl。见图2。

1.2.3方法学考察

1.2.3.1标准曲线的绘制精密吸取桔梗皂苷D标准品溶液40、80、160、200、2400μl, 置10 ml具塞磨口试管中, 于水浴蒸发至干, 精密加10%香草醛试液0.5 ml, 60%硫酸5ml摇匀, 于水浴加热15 min, 冰水浴中冷却3 min, 以同法平行处理的空白溶剂为空白, 在472 nm处测定吸光度。以标准品浓度C (μl/ml) 为横坐标, 吸光度A为纵坐标绘制标准曲线, 得到回归方程为:A=0.0034 C+0.0064, r=0.9997, 结果看出C在此浓度系列范围内与A呈现良好的线性关系。

1.2.3.2精密度试验取同一批次桔梗样品溶液, 按“2.1”项下条件连续进样6次, 记录指纹图谱。计算各共有峰相对峰面积和相对保留时间的相对标准偏差 (RSD) 值, 结果显示, RSD均<3%, 表明精密度良好。

1.2.3.3重复性试验取同一批次桔梗样品溶液共6份, 按“2.1”项下条件分别进样20μl, 记录指纹图谱。计算各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值, 结果显示, RSD均<3%, 表明重复性良好。

1.2.3.4稳定性试验取同一批次桔梗样品溶液, 分别在0、2、4、6、8、12、24 h检测, 记录指纹图谱。计算各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值, 结果显示, RSD均<3%, 表明供试品溶液在室温下24 h内稳定性良好。

1.2.3.5加样回收率实验准确称取已知含量的桔梗药材已干燥粉末6份, 每份0.05 g, 加入桔梗皂苷D适量, 按照上述方法制备样品溶液, 各取20μl样品液, 测定吸光度, 计算回收率。平均加样回收率为96.97%, RSD为1.51%。

1.3统计学方法采用DAS2.0药物代谢动力学软件对数据进行回归分析。

2结果

依据方法“1.2”对不同海拔高度的12批次的桔梗皂苷含量测定。结果见表1。

3小结

海拔高度对桔梗药材成分影响较显著, 700 m以下地区桔梗皂苷的含量无明显差异, 较为接近, 700 m以上地区桔梗皂苷的含量出现明显变化, 说明高海拔地区种植条件、产地对桔梗药材产生影响。800 m以上地区阳光、气温等环境因素与低海拔丘陵山地地区出现较为大的变化。受到其他因素影响 (气候、土壤环境、采收时间等) , 为保证桔梗药材质量的稳定、可靠, 建议适宜的区域化种植。而桔梗皂苷含量与外在因子的相关性研究尚需进一步研究。

参考文献

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[2]李文庭, 祝明, 马临科, 等.桔梗的HPLC-ELSD指纹图谱研究.中国实验方剂学杂志, 2011, 17 (22) :50-53.

[3]李喜凤, 杜云锋, 谢新年, 等.不同采收期桔梗HPLC指纹图谱比较研究.中成药, 2010, 32 (3) :353.

[4]杨海玲, 张振凌, 李俊雅, 等.河南省不同产区桔梗饮片HPLC指纹图谱研究.河南科技, 2010 (5) :66.

[5]李喜凤, 杜云锋, 谢新年, 等.不同产地桔梗药材HPLC指纹图谱及桔梗皂苷D含量测定研究.中成药, 2010, 32 (4) :529.