HPLC测定法

HPLC测定法（精选十篇）

HPLC测定法 篇1

关键词：肾炎片,芦丁,高效液相色谱法

肾炎片处方由一枝黄花、车前草、马鞭草、白前、白茅根、葫芦壳六种药材组成, 具有清热解毒、利水消肿的功效。用于急慢性肾炎和泌尿道感染等症。现行质量标准为部颁标准《中药成方制剂》第6册WS3-B-1152-92-2005, 无含量测定项。为更好控制产品质量, 对本品中芦丁进行含量测定方法的研究。参考目前同类制剂测定芦丁含量的方法[1,2], 本文采用HPLC对肾炎片中芦丁含量进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪 (Agilent 1100) , UV2401 PC型紫外-可见分光光度计, C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5μm Agilent) 。

1.2试药

肾炎片来源于江苏康缘药业股份有限公司, 芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈、甲醇为色谱纯, 水为自制超纯水, 冰醋酸、95%乙醇、无水甲醇、无水乙醇为分析纯。

2 方法学考察与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Phenomenex luna C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液 (16:6:78) [3];检测波长360 nm;柱温30℃。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品2.931 mg, 置100 ml容量瓶中, 加甲醇溶解, 并稀释至刻度, 摇匀, 即得, 浓度为29.31μg/ml。

2.3 供试品溶液的制备[3]

精密称取3 g, 置250 ml平底烧瓶中, 精密加入50%乙醇50 ml, 水浴回流30 min提取, 放冷, 再称定重量, 用50%乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

3 方法学验证

3.1 准确度

取已知含量的样品 (芦丁含量:0.48 mg/g) 9份, 每份1.5 g, 精密称定, 置烧瓶中, 第1~3份分别加入对照品1.15 mg, 第4~6份分别加入对照品1.44 mg, 第7~9份分别加入对照品1.73 mg, 制备供试品溶液, 依法测定, 计算芦丁的平均回收率为99.6%, RSD为1.5%, 该方法准确度良好。

3.2 重复性

取样品, 按供试品溶液制备方法制备, 平行制备6份, 测定其含量结果分别为0.168, 0.172, 0.168, 0.172, 0.168, 0.170, 计算6个测定结果的相对标准偏差RSD为1.2%, 试验结果表明, 该方法重复性良好。

3.3 精密度

取对照品溶液重复进样6次, 计算其峰面积RSD为0.4%, 结果表明精密度良好。

3.4 专属性验证

取按处方及制备工艺制备不含一枝黄花的阴性供试品, 按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。取对照品溶液、阴性供试品溶液与供试品溶液同时测定, 结果表明, 本方法专属性良好, 阴性无干扰。见图1。

3.5 线性关系考察

精密称取芦丁对照品10.15 mg, 置100 ml量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密吸取上述溶液1、2、5、6、7、10 ml, 分别置20 ml容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀。在已确定的色谱条件下, 分别吸取上述7份对照品溶液进样10 ul, 测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标, 芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线, 计算得回归方程:Y=9.8605X-0.4489, r=1。表明芦丁在5.075~101.5μg范围内线性关系良好。见图1。

3.6 稳定性考察

取供试品溶液, 室温放置, 依上述方法分别在0、2、4、8、12、24 h测定6次。结果芦丁峰面积的RSD为0.4%, 表明供试品溶液在24 h内基本稳定。见图1。

4 讨论

4.1检测过程中通过查阅参考文献及对照品溶液的全波长扫描效果, 对检测波长进行选择, 以溶剂为空白在200~400nm范围内绘制吸收光谱图。实验表明, 芦丁在360 nm具最大吸收, 当采用360 nm为检测波长时, 芦丁检测灵敏度高, 杂质峰较少, 基线较平稳, 且杂质均不干扰测定, 故选择360nm为其检测波长。

4.2本试验采用水浴回流法提取, HPLC测定肾炎片中芦丁的含量, 方法简便、快捷、准确, 适合该制剂的含量测定。

参考文献

[1]赵海云, 康君慧.HPLC法测定肾复康胶囊中芦丁的含量.陕西中医学院学报, 2008, 31 (3) :59-60.

[2]孙秋, 高莹莹, 常波.痔速宁片中芦丁的含量.中国医药指南, 2011, 9 (34) :304-305.

HPLC测定法 篇2

HPLC法测定L-丙氨酸中杂质含量

建立了HPLC法分离测定L-丙氨酸中主要杂质的方法.色谱条件为:美国astec手性柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为:甲醇体积分数为33%,磷酸氢二钠浓度为0.01 mol/L,pH=6.00(磷酸调节)的水溶液,流速0.50 mL/min,柱温为25 ℃,检测波长为200 nm,进样量5 μL.方法的`建立为生产L-丙氨酸提供了分析测定的新方法.

作 者：王永秋 刘雪艳 WANG Yong-qiu LIU Xue-yan  作者单位：淮北煤炭师范学院,化学系,安徽,淮北,235000 刊 名：应用化工  ISTIC英文刊名：APPLIED CHEMICAL INDUSTRY 年，卷(期)： 38(6) 分类号：O629 关键词：L-丙氨酸   杂质   高效液相色谱法  

HPLC测定法 篇3

关键词：内源激素；高效液相色谱；板栗（Castanea mollissima Bl.）

中图分类号：S-3文献标识码：A文章编号：1674-0432（2011）-03-0076-1

植物的内源激素与植物生长发育的基本规律和代谢过程的调节控制都密切相关[1]。果树的许多生命活动过程都与激素息息相关，对激素的定性、定量研究是调控果树生长发育、开花结实的一种十分重要的途径和手段[2]，但是植物激素的含量很少，用传统的方法无法实现精确的研究，随着现代仪器的快速发展使我们对植物激素含量的定性、定量研究成为现实，尤其是色谱仪器的快速发展，几乎成为植物激素测定的必备设备，这为我们从宏观上用植物生长调节物质进行调控植物花芽分化、生长发育、开花结果、落叶休眠奠定了重要的基础[3]。

使用高效液相色谱法测定植物内源激素比较准确，在植物痕量测定方面起着重要作用[4]。用高效液相色谱法测定植物内源激素，提取方法和色谱条件是关键，通过反复实验，获得测定板栗（Castanea mollissima Bl.）枝条顶芽内源激素合适的实验条件、纯化方法和色谱条件。

1 采样方法

采用完全随机区组试验设计，三次重复，每株采八个不同方位枝条上的顶芽，每次50个，包入锡箔纸中，进行标记，放入液氮罐中，带回试验室，放入-60℃超低温冰箱中备用。

2 液相仪器分析条件

2.1 主要仪器和试剂

主要仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪。

主要试剂：色谱用甲醇、高纯水、0.1M冰醋酸和其他化学分析试剂。

2.2 色谱条件

色谱柱：Waters C18 3.9×150mm，4.5um；

流动相：甲醇：水：冰醋酸=46.0：53.5：0.5；

柱温：36℃；进样量：15uL；流速1.0mL/min；

标样：ZR、IAA、GA3、ABA均为Fluka產品。

采用外标峰面积定量方法，梯度洗脱，洗脱条件如表1：

表1IAA、GA3、ABA和ZR梯度洗脱条件

3 板栗顶芽内源激素提取纯化方法

首先，从超低温冰箱中取出样品，用精确度为0.1mg的化学分析天平迅速准确称取0.5g样品，在研钵中加入冰醋酸研磨直至成为浆状，研磨好的浆状物倒入准备好的小烧杯中，用甲醇冲洗研钵数遍，保证浆状物全部洗入烧杯中。研磨时注意避光，需要在研钵中加入少量抗氧化剂，用锡箔纸封住烧杯口，放入恒定3℃冰箱中浸提过夜。

其次，从冰箱中取出烧杯，加入不溶PVP(聚乙烯聚吡咯烷酮)，进行搅拌，大约8min左右，进行抽提、弃残渣、过滤，将过滤液倒入浓缩瓶中，加入几滴氨水，用旋转蒸发仪器进行浓缩（温度不要超过40℃，然后用试管定容在5ml，放入冰箱中冷冻过夜（温度在-18℃以下）。

再次，取出样品，放入离心机中进行离心，离心前用水配平，转速在4500转以上，离心15min左右，离心后取出试管，倒出上清液于烧杯中，调ph值大约为2.8左右，定容至10ml试管中，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，取出上清液倒入浓缩瓶中，在38-40℃温度下用旋转蒸发仪浓缩至干。

第四，浓缩后的浓缩瓶用流动相溶液溶解，然后定容到1ml青霉素管中，放入高效液相仪器中测定样品中激素含量。

4 实验结果与讨论

在上述色谱条件和样品提取纯化方法下，样品中IAA、GA3、ABA、ZR激素可以获得比较好的分离效果，从图1中可以看出，基线比较平直，峰型好，拖尾少，能够获得比较好的色谱图；从图2中可以看出标样中GA3、IAA、ZR和ABA激素的峰高、峰型和保留时间，同图1中样品混合液中峰1、峰2、峰3和峰4比较符合，说明样品混合液中峰1、峰2、峰3和峰4分别是IAA、GA3、ABA和ZR，因此，本实验采用的色谱分离条件和样品提取纯化方法适用于板栗顶芽内源激素定量和定性测定。

注：1-GA3(赤霉素)；2-IAA（生长素）；3-ZR(玉米素)；4-ABA（脱落酸）。

参考文献

[1] 王沙生,高荣孚,吴贯明.植物生理学[M].北京:中国林业出版社,1991.

[2] 黄卫东.温带树花芽孕育激素调控的研究进展.园艺学进展.

1994,(2):37-45.

[3] 张立民.板栗花芽分化规律及其调控研究.北京林业大学硕士论文.2007,10-11.

[4] 河北农业大学.果树栽培学[M].北京:中国农业出版社,1987

(2).

HPLC法测定阿奇霉素颗粒的含量 篇4

1 仪器与试药

1.1 仪器:

ELGA超纯水器 (上海澜锐仪器科技有限公司) ;Waters Alliance高效液相色谱系统 (乌鲁木齐祥生仪器有限公司) ;10L-50L大型旋转蒸发仪 (北京赛美思仪器设备有限公司) ;JΜLABO TW系列通用水浴槽 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ;PHS-3C数字酸度计 (上海攸茜实业有限公司) ;SCQ-1002实验室玻璃器皿批量清洗器 (上海声彦超声波仪器有限公司) ;UV-2200可见分光光度计 (北京北分瑞利分析仪器 (集团) 公司) ;FA2104电子分析天平 (西安禾普生物科技有限公司) 。

1.2 试药:

乙腈 (常州市武进区前黄华茂化工有限公司) 、盐酸 (淄博市临淄冰清精细化工厂) 、三乙胺 (淄博市临淄冰清精细化工厂) 、甲醇 (吉林省化工进出口有限公司) 、磷酸 (常州市武进区前黄华茂化工有限公司) 、磷酸氢二铵 (淄博市淄川区鑫川化工厂) 、冰醋酸 (常州市武进区前黄华茂化工有限公司) 。

2 含量测定

2.1 色谱条件:

依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDS C18色谱柱 (4.6*250*5u) ;乙腈∶p H8.2磷酸盐缓冲液 (0.05mol/L磷酸氢二钾溶液, 用20%磷酸调节p H至8.2) (55∶45) 为流动相;检测波长为210nm;流速1.0m L·min-1;柱温:30℃。理论板数按阿奇霉素峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取阿奇霉素颗粒适量, 研细, 精密称定至容量瓶内, 加适量流动相超声溶解, 放凉, 用流动相定容, 过0.45μm的滤膜, 即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿奇霉素对照品约50mg, 置10毫升棕色容量瓶中, 用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取10毫升, 置100毫升棕色容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每1m L溶液中含阿奇霉素0.5mg) 。

2.4 阴性干扰试验:

按方中比例取除阿奇霉素以外的原辅料, 按照制备工艺方法制成阴性制剂, 按2.3项下方法制成供试品溶液, 按色谱条件测定。结果表明:在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与阿奇霉素相同保留时间处不存在吸收峰, 说明此方法具有较强的专属性。

2.5 标准曲线的制备

制备浓度为0.1mg·m L-1、0.2mg·m L-1、0.4mg·m L-1、0.8mg·m L-1、1.6mg·m L-1、3.2mg·m L-1、6.4mg·m L-1、12.8mg·m L-1的对照品溶液, 分别精密吸取10μL注入HPLC, 记录色谱图。以峰面积积分值A (μg) 为横坐标, 进样量为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。试验表明, 阿奇霉素对照品在0.1~12.8mg·m L-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取阿奇霉素对照品溶液10μL重复进样6次, 测定峰面积积分值, 对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明, 本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批阿奇霉素颗粒样品6份, 分别制备成供试品, 按色谱条件测定含量, 并计算样品的RSD值为0.82%, 结果表明, 此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液, 分别在0, 1, 2, 3, 4h, 6h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪, 进样测定, 供试品阿奇霉素峰面积积分值的RSD为0.62%。结果表明阿奇霉素至少在6h内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分精密添加一定量的阿奇霉素对照品, 按供试品制备所述方法制备供试品溶液, 测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%, RSD为0.55%。

2.1 0 样品含量测定

依照上述含量测定方法, 测定阿奇霉素颗粒三批样品中阿奇霉素的含量, 结果三批样品的含量分别为标示量的100.5%、100.3%、100.1%。

3 讨论

分别考察乙腈∶p H8.2磷酸盐缓冲液 (0.05mol/L磷酸氢二钾溶液, 用20%磷酸调节p H至8.2) (55∶45) , 乙腈-甲醇-水-三乙胺 (20:20:60∶0.01) , 水 (0.4%磷酸∶0.7%三乙胺) -乙腈 (77∶23) , 乙腈∶p H8.2磷酸盐缓冲液 (0.05mol/L磷酸氢二钾溶液, 用20%磷酸调节p H至8.2) (65∶35) , 乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸 (18:12:70∶0.1) , 0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液 (用磷酸调p H到3.0) -乙腈 (20∶80) , 乙腈-甲醇-四氢呋喃-水 (10:15:35∶40) 不同比例的流动相, 结果以乙腈∶p H8.2磷酸盐缓冲液 (0.05mol/L磷酸氢二钾溶液, 用20%磷酸调节p H至8.2) (55∶45) 为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用乙腈∶p H8.2磷酸盐缓冲液 (0.05mol/L磷酸氢二钾溶液, 用20%磷酸调节p H至8.2) (55∶45) 为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定阿奇霉素颗粒含量的方法。阿奇霉素颗粒中阿奇霉素的含量应为标示量的105-95%。

摘要：本文用高效液相法对阿奇霉素颗粒中的阿奇霉素的进行了含量测定。固定相为:依利特hypersil BDS C18色谱柱 (4.6*250*5u) , 乙腈∶p H8.2磷酸盐缓冲液 (0.05mol/L磷酸氢二钾溶液, 用20%磷酸调节p H至8.2) (55∶45) 为流动相, 检测波长为210nm;阿奇霉素在0.112.8mg·m L-1范围内呈良好的线性关系。阿奇霉素的平均回收率为99.5%。本法简便、重现性好、回收率高, 可用于阿奇霉素颗粒中阿奇霉素的含量测定。

关键词：阿奇霉素颗粒,阿奇霉素,测定

参考文献

[1]姬峰, 金华, 韩智国, 郭鲁闽.阿奇霉素与红霉素治疗小儿支原体肺炎87例临床分析[J].山东医药, 2008 (16) .

[2]赵杰, 张海朋, 薛文华, 梁淑红.克拉霉素片剂的人体药动学及生物等效性LC-MS-MS法研究[J].医药论坛杂志, 2011 (06) .

[3]何运芳, 赵琦.阿奇霉素连续和间歇给药治疗支原体肺炎的疗效及耐药性研究[J].中国处方药, 2014 (03) .

[4]汪华蓉, 余蕾, 易发红, 何海霞.市售6种阿奇霉素制剂的人体生物等效性研究[J].中国药房, 2011 (30) .

HPLC测定法 篇5

建立HPLC法测定花蛇解痒片中盐酸小檗碱含量的方法.方法是采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;以乙腈:0.05mol・L-1磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH值2.8)=28.5∶71.5为流动相,流速1.0ml・min-1,检测波长265nm,进样量10μl;柱温为室温.结果盐酸小檗碱进样量在0.0421～0.4208μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998).精密度试验的RSD为0.33%,重复性试验的RSD为0.93%,加样回收试验的.平均回收率为98.74%,RSD=1.19%(n=6).该方法测定10批样品的盐酸小檗碱平均含量为每片0.39mg,与标准中拟定的0.3mg相近.该方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制.

作 者：曾祥林 梁佳 ZENG Xiang-lin LIANG Jia 作者单位：曾祥林,ZENG Xiang-lin(广西食品药品检验所,广西南宁,530021)

梁佳,LIANG Jia(广西中医学院,广西南宁,530001)

HPLC测定法 篇6

关键词：头孢呋辛；HPLC；EDTA

頭孢呋辛钠是第二代头孢抗生素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有效，临床多用于敏感菌所致的呼吸道，耳鼻喉，尿道，软组织，骨骼关节，产科等感染[1]。华北制药集团河北华民药业有限责任公司在生产头孢呋辛钠的过程中使用EDTA作为络合剂，EDTA对人体有害，根据WHO规定，EDTA二钠的每日允许摄入量为0-2.5mg/kg。测定不同介质中EDTA的方法有比色法[2]、滴定法和高效液相色谱法[3]、离子色谱法[4]等。滴定法和比色法会受到头孢呋辛钠的干扰，测定结果不能令人满意。高效液相色谱法是通过检测EDTA的金属络合物EDTA - Cu对EDTA进行测定，本文通过对EDTA- Cu进行测定，来检测EDTA在头孢呋辛钠中的残留量。

1 仪器与试剂

1.1 仪器。安捷伦1260液相色谱仪，梅特勒托利多XS105电子天平。

1.2 试剂。头孢呋辛钠，华北制药河北华民药业有限责任公司提供，批号C2091306001；EDTA，优级纯，含量99.9% ；四丁基氢氧化铵，离子对试剂；乙腈，色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件。色谱柱Venusil XBP C18 （4.6mm×250mm，5.0μm）；柱温30℃；检测器波长254nm，流速1.5ml/min。在此情况下，样品中EDTA获得了良好的分离。结果见图1。

2.2 对照品溶液制备。精密称取EDTA二钠约33mg，置100ml量瓶中，加水使溶解并定量稀释成0.33mg/mlEDTA对照品储备液。

2.3 样品溶液制备。精密称取头孢呋辛钠供试品约1.0g，置100ml量瓶中，加水适量使溶解，加1%硫酸铜溶液5ml，加水稀释至刻度，过滤，即得。

2.4 线性关系。精密量取贮备液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1ml、1.2ml、1.5ml至100ml容量瓶中，加1%硫酸铜溶液5mL用纯化水稀释至刻度，得浓度为0.66μg/ml、1.65μg/ml、2.64μg/ml、3.3μg/ml、3.96μg/ml、4.95μg/ml溶液，依次进样20μl，按照上述色谱条件测定。以EDTA浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=8.3559x-0.2102，R2=0.9992。当信噪比（S/N）为3：1时，EDTA的浓度为0.1674μg/ml。

2.5 中间精密度。按照色谱条件，采用不同人不同时间进行样品测定，测得EDTA检测结果分别为3.35、3.32、3.32、3.33、3.34、3.32，RSD为0.4%。

2.6 回收率实验。准确称取0.5g样品，分别加入不同浓度的对照品，按照上述色谱条件进行检测的回收率结果见表1。

3 讨论

3.1 本实验建立了HPLC检测头孢呋辛钠中EDTA的含量，以外标法进行计算，该方法具有检测限低，准确度及精密度高，样品检测时间短的优势。

3.2 由于本法进样量较大，容易使色谱柱过载，在样品检测完后，应及时冲洗色谱柱。

参考文献：

[1]陈新谦，金有豫，汤光主编.新编药物学（第15版）[M]北京：人民卫生出版社，2003：59-60.

[2]刘海玲，谢瑞容. 动力学光度法测定微量乙二胺四乙酸[J].分析化学2000，28（8）.

[3]施炎炎，丁红梅，汪晶晶，张霞.浅析食品中乙二胺四乙酸二钠检测[J].福建分析测试，2013，22（3）.

[4]朱岩，陈治强，俞建国，王素芬.离子色谱法测定洗涤剂中乙二胺四乙酸、磷酸盐[J].化学世界，1998（9）.

HPLC测定法 篇7

1 仪器与试药

Waters 600高效液相色谱仪;UV996紫外检测器;AD-2型百万分之一电子天平;BP210S型万分之一电子天平;AS3120型超声波清洗器;胆酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号: 100078-200414) ;甲醇 (色谱纯) ;水 (重蒸水) ;其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

采用反向高效液相法测定本品中的胆酸含量[4,5]。色谱柱:Shim Pack CLC ODS C18柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:乙腈-水-磷酸 (38:62:0.1) ;检测波长:208nm;柱温:25℃;流速:1.0mL×min-1;进样量:20μL。在此条件下进行样品分析, 供试品溶液中的胆酸与其他杂质峰分离良好, 保留时间在25min左右, 分离度大于1.5。

2.2 线性范围考察

精密称取胆酸对照品适量, 加甲醇制成4.105mg/mL的对照品溶液, 分别精密吸取1.25、2.50、5.00、7.50mL, 置10mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液。依法测定, 峰面积积分值分别为:84 466、166 931、343 615、506 738、691 137。以胆酸峰面积为纵坐标, 进样浓度为横坐标, 得回归方程为Y=168277X-4080.6, r=0.9998。结果表明, 胆酸浓度在0.513～4.105mg/mL范围内与峰面积之间呈良好线性关系。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片, 研细, 取约0.5g, 精密称定, 置50mL量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理 (功率300W, 频率50Hz) 30min, 放冷, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.4 干扰试验

取处方中除粗胆酸外的全部药味, 按成品工艺及供试品溶液的制备方法制备空白对照品溶液, 按正文拟定方法进行测定, 结果表明:在胆酸保留时间处, 无其他成分干扰。见图1。

2.5 仪器精密度考察

精密吸取同一份供试品溶液 (批号:091201) , 重复进样, 结果峰面积积分值依次为:351 280、354 819、355 865、353 464、350 060, RSD为0.68%。结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性考察

取同一份供试品溶液 (批号091201) , 分别在制备后0、2、4、6、8h后依法测定胆酸的峰面积, 结果峰面积积分值依次为:362 473、361 279、363 010、355 794、348 026, RSD为1.77%。结果表明:供试品溶液在8h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同批样品 (批号091201) , 依法平行制备5份供试品溶液, 分别进行测定, 计算胆酸的含量, 结果测得含量分别为61.13mg/片、59.63mg/片、60.37mg/片、59.00mg/片、60.68mg/片, 平均含量为60.16mg/片, RSD为1.41%。结果表明:该方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验

采用加样回收方法, 精密称取重现性样品6份, 每份0.25g, 精密称定, 分别置50mL量瓶中, 分别精密加入一定量的胆酸对照品, 再加甲醇适量 (约40mL) , 超声处理30min, 放冷, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液, 依法测定, 计算回收率, 结果见表1。

结果表明:正文拟定方法具有良好的回收率。

2.9样品的测定

取三批样品, 分别依法测定, 计算胆酸的含量, 结果胆酸含量分别为60.16mg/片、57.53mg/片、53.39mg/片。

3讨论

3.1测定波长的选择

精密称取胆酸对照品102.63mg, 置25mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液 (每1mL含胆酸4.105mg) , 用岛津UV-240可见紫外分光光度计在300～190nm波长范围进行光谱扫描[1], 结果在200nm和208nm处有最大吸收, 由于在200nm处溶剂干扰大, 故选择208nm为测定波长。

3.2供试品溶液的制备

胆酸可溶于甲醇、乙醇, 由于本片为片剂, 含有一定量的淀粉, 故选用对淀粉溶解性较小的甲醇提取胆酸。在确定供试品溶液的制备方法时, 对回流提取和超声提取两种方法进行了比较, 并对提取时间进行了考察, 结果发现, 超声提取30min不仅方法简便且提取完全, 故最后确定供试品溶液的制备选择用甲醇超声30min。

参考文献

[1]陈琦.紫外分光光度法测定牛黄上清胶囊中胆酸的含量[J].中国医药指南, 2010, 8 (20) :183-184.

[2]温金莲, 廖月镜.蛇胆糖浆口服液中胆酸的含量测定[J].广东药学院学报, 1996, 12 (3) :148-150.

[3]郑建新, 邹登峰.毛细管电泳法测定人工牛黄中胆酸的含量[J].中国药房, 2006, 17 (23) :1817-1818.

[4]卢润枚, 于沛, 高伟贤.HPLC法测定清开灵口服液中胆酸的含量[J].今日药学, 2009, 19 (12) :49-50.

HPLC法测定呋喃妥因栓有关物质 篇8

1 仪器与试药

1.1 仪器:

岛津高效液相色谱仪,泵:LC-10AT,检测器:SPD-10A,工作站:N2000双通道色谱工作站。

1.2 试药:

呋喃妥因对照品(中国药品生物制品检定所,供HPLC法测定,批号为101166-201001);磷酸盐及四氢呋喃分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;磷酸盐缓冲液(p H7.0)-四氢呋喃(9:1)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为367nm;进样量10μl。

2.2 溶液制备:

对照品溶液的制备:取呋喃妥因对照品适量,加流动相溶解并稀释成0.08mg/ml的溶液,用为对照品溶液。供试品溶液的制备:避光操作,取呋喃妥因栓切成细片,精密称取本品适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,水浴中加热使融化,加二甲基甲酰胺10ml使溶解,加流动相至刻度,摇匀,冷冻使基质凝固(约10分钟),用微孔滤膜滤过,弃去初滤液,取续滤液1ml至10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为供试品溶液。取不含呋喃妥因的阴性样品,同法制备阴性溶液(图1~3)。

2.3 方法学。

2.3.1检测波长的确定:取呋喃妥因对照品溶液,照紫外分光光度法(中国药典2010年版二部附录)在200-400nm波长范围内进行扫描,结果在367±2nm波长处有最大吸收,因此确定检测波长为367nm。2.3.2专属性试验:2.3.2.1酸破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,加2mol/L盐酸溶液2ml,避光放置2小时,用2mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.2碱破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,加2mol/L氢氧化钠溶液2ml,避光放置2小时,用2mol/L盐酸溶液中和至中性,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.3热破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,于100℃水浴加热4小时;水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.4氧破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,加30%过氧化氢溶液2ml,避光放置2小时,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.5光破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,于4000LX光照下放置4小时后,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.6阴性干扰试验。取不含呋喃妥因的阴性栓切成细片,精密称取本品适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.7结论:样品经酸、碱、氧、热、光破坏后产生的杂质峰均能与呋喃妥因峰完全分离;阴性在样品及杂质出峰时间均无色谱峰出现,不干扰测定;空白溶剂亦不干扰测定;说明此方法专属性强,能有效检查呋喃妥因栓中的有关物质。2.3.3检测限:取呋喃妥因原料制成的对照溶液,用水进行一系列的稀释,精密吸取各稀释液注入液相色谱仪,以信噪比3:1的浓度为检测限度,测得呋喃妥因的检测限为0.8ng。2.3.4溶液稳定性试验:取呋喃妥因栓按2.2供试品溶液制备方法制备供试品溶液,放置8小时,分别于0、1、2、4、6、8小时进样,得呋喃妥因峰面积,计算RSD,考察供试品溶液稳定性,数据如表1所示。结论:平均峰面积为3032823,RSD为4.17%,说明溶液在8小时之内稳定性不好,计算RSD值,结果溶液在2小时内稳定性良好,RSD值小于1.5%,样品溶液配制完成后在2小时之内进行测定。

3 样品有关物质测定

用上述确定的方法对7批呋喃妥因栓样品进行有关物质测定,结果如表2所示。

4 讨论

该法能够准确而有效的测定呋喃妥因栓的有关物质,能够更好的控制产品质量。

摘要：目的:建立一种高效液相色谱法测定呋喃妥因栓的有关物质。方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲液(pH7.0)-四氢呋喃(9:1)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为367nm。结果:此方法专属性较强。结论:此方法能够有效控制呋喃妥因栓的有关物质。

关键词：呋喃妥因栓,有关物质,高效液相色谱法

参考文献

HPLC法测定板蓝根中腺苷的含量 篇9

1.仪器与试剂

1.1仪器。SPD-LC10A型高效液相色谱仪 (日本岛津) ;BP210S电子天平 (德国Sartorius公司) ;SPD—10A型紫外检测器 (日本岛津) ;N2000 (浙大智达) 数据处理系统。

1.2材料及试剂。板蓝根 (陕西省老百姓大药房 , 产自甘肃, 经鉴定均为正品板蓝根) ;腺苷对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号896-200909, 质量分数>98%) , 色谱纯甲醇, 水为重蒸水, 其他试剂为分析纯和色谱纯 (国药集团化学试剂有限公司) 。

2.方法与结果

2.1色谱条件。色谱柱:Diamonsil C18, 250mm×4.6 mm, 5μm, 流动相:甲醇-水 (10∶90) , 流速:1.0mL/min, 检测波长:260nm, 柱温:45℃。理论塔板数按腺苷计算不低于4000。

2.2腺苷对照品溶液的配制。精密称取腺苷对照品3.2mg, 置50 mL量瓶中, 加10%甲醇适量使溶解, 并稀释至刻度, 摇

摘要：本文采用HPLC测定板蓝根提取物腺苷含量, 以提高板蓝根的质量标准, 方法为将板蓝根醇提液挥去乙醇, 经氯仿萃取, 然后用HPLC测定, 得出色谱柱:Diamonsil C18, 250mm×4.6mm, 5μm, 流动相:甲醇-水 (10∶90) , 流速:1.0mL/min, 检测波长:260nm, 柱温:45℃。结果表明腺苷含量在0.1880.940μg范围内, r=0.9998, 平均回收率为96.45%, RSD为3.05% (n=5) , 线性关系良好。可见本方法简单灵敏, 准确可靠, 重现性好, 可完善现行的质量标准, 为提高板蓝根的质量控制方法提供实验数据, 对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。

关键词：板蓝根,腺苷,高效液相色谱法,质量标准

参考文献

[1]国家药典委员会编, 中华人民共和国药典 (一部) [S].北京:化学工业出版社, 2005:142-143, 487-488.1985, 2000, 2005, 2010.

[2]赵军.板蓝根的药理作用及其临床应用[J].时珍国医国药, 2003, 14 (4) :241.743.

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[5]姜涛, 刘畅.车环宇板蓝根颗粒剂中靛玉红、腺苷含量测定方法学研究[J].黑龙江医药, 2010, 23 (4) .

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HPLC法测定灵芝中葡萄糖的含量 篇10

1 仪器与材料

日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪,(包括二元梯度泵、紫外线检测器)。乙腈为色谱纯(MADE IN USA DIKMA-PURE:LOT:57440);2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品110844-200505(中国生物制品检定所)。灵芝样品为市售,水为注射用水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂:乙腈:水(24∶76)为流动相;流速0.8mL/min;柱温:室温:进样量10μL;检测波长320nm,理论板数按2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积计算不低于1500。

2.2 对照品溶液制备

取2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量,精密称定,加稀乙醇制成每1m L含20μg的溶液,即得。

2.3 供试品溶液制备

精密称取供试品5g,置25mL棕色量瓶中,加稀乙醇至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。

2.4 阴性对照溶液

取本品处方缺云芝的其他组分,按“2.3”项下方法制备。

2.5 线性关系考察

精密吸取2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液(0.02010mg/mL)4.0μL、7.0μL、10.0μL、13.0μL、16.0μL,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以峰面积积分值为纵坐标,进样量为横坐标(mg)绘制标准曲线,回归方程为:Y=3968841.3×-2682.5,r=0.99999,结果表明2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在8.04~32.16μg/mg范围内具有良好线性关系。

2.6 干扰试验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液,按上述色谱条件测定,阴性样品无干扰。结果见图1。2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰位置在21min左右,与其他组分均能达到基线分离。

2.7 精密度试验

精密吸取同一2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液(0.02010mg/mL),10μL,重复进样5次,测定峰面积,RSD为0.4%(n:5)。结果表明,精密度较好。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液,分别于配置后0、2、4、6、8、12、18h进样,依次测定,结果表明,供试品溶液在18h内基本稳定。

2.9 重复性试验

同样品称取5份,分别按上述方法测定,RSD为1.0%结果表明此法重复性良好。

2.1 0 回收试验

采用加样回收法,精密称取同样品(含量43μg/g,)9份各约2.5g,分别精确加入对照品适量,按“2.3”项下方法及色谱条件,进行测定,并计算回收率,结果见表1。

2.1 1 样品测定结果

按照“2.2”、“2.3”的处理方法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定3批样品不同抽样单位,测定结果见表2。

3 结论

通过紫外分光光度法与样品HPLC法测定样品含量对比,HPLC法更适合,方便快捷,灵敏度高,重现性好,准确可行。

摘要：目的 采用HPLC法测定灵芝中葡萄糖的含量。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-水(24∶76)为流动相;检测波长为320nm;流速0.8mL/min;柱温:室温。结果 2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量在8.4～33.6g/mL范围内具有良好线性关系,r=0.99999,平均加样回收率为99.32%,RSD-I.2%(n=9)。结论 结果表明,该方法方便快捷、准确、灵敏度高、重现性好.

关键词：葡萄糖含量测定,灵芝,高效液相色谱

参考文献