高质量DNA

高质量DNA（精选十篇）

高质量DNA 篇1

斜带髭鲷(Hapalogenys nitens),学名为黒鳍髭鲷(Hapalogenys nigripinnis),又名Short barbeled grunter、铜盆鱼、打铁婆、包公鱼、乌包公[7,8]。它属于动物界、脊索动物门、辐鳍鱼纲、鲈形目、鲈亚目、石鲈科、髭鲷属[9]。目前国内外尚未见到利用AFLP技术对斜带髭鲷研究的相关报道,为此本研究首次应用AFLP技术对斜带髭鲷进行分析,通过体系优化,建立了适用于斜带髭鲷分析体系,以期为AFLP技术在斜带髭鲷相关应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 材料

实验所用的斜带髭鲷采自广东省深圳市南澳区,共30尾。取鱼肌肉组织,并做好采集标号,用90%乙醇浸没鱼肌肉组织在瓶中,保存在-20℃冰箱。

1.1.2 试剂

限制性内切酶购自Fermentas公司,AFLP接头及引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

AFLP分析所用的DNA接头,预扩增及选择性扩增引物序列见表1。

1.2 方法

1.2.1 提取高质量基因组DNA

(1)从90%乙醇中剪取100mg左右鱼肌肉组织,用蒸馏水洗净,剪碎放入离心管,加400mL裂解液,10μL蛋白酶K(20mg/mL),1μL RNA酶(10mg/mL),振荡均匀,平放入55℃烤箱2h左右,至组织完全消化(无颗粒);

(2)加200μL纯化树脂,颠倒混匀,5 000r/min离心3s,收集沉淀;

(3)用0.4mL漂洗液漂洗纯化树脂2次,颠倒混匀,5 000r/min离心3s,收集沉淀;

(4)用0.8mL无水乙醇悬浮沉淀,装入离心纯化柱,12 000r/min离心1min,倒掉废液,收集管中的乙醇,再离心1min,收集纯化柱;

(5)将离心纯化柱套入干净的离心管中,加入200μL灭菌水于纯化树脂上,室温下放置3min,12 000r/min离心2min,重复1次。吸取5μL DNA样品,用琼脂糖电泳检测DNA质量,稀释DNA至同一浓度,-20℃保存。

1.3 AFLP反应体系的建立

1.3.1 酶切与连接

采用EcoRⅠ和MseⅠ对基因组进行双酶切,37℃酶切完全后,加入制作的DNA接头,22℃连接6h,并将连接液稀释10倍。酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测,酶切、连接体系见表2。

1.3.2 预扩增

预扩体系见表2,PCR程序为:90℃、5min,94℃、30s,56℃、60s,72℃、60s,20个循环,72℃、5min,20℃、停止。琼脂糖电泳检测终产物,终产物稀释10倍,分装,一部分4℃保存,一部分-20℃保存。

1.3.3 选择性扩增

选择性扩增反应体系同见表2,3对引物(E-AGG/E-ACA,E-AGC/M-AA,M-TA/M-TC)按照两两组合的方式对稀释后的DNA模板进行扩增。PCR程序:94℃、30s,65℃、30s(每循环一次下降0.7℃),72℃、60s,循环13次;72℃延伸60s;接着按94℃、30s,56℃、30s,72℃、60s扩增23个循环;72℃延伸60s。琼脂糖凝胶电泳检测结果。

1.3.4 电泳与银染

电泳:选择性扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测合格后,加入等体积上样buffer、矿物油,高温(约94℃)变性5min,然后置于冰水混合物中骤冷至少2min。预电泳,将胶板固定在电泳架上,加入0.5×TBE缓冲液,3 000V、60W的电流条件下预电泳0.8h,断电,用注射器将胶口的气泡吹尽,插入梳子,立即点样;点样电泳,每孔加变性的样品3μL,打开电泳仪电泳1.5h。

银染:固定,电泳结束后,拆开胶板,此时凝胶应该粘在长板上,除去短板及压条,将长板胶面朝上放入AgNO3染液中,放在振荡器振荡10min;漂洗,将长板从AgNO3染液中取出,立即放入纯水中迅速(10s左右)浸洗2次;显色,在NaOH溶液中加入2mL甲醇,放入漂洗好的长板(胶面朝上),显色,直至出现明显带型。(显色液温度最好在30℃左右)。

2 结果与分析

2.1 提取高质量DNA

AFLP实验面临的首要问题是高质量DNA的提取,开始采用常规酚氯仿方法提取DNA,发现这种方法提取的DNA琼脂糖电泳拖尾较严重,提取的DNA质量差异很大,操作中任何剧烈动作都可能造成DNA的质量不高,最后本人采用先用裂解液裂解鱼组织样本,再结合试剂盒中纯化树脂吸附DNA,洗脱得到高质量DNA,这种提取手段可以保证一次或分次提取高质量的DNA,DNA质量保持一致。分别成功提取斜带髭鲷全基因组DNA,如图1。

1-4为DNA样品;M为marker。

1-4 are DNA samples;M is Marker DL2000.

2.2 酶切与连接

由于在缓冲液中EcoRⅠ和MseⅠ的活性不同,所以采用特殊设计的体系,在同一体系中,两种DNA限制性内切酶可以完全酶切全基因组,形成带粘性末端的DNA片段,酶切后琼脂糖电泳,如图2。

AFLP实验的酶切是多位点双酶切,经过摸索,作者参考所得到的酶活性,选择了同一反应缓冲液,根在这种反应液中酶活的不同,采取了EcoR Ⅰ:MseⅠ (10pmol/μL)为1:5的比例进行酶切,DNA样品在37℃恒温箱,酶切4h时间可以充分保证酶切完全,相对于酶切,DNA片段的连接是一个比较简单的过程,采用T4-DNA连接酶可以有效地连接DNA片段和AFLP接头。

2.3 预扩增

为了检测接头是否连接上DNA片段,并进行下一步选择性扩增,将酶切-连接后的DNA片段进行预扩增,如图3。

1-10为DNA样品。

1-10 are DNA samples.

2.4 选择性扩增

分别用3组引物以两两组合的方式进行选择性扩增,为了保证6%聚丙烯酰胺凝胶大板电泳有PCR产物,先用琼脂糖电泳检测,如图4。

确定有选择性PCR有产物后,进行6%聚丙烯酰胺凝胶大板电泳,结果如图5。

9对引物选择性扩增一共得到350个位点,平均每一组引物扩增的DNA条带约有20条,从图5可见,扩增条带清晰,扩增信号强度一致,扩增片段分布密度均匀。

3 讨论

斜带髭鲷是一种优质的食用海水鱼,具有很好的经济市场。但人口的急剧增加和过度捕捞野生水产导致目前斜带髭鲷种质资源已经受到严重破坏,。由于斜带髭鲷地理分布独特和种质资源稀少等原因,国内外对斜带髭鲷的报道相对甚少。陈竹等通过线粒体D-loop区比较分析野生与养殖斜带髭鲷种群的遗传多样性[10],梅景良应用透射电镜技术研究了斜带髭鲷外周血红细胞和血栓细胞的超微结构[11]。本研究首次应用AFLP技术对斜带髭鲷进行分析,并建立了高效的AFLP分析体系。

AFLP技术已经运用在很多方面,如对植物[12]、动物[13]、微生物[14]等方面的研究。AFLP也在水生生物中得到了广泛的应用。李法君[15]建立了适用于日本沼虾的AFLP反应体系。Guo B等[16]用5对引物对黑斑原鮡(一种硬骨鱼)进行了遗传多态性检测,得到332个位点,研究中得到这三个群体遗传距离平均是0.0024,表明这三个群体没有地理分化。王荻[17]对我国乌苏里江的细鳞鲑进行了遗传多样性研究,结果表明乌苏里江的细鳞鲑群体有较高的群体遗传多样性。此外,利用AFLP技术研究的鱼类还有:哲罗鱼[18],金枪鱼[19],罗非鱼[20]等。由于样本基因组DNA质量的高低直接影响到AFLP的分析,因此本研究通过纯化柱反复吸附和洗脱得到高质量的全基因组DNA。AFLP实验中酶切时间及酶浓度、预扩增及选择性扩增都是实验成功的关键,实验中通过对不同酶浓度和时间的比较,发现EcoRⅠ和MseⅠ按浓度5:1于37℃、4h时,基因组DNA双酶切最充分。酶切和选择性扩增的结果可以通过预扩增进行检验,通过对预扩增结果进行比较分析,得出DNA稀释倍数适宜,适用于选择性扩增的模板。

高质量DNA 篇2

SDS法和CTAB法提取蜡梅DNA质量的比较

采集6个蜡梅(Chimonanthus praecox (L.) Link.)单株的新鲜嫩叶,分别采用SDS和CTAB的微量法提取基因组DNA,取适量的该DNA进行琼脂糖凝胶电泳,并利用紫外分光光度计测定所提取的.DNA在260 nm和280 nm的光密度值及比值,以及利用EcoR I和Mse I双酶切后进行AFLP标记.结果表明,2种方法均能从蜡梅中提取出一定量的比较完整且纯度比较高的基因组DNA,但用CTAB法提取的蜡梅基因组DNA的纯度更高、质量更好.

作 者：周明芹 ZHOU Ming-qin  作者单位：长江大学园艺园林学院,湖北,荆州,434025 刊 名：长江大学学报（自科版）农学卷 英文刊名：JOURNAL OF YANGTZE UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2009 6(3) 分类号：Q503 Q959.747.2 关键词：蜡梅(Chimonanthus   praecox   (L.)Link.)   DNA的提取   SDS   CTAB  

高质量DNA 篇3

关键词 红毛丹 ；DNA提取 ；改良CTAB法 ；SRAP

分类号 Q949.755.5

A High-quality Extraction Method for Genomic DNA of Rambutan

（Nephelium lappaceum）

LIN Xing'e1） GE Yu1） ZHOU Zhaoxi1）

ZANG Xiaoping1） WANG Jiashui1） XIAO Zhengxin2） MA Weihong1）

（1 Institute of Banana and Plantain， CATAS， Haikou， Hainan 570102；

2 Bureau of State Farm， Baoting， Hainan 572300）

Abstract To obtain high-quality rambutan gDNA used for SRAP-PCR analysis， total DNA was comparatively extracted from fresh leaves by using variant methods of the improved CTAB， improved SDS and a commercial plant genomic DNA Kit respectively. The results showed that all three methods were available for DNA extraction from rambutan leaf， but improved CTAB method by adding β-mercaptoethanol and PVP with rinse and two times washing， could effectively remove polyphenols， polysaccharides， protein and other substances of samples. The yield high-quality DNA from fresh leaves could be used for SRAP-PCR analysis.

Keywords rambutan （Nephelium lappaceum） ； DNA extraction ； improved CTAB method ； SRAP

红毛丹（Nephelium lappaceum）属无患子科（Sapindaceae）韶子属（Nephelium）热带多年生常绿乔木植物，原产于马来西亚和印度尼西亚，是著名的热带珍稀水果之一，与荔枝、龙眼同科，现广泛分布于东南亚、中美洲等地区[1]。红毛丹的果皮多毛，果壳含抗氧化和抗菌活性成分，果肉富含磷、镁、硫、钙、锌、铁和锰，具有极高的食用和药用价值[2-4]。目前，红毛丹的研究范围主要集中在栽培、繁殖、病虫防治、果实采后保鲜、化学成分分离提取等应用技术方面[5-7]，而在无性系资源评价、育种改良、基因组变异、重要性状遗传与分子形成机制等基础领域的研究尚未开展。借助分子标记技术，检测基因组DNA水平的遗传变异已成为物种进化分析、种质资源评价、分子遗传育种等研究的重要策略。而提取高质量的DNA是开展相关工作的技术基础。

随着现代分子生物学的巨大进步，已经发展出许多植物DNA提取的方法，广泛应用的CTAB 法、SDS 法、尿素法等均通过裂解植物细胞，释放蛋白质等内含物于有机溶剂中，从而使核酸分离在水相中。但由于不同物种、部位在组织结构、化学成分等方面存在差异，不同方法对具体实验材料的提取效果差异很大。红毛丹的组织细胞中含有大量的多酚、多糖及其他脂类、色素等次生代谢物质[8-10]，采用常规方法分离出来的DNA易被多酚氧化呈现褐色，同时由于DNA溶液粘稠，采用多次酚-氯仿抽提也不能得到高质量的DNA，并且在多次抽提过程中易受机械剪切作用而发生降解，不能作为PCR模板进一步分析使用。本试验通过对比改良CTAB法、改良SDS法和商品化试剂盒3种方法的提取效果，旨在选择一种简便、快捷、经济的高质量红毛丹基因组DNA提取方法，为进一步开展红毛丹SRAP等分子标记方面的相关研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料均取自海南省保亭热作所红毛丹种质资源圃，采集无病虫害的叶片放入冰壶中带回实验室，置于-80℃超低温冰箱内保存备用。本研究随机选取3个样品作为试验材料，每个样品重复3次。

1.2 方法

1.2.1 改良CTAB法

改良CTAB法参照李明芳等[11]的方法，在叶片研磨时预先加入PVP粉末，研磨成粉末后加入2×CTAB提取液和β-巯基乙醇，离心取上清后分别用等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）和氯仿∶异戊醇（24∶1）进行振荡抽提DNA。具体操作方法为：称取幼嫩叶片0.2 g，加入0.03 g PVP和液氮磨成细粉，然后转入2.0 mL预冷冻离心管中，再加入800 μL 65℃预热的CTAB提取液[2%（m/V）CTAB，100 mmol/L Tris·HCl，20 mmol/L EDTA，1.4 mol/L NaCl，2%（m/V）PVP，pH调至8.0]和20 μL β-巯基乙醇充分混匀，65℃温浴30 min，期间轻摇2次；水浴完成后离心（15℃，12 000 r/min）15 min取上清液，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）抽提上清液，颠倒使之充分混匀，离心（4℃，12 000 r/min）15 min取上清；再加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1）抽提1次，颠倒混匀，离心（4℃，12 000 r/min）15 min取上清；加入等体积的异丙醇，混匀后可见丝状或絮状沉淀，即为DNA粗提物，用70%乙醇洗涤3遍，吹干；加入100 μL超纯水溶解DNA，再加入0.5 μL RNase A液（10 mg/mL），37℃水浴消化30 min，最后将获得的DNA置于-20℃保存备用。

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1.2.2 改良SDS法

改良SDS法参照曹辉庆等[12]的方法，在叶片研磨时预先加入PVP粉末，研磨至粉末后加入SDS提取缓冲液和β-巯基乙醇，离心取上清后分别用等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）和氯仿∶异戊醇（24∶1）进行振荡抽提DNA。具体操作方法为：称取幼嫩叶片0.2 g，加入0.03 g PVP和液氮磨成细粉，然后转入2.0 mL预冷冻离心管中，再加入800 μL 65℃预热的SDS提取缓冲液[100 mmol/L Tris·HCl（pH 8.0），50 mmol/L EDTA（pH 8.0），500 mmol/L NaCl，2%（m/V）PVP，2% SDS溶液（m/V）]和20 μL β-巯基乙醇充分混匀，65℃温浴30 min，期间轻摇2次；水浴后离心（15℃，12 000 r/min）15 min，取上清液，后续操作同1.2.1。

1.2.3 试剂盒法

称取幼嫩叶片0.2 g，加入液氮充分研磨，用天根生化科技（北京）有限公司生产的DNA secure plant Kit （D2485-01）新型植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，具体操作见产品说明书。

1.2.4 DNA质量检测

取DNA样品5 μL 用ddH2O稀释混匀20倍，用紫外分光光度计测定其OD230nm、OD260nm、OD280nm值。根据OD260nm值估测其浓度，根据OD260nm/OD280nm值和OD260nm/OD230nm值估测其纯度。DNA浓度=OD260nm×测定样品体积×稀释倍数；DNA得率=DNA浓度×总样品体积/样品鲜重。

取 DNA样品8 μL，加入3 μL溴酚蓝上样缓冲液，用1%琼脂糖凝胶电泳120 V电泳18 min后拍照，判断DNA的质量和完整性。

1.2.5 SRAP分子标记验证提取效果

以3种提取方法获得的样品DNA为模板，采用引物组合ME5/EM3进行SRAP-PCR扩增，以检测3种DNA提取方法的效果。SRAP-PCR反应体系为20 μL，其中含DNA模板20 ng、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.4 μmol/L、rTaq酶0.8 U、Mg2+ 2.0 mmol/L。扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，35℃复性1 min，72℃延伸70 s，5个循环；94℃变性1 min，50℃复性1 min，72℃延伸70 s，35个循环；72℃延伸5 min，4℃保存。扩增反应结束后取5 μL扩增产物进行电泳，染色后在紫外凝胶成像仪上观察并拍照分析。

2 结果与分析

2.1 不同提取方法所得DNA的纯度和得率

用紫外分光光度法测定DNA纯度时，一般情况下，若1.9>OD260nm/OD280nm值>1.8时，说明该DNA样品受杂质污染最少，质量最佳；若OD260nm/OD280nm>1.9时，表明DNA样品可能受到少量RNA的污染；如果其比值小于1.8，则说明有蛋白质等杂质存在[13]。由表1可知，改良CTAB法提取出的DNA质量较好，纯度较高，杂质量少，说明DNA样品中的蛋白质、酚类和多糖去除充分，较好地避免了RNA污染，可很好的满足后续实验的需求；改良SDS法提取得到的DNA呈褐色，含有较多的蛋白质、酚类和多糖等杂质，纯度较低；试剂盒法提取DNA得率最低，这是由于红毛丹叶片含有丰富的多糖，提取过程中多糖很容易形成粘稠的胶状物质，难于溶解，堵塞柱子造成DNA得率低。

2.2 琼脂糖凝胶电泳

从图1可知，3种方法均能从红毛丹的叶片中提取出完整的DNA，其大小均在4.5 kb以上。但改良SDS法提取的DNA量相对较少，同时含有胶状粘稠杂质，提取效果的稳定性差；而采用改良CTAB法提取的DNA量明显高于改良SDS法，其电泳条带明显比改良SDS法的亮，提取效果的稳定性好；试剂盒提取3个材料DNA所得的效果并不相同，有些材料的DNA条带较亮，有些较暗，条带亮度与DNA产量呈正相关，少数点样孔存在微弱荧光，表明有蛋白质污染，还存在少量RNA污染，这可能是加入RNase A量不足或37℃水浴消化时间过短造成。综合考虑，改良CTAB法可较好的去除蛋白质和多糖，DNA质量较好，最适于红毛丹成熟和幼嫩叶片基因组DNA的提取。

2.3 SRAP-PCR扩增验证

为了进一步评价改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法提取的DNA质量对后续试验的影响，分别以3种提取方法获得的DNA为模板，对其进行SRAP-PCR扩增检测。由图2可知，改良CTAB法提取的DNA模板均可扩增出比较清晰的条带，且稳定性好；试剂盒法提取的DNA纯度高，但不同背景的植物材料差别较大，SRAP-PCR扩增结果稳定性较差；而改良SDS法提取的DNA未成功扩增出清晰的SRAP条带，可能含有较多的蛋白质、糖、色素等反应抑制物。综上所述，改良CTAB法提取的红毛丹基因组DNA纯度高，杂质去除充分，通用性好，完全可满足SRAP等分子标记分析的需要。

3 讨论与结论

目前，关于去除荔枝、龙眼组织中多糖、多酚、蛋白质等杂质的研究报道较多。如易干军等[14]比较了传统SDS法和CTAB法提取荔枝基因组DNA的效果，结果表明2种方法均不适宜荔枝DNA的提取；分别在CTAB缓冲液中加入50 mmol/L的β-巯基乙醇、5%PVP和10 mmol/L Na2S2O5，比较结果发现加入10 mmol/L Na2S2O5提取的DNA质量较好。刘锴栋等[15]采用改良2×CTAB法即在缓冲液中加入β-巯基乙醇和PVP，且把温浴时间延长至2 h，可有效去除野生龙眼叶片中大部分多糖、多酚、单宁、色素等物质，提取到的DNA呈乳白色絮状沉淀，质量较高。肖璇等[16]采用改良的CTAB法和SDS法，即在核裂解之前先破碎细胞，将存在于细胞质中的次生物质去除后再裂解细胞核，细胞核裂解后用氯仿/异戊醇连续抽提2次以上，去除了大部分蛋白和色素，同时将CTAB浓度提高到3%（m/V），增强了裂解细胞和去杂质的能力，在改良SDS法中异丙醇沉淀前加入1/5体积的5 mol/L NaCl，进一步去除细胞碎片及其他杂质，提取到的DNA纯度高。目前关于红毛丹DNA提取的研究尚未见报道。

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本试验在参考前人研究的基础上，结合红毛丹的特性，主要通过预先在材料中加入PVP粉末再进行研磨，然后转入含2%（V/V）β-巯基乙醇和2%（m/V）PVP的提取液中，无论材料的老嫩程度，均可有效防止褐变及多糖形成的胶状物质。改良CTAB法较改良SDS法提取到的DNA纯度更高，呈乳白色，可有效去除色素。通过PCR检测，结果发现提取的DNA可用于后续研究。

从本试验结果可看出，不同的红毛丹品系间得到的DNA纯度和产率不一致，可能是由于不同红毛丹品种中多糖和酚类的组成和含量具有一定的差异。植物组织中多酚、多糖等代谢物质随着组织器官的成熟而增加[16-19]，因此，在改良CTAB法的基础上，还需根据红毛丹不同的品系、取材部位、发育程度及试验要求等进一步调节试验成分的组成，以便探索一种更好的操作方法，最终得到更高质量的DNA。

参考文献

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高质量DNA 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

在溶血40例乙肝DNA阳性标本之后, 溶血之前和溶血之后乙肝DNA结果的对数通过配对技术资料Kappa检测, Kappa的数值是1.958, P<0.05, 对22例乙肝DNA阳性患者实施血清组分别与肝素抗凝血浆组以及EDTA-K:对抗凝血浆组做出对比与分析, 分别得出Kappa的数值为4.679 (P<0.01) 和0.719 (P>0.05) 。

1.2 方法

对乙肝DNA试剂进行荧光定量PCR检测, 通过标本溶血、抗凝剂种类、实验污染、实验设施和机器设施的应用等方面, 研究讨论在分析前进行质量控制对荧光定量PCR检测乙肝DNA所带来的影响。通过荧光定量PCR检测乙肝DNA试剂, 从标本溶血、不同抗凝剂、实验污染、实验设施与机器设备管理等方面, 讨论是否对荧光定量PCR检测乙肝DNA的检测产生影响。通过此次试剂盒来进行检测的标本, 在溶血前和溶血后, 所得出的乙肝DNA定量结果差异无统计学意义 (P>0.05) , 但仍存在一定的降低趋势, 出现这样的情况应该是和试剂本身具有的缓和能力及所选择病例的乙肝DNA含量相对较低有一定联系;使用肝素来抗凝血浆的小组, 所含乙肝DNA的量比血清组明显要低 (P<0.05) 。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 13.0对结果进行Kappa检验、线性回归分析和ROC曲线分析, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

对两种测试的结果进行Kappa检验并按计数资料处理, 由此得出排除Hbc Ab、pre Sz Ag和HBV-DNA检测没有达到一致, 乙肝血清标志物与HBV-DNA的结果都具有一致性, 见附表。根据所研究的溶血40例乙肝DNA阳性标本之后, 溶血之前和溶血之后乙肝DNA结果的对数通过配对技术资料Kappa检测, Kappa的数值为1.958, P<0.05;对22例乙肝DNA阳性患者实施血清组分别与肝素抗凝血浆组以及EDTA-K:对抗凝血浆组做出对比与分析, 分别得出Kappa的数值为4.679 (P<0.01) 和0.719 (P>0.05) 。由此可以看出, 使用独立一管标本并且将血清快速分离, 可以有效控制交叉污染。完整的、有规律的实验过程与按规定进行环境消毒可以对环境污染进行调控, 对试验器械进行处理可以使用稀盐酸处理方法、高压灭菌的消毒方式, 以达到比较理想的效果;运用DNase法、紫外照射法可以对反应液的污染作出简单的处理;预防PCR产物的污染可以通过尿啥咙糖昔酶的方法;使用加样器来校准杀菌热循环仪、金属恒温仪等, 从而保证荧光定量CPR对乙肝DNA的检测结果更为准确。然而, EDTA-K:抗凝血浆组与血清组对比之后无明显差别 (P>0.01) ;要使荧光定量PCR对乙肝DNA的检测得到良好的结果, 必须预防互相污染与环境污染, 对校准所使用的仪器加强管理。

3 讨论

工作人员对于临床监测质量的效果和疾病治疗的进行与预防保健工作直接相关。对荧光定量PCR检测乙肝DNA分析前质量控制的主要目的是保障所得出的检验结果的准确性, 能够及时的对患者或者健康受检人员的器官功能与病情的变化提供可靠的临床信息, 帮助医师判断病情及观察受检人员的健康状况, 从而建立治疗方案与治疗计划。在日常工作当中, 每一份检测报告必须准确与精细, 医院所设立的临床检验科主要按照临床检验就是所谓的实验诊断技术所包含的性质与特征来计划完整的管理方法、工作方案、组织实施、要持续的进行控制, 从而保证检验质量的结果能够达到临床要求及国家所要求的标准[1,2,3,4]。还要不断增强质量管理办法, 主要涵盖分析前、分析中及分析后对质量的控制。合理使用检测人员, 提高业务能力, 建立和检测仪器对应的仪器档案, 确保仪器正常使用, 及时维护、校准、保养仪器, 防止出现交叉感染。做到以上各方面, 就很大程度的保证荧光定量PCR对乙肝DNA的检测所得出结果的准确性。

参考文献

[1]翁厚光, 曹维克, 张迎梅, 等.肝功能异常的乙肝患者血清中自身抗体检测分析[J].山东医药, 2012, 52 (7) :67-68.

[2]林森, 易荣.实时荧光定量PCR对乙肝DNA检测的影响因素[J].国际检验医学杂志, 2012, 33 (1) :127-128.

[3]魏颖.实时荧光定量PCR对乙肝DNA检测的影响因素[J].求医问药:学术版, 2012, 10 (12) :373.

厦门dna鉴定 篇5

厦门dna鉴定

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DNA的结构和DNA的复制 篇6

【关键词】 DNA的结构 DNA的复制

【中图分类号】 G633.8 【文献标识码】 A 【文章编号】 1674-4772（2013）08-023-01

一、电话教学目标

1. 知识目标：概述DNA分子的复制过程。探讨DNA复制的生物学意义。

2. 能力目标：通过介绍科恩伯格、米西尔森、斯塔尔的实验，引导学生分析、比较、推理、归纳，培养学生科学性思维的能力。

通过小组分析讨论实验结果，培养学生自主探讨、合作学习的能力。通过自学课文，培养学生识图能力和自学能力。

3. 情感态度与价值观目标：通过揭示DNA结构和功能的相互统一，对学生进行辩证唯物主义世界观教育。通过分组探究活动，培养学生的协作意识和科学态度。

二、教学重点和难点

教学重点：探究DNA分子复制的方式及复制过程。

教学难点：DNA分子的复制过程及办保留过程实验分析。

三、教学过程

1. 将“问题探讨”作为情景，引入新课

导入：上节课我们共同学习了DNA结构，作为遗传物质，DNA在结构上应该具备哪些特点？生物的结构与功能总是相互适应的，DNA作为遗传物质应该首先具备什么功能呢？

（板书课题）DNA的复制。

但DNA是不是真的就能复制呢？有什么证据能证明DNA能复制呢？科恩博格设想，细胞呢必需有合成DNA所需的酶。于是他把大肠杆菌碾碎，用其提取液加上四种脱氧核苷酸，其中至少有一种用同位素标记，便于检查结果。再加上一些微量的DNA作为“模板”，（比如小牛胸腺DNA）。把上述混合液在有镁离子存在的条件下于37C温度下静置30分钟，发现防渗性物质进入DNA部分，说明有新DNA合成。新合成的DNA分子用过滤沉淀法提纯后，科恩伯格测定了产物DNA的碱基组成，发现它们同模板DNA组成惊人相似。

剖析试验，分析得出DNA分子复制的条件和特点。

⑴DNA可以复制吗？实验中哪些信息支持此结论？⑵DNA复制需要哪些原料？（3）如果不加入“模板”DNA，DNA可以合成吗？

2. 层层设疑，导入剖析经典实验

这个实验说明了DNA复制的微观过程吗？如果没有你能根据所学过的知识设计一个DNA 复制的模型吗？当时科学家设计的模型又是什么呢？（投影播放三个模型）①全保留复制模型：作为模板的DNA的两条母链分开，分别复制形成两条DNA子链，此后两条母链彼此结合，恢复原状，新合成的两条子链彼此互补结合形成一条新的双链DNA分子。②弥散复制模型：亲代DNA双链被切成双链片段，而这些片段又可以作为新合成双链片段的模板，新、老双链又以某种方式聚集成“杂种链”。③半保留复制：在复制过程中，原来双螺旋的两条链并没有被破坏，它们分成单独的链，每一条旧链作为模板再合成一条新链，这样在新合成的两个双螺旋分子中，每个分子中都有一条旧链和一条新链。

让同学们仔细阅读三个模型，同时分组讨论对三个模型的理解和认识。让小组代表把他们的理解画在黑板上。

问题：DNA复制到底是一个什么样的过程？我们能否设计一个实验验证呢？DNA 是肉眼看不到的，如何才能分辨出那个DNA是原来就存在的，还是新形成的呢？

通过科恩伯格的实验同学们可以想出同位素标记法，分步演示米西尔森和斯塔尔的实验1957年美国的米西尔森和斯塔尔采用稳定的同位素15N作DNA标记，15N可以导致DNA分子密度显著增加这样可以通过密度梯度离心将不同的DNA分子区分开来。通过层层设疑引导学生画出“轻链”“重链”“混合链”离心后在试管中的位置。如：同学们想一想；如果两条链都用15N标记的DNA分子与用14N 标记的DNA分子相比哪一条较轻，离心的话哪一种在底部？

先播放亲代的离心结果让同学们感受一下成功的喜悦。然后播放第二步试验，但不显示实验离心结果，让同学们根据所学预测不同模型的离心结果。如：①如果DNA复制是全保留复制，离心结果如何？②如果DNA复制是弥散复制，离心结果如何？③如果DNA复制是半保留复制，离心结果如何？而后显示出真实的实验结果，引导同学们排除全保留复制模型。然后播放第三步同樣不显示离心结果，让同学们预测弥散复制与半保留复制各会有什么样的结果。如：同学们预测一下，如果是弥散复制会是什么结果？如果是半保留复制又是什么结果？而后显示真实的离心结果，排除弥散复制模型。得出DNA复制半保留复制模型。

3. DNA的复制过程

自学导读：向同学们展示DNA分子复制示意图。阅读P63～P64 三小段文字，找出复制的概念、时间、条件、过程、结果、意义，完成结构化知识图表。

概念：___________，___________。时间：___________，___________。

条件：___________，___________，___________，___________。

过程：___________，___________。结果：___________，___________。

意义：___________。

播放DNA分子复制的flash动画过程，形成感性认识。

4. 知识巩固

1. 用标记有15N的一个双链DNA分子，在14N的培养液中进行两次复制后，其后代的DNA分子单链中，含14N和15N的比值为（ ）.

A. 1：1 B. 2 ：1 C. 3：1 D. 4：1

2. 下列关于DNA分子复制的叙述中，正确的是（ ）.

A. 把信息从基因传递给染色体 B. 代与代之间的信息传递

C. 按照基因的指导产生蛋白质 D. 释放糖类中的能量

小结：a. DNA分子的复制是一个半保留复制过程。b. 复制时边解旋边复制。c. 复制过程中母链与子链之间严格遵循碱基互补配对原则。

课下思考：DNA分子复制时，原来两条链之间氢键要打开，DNA的稳定性是否改变。

重构DNA 篇7

面对移动互联网“苹果”的诱惑,运营商忍不住争抢,引入了苹果手机,复制了其应用商店的业务模式,甚至“山寨”了很多具体的应用,但同时真正领悟了互联网创新的核心价值观、动力、机制、文化的精髓吗?

近期一次闲谈中,某运营商应用基地负责人不无感慨地说,我们处在自生自灭的环境,要有自娱自乐的精神。这既道出了其业务拓展面临的组织困境,也抒发了员工们在资源不匹配的情境下艰辛但是乐观求变的精神。也许,这就是运营商重构企业DNA、融入互联网大潮的驱动要素。

基因的突变总是在环境突变的情形下产生的,目的是为了适者生存。只有将创新的DNA融入到企业的血液当中,使之成为企业文化的基因得以延续,企业才会生生不息。0.03%的DNA序列差异决定了人类与猿猴的不同,传统通信业的进化也并不需要做很多改变,但必须去改变!

企业DNA模型研究 篇8

生命科学告诉我们,生物体的生命现象是遗传物质决定的。生物体的遗传特征是由DNA中特定的核苷酸序列决定的。DNA通过转录和翻译可以保证支持生命活动的各种蛋白质在细胞内有序合成的基本功能,就是作为生物遗传信息复制的模板和基因转录的模板,是生命遗传繁殖的物质基础,也是个体活动的基础。

企业是有生命的,同其他自然界生物体一样,企业成长的内在决定因素是企业的遗传物质,即企业DNA。企业DNA是决定企业生命体的基本形态特征、成长发展,以及变异的内在因素。企业DNA的特征也就构成了企业DNA的判断标准。

2企业DNA结构模型

通过类比生物DNA的特征来建立企业DNA判断标准,界定出企业DNA构成要素及其模型。企业DNA是由双螺旋平行双链构成基本骨架。一条链是人力链(Human Resource,H),另一条是资金链(Capital,C);企业DNA的碱基组成为企业机制(CorporateMechanism,M)、企业文化(OrganizationsCulture,O)、企业战略(Strategy,S)、技术能力(Technology,T),如下图所示:

(1)企业人力资源链是指能适应企业发展需要,具有满足企业生产经营要求的技能、知识、体能,能作为企业生产要素提供企业所需智慧、知识、管理、服务和劳务的人。它包括企业的所有者及其组织成员。

(2)资金链作为企业DNA的骨架,在企业生命活动中处于重要的地位,一旦资金链断裂,会破坏企业的DNA,造成企业生命活动难以得到保证。

(3)企业技术能力碱基是指企业在技术的选择获取、消化吸收、改进和创新过程中,有效地学习、积累和使用技术知识的能力。技术要素必须通过人才能发生作用,同时技术作为一种资本存在于企业生命体中。技术能力碱基包括:寻找可靠的可选择技术,并决定最合适的引进技术的能力;对引进技术实现从投入到产出的转换能力;改进以适应当地生产条件的能力;实现局部创新的能力;开发适应当地的R&D设备的能力;制订基础研究计划并进一步提高改进技术的能力。

(4)信息结构碱基是指及时获得信息、处理、传递并使用信息的机制和渠道。建立一个有效、合理的企业信息结构的目的是进行有效的企业信息沟通,通过建立一个高效的企业信息系统确保企业做出正确决策,这决定整个企业经营的成败。

(5)企业机制是指在市场经济体制下企业生存和发展的内在机能和运行方式。由产权制度、经营机制、管理机制、用人机制、激励机制等组成。

张舰:找到企业发展的DNA 篇9

回顾现任滨海泰达物流董事会主席、总裁张舰20多年来的职场历程, 他曾担任过开发区的行政管理工作, 先后在开发区、泰达控股负责对外投资管理。而说起他和物流的渊源, 则可以追溯到1995年, 这一年他开始从事物流投资方面的管理。而正是这个泰达控股当时投资管理的一个“小项目”, 却引发了张舰对物流的浓厚兴趣。

如今, 由他执掌的滨海泰达物流下辖八家子公司, 分别是天津泰达阿尔卑斯物流、大连泰达阿尔卑斯物流、天津丰田物流、天津泰达公共保税仓公司、天津元大现代物流、天津滨海元盛钢材市场、天津港国际汽车物流有限公司及天津泰达斯迪尔电子交易市场。涉足的业务形态包括四类:一体化的高精度、专业型电子零部件物流业务、一体化的整车及汽车零部件物流业务、专业的公共保税仓储业务和供应链金融服务。

物流需要创意

将“千奇百态”的业务形态组合到一起, 关键在于张舰能够突破传统的固定思维模式, 而这也正是张舰将企业发展游离于竞争之外的秘诀。“物流与商贸是分不开的, 它涉及物资流动的方方面面。”张舰一直坚持“大金融拉动大商流, 大商流带动大物流”的经营战略。正是基于这种思路, 在提供电子、汽车的一体化供应链服务基础之上, 他先后带领企业不断开拓新的业务模式。比如, 依托资金优势和信用优势, 滨海泰达物流为客户提供供应链金融服务;不断采取措施, 在滨海新区推动建设大宗商品交易市场。

通过参与供应链金融物流服务, 滨海泰达物流不仅带动自身物流量大幅增长, 并且承担了客户与银行之间融资桥梁的作用。2008年以来, 滨海泰达物流的供应链金融业务出现较快增长, 不仅与工商银行、农业银行、交通银行、兴业银行等建立了良好的合作关系, 同时还与首都钢铁公司、唐山钢铁公司、邯郸钢铁公司等十余家钢厂签订了钢材采购协议。此外, 在张舰的推动下, 滨海泰达物流先后参与合作投资组建了钢材现货市场和电子交易市场, 并依托自身丰富的资源优势、雄厚的资金优势、先进的物流优势和服务模式, 为商户提供包括代理采购、仓储、交易、运输、加工及配送等在内的一站式服务。

去年以来, 金融危机对物流行业产生了较大的冲击, 滨海泰达物流亦未能幸免。尤其是今年一季度, 随着电子和汽车两大行业进口量和订单量的减少, 滨海泰达物流的电子及汽车物流业务出现严重下滑, 对公司业绩造成影响。不过, 好在新开展的业务出现较快增长, 基本弥补了电子、汽车一体化供应链服务的业务下降。可以说, 滨海泰达物流的发展, 正是得益于业务模式的不断创新。

“我们视合作、创新与进取为企业的DNA。”张舰总结说, 滨海泰达物流定位于一个综合物流运作平台, 而并非简单的第三方物流企业。

物流需要想象

张舰认为, 物流业的发展有着巨大的想象空间。“物流行业既不能说是朝阳行业也不能说是夕阳行业, 而应该说是创意空间和发展空间巨大的行业。”张舰强调, 物流作为服务型行业, 不单可以输出技术 (包括信息管理技术、分拣及仓储技术等) , 还可以通过供应链一体化的服务输出管理。除此之外, 还可以输出信用协助客户进行融资、采购, 未来还有可能输出文化, 如结合环境发展、倡导节能减排等。

2008年4月30日滨海泰达物流 (股票代码8348, HK) 在香港联交所创业板成功挂牌上市。这不仅是2008年香港创业板的第一支新股, 同时也是天津滨海新区在香港资本市场上市的首家物流企业。可以说, 实现在香港成功上市对其发展有着里程碑式的意义。

然而, 正是上市计划让张舰经历了其职场生涯中刻骨铭心的挫折和冲击。据悉, 滨海泰达物流原本计划2007年1月16日提交上市报告, 然而保荐机构却由于内部原因于1月13日宣称停止这个项目。此时距离报告提交时间不到72个小时, 这对于当时的张舰及其团队来说, 无异于当头一棒。众所周知, 提交上市申报材料之前的准备过程异常繁杂, 也是整个上市筹备中最为关键的一环, 整个团队已经不记得多少次挑灯夜战到天明, “在完成了那么多不可能完成的任务之后, 中介机构却在没有任何预警的情况下突然说不做这事了, 其中的滋味可想而知。”张舰认为, 虽然他没有承担上市时间的压力, 但仍觉得愧对与自己并肩奋战的团队。好在短短一年之后, 滨海泰达物流在国泰君安的保荐下成功实现上市。

事实上, 上市经历的挫折还远远不止这些。2008年春节前后, 也是公司上市最为关键的时候, 张舰因公出差日本, 不巧在此期间父亲病危入院, 不久之后便撒手人寰。这件事给张舰留下了永久的遗憾, 在家庭变故和公司上市的双重心理压力下, 张舰出现了面部神经麻痹的症状, 整整一个月的时间, 他不得不在医院边进行针灸治疗边处理上市前夕的相关事务。

如今回忆起当时的情形, 张舰仍感慨不已。尽管从未料到自己会在“五十而知天命”的年纪遭受如此“磨难”, 不过在张舰看来, 这是难得的历练和体会, 同时也让他深刻感受到团队支持的力量。在今年年初, 公司上市一周年之际的总结大会上, 乐于反思的张舰得出了另一个结论:在目标明确和时间紧迫的前提下, 可以实现更高的工作效率, 而这正是他的团队在上市之前能够完成那么多不可能完成的工作任务的原因。现在, 每当听到埋怨声时, 他往往会用天津人特有的幽默语调问上一句:“您在香港上过市吗?”

结合DNA特性的机械设计 篇10

如今的机械设计师们在设计时将机械工程中固有的关键性要点与人类基因特性整合为了一体。最新的理论也谈及了有机体DNA融合适应说与机电一体化设计结合对提高生产效率、灵活性及制造业生存能力的作用。

“共生起源(Symbiogenesis)说”是一项生物假说,它认定两个相互依存的有机体的DNA融合导致了遗传适应,而非适者生存引起的基因随机突变导致了遗传适应。为了让设计师能成功地适应和生存,下面列举几例来说明自动机械设计与“共生起源(Symbiogenesis)说”的相似之处。

相互依存型设计

完全重新开始设计的机械设备是绝无仅有的。因此,设计工程师们在认真探讨完最符合应用的结构设计后,往往把COTS技术,比如说电力供应、自动化程序控制器、人机界面等与提高生产速度相结合。内部关系的设置必须符合外部环境的需要。相互依存型设计可以为原始设备制造商(OEMs)提供优质服务,将机械设备的先进性提高到一个新的阶段,使之优于传统工艺的自我型设计系统。根据人类生物学,人体内有千余个共生组织,默默承担人类自身许多方面的责任,自动发挥功能。而相互依存型设计正是采用了模仿人类生物学中类似功能的做法。

板级集成设计

当各控制器与应用技术方面不相匹配的情形出现时,就轮到板级集成设计派上用场了,它能够消除系统中“床上架床”类的多余设置。按人类生物学传统观念,生物体细胞核内染色体上的脱氧核糖核酸(DNA)这一生物遗传的物质基础曾被认定只能存在于细胞核内。如今,根据人类生物学最新研究成果,生物体细胞核内染色体上的脱氧核糖核酸(DNA)可以在一个细胞的“控制领域”之外存在并发挥其功能。与之相似,原先,智能装置只能容纳于一个很小的密封外罩中,现在已经可以安装到嵌入式计板级产品之中了。这是自动机械设计学习模仿“共生起源说”的又一实例。

微信息处理机

微信息处理机的发明和使用使控制器得以在机器的其它部位发生功用:分布、嵌入于各个传感器、传动装置及I/O模块中,提高了机械设备的速度,增加了其功能。在生物学中,人体和其他生物体携带的遗传基因及其它生物基因(包括共生生物基因)中的染色体也具有集成功效,两者十分类似,模仿可谓成功。

正如机械设计师们广泛深入研究借鉴自动化供应商与系统集成商的专业知识一样,科学家们彼此之间也互相学习科研成果,取长补短,集思广益。

像各种生物活体一样,以创造性工程设计与共生理念技术为指导方针创建的各种机器和流程在工作时必将更加迅捷高效,灵活多变,并凭借各自的优势共建更有保障的未来。