牙齿发育

牙齿发育（精选三篇）

牙齿发育 篇1

关键词：细胞凋亡,牙齿发育,凋亡基因

细胞凋亡(apoptosis),是多细胞生物体调控机体发育,维护内环境稳定,由基因控制的细胞主动死亡过程。细胞凋亡一词提出至今已有40多年。随着细胞生物学、遗传学、分子生物学等相关学科的发展,对其分子机制的认识有了更深入的了解,细胞凋亡已逐渐成为生命科学的研究热点。

长期以来,细胞凋亡往往又被称为程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),两种名称经常被混淆使用,而事实上,两者的涵义是不同的。PCD是机制上的概念,用于描述发生于各生物种系胚胎发育过程中的正常细胞死亡的所有表型,具高度可遗传的时序性和空间性,即细胞在发育的特定阶段按序死亡。而细胞凋亡是形态学的概念,是对多种方式引起的一种特征性形态和生化改变的概括。它并非代表引起细胞死亡的过程和路径而是指众多因素造成的众多死亡途径的最终表现。

早在19世纪,发育生物学家就发现无论是胚胎发育过程中,还是胚后发育,均存在细胞的死亡现象。细胞凋亡机制已经包含在许多精细的组织器官胚胎发育中,如肾脏、心脏、神经系统、上皮组织等,它通过控制细胞数目和组织形状,在器官形态发生和形成时起重要作用[1]。

1 牙齿发育中的细胞凋亡

哺乳动物牙齿发育是由外胚层来源的上皮细胞和颅神经嵴来源的间充质细胞共同分化而来的,其中牙釉质由上皮细胞分化形成,牙本质、牙髓等其他结构是由间充质细胞分化形成。在组织形态学上,人类的牙齿发生与小鼠的磨牙发生极为相似[2]。在小鼠中,牙齿发生的定位是在胚胎发育的E10.5(胚胎龄第10.5 d)[2]。哺乳动物的牙齿发育均会经历一系列上皮增厚的过程:牙板期、牙蕾期、帽状期和钟状期,同时伴随着牙釉质的分泌矿化[3]。牙齿的形态发生是在特定时空所发生的由诸多相关基因严格调控的一系列生理过程,包括细胞增殖、细胞凋亡的抑制或刺激、细胞周期调节等[4]。

牙齿作为研究哺乳动物器官发育的一个模型,其细胞凋亡已有大量研究。研究发现,小鼠牙胚发育中存在着细胞凋亡现象,提示细胞凋亡在牙齿发育中有重要作用[5]。同时,应用TUNEL技术研究小鼠牙胚发育过程中的细胞凋亡,发现细胞凋亡参与了牙上皮与牙间充质的相互作用,调控牙尖、牙颈及牙根的形成,发挥塑形作用[6]。

细胞凋亡最早发生在蕾状期,表明细胞凋亡参与了牙蕾结构的形成[7]。帽状期,细胞凋亡位于原发性釉结节(Primary enamel knot)中。随着牙胚发育进入钟状期,细胞凋亡又在继发性釉结节(Secondary enamel knot)中出现。这一结果表明,釉结节在完成其诱导牙尖形成的功能后,通过细胞凋亡机制而被清除。用体外重组实验研究,证实细胞凋亡在牙胚发育中的作用。将E13小鼠牙胚的上皮与间充质分离后分别进行体外培养,结果发现在上皮和间充质中均有凋亡细胞。当两者共培养时,在两个组织接触的区域细胞凋亡受到明显抑制。这个结果表明上皮与间充质的相互作用可以抑制细胞凋亡。将成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)加入培养体系中,发现其能明显抑制间充质的细胞凋亡。因此,信号因子的作用会影响上皮与间充质的相互作用,最终可能导致细胞凋亡[5]。

小鼠磨牙牙胚中,原发性釉结节参与了牙齿从蕾状期向帽状期的转变过程[8]。牙胚发育至帽状期,凋亡细胞主要集中在内釉上皮凹面中心区域(即原发性釉结节)。随着牙胚发育至钟状期,研究证实继发性釉结节决定着未来牙尖的位置,调节牙胚形状,尤其是牙尖形成的信号调控中心[9]。原发性釉结节与继发性釉结节均表达了一系列的信号分子,如Fgf-4,参与了细胞凋亡[9]。随后,有研究发现存在着第三种釉结节,出现在靠近牙尖无釉质分泌的区域,研究认为其对于调控釉质的沉积有重要的作用[10]。Matalova等利用激光捕获显微切割技术,将原发性釉结节分离培养细胞,研究结果表明,此类细胞是研究牙齿发育中细胞凋亡的分子机制的一类重要的细胞[11]。已有超过50种基因被证实在釉结节中有显著表达,如Shh、Bmp-2、Bmp-4、Bmp-7、Fgf-4等[12]。釉结节在完成其诱导牙齿发育及其信号调控作用后,通过细胞凋亡机制而被清除。

2 牙齿发育中细胞凋亡相关因子

发育中的细胞凋亡,是在许多基因调控下发生的生理性现象,其中Caspases和Bcl-2基因家族等是重要的细胞凋亡相关因子。

2.1 Caspases

Caspases(cysteiny 1 aspartate-specific proteases),是一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶,能够特异地切割天冬氨酸残基后的肽键,是一类与凋亡密切相关的蛋白水解酶家族,该家族成员按其发现先后分别被命名为Caspase 1-14。Caspases-3是Caspases家族中最主要的凋亡执行者之一,可促进凋亡,并被Bcl-2阻止。在牙胚中Caspases-3阳性细胞与Tunel阳性凋亡细胞分布一致,表明在牙齿发育期细胞凋亡可能是由于激活了Caspases家族[13,14]。

利用Caspases-3突变鼠(knock-out)研究Caspases-3在牙齿发育中的功能[15],发现在突变鼠的原发性釉结节中检测到细胞凋亡的存在,第一磨牙有暂时性的改变。然而,这些形态学的变化在随后的发育过程中都得以补偿,最终形成正常的牙齿形态。因此,Caspases-3虽然参与了牙齿的细胞凋亡,但是似乎不是牙齿形成所必须的。在牙齿发育早期,特别是在原发性釉结节中,Caspases-3的缺乏并不会影响最终恒牙的结构、形态和组织分化。

在Caspases-9和Apaf-1突变鼠中,在原发性釉结节中并未发现有细胞凋亡[16]。与Caspases-3突变鼠不同的是,Caspases-9和Apaf-1突变鼠在钟状期并未发生形态学上的变化。虽然在原发性釉结节中没有检测到细胞凋亡,但是从帽状期到钟状期的转变与野生型小鼠的表型一致。因此,认为这种放大机制,特别是通过凋亡受体作用,是线粒体与Caspases之间连接进行协同作用,从而启动细胞凋亡[17]。

有研究报道利用磨牙离体培养检测Caspases(半胱天冬酶)的抑制作用[18]。在E13.5小鼠磨牙的离体培养中,通过药物抑制Caspases的活性,发现其形态上并未有明显变化。由于Caspases被抑制细胞没有发生凋亡,釉结节依然存在并未消失。同时,在存留的釉结节中,Shh、Msx-2、Bmp-2、Bmp-4等基因的表达下调,表明釉结节中信号的缺失能够引起其本身不被消除。因此,细胞凋亡的缺失,不会影响牙齿形态的形成。细胞凋亡的作用可能仅仅只是清除停止生长的细胞,而不是抑制釉结节发挥其信号调节作用。然而,运用Caspases抑制剂干扰早期牙齿发育,却发现牙齿的形态最终被改变,因此,釉结节中发生的细胞凋亡对于牙齿正常的形态和大小也是必要的[19]。关于釉结节中所发生的细胞凋亡的准确作用,仍然需要进一步的研究证实。

2.2 Bcl-2/Bax

Bcl-2是从滤泡性淋巴瘤中分离出的一种原癌基因[20]。已知Bcl-2通过控制核内外物质的运输、抑制Ca2+的释放或阻断细胞内外过氧化物的堆积而抑制细胞的凋亡。而Bax基因是第一个分离到的Bcl-2同源基因,可与Bcl-2形成异源二聚体(Bcl-2/Bax)从而拮抗Bcl-2抑制细胞凋亡的作用,是一种凋亡相关基因。Bcl-2与Bax所形成的异源二聚体中两者的比例决定细胞到底该向存活还是死亡的方向发展[21]。

Bcl-2在牙齿发育的早期表达较强,在牙体组织形成后表达下调[22]。在成釉细胞中也检测到Bcl-2的表达[23]。表明Bcl-2基因在牙齿形态形成过程中,是调控细胞增殖、分化、成熟、消亡的重要因素。

有研究发现,大部分牙胚细胞均同时表达Bcl-2和Bax[24]。Bax在外釉上皮中表达更强,而在内釉上皮中Bcl-2表达更强。星网层中,有一些细胞仅单一表达Bcl-2或者Bax,也有一些两者同时表达。间充质中大部分只表达Bax。利用转基因小鼠在成牙本质细胞中过表达Bcl-2,研究发现过表达Bcl-2会导致牙齿发育过程的异常,成牙本质细胞凋亡受抑制[25]。然而,虽然成牙本质细胞的增殖率或死亡率均受到了影响,但突变鼠与野生鼠中成牙本质细胞的密度并未发现明显变化。成牙本质细胞密度未改变,可能是由于牙髓腔体积的均衡变化(突变鼠的牙髓腔比野生型的大),也可能是由于其他未知的原因,仍需要更深入的研究。

3 结语

牙齿发育 篇2

牙齿发育试题

一、单项选择题（每题的备选项中，只有 1 个事最符合题意）

1、暂时性错牙合的临床表现是 A．个别前牙反牙合

B．Ⅲ度深覆胎、Ⅲ度深覆盖 C．后牙反牙合 D．Ⅲ度牙列拥挤

E．上颌侧切牙初萌出时，牙冠向远中倾斜

2、患者男性，呼吸困难，端坐呼吸，咳粉红色泡沫痰，下列哪项体征对诊断左侧心力衰竭最有价值 A．抬举样心尖冲动 B．交替脉

C．心尖区舒张期杂音 D．心界扩大 E．心尖区震颤

3、某患者食欲不振、乏力，血清学检查为：抗HAV IgG(+)，抗HBc IgM(+)，HBsAg(+)。可诊断为 A．甲型肝炎患者

B．乙型肝炎患者

C．甲型肝炎并发乙型肝炎

D．乙型肝炎并发甲型肝炎

E．丁型肝炎患者

4、有关可摘局部义齿基托的要求，不正确的是 A．整铸支架式义齿基托厚度为0.5mm B．基托应与天然牙非倒凹区接触，密合无压力

C．上颌膊侧基托边缘应圆钝，略厚，以防基托下沉，刺激软腭 D．下颌基托后缘应盖过磨牙后垫的1/3～1/2 E．基托磨光面外形应为凹斜面

5、患儿1岁，男性，3天前发热38.5℃，口腔黏膜广泛充血、水肿，热退后出现口腔溃疡，哭闹，拒食，流涎。检查见口腔黏膜片状充血，有数十个溃疡，有的互相融合，疮破溃后形成糜烂，最可能的诊断是

A．球菌性口炎

B．疱疹性口炎

C．雪口病

D．疱疹样口疮

E．手足口病

6、可摘局部义齿固位体不具备的作用是 A．固位作用 B．支持作用 C．连接作用 D．稳定作用 E．间接固位作用

7、慢性阻塞性腮腺炎最常见的病因是 A．导管较长导致的唾液滞留 B．导管口黏膜损伤致导管口狭窄 C．导管异物 D．导管结石

E．增龄性改变，导致唾液黏滞

8、以下疾病中多发生于上唇的是

A．盘状红斑狼疮

B．扁平苔藓

C．肉芽肿性唇炎

D．慢性唇炎

E．光化性唇炎

9、学校口腔健康教育课的目的是使学生理解

A．窝沟封闭与氟化物可以最大限度地控制龋病的发生

B．预防牙周病要在一生中不断地彻底清除牙菌斑

C．定期口腔检查和保健是保持口腔健康所必需的D．吸烟、饮酒是口腔癌、牙周炎的主要危险因素

E．理解以上所有方面

10、下列活髓切断的适应证中，错误的是 A．外伤冠折露髓 B．意外露髓

C．深龋去腐未净露髓

D．年轻恒牙局部性牙髓炎 E．备洞时髓角暴露

11、”长正中”所指的滑动距离为

A．由下颌后退接触位自如滑到牙尖交错位

B．由牙尖交错位向前滑到下颌后退接触位

C．由下颌后退接触位向前滑到牙尖交错位

D．由牙尖交错位自如地直向前滑动到下颌后退接触位

E．由下颌后退接触位自如地直向前滑动到牙尖交错位

12、上颌第一恒磨牙的抬面特征是

A．呈菱形，近中颊角和远中舌角为锐角 B．呈菱形，远中颊角和近中舌角为锐角 C．远中舌尖和近中颊尖三角嵴相连成斜嵴 D．近中舌尖和远中颊尖三角嵴相连成斜嵴 E．远中舌尖和远中颊尖三角嵴相连成横嵴

13、牙龈缘肿胀坚实，呈炎性增生。镜下见上皮下纤维结缔组织增生成束，束间可见淋巴细胞和浆细胞浸润，毛细血管增生不明显。该疾病是

A．炎症水肿型慢性龈炎

B．纤维增生型慢性龈炎

C．牙急性坏死溃疡性龈炎

D．剥脱性龈病损

E．药物性龈炎

14、可能发生龋病的危险信号不包括 A．致龋菌数量变化 B．牙龈出血

C．菌斑内酸性产物量

D．菌斑内及唾液内pH值，糖代谢反应 E．唾液缓冲能力

15、根据赫尔姆斯的调查，若生活变化单位(LCU)累计得分在200～299之间，则第2年的患病率约为

A．20%

B．35%

C．50%

D．65%

E．80%

16、半月神经节射频控温热术，温度应升至

A．75～85℃

B．70～75℃

C．60～70℃

D．75～90℃

E．50～60℃

17、龈上边缘的主要缺点是 A．容易造成菌斑附着 B．边缘不易密合 C．易产生继发龋 D．在前牙区不美观 E．易形成肩台

18、与釉柱排列相关的结构是

A．釉板

B．生长线

C．横纹

D．无釉柱釉质

E．釉丛

19、口腔检查应遵循的顺序是下列哪项____ A．由外到内、由后至前、由浅入深

B．由内到外、由前至后、由浅入深

C．由外到内、由前至后、由浅入深

D．由内到外、由后至前、由浅入深

E．由内到外、由后至前、两侧对比

20、婴幼儿化脓性颌骨骨髓炎多见于 A．下颌骨 B．上颌骨 C．颞骨 D．颧骨 E．鼻骨

21、近中颊尖

22、C．硝苯地平

D．维拉帕米

E．氨氯地平

二、多项选择题（每题的备选项中，有 2 个或 2 个以上符合题意，至少有1 个错项。）

1、下列哪一项属于酸蚀过程中的错误操作____ A．清洁吹干后用细毛刷、小棉球或小海绵块蘸上酸蚀剂放在要封闭的牙面上

B．酸蚀剂使用磷酸液或含磷酸的凝胶

C．酸蚀面积为接受封闭的范围，一般为牙尖斜面2/3

D．恒牙酸蚀20～30秒，乳牙酸蚀60秒

E．酸蚀过程中擦拭酸蚀牙面

2、需采用复合固定桥的情况是 A．两侧侧切牙缺失 B．两中切牙缺失

C．一侧单个后牙缺失

D．第一前磨牙和第一磨牙缺失 E．全部磨牙游离缺失

3、，双侧颞下颌关节区肿胀疼痛，正确诊断应是’

A．双侧颞下颌关节急性前脱位

B．双侧髁突颈骨折

C．双侧升颌肌群痉挛

D．双侧关节盘穿孔破裂

E．双侧翼外肌痉挛

4、以下关于酚醛树脂(塑化液)的描述，不正确的是

A．主要成分为间苯二酚和甲醛

B．聚合前流动性大，具有良好渗透性

C．能促进根尖钙化，封闭根尖孔

D．聚合后对根尖周组织刺激性小

E．能够渗透到牙本质小管中去

5、男，40岁。感冒后，下唇及唇周皮肤出现成簇的针头大小的小水疱，破溃后结痂，局部灼痒疼痛。该患者患的疾病可能为

A．口角炎

B．固定性药疹

C．复发性口疮

D．天疱疮

E．唇疱疹

6、患者，女，50岁。慢性肾炎病史10年。血肌酐为5.5mg/dl。现出现库斯莫尔呼吸。考虑其已出现 A．肺水肿

B．代谢性酸中毒 C．代谢性碱中毒 D．呼吸性酸中毒 E．呼吸性碱中毒

7、FR-Ⅳ矫治器适用于（）A．安氏Ⅰ类 B．安氏Ⅱ类 C．安氏Ⅲ类 D．开 E．深覆

8、上牙槽神经丛的内环神经组成是

A．上牙槽前神经、中神经、后神经

B．上牙槽前神经、中神经

C．上牙槽前神经、中神经、鼻腭神经

D．腭前神经、鼻腭神经

E．上牙槽前神经、中神经、后神经、鼻腭神经

9、以下最适宜作桥体龈面的材料是

A．金合金

B．镍铬合金

C．烤瓷

D．复合树脂

E．塑料

10、人类口腔正常菌群中的主要致龋菌不包括____ A.内氏放线菌

B.粘性放线菌

C.变形链球菌

D.乳杆菌

E.梭形菌

11、男，50岁，左腮腺区无痛性肿块数年。镜下见肿瘤由上皮和淋巴样组织组成，上皮成分形成不规则囊腔，细胞排列成假复层，间质中淋巴细胞密集，并形成淋巴滤泡。病理诊断为 A．多形性腺瘤

B．肌上皮瘤

C．底细胞腺瘤

D．嗜酸性腺瘤

E．腺淋巴瘤

12、金属烤瓷冠舌侧龈边缘最好为 A．1mm肩台 B．0.5mm凹形 C．刃状 D．凿状 E．1.5mm

13、上唇红唇上的解剖标志有 A．人中凹 B．人中穴 C．人中嵴 D．唇峰 E．唇珠

14、提高宿主抵抗力的措施是（）A．降低牙尖高度和斜度 B．去除不良修复体

C．补充维生素和钙磷等营养 D．治疗食物嵌塞 E．矫治错畸形

15、口腔保健咨询时，对于窝沟封闭剂是什么的提问，杨大夫是这样回答家长的 A．封闭牙齿窝沟的药物

B．高分子树脂材料

C．一种光固化材料

D．由树脂和稀释剂等组成E．预防龋齿的药物

16、决定牙周炎进展和结局的主要因素是

A．细菌微生物

B．食物因素

C．宿主因素

D．时间因素

E．环境因素

17、关于细菌L型，不正确的是 A．去除诱发因素后可回复为原菌 B．多为革兰染色阴性

C．在低渗透压环境中仍可存活 D．形态多样

E．仍具有一定的致病力

18、除鳞癌外，以下肿瘤哪项在口腔颌面恶性肿瘤的构成比中最高____ A．淋巴瘤

B．腺癌

C．肉瘤

D．黑色素瘤

E．腺样囊性癌

19、增生性龈炎的临床表现是

A．探诊出血

B．龈缘肥厚

C．多发生于前牙的唇侧牙龈

D．可形成假性牙周袋

E．以上都是

20、以下哪些口腔卫生用品或方法没有去除菌斑的作用 A．洗必泰漱口液 B．牙签 C．漱口 D．牙间刷 E．牙刷

21、患者，男，27岁。3个月前患胸膜炎，经抽液、异烟肼加利福平加吡嗪酰胺治疗2个月，胸水吸收。2周来发热、咳嗽、痰血。X线检查示右上肺浸润性阴影，痰抗酸杆菌阳性。宜用哪种抗结核方案

A．异烟肼、链霉素、乙胺丁醇

B．异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、链霉素、乙胺丁醇

C．异烟肼、利福平、乙胺丁醇

D．异烟肼、利福平、吡嗪酰胺(原来方案)

E．异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、氧氟沙星

22、低磷酸酯酶症引起的牙骨质发育不全表现为

A．四肢畸形

B．颅盖骨未钙化

C．乳恒牙的早失

D．未形成正常的牙周连接

牙齿发育 篇3

1 材料与方法

1.1 主要实验仪器

热场发射扫描电子显微镜/X- 射线能谱联用仪(QUANTA- 400F,荷兰FEI公司);真空镀膜机(PELCO SC- 7);样品台;双面碳导电胶带;硬组织切片机抛光刀,牙科慢速涡轮机,粗、中、细油石各一块。

1.2 主要实验试剂

钯金;2%戊二醛;40%磷酸; 0.1 mol/L、pH7.2磷酸盐缓冲液。

1.3 牙齿磨片制备及观察

取出存放于2.5%戊二醛缓冲液(pH7.2左右)中的该病例先证者姐姐的下恒切牙及乳前牙、第二乳磨牙及正常对照牙,应用1 mol/L、 pH 7.2磷酸盐缓冲液反复冲洗,彻底清洗表面,自牙齿远中向近中纵剖为两半,用牙科慢速涡轮机将其中一半锯成数段,每段厚度约1.5～2.0 mm的片状,注意应不断向砂轮滴水使砂轮和标本保持湿润。将标本在粗、中、细油石上打磨,边打磨边滴水,使打磨纹路消失,表面光滑平整,然后应用硬组织切片机抛光刀抛光, 40%磷酸酸蚀10 s,双蒸水冲洗,自然干燥;于真空干燥箱中干燥,喷金,取出样品在热场扫描电镜中进行观察。工作条件:加速电压25 kV,电流5×1010 A,工作距离10 mm。正常对照牙平行做同样处理。

1.4 能谱分析

将以上正常对照牙和CCD患牙样品通过与扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)联机的色散能分光计(energy- dispersive spectrometer,EDS)进行成分分析,分别随机选择釉质及牙本质以及牙骨质处各2 个面选取区域进行Ca、P、C、O等元素成分分析。

1.5 统计学分析

能谱分析相关数据应用SPSS 13.0版本,用两样本均数t检验进行统计学分析,实验数据以undefined表示,P<0.01为显著差异。

2 结 果

2.1 牙齿组织形态学观察

与正常对照恒牙(图 1A,B,C)相比,磨片在光镜下可见CCD恒牙的釉质厚度无明显变薄,但釉柱结构不清晰,釉板(或裂隙样)结构较多,釉牙本质界较为平直(即未见明显连续扇形结构),牙本质小管的分布及形状未见明显异常(图 2A);电镜下可见釉牙本质界不规则(图 3A),牙本质小管部分闭塞,小管周牙本质矿化低,不清晰(图 3B,C);光镜观察牙根上2/3纵磨片,可见牙骨质较薄,未见明确牙骨质细胞,牙本质小管分布未见明显异常,牙本质透明层的内侧可见较多颗粒状未矿化区(Tom's粒层)(图 2B)。

与正常对照乳牙(图 1D)相比,光镜下可见CCD乳前牙釉质厚度无明显变薄,釉板(或裂隙样)及釉丛结构较多,釉柱排列相对规则,釉牙本质界较为平直,牙本质小管排列稀疏,粗细不一,出现扭曲断裂不连续(图 2C);电镜下可见牙本质小管分布不均,部分闭塞,并可见裂隙,小管大小不均,管周牙本质不清晰,光镜下可见CCD乳磨牙的根横磨片牙骨质薄,牙本质小管分布不均匀,粗细不一(图 2D)。

2.2 能谱分析

随机选择釉质、牙本质以及牙骨质处各2 个面选取区域进行Ca、P、C、O等元素成分分析,结果见表 1～4。

A:光镜下恒牙牙冠横断面(LM,×100); B:光镜下乳牙根部磨片(LM,×100); C:电镜下恒牙釉牙本质界(EM,×1 000); D:电镜下恒牙牙本质(EM,×1 000)

与正常组相比,CCD患者恒牙牙釉质中Ca和P的含量显著降低(P<0.01), C含量显著升高,O含量无统计学差异。

与正常组相比,CCD患者恒牙牙本质的Ca和P含量均降低,而C及O含量均升高。

与正常组相比,CCD患者的乳牙牙釉质的Ca、P和O的含量均降低,而C的含量升高。

与正常组相比,CCD患者的乳牙牙本质的Ca、P、C和O的含量均无明显差异。

3 讨 论

CCD患者典型的口腔畸形特征就是乳牙滞留,恒牙迟萌,多生埋藏牙。虽然在描述CCD患者的临床特征时,都会提及口腔畸形表现,但牙齿组织学改变的报道却很少。本实验收集到的乳恒牙标本来自临床病例先证者的姐姐,该CCD患者因个人因素要求快速解决功能问题,由于义齿修复需要拔除下中切牙以及部分滞留并发生大面积龋坏的乳牙。

runx 2参与成釉器的早期形成以及牙齿形态发生,并且在釉质形成中直接发挥作用。runx 2- /- 小鼠切牙胚的釉质缺乏,表明runx 2在釉质形成中具有重要作用。成釉蛋白(ameloblastin,AMBN)是细胞外基质蛋白,作为成釉细胞特异性的标志基因在釉质晶体形成中发挥作用,小鼠AMBN启动子包括2 个runx 2结合位点。runx 2与AMBN启动子的重要区域相互作用,启动子上结合位点的突变将减弱其活性,表明runx 2在AMBN的转录中具有重要作用[5]。在成熟以及未成熟的成釉细胞中都有II型runx 2 mRNA的强表达[6]。在不同发育时期的成牙本质细胞中runx 2的表达谱不同,在牙冠发育之前,II型runx 2在牙乳头间充质中呈强表达;形态发生完成后,在钟状期牙乳头中的表达明显下调;尽管表达水平较低,在牙乳头细胞,尤其在位于尖部以及髓室衬里的成牙本质细胞中,runx 2持续表达。在牙齿的进一步发育以及牙根形成的所有阶段,包括牙周膜形成中,runx 2的表达都很明显。

本研究中CCD患者表现为釉质发育不全,部分剥脱,牙齿呈黄褐色,充分显示runx 2基因突变对牙齿结构发育的影响。本实验在组织学水平观察CCD患者的牙齿结构变化,并与扫描电镜联机进行牙釉质与牙本质的能谱分析,发现CCD患者恒牙的牙釉质及牙本质的Ca、P含量均较正常降低,并具有统计学意义(P值分别为0.001、0.004),说明CCD患牙矿化较差;这与组织学观察发现恒牙牙釉质结构不清晰以及牙本质小管部分闭塞、管周牙本质矿化低相呼应,釉牙本质界缺乏典型的连续扇形结构(连续的小弧形线),观察牙骨质时未见明确牙骨质细胞。CCD乳牙牙釉质的Ca、P含量均降低,并具有统计学意义(P值分别为0.011、0.019),但牙本质各元素的含量无显著降低;光镜下可见CCD乳前牙釉质厚度无明显变薄,釉板(或裂隙样)及釉丛结构较多;电镜下可见牙本质小管分布及大小不均,部分闭塞,并可见裂隙。

关于CCD患者牙根部是否存在细胞牙骨质的说法不一,最早的Smith 等[7]对CCD患者的牙齿进行了详细的组织学观察,报道萌出的乳牙以及未萌的恒牙几乎完全缺乏细胞牙骨质,并提出细胞牙骨质的形成肯定不是牙齿正常萌出的必需因素,牙齿萌出过程中所需要的空间是由牙槽骨的位置来维持的。Rushton[8]以及Lukinmaa等[9]报道CCD患者已萌出的以及埋藏的恒牙均缺乏细胞牙骨质,而同一患者的滞留乳牙则有正常细胞牙骨质的形成。Count等[10]观察了一CCD患者的2 颗恒下前牙以及正常人的10 颗对应牙,评价细胞牙骨质以及无细胞牙骨质在根部的覆盖比例,研究结果表明在CCD患牙细胞牙骨质覆盖根部(18.05±10.67)%,无细胞牙骨质覆盖根部(76.90±3.53)%;在正常人细胞牙骨质覆盖根部(19.12±15.60)%,无细胞牙骨质覆盖根部(80.34±15.71)%,统计学分析CCD与正常人的细胞牙骨质所占比例无显著差异,从而提出细胞牙骨质以及无细胞牙骨质的数量多少可能不是CCD患者埋藏牙不萌出的一个影响因素。由于此报道CCD患牙数量较少,因而结论的支持力度较小,大量CCD样本的收集观察以及统计学分析将会给出越来越清晰的结论。本研究对CCD患者已萌出的下颌恒中切牙以及滞留乳牙进行观察,均未发现细胞牙骨质,考虑有多种可能原因:一是样本牙本身没有细胞牙骨质,与Rushton报道相符;二是可能在磨片制备过程中细胞牙骨质丢失了,因此无法连续观察到,故作此推测。考虑到CCD患者的临床表现多样化以及牙齿发育过程中基因调控的复杂性,牙骨质发育异常的不同报道是可以接受的。

基因检测分析证明了runx 2基因突变所致的单倍体不足是造成CCD的重要原因。基因敲除小鼠模型的建立也已经表明runx 2基因在牙齿形成中的重要作用。本研究结果则在组织学水平展现了runx 2基因突变对CCD患者牙齿形成的影响,并对其组成元素进行成分分析,再次证明runx 2基因对于牙齿正常发育的重要性。

参考文献

[1]邓华颉,冯青,薛海燕.锁骨颅骨发育不全综合征(CCD)1例[J].实用口腔医学杂志,2008,24(3):443-444.

[2]Ducy P,Starbuck M,Priemel M,et al.A Cbfa1-dependent genetic pathway controls bone formation beyond embryonic development[J].Gemes Dev,1999,13(8):1025-1036.

[3]Young MF,Kerr JM,Ibaraki K,et al.Structure,expres-sion,and regulation of the major noncollagenous matrix pro-teins of bone[J].Clin Orthop Relat Res,1992,(281):275-294.

[4]Robey PG,Fedarko NS,Hefferan TE,et al.Structure and molecular regulation of bone matrix proteins[J].J Bone Min-er Res,1993,8Suppl2:S483-487.

[5]Dhamija S,Krebsbach PH.Role of Cbfa1in ameloblastin gene transcription[J].J Biol Chem,2001,276(37):35159-35164.

[6]Jiang H,Sodek J,Karsenty G,et al.Expression of core binding factor Osf2/Cbfa-1and bone sialoprotein in tooth development[J].Mech Dev,1999,81(1-2):169-173.

[7]Smith NH.A histologic study of cementum in a case of clei-docranial dysostosis[J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol,1968,25(3):470-478.

[8]Rushton MA.An anomaly of cementum in cleido-cranial dys-ostosis[J].Br Dent J,1956,100:81-83.

[9]Lukinmaa PL,Jensen BL,Thesleff I,et al.Histological ob-servations of teeth and peridental tissues in cleidocranial dys-plasia imply increased activity of odontogenic epithelium and abnormal bone remodeling[J].J Craniofac Genet Dev Biol,1995,15(4):212-221.