时间分辨法（精选八篇）
时间分辨法 篇1
1 资料与方法
1.1 一般资料
(1) 基本资料:选取2009年来本院门诊、住院患者及其家属进行乙肝两对半检验的临床样本238例, 其中女42例, 男196例。 (2) 试剂:上海新波生物技术有限公司乙肝定量试剂盒, 厦门英科新创科技有限公司乙肝定性试剂盒。 (3) 仪器:上海新波时间分辨荧光免疫全自动分析仪;芬兰雷博M2酶标仪。
1.2 方法
对238例相同样本分别用TRFIA法和ELISA法进行乙肝两对半 (5项) 的定量和定性检测, 检测方法严格按照说明书进行操作。
2 结果
2 组5项指标的符合率分别为:
95.8% (HBs Ag) 、94.2% (HBs Ab) 、94.5% (HBe Ag) 、92.9% (HBe Ab) 、82.2% (Hbc Ab) , 经配对资料检验P<0.05, 差异有统计学意义 (TRFIA法较ELISA法的阳性预示值比率均明显偏高) , 两组详细的数据比较见表1。
3 讨论
(1) 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂的标记免疫技术中最常用的一种技术, 此方法操作简便快速, 适于大批量样本检测, 试剂有效期较长, 但是其特异性、灵敏度不及TRFIA, 易造成漏检和假阳性。因酶的纯度反应过程容易受环境因素影响, 也导致ELISA稳定性不好。此外, ELISA也无法检测出乙肝两对半各项指标的具体浓度, 只能笼统的检测其阴、阳性结果, 给临床诊断和治疗带来诸多不便。
(2) 时间分辨荧光免疫分析技术 (TRFIA) 作为一项具有广阔发展潜力的新兴生物学技术, 其零本底、灵敏度高、线性范围宽、试剂有效期长、标准曲线稳定性好、应用范围广等优点, 给标记免疫技术带来了一次飞速发展。我们看到, 近年来该方法发展迅速, 目前已然成为了各级医疗部门进行乙肝两对半检测的一种新兴、有效的主要方法。TRFIAR同样也适合大批量样本检测, 只是结果更准确更可靠而已。笔者认为, 随着TRFIA不断发展, 该技术必将受到广大医患双方的欢迎和认可, 成为临床医生对乙肝患者治疗后的疗效动态观察的首选, 成为正常人群自身对乙肝病毒预防接种状况进行实时监测的首选。
(3) 对采用TRFIA法与ELISA法分别检测出的两组数据, 进行配对资料的检验 (见表1) , 差异有统计学意义, 尤其是HBc Ab的检测结果, 2者的符合率仅为82.2%。因此, 虽然2种方法都能对乙肝2对半五项指标进行检测, 但对两种方法检测结果的差异性指标进一步复核后, 我们发现TRFIA法更为特异、灵敏、准确和可靠, 由此说明在特异性、准确性 (阴、阳性预示值) 、灵敏度方面TRFIA法要优于ELISA法。
(4) 前文提到, TRFIA法能准确检测乙肝2对半5项指标的浓度变化, 而ELISA法只能提供阴、阳性结果。2者比较, TRFIA法不但能通过测定ELISA不能测出的HBs Ag低浓度值, 为临床早诊断、早发现乙肝患者提供有力证据, 也能通过测定HBs Ab的浓度, 对被检测人群机体的免疫状况进行评估, 为需注射乙肝疫苗的人群提供精确指导, 也为临床评价药物疗效提供动态数据。
摘要：本文对时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA) 检测乙肝两对半的效果进行评价。
关键词：时间分辨荧光免疫法,乙肝两对半,酶联免疫吸附试验
参考文献
[1]李振甲, 陈萍藻, 高平, 等.时间分辨荧光分析技术与应用[M].北京:科学出版社, 1996:3.
氯噻啉时间分辨免疫分析方法研究 篇2
关键词：氯噻啉 多克隆抗体 时间分辨免疫分析
中图分类号：S482 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）24-0000-00
氯噻啉（imidaclothiz）是我国公司自主研发一种新烟碱类杀虫剂，与常规杀虫剂没有交互抗性，因而可用于抗性治理，广泛应用于那些对有机磷类、氨基甲酸酯类、除虫菊酯类已产生抗性的农林业害虫的防治[1]。由于其具有高效、广谱、低毒等优点，氯噻啉使用量日益上升，不合理的使用也经常出现，对环境造成很大压力，因此，研制快速廉价、灵敏度高、稳定性好和筛通量大的检测氯噻啉残留的常规方法，加强对氯噻啉药物的检测和控制是一项刻不容缓的工作。
目前，有关氯噻啉残留检测方法主要是高效液相色谱法（HPLC）[2-4]。但前处理过程比较繁琐，检测结果受样品净化、浓缩等步骤的影响，不适合进行批量样品的快速检测。而免疫分析技术具有很高的精确度、更灵敏的反应，更强的特异性、不高的技术要求、更短的检测时间和大批量测定等优点，越来越受到人们的重视。抗氯噻啉农药的多克隆抗体的酶联免疫分析技术（ELISA）也有报道[5]，然而该方法检测灵敏度不太理想。时间分辨免疫分析技术具有高灵敏性、高选择性、快速等优点，可以弥补普通ELISA免疫分析技术灵敏度的不足。本研究建立了氯噻啉的TRFIA残留检测方法，为环境与食品中痕量氯噻啉残留高灵敏检测提供技术支持。
1 材料与方法
1.1 材料
96孔聚苯乙烯荧光板（江苏省原子医学研究所）；95%氯噻啉原药（南通江山农药化工股份有限公司）；卵清蛋白（OVA）、正三丁胺、氯甲酸异丁酯（Sigma公司）；Eu3+标记盒为PerkinElmer公司产品；荧光增强液，（江苏省原子医学研究所）；碳酸盐缓冲液（CBS）：0.05M，pH 9.6；磷酸盐缓冲液（PBS）：0.01M，pH 7.4；氯噻啉多克隆抗体为本实验自行制备；二甲亚砜（DMSO）、N，N-二甲基甲酰胺、磷酸二氢钾、氢氧化钾等试剂均为分析纯。
1.2包被原的合成
氯噻啉的半抗原合成参照文献[5]，将合成的半抗原与卵清蛋白（OVA）偶联通过混合酸酐法制备包被抗原。反应液用PBS在4℃下透析3天。根据三者在280 nm的摩尔吸光系数（ε）估算半抗原与载体蛋白的偶联比[10]：结合比=（ε偶联物-ε载体蛋白）/ε半抗原。
1.3 包被板的制备
包被抗原用0.05 M pH 9.6 CBS溶液稀释至5 μg /mL，加入到96孔微孔板中（100 μL /孔），4℃包被过夜，弃去包被液，加入封闭液，每孔200μL，37 ℃孵育2h，弃去封闭液，真空抽干，-20℃冷冻保存。
1.4 Eu3 + 标记抗体的制备
取适量的PBS溶解的抗氯噻啉的抗体，在4℃下碳酸盐缓冲液（0.05 M，PH 8.5）透析2次，每次24h，目的是除去溶液中NaN3并且转换成碳酸盐缓冲液。在碳酸盐缓冲液环境中用DTTA-Eu3+标记抗体。取0.5 mg上述透析的抗氯噻啉的抗体加入含0.2 mg 的DTTA- Eu3+的小瓶中，室温下磁力搅拌反应24 h。将Eu3 +标记抗体溶液加入到Sephadex G-50层析柱中，用含0.9% NaCl的Tris-HCl洗脱液洗脱。收集层析柱流出液（ 1mL/管），逐管测量其吸光值（A280 nm），合并峰管。以Eu3+标记试剂盒说明书提供的方法测定并计算抗体标记率。
1.5 回收率的测定
河水经过滤，添加不同浓度（0.05-0.5 mg/L）的氯噻啉标样，用含甲醇的PBS稀释，直接用于TRFIA测定。称取10g土壤，添加不同浓度（0.05-0.5 mg/kg）的氯噻啉标样，静置一段时间，加入40mL二氯甲烷进行超声提取，4000 r/min离心。取上清液20 mL减压浓缩，用含甲醇的PBS定容到10mL。每个处理设3个重复，各设一个空白对照，用建立的TRFIA法对样品进行分析。
1.6 分析测定
取准备好的酶标板，加入50μL的氯噻啉标准品或处理好的样品溶液到酶标孔中，加Eu3 + 标记抗氯噻啉抗体（50 mmol/L pH 7.4的PBS稀释）100μL，室温振荡孵育30 min，用含0. 1% 吐温-20的Tris-HCl（50 mmol /L pH 7.8）洗涤液洗6次。加200μL 增强液，振荡孵育5 min 后，用荧光检测仪进行测定。
2结果与分析
2.1包被原的鉴定
对氯噻啉半抗原、OVA及偶联物进行紫外全波长扫描，发现偶联物的紫外吸收光谱具有载体蛋白和半抗原的紫外吸收特征，说明偶联成功，如图1所示。根据它们在280 nm波长下的摩尔吸光系数估算得到包被原的结合比为8.5：1。
2.2 Eu3 +标记率
Eu3+标记抗体溶液经Sephadex G-50层析，用离心管收集出现的第1洗脱峰，以PerkinElmer公司提供的Eu3+标准为参考，计算得出第1洗脱峰的Eu3+含量为22.4 μmol /L，蛋白质含量为4.7 μmol /L，即平均每个免疫球蛋白分子上标记了4.8个Eu3 +。
2.3标准曲线的建立
各参考标准品浓度以及荧光值建立氯噻啉的标准曲线，曲线方程为Y=-2.292X-3.0874， IC50为0.0447 mg/L，最低检测限为0.005 mg/L。 图2表明本试剂具有良好的剂量-反应线性关系。
2.4 抗体的特异性
用TRFIA在相同的条件下测定氯噻啉和结构类似烟碱类杀虫剂对抗体的交叉反应，计算各自的IC50和交叉反应率CR（表1），结果表明得到的抗体对氯噻啉有较好的特异性，与大部分杀虫剂的几乎没有交叉。
2.5 回收率测定
在河水和土壤中添加不同浓度的的氯噻啉标样，按照TRFIA进行回收率测定，检测结果见表2。在水和土壤中分别添加氯噻啉标准溶液，平均回收率为81.7%～103.8%，变异系数为3.9%～10%，符合农药残留检测要求。
3 讨论
本文基于多克隆抗体建立了氯噻啉TRFIA免疫分析方法。其灵敏度（IC50）较先前报道的ELISA[5]有了很大的提高（大约5倍），方法的抑制中浓度可达到0.0447 mg/L。可见TRFIA法检测氯噻啉比ELISA 法灵敏度上具有明显优势。时间分辨荧光免疫分析具有示踪物稳定、无放射性污染、灵敏度高、操作简便、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、标记物储存时间长等优点[6-9]，使得试剂标准曲线飘移小，更提高了试剂的稳定性和准确性。在研究抗体标记和发光过程中发现：抗体的浓度与标记效率和本底发光值成反比，高浓度标记抗体，能够提高灵敏度和降低本底，使我们建立方法所需要。本文建立的氯噻啉-TRFIA 法，与方松等人的报道在灵敏度上有了很大的提高，可以用于环境与食品中痕量氯噻啉的检测需求。
参考文献
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[4] 张丽芬.氯噻啉在甘蓝中残留分析方法的研究[J].张家口农专学报，2004，20（2）： 60-63.
[5] Song Fang，Bin Zhang， Ke-wei Ren，et al.Development of a Sensitive Indirect Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay （ic-ELISA） Based on the Monoclonal Antibody for the Detection of the Imidaclothiz Residue[J]. J. Agric. Food Chem. 2011，59，1594–1597.
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[7] 武学成，何林，周克元.时间分辨荧光免疫分析技术及临床应用[J].医学综述，2006，12 7）：434-436.
[8] 乔艳红，谷泽亮，张湔，等.乙肝病毒表面抗体TrFIA 方法的建立及其应用[J].标记免疫分析与临床，2007，14（1）：24-26.
[9] HEMMIL I.Lanthanides as probes for time-resolved fluorometricimmunoassay[J].Scand J Clin Lab Invest，1988，48 （5）：389-399.
*通讯作者：洪霞，E-mail：hongxia19862@163.com
时间分辨法 篇3
1 材料与方法
1.1 对象
2011年1月1日至2012年3月31日在我院住院和门诊就诊患者的共计14476份血清标本, 其中女性患者血清7431份, 男性7035份, 年龄0~94岁, 平均年龄47.5岁。
1.2 方法
清晨空腹采静脉血3mL, 分离血清后, 用TRFIA法进行检测。乙型肝炎标志物采用TRFIA法测定, 仪器为上海新波生物技术有限公司生产的EFFICUTA前处理仪和Anytest时间分辨荧光检测仪, 试剂使用上海新波生物技术有限公司生产的配套试剂, 严格按说明书操作。
1.3 数据处理
采用Execl统计各标志物阳性率及乙型肝炎标志物罕见模式阳性率, 组间比较采用χ2检验。
2 结果
2.1在检测的14476份血清标本中, HbsAg阳性率为37.48% (5425/14476) , HBsAb阳性率为44.91% (6501/14476) , HBeAg阳性率为11.20% (1621/14476) , HBeAb阳性率为40.35 (5841/14476) , HBcAb阳性率为55.53% (8039/14476) 。见表1。
2.2本次统计的14476份乙型肝炎检测结果, 共有乙型肝炎标志物模式共有17种, 其中常见模式9种, 占95.88% (13879/14476) , 罕见模式8种, 占4.12% (597/14476) , 结果见表2。罕见模式中, HBsAg、HBsAb、HBeAb和HBcAb同时阳性模式阳性率最高, 与其他组有显著差异 (P<0.05) , HBsAg和HBsAb同时阳性占所有罕见模式的87.94% (525/597) , 而HBsAg阴性HBeAg阳性占所有罕见模式的11.73% (70/597) 。
注:*与第1组阳性率比较, P<0.05
3 讨论
3.1 目前, 临床上检测乙型肝炎血清标志物应用最多的是ELISA, 由于其操作简便快速, 成本低廉, 适于大批量样本检测, 灵敏度、特异性基本满足乙型肝炎标志物定性检测的要求, 但该法影响因素较多, 检测结果易受污染、操作手法、前带现象[3, 4]等多种因素的影响, 会出现假阳性或假阴性, 从而造成漏诊和误诊。该法只能定性判断无法定量判断, 对于病情监测、疗效观察及预后评估具有局限性。
3.2 人体感染HBV之后, HBV的包膜、核壳抗原作为外来抗原物质、以及整合有病毒核酸成分的感染肝细胞也可成为异“己”物质, 刺激机体产生针对其的细胞和体液免疫应答。我们的检测中出现常见模式9种13248例, 占95.88%, 少见模式出现了8种597例, 占4.12%[5]。同时将抗原抗体同时阳性者选择阳性程度高者判为阳性, 这就使罕见模式患者得不到正确治疗, 并使乙型肝炎病毒隐蔽传播, 产生极大危害。本研究发现罕见模式中HBsAg、HBsAb同时阳性模式阳性率占所有罕见模式的87.94%, 但HBsAb大部分都处于低值区, 说明这种模式是转归过程中的中间模式或新的亚型感染, 这时的表面抗体阳性就不具有保护性。而HBsAg阴性HBeAg阳性占所有罕见模式的11.73%, 这主要是由于检测方法的HBsAg处于窗口期或钩状效应等原因所至。因此, 完全依据定性检测结果有可能导致临床的误诊和延误治疗, 主动免疫的失败, 更大的威胁在于输血安全性的保障。
综上所述, 临床对乙型肝炎标志物检测结果的判读有可能因灵敏度不够等引起的假阴性结果和多种病毒变异引起的少见模式等。必要时选择灵敏度高的检测方法或几种方法联合检测, 特殊病例的连续监测等有助于我们正确的诊断和疗效判定, 及时发现变异菌株和耐药菌株有助于临床治疗。TRFIA已被认为是最有发展前途的新的超微量分析技术。此法具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、无放射性污染、能定量检测等多项优点, 能有效检测乙型肝炎标志物罕见模式, 对临床诊断和治疗起着重要作用。
摘要：目的 探讨时间分辨荧光免疫技术 (TRFIA) 对乙型肝炎标志物少见模式的应用价值并进行评价。方法 用时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA) 法检测14476份临床标本的乙型肝炎标志物并对其模式进行统计分析。结果 14476份乙型肝炎检测结果, 共有乙型肝炎标志物模式共有17种, 其中常见模式9种, 占95.88% (13879/14476) , 罕见模式8种, 占4.12% (597/14476) , HBsAg和HBsAb同时阳性占所有罕见模式的87.94% (525/597) , 而HBsAg阴性HBeAg阳性占所有罕见模式的11.73% (70/597) 。结论 时间分辨荧光免疫技术能有效检测出乙型肝炎标志物罕见模式, 对临床诊断和治疗起着重要作用。
关键词：时间分辨荧光免疫,乙型肝炎标志物,少见模式
参考文献
[1]何印蕾.实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义[J].实用医技杂志, 2006, 13 (22) :3954-3955.
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[3]刘中国, 徐峰, 王卫, 等.时间分辨荧光免疫分析检测乙肝病毒血清标志物的临床评价[J].实用医院临床杂志, 2004, 1 (2) :84.
[4]Uehara M, LapcíkO, Hamp LR, et al.Rap id analysis of phytoestro-gens in human urine by time-resolv fluoroimmunoassay[J].J Steroid Biochem Mol Biol, 2000, 72 (5) :273-282.
时间分辨法 篇4
关键词：婴儿, 新生,时光分辨荧光免疫法,先天性甲状腺功能减退症
新生儿疾病筛查工作一直是临床检验工作中的一个重点, 指对患儿在临床上并未有明显症状, 但体内的生化、激素水平已经出现改变的这种情况做出筛查, 通过检验为临床提供依据, 做出早期诊断, 更好、更及时地对此类疾病做出治疗, 防止疾病进一步发展对患儿的重要器官造成更严重的伤害[1]。为了提高筛查质量, 为临床提供更准确的诊断依据, 本研究近年来采用时光分辨荧光免疫法 (TRFIA) 对新生儿的先天性甲状腺功能减退 (CH) 进行了筛查, 现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选取我院2008年1月—2012年1月所收治的12462名足月出生、无畸形的正常新生儿的临床资料。
1.2 血片采集
在新生儿出生72h之后且至少吃奶6次以上, 方可进行足跟末梢采血2滴作为实验标本, 让血滴自然流出之后采用S&S 903专用滤纸片进行采集, 待血液渗透滤纸形成两个血斑之后将其放置于室温下自然干燥, 对每个标本进行单独放置并详细填写姓名、性别、地址等信息, 之后冷藏于4℃冰箱内保存, 作为筛查之用。
1.3 试验方法及仪器
将以上新生儿血液标本分别采用TRFIA法和酶联免疫吸附试验 (ELISA) 法进行筛查。TRFIA法中时光分辨荧光免疫检测仪采用芬兰产Wallac 1420型、试剂盒为配套Neo-hTsh试剂盒;ELISA法的酶标仪采用美国产B10-RADmodel 550型进行筛查, 样品测定中均带有内质控, 包括质控结果在内的所有操作严格按照说明书进行。
1.4 结果判定
ELISA的筛查切值为20μU/ml。TRFIA的判断标准为 (μU/ml blood) :<9为阴性;9～18为可疑;>18为CH。筛查值均用原标本进行复查, 确保实验结果不出现偏差, 复查结果仍在切值以上者视为初检阳性, 随即采用放射免疫法 (RIA) 进行对照检测, 检测血清中T3、T4以及TSH水平, TSH≥20mU/L且T4<48ng/ml视为CH;TSH≥20mU/L但T4水平正常则视为非典型甲状腺功能减退。
1.5 统计学方法
采用SPSS15.0统计软件进行统计学处理, 计数资料采用χ2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
TRFIA法的检出率为1/1558, ELISA法的检出率为1/3116, TRFIA法的检出率明显优于ELISA法, 差异具有统计学意义 (P<0.05) ;TRFIA的99%百分位值为8.81μU/ml, ELISA则为12.64μU/ml, TRFIA的室内质控、内质控C1血片CV值为4.88%～10.61%、s0.61～1.81。
3 讨论
由于新生儿疾病筛查均是对终生性疾病的诊断, 所以相较于临床检验具有一定差异, 属于一次性检验, 目前在临床上的检验方法较多, 笔者采用主流的三种检验方法之一的TRFIA法进行CH的筛查发现检出率要明显高于ELISA法。本研究数据虽然受到范围等因素的限制筛查新生儿数量较少, 但是由于两种方法的检验对象是同一时间的同一批标本, 所以具有一定的参考价值。对于两种检测方法检出率的不同我们认为坑是由于其的筛查切值不同, TRFIA法筛查时将TSH在9～18μU/ml的患儿已经作为可疑病例进行复查, 之后复查结果往往发现TSH值已经上升到20μU/ml以上, 可以作为确诊对象。从两种方法的TSH频数来看, TRFIA法的99%百分位值为8.81, 而ELISA法则为12.64, 因此可以考虑将ELISA法的筛查切值进行提高, 或许能够提高相应检出率[2]。
综上所述, TRFIA法作为新生儿先天性甲状腺功能减退的筛查方法是可靠的, 具有检测质量稳定、敏感度高的特点, 值得在临床上加以推广和应用。
参考文献
[1]王志国, 李小鹏, 武平原.2001年全国新生儿疾病筛查实验室质量评价[J].中国公共卫生, 2002, 18 (11) :1324-1327.
时间分辨法 篇5
1 TRFIA的原理和优势
1.1 TRFIA的反应原理TRFIA是20世纪70年代末Wallac公司Soini和Kojola创立的一种非放射性标记免疫分析技术, 它是利用镧系元素, 如铕 (Eu) 、铽 (Tb) 、钐 (Sm) 和镝 (Dy) 的三价稀土离子及其螯合物作为示踪物, 代替荧光物质、酶、同位素、化学发光物质来标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞等, 在一定的反应体系 (目前常用的有抗原抗体反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等) 内发生反应后, 用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的特异荧光强度, 并与相对应的标准荧光曲线比对, 判断反应体系中分析物的浓度, 从而达到定量分析待测物的目的[2]。目前常用的反应模式有双位点夹心法和竞争法[3]。
1.2 TRFIA的优势TRFIA能够继放免、酶标、化学发光、电化学发光之后成为一种更新、更灵敏的检测方法, 主要取决于镧系元素及其螯合物作为标记物的独一无二的理化特性, 其优势有以下几点:
1.2.1镧系元素离子螯合物的荧光寿命长其衰变时间为传统荧光的103~106倍 (表1) [4]。由于镧系元素螯合物的荧光寿命达60~900μs, 样本中蛋白质的荧光寿命为1~10 ns, 普通荧光免疫中荧光团的寿命为1~100 ns, 所以在用时间分辨荧光仪测量荧光时, 可以适当地延迟一段时间, 待其他物质的荧光衰变后再测量, 所测的便是镧系离子螯合物标记物的特异性荧光。这就最大限度地克服了来自样品、试剂本身的荧光及散射光的干扰, 极大地提高了检测的灵敏度。
1.2.2激发光和发射光的Stokes位移大如铕 (Eu) 的发射光波长为613 nm, 激发光波长为340 nm, 其Stokes位移为273 nm, 而普通荧光物质的Stokes位移最多也只有几十纳米。因此, 在某一波长测定样品荧光时, 可以通过滤波片或分光计消除激发光和散射光的干扰。
1.2.3镧系元素离子螯合物的荧光特异性强其激发光谱带宽 (300~500nm) , 发射光谱带窄 (615±5nm) , 可使仪器调整在极窄的波长范围内测定荧光信号, 从而极大地降低来自背景光的各种干扰[5]。
1.2.4标记物体积很小且稳定一般是原子标记, 标记后不会影响被标记物的空间主体结构, 既保证了被检测物质的稳定性, 又可实现多位点标记, 使得一个试剂盒能够同时检测两种或多种项目。标记物稳定, 就可以对标记物进行多次激发, 通过对每次激发的荧光信号累加后取平均值的办法可大大减少偶然误差, 提高检测准确度。镧系离子标记物可保存1~2年, 克服了同位素、酶标等不稳定的缺点。
1.3常用螯合剂现常用的螯合剂有: (1) 多胺多羧类螯合剂, 如乙二胺四乙酸 (EDTA) 、二乙三胺四乙酸 (DTTA) 和二乙三胺五乙酸 (DTPA) , 主要用于液相测定体系, 又称为解离一增强镧系荧光免疫分析; (2) 菲啰啉类螯合剂, 如4, 7-二 (氯磺酰基苯基) -1、10-菲啰啉-2, 9-二羧酸 (BCPDA) , 主要用于Cyber Fluoro体系; (3) 水杨酸类螯合剂, 如DTPA-p AS-Tb (p AS-对苯基水杨酸) ; (4) β-二酮类螯合剂, 如噻吩甲酰三氟丙酮 (TTA) 、三甲基乙酰三氟丙酮 (PTA) 等; (5) 联吡啶类螯合剂。
1.4镧系离子标记方法[1]
1.4.1一步标记法又称为直接标记法, 先将稀土离子与螯合剂结合, 再与抗原或抗体结合。简要步骤如下:取10 mg纯化好的抗体, 加入相应量的Eu-N2-[p-异硫氰酸-苄基]-二乙烯三胺乙酸 (Eu3+-DTTA) , 用Na OH调p H值至9.0, 4℃反应过夜;反应液上Sephadex G-50, 280 nm下收集蛋白峰, 测出Eu3+浓度, 计算标记率;加入BSA至1 mg/m L, 0~4℃保存。
1.4.2两步标记法将抗体Ig G先与螯合剂结合, 再与镧系离子螯合。步骤:取1 mg纯化好的抗体, 加入260μg二乙烯三胺五乙酸 (DTPA) (Ig G∶DTPA=1∶200) , 用Na OH调p H值到7.0, 置高速混匀器上混匀1 min, 室温下继续反应30 min;用50 m M的柠檬酸 (p H值为6.0) 透析反应液, 去除多余的DTPA, 取25~30μL Eu Cl3 (33 mmol/L) 加入到已透析的Ig G-DTPA中, 室温反应30min;反应液上Sephadex G-50, 280nm下收集蛋白峰, 测定Eu3+浓度, 计算标记率, 0~4℃下保存。
1.4.3多标记及双标记TRFIA根据各镧系离子的荧光寿命不同及波长差异很大的特点, 可以对多种标记的镧系离子的荧光进行同时测量。多标记TRFIA是指一个统一的反应体系中有两种或两种以上的待测物与相应特异性配体进行结合反应, 在引入两种或两种以上相对应的镧系离子标记物后, 通过时间分辨荧光测量, 将各种待测物的结果计算出来[6]。在双重标记分析中, Eu3+和Sm3+、Tb3+和Eu3+是两对常用的镧系离子。
2 TRFIA在兽医学中的应用
TRFIA专门用于兽医上的检测目前还很少见, 用于食品安全检测及人畜共患病检测的相对较多。
2.1在真菌毒素检测中的应用[7]当前真菌毒素主要有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、T-2毒素、展青霉素、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇等, 这些毒素都具有较强的致癌性。对真菌毒素的检测, 目前常用TLC法、HPLC法等, 但不同程度地存在着样品前处理过程复杂、毒性大、所需时间长等缺点。用TRFIA技术检测真菌毒素, 灵敏度高, 检测范围宽, 重复性和稳定性好, 所需时间短, 分析系统高度自动化, 是一种简便、快速、经济、稳定且可大批量检测的方法。各种主要真菌毒素的TRFIA检测限详见表2。
2.2在兽药残留检测中的应用兽药残留分析由于具有待测物质浓度低, 浓度差异大, 样品基质复杂, 干扰物质多, 兽药残留种类及代谢产物多样等特点, 要求其测定技术应具有灵敏度高, 线性范围宽, 特异性强, 高通量等特点。目前常用的方法有酶免疫分析法 (EIA) 、荧光免疫分析法 (FIA) 、胶体金免疫分析法 (CGIA) 、微生物学分析法、气相色谱 (GC) 、高压液相色谱 (HPLC) 、色谱-质谱联用等方法。但这些方法都存在样品前处理复杂、费时、费力、费钱的缺点。而TRFIA是一种新兴检测方法, 对兽药残留检测具有灵敏度高、特异性好、检测时间短、安全、样品前处理简单方便等优点, 应用前景看好。Bacigalup等[14]用Eu3+-BCPDA标记单抗兔Ig G, 建立了不同脂肪含量的生牛奶中氨苄青霉素的TRFIA, 结果得出其灵敏度为1 ng/m L。宓晓黎等[5]利用TRFIA检测环丙沙星, 得出检测灵敏度为0.002μg/L, 比ELISA的灵敏度高了3个数量级。李丽华等[16]用TRFIA检测环丙沙星, 其检测限为0.5μg/L, 线性范围 (IC20~IC80) 为1.14~28.85μg/L, 该法可用于检测蜂蜜和牛奶中的环丙沙星。王超等[17]利用TRFIA检测莱克多巴胺 (RAC) 残留, 其灵敏度为0.01ng/m L, 可应用于食品检测。
2.3在寄生虫病检测中的应用TRFIA目前主要用于人的人畜共患寄生虫病检测。既然可用于人的检测, 那么相信在不久的将来, 会有动物寄生虫病TRFIA检测出现。Aceti等[18]用TRFIA诊断包虫病 (棘球蚴病) , 与ELISA相比, TRFIA的阳性检出率达95.1%, 高于ELISA法的81.4%;在定位囊肿的敏感性方面, TRFIA也较ELISA高。Kapel等[19]用夹心法TRFIA检测抗隐孢子虫类抗体, 结果显示:该法的重复性和特异性均很好, Ig A、Ig M和Ig G的批内变异系数仅为5.1%、4.6%和5.8%, 同样的粪便样本的批内变异系数也只有9.4%、10.5%和12.2%, 特异性为100%, 敏感性分别为83%、67%、33%。
2.4在致病微生物检测中的应用TRFIA已广泛应用于人多种传染病的诊断和研究, 包括甲肝病毒 (HAV) 、乙肝病毒 (HBV) 、脑炎病毒、流感病毒、轮状病毒、免疫缺陷病病毒及出血热病毒等。Yu等运用TRFIA技术测定苹果汁中大肠杆菌O157∶H7的数量, 结果最低检测量达到了10 CFU/m L, 并且当大量的大肠杆菌K-12共存时, 也不会影响大肠杆菌O157∶H7的检测灵敏度。用TRFIA检测动物致病性细菌和病毒的研究还在初期起步阶段, 相信不久将有商业化产品面世。
3结语
TRFIA是近些年新兴起来的一种超微量快速免疫检测技术, 它集合了酶标记技术、放射标记技术和同位素标记技术的优点, 具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、无污染, 测定范围宽, 试剂盒寿命长, 操作简单和非放射性等优点, 越来越受到各领域科研工作者的关注, 应用范围也已渗入多个领域。国外目前已有多种商品化试剂推出, 国内在人医学方面已开展多项检测并成功地应用到了临床。在兽医领域, 用TRFIA检测兽药残留、真菌毒素等正逐步得到重视和应用, 相信TRFIA不久将成为微量检测动物病毒病、细菌病等致病微生物的重要手段。
摘要：时间分辨荧光免疫分析技术是一种新型的超微量免疫标记分析方法, 集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身, 具有无放射性、无背景光干扰、灵敏、稳定、线性范围宽、操作简便、分析速度快等优点, 已广泛应用于临床医学检测、食品安全快速检测等领域。本文就时间分辨荧光免疫分析的原理及在兽医学中的应用作一综述。
时间分辨法 篇6
对于很多信号, 由于它的低频部分能够较好地反映信息变化的一致性,因此通常会更受人们的关注。 以人类的声音为例, 低频信息蕴含了语义,高频信息表达了语调。 此时即使高频信息被剔除,也不会影响人们正常的交流。 同理,在金融时间序列分析当中,一些重要的经济规律也被隐藏在月、季等长周期的数据变化当中。
近20年来,小波分析作为一种具有时频特性的序列分析方法,日益被广泛地应用于金融工程研究领域。 该理论能够很好地通过尺度、小波函数的伸缩与平移,对非平稳的原始数据按不同的时间刻度进行分解,并自适应地调整时频窗宽,分析数据在各时频的局部细节特征。 然而,目前小波分析操作主要通过Matlab的小波工具箱完成。 对于很多不熟悉复变函数和小波理论的金融从业人员,拿着软件直接生成的结果,往往不知所措。 针对上述问题,为了更好地揭示金融时间序列的多分辨分析过程,本文旨在通过详实的例子, 对整个小波分解与重构进行详细的描述性研究,来帮助读者透析其中的原理。
1离散小波变换的基本原理
离散小波变换是一个对金融时间序列进行不同周期的分解与重构的过程。 其中第一步是小波分解,也就是将原始信号乘以特定的低通或高通滤波器,以此实现对原始信号的分解,其中经过低通(尺度)滤波器处理后的信号称为“尺度系数”,它能反映数据变换的长期趋势;经过高通(小波)滤波器处理后的信号称为“小波系数”,它蕴含了信号对长期趋势的偏离。 本文利用余弦波和高频噪声构造出一个数量为1 000的原始信号X。 该信号通过低通与高通滤波,可以得到数量各为500的小波系数s1与尺度系数d1。 具体过程如图1所示。
观察图1可以看到:由于尺度系数s1为原信号在尺度2上的非重叠平均,因此它保留了与原信号相似的形状;小波系数d1则反映了实际信号对每一均值的偏离。 人们形象的将这一过程称之为“下抽样”。 选取不同的尺度和小波类型可以构造出形式各异的小波分解。 例如,图1中的第一层小波分解选取的就是尺度为的Harr小波。 目前常见的小波还有Mexican Hat、Guass等在内的15种。 此外,图1中的小波分解还可以继续下去,例如对尺度系数s1的再分解能够得到尺度为22的小波系数d2和尺度系数s2, 两者能够在更长周期上反映信号的均值变化和偏离程度。
第二步就是在小波系数与尺度系数的基础上对原始信号进行重构, 即将原始信号表示成一个常数向量SJ和J个常数向量
其中,X为原始信号,SJ为第J层光滑,Dj代表第j层小波粗糙。 上述过程定义了序列的一个多分辨分析。
2离散小波变换的数学描述
为了解释小波变换的基本原理, 本文采用一个简单的金融资产价格序列f(t)=(2,6,5,11,8,5,2,4)对整个离散小波变换过程进行详细的描述性研究。 出于简化的目的,这里采用的是形式最为简单的Harr小波。 该小波在(-1,0]和(0,1]的区间上分别取值,在其余区间取值为0。
2.1离线小波变换的分解
根据f(t)的序列长度和Harr小波滤波器的特点,可以很容易地构造出如下第一层小波分解的尺度滤波器scale1和小波滤波器wave1:
然后将序列f(t)乘以尺度滤波器的转置scale1T可得:
其中,s1为该序列的第一层小波分解尺度系数。 观察s1不难发现,它是由原序列f(t)的4组非重叠样本平均值再乘以21/2得到。 序列f(t)的第一层小波分解尺度系数d1则是由f(t)乘以小波滤波器的转至wave1T得到:
其中,小波系数d1中的每个元素都等于原序列f(t)中非重叠相邻两项前后差值的平均值再乘以21/2。 观察公式(3)和(4) 不难发现,尺度系数与小波系数的长度均只有原序列的一半。 另外,在求解小波和尺度系数的过程中之所以要乘以21/2主要是为了让尺度滤波器和小波滤波器满足规范正交性,即矩阵的转置等于其逆矩阵。
一层小波分解完成后, 还可以对第一层尺度系数s1进行二次分解,得到二层小波系数d2和尺度系数s2,其具体计算过程如下:
同理还可以对该序列进行第三层的小波分解, 得到三层小波系数d3和尺度系数s3:
2.2离散小波变换的重构
小波分解只是完成了整个离散小波变换的一半, 剩下的一半则是在保留原始信号f(t)全部信息的基础上实现从小波分解到原始信号的重构。 该过程在小波变换中又被称之为离散小波变换的逆变换(IDWT)。
根据前面小波分解过程可知, 尺度滤波器和小波滤波器均满足规范正交性,即矩阵的转置等于其逆矩阵。 因此可以通过第一层小波系数d1乘以第一层小波滤波器wave1和第一层尺度系数s1乘以第一层尺度滤波器scale1,重构原始序列:
f(t)=s1*scale1+d1*wave1=A1+D1(7)
其中,A1=s1*scale1是对原始信号的第一层近似, 又被称之为第一层光滑;D1=d1*wave1则蕴含了原始信号在第一层次变换上的细节,因此又被称之为第一层粗糙。 同理我们可以用二层小波系数d2和尺度系数s2来重构第一层小波系数s1, 再通过公示(7)求出第一层光滑A1:
A1=(s1*scale2+d2*wave2)*scale1=A2+D2(8)
其中,A2=s2(scale2*scale1,D2=d2*wave2*scale1。此时,原始信号f(t)实现了二层的多分辨分析过程。
f(t)=A1+D1=A2+D2+D1(9)
由于f(t)具有三层小波分解,所以A2还可以由第三层小波系数d3和尺度系数s3按如下形式进行构造:
其中,s3*scale3+d3wave3=s2。 至此,原始信号f(t)的三层多分辨分析过程全部完成。
f(t)=A3+D3+D2+D1(11)
其中,式(11)中各细节Dj,j=1,2,3以及第三层光滑A3的具体数值均由表1所示。
观察表1可以看到, 每一层细节与光滑的变量个数均与原始信号相同, 并且每一列1~4行数值之和都会与原始信号对应数值相同,进而验证了式(10)的正确性。
3多分辨分析在金融时间序列中应用
最后,本文以沪深300股指期货实际对数收益率为样本,对其进行三层Haar小波多分辨分析。 样本数量为600,使用工具为Matlab小波工具箱。 具体涉及到的命令有3个。 1是用[C, L]= wavedec (f,3,’Haar’) 命令完成小波分解, 并将全部分解信息存入到C,L两变量当中, 其中f为待分析金融时间序列,3为多分辨分析层次,Haar为小波类型。 2是用A3=appcoef(C,L,’Haar’, 3)命令生成三层小波变换光滑。 3是用D3=detcoef(C,L,3)、D2= detcoef(C,L,2)和D1=detcoef(C,L,1)命令分别生成一至三层的小波变换细节, 至此沪深300股指期货实际对数收益率的三层Haar离散小波多分辨分析过程全部完成,最后结果如图2所示。
另外,金融时间序列的离散多分辨分析也可以通过小波GUI (Graphical User Interface)来实现。 由于GUI采用的是菜单操作界面,因此使用起来会更方便、更快捷。
摘要：小波理论近年来已经被广泛应用于金融时间序列分析,然而实践证明想要掌握好该方法并不容易。本文以简单的时间序列为样本,详细地描述了小波分解与重构的全部过程,意在通过详实的步骤,揭示出小波多分辨分析的本质。最后,实际演示了如何运用Matlab小波工具箱对包含600个交易数据的金融时间序列进行多分辨分析。
时间分辨法 篇7
1 资料和方法
1.1 标本来源
门诊皮肤性病科初诊梅毒筛查及复诊梅毒复检患者;住院手术输血前检测患者血清26份, 同时用TRFIA、TPPA和RPR方法检测, 并且按照实验室规定SOP文件严格操作。
1.2 试剂来源
运用TRFIA、TPPA法检测梅毒特异性抗体, RPR法检测梅毒非特异性抗体。TRFIA法运用上海新波公司提供的仪器和仪器专用试剂;TPPA试剂来自日本富士株式会社;RPR试剂购自兰州生物制品研究所, 质控品购自上海仪器厂家提供供。试剂和质控品都在效期之内。
1.3 测定基本原理
TRFIA基本原理是蛋白质、激素、多肽、抗体等用镧系金属离子标记抗原和抗体, 并与时间分辨荧光仪测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量分析技术, 对液体标本中微量物质进行定量测定最后产物的荧光强度;具有灵敏度高、发光稳定、荧光寿命长、自然荧光干扰少, 标准曲线范围宽等特点目前已广泛应用临床。TPPA法是在室温下在U型板加稀释血清25μL, 分别在3、4孔加未致敏和致敏血球颗粒, 封板静止2h;RPR法是在反应板加血清50μL再滴加心脂抗原振荡10min。
1.4 统计学处理
采用χ2检验, P<0.05为差异而统计学意义。
2 结果
TRFIA实验26份血清标本阳性11例, 阳性检出率12.7%;TPPA实验26份血清标本阳性11例, 阳性检出率12.5%;RPR实验26份血清标本滴度出现颗粒阳性者9例, 阳性检出率9.5%。
3 讨论
梅毒病程漫长, 早期侵犯生殖器和皮肤, 晚期侵犯全身器官, 并产生多种多样的症状和体征, 通过性行为在人群中相互传播, 危机下一代, 也有极少数患者通过接吻、哺乳。接触有传染性损害病人的日常用品而被感染, 危害性大因此必须予以高度重视。
TRFIA法检测同TPPA、RPR法相比TRFIA检测梅毒特异性抗体适用于批量梅毒生物学假阳性的排除和患者的初步诊断。对疗效判断和预后评价应用可能受一定限制[3]。
TPPA法是在TPHA试剂基础上建立起来的一种新试剂, 具有操作简单, 敏感性强, 特异性高的特点, 所以大多实验室将其用作确证试验, 业界认为TP-ELISA检测效果类同TPPA[4]。
RPR (快速血浆反应环状卡片试验) 是20世纪80年代问世的非特异性抗体, 主要用于二期梅毒诊断。对一期梅毒阳性率在75%~85%, RPR可用于梅毒普查, 抗体过量易出现假阴性反应, 并且此方法必须手工操作, 肉眼观察结果, 出现阳性必须用TPPA或TRFIA法进一步确证, 而且存在一定生物学阳性[5], 是梅毒治疗预后疗效观察、复发或再感染的检测方法, 患者经过治疗后反应素消失或阴转, 因而用于梅毒的诊断和疗效判断, 可是有时也需用特异性抗体测定试验排除因其它疾病, 如结核、类风湿、红斑狼疮、麻风等血清中也含有抗磷脂抗体的因素所致的生物学假阳性。
以上试验充分的比较了梅毒血清学三种检测方法的可靠性, 同时对26份血清标本用TRFIA法和TPPA法检测特异性抗体, 以及用RPR方法检测非特异性抗体。TRFIA检测与TPPA检出阳性符合率几乎100%。符合程度比较高。同时应用TRFIA法检测避免了用TPPA检测时由于用手工和肉眼观察时的室内光线而出现遗漏, 得出结论两种检测方法可以互补存在, 同时发展。RPR检出阳性9例, 检出阳性率9.5%, 比较与特异性抗体阳性检出率, 差异明显, 时间分辨荧光免疫分析仪的应用结果表明, 在检测梅毒特异性抗体时, 操作流程比TPPA检测更安全、加样更准确、判读灵敏度高, 而且时间分辨荧光免疫分析仪整体智能化程度较高, 减轻工作人员的负荷, 在今后的实验室发展趋势中会更加适应。
摘要：目的:探究梅毒螺旋体感染者在血清中的免疫学标志物, 实验室应用时间分辨荧光免疫法测定梅毒螺旋体特异性抗体S/CO值与TPPA颗粒凝集法, 及梅毒非特异性抗体RPR法结果的灵敏度、吻合程度、特异性。以掌握梅毒检测方法适用性和临床诊断意义。方法:门诊及住院26例就诊患者分别用TRFIA、TPPA、RPR法同时测定含量及滴度, 比对检测结果 的不同。结果:TRFIA测定大于参考值11例, 阳性率12.7%;TPPA阳性11例, 阳性率12.5%;RPR阳性9例, 阳性率9.5%。结论:时间分辨荧光法与TPPA法联合应用对输血筛查;临床诊断及预后疗效利于血液质量的保证, 质量成本也更为经济。
关键词：时间分辨荧光免疫技术,梅毒抗体
参考文献
[1]郭兑山, 宁平, 方德强, 等.梅毒螺旋体抗体IgG ELISA和RPR试验的比较[J].中国输血杂志, 2001, 14 (2) :88
[2]陈华根.梅毒的实验室诊断及临床应用[J].实用医技杂志, 2010, 17 (3) :245-246
[3]李金明.临床酶免疫测定技术[M].北京:人民军医出版社, 2005, 163
[4]叶顺章, 邵长庚, 主编.性病诊疗与预防[M].北京:人民卫生出版社, 2002, 11-12
时间分辨法 篇8
1 检测原理
时间分辨荧光免疫分析方法与传统标记方法的区别是其应用稀土离子作为标记物, 最常应用的是镧系元素中的铕 (Eu) 和钐 (Sm) 。在接受激发光照射后, 普通荧光物质的衰变时间仅为1~10 ns, 而稀土离子荧光寿命比其长100~1 000倍不等, 待样品中杂的荧光猝灭后, 再测量标记物的荧光强度, 可以消除自然本底荧光的干扰。此外, 测量时激发光是380 nm, 而发射光是620 nm, 发射光与激发光的Stock光谱位移大, 以上2种因素极大地提高了该方法检测信噪比[1], 使得该方法具有极高的检测灵敏度。TRFIA应用的是微孔板包被抗原或抗体作为固相载体, 结合了待测样本中的待测物质后, 再加以Eu标记的抗原或抗体, 经洗板后, 洗去游离的Eu标记物, 微孔板内形成了固相抗体 (抗原) -待测抗原 (抗体) -Eu标记抗体 (抗原) 复合物, 加入增强液后, 与上述复合物中的Eu形成新的螯合物, 经激发光照射后, 测量荧光强度, 样本中的物质的含量根据校准曲线由仪器自动计算出来。
2 日常操作与维护保养
2.1 开关机顺序
开机顺序:先打开板处理器电源, 接着打开样本处理器电源, 最后双击计算机上的auto DELFIA1235图标, 启动程序, 仪器随后进行模拟进样、冲洗样品针、模拟加试剂、模拟振荡、模拟加增强液等一系列自检步骤, 待自检无误后, 方可进行样本测试, 若自检不通过, 仪器会给予提示, 待故障解决后方可使用。关机顺序:先关计算机程序, 再关样品处理器电源, 最后关板处理系统的电源。使用时须注意:不能随便改变开关机顺序, 因为仪器设备的总的信号处理系统集成在板处理器上, 必须先打开板处理器的开关, 再打开样品处理器的开关, 否则可能烧坏电路板。
2.2 样品检测前准备
在检测前, 应先检查系统试剂 (增强液、洗板液及蒸馏水等) 是否够用 (若不够用, 应及时补充) , 再排空废液桶中的废液, 待所有准备工作做好后方可开始样品检测。
2.3 每日、每周维护
由于仪器每次开机时都会自检, 自检过程中对仪器的各个部件进行系统详细的检查, 所以每天开关机都相当于对仪器进行一次维护。每天用完后应进行维护, 包括样品针的冲洗、擦拭仪器外部的灰尘等。每周维护, 除了做好每天维护的工作外, 在关机状态下, 向仪器的3根轴上 (样品加样器轴、X轴、Z轴) 涂抹少量随机配送的润滑油, 然后手动推动轴, 使润滑油均匀分布, 使仪器运行自如。
3 常见故障及处理
3.1 洗板针堵孔
3.1.1 故障现象
洗板机针孔堵孔, 洗板无法进行。
3.1.2 故障分析
洗液主要成分为含盐类的溶液, 在每次洗完板后会有少量洗液残留在针孔内, 当水挥发后, 剩下的盐会形成结晶。
3.1.3 故障排除
在仪器待机状态下, 打开板处理器前盖, 卸掉增强液瓶, 托起洗板器, 移到洗板的位置, 从仪器上卸下洗板器, 用随机附带的桶针捅针孔, 然后用自来水冲洗, 故障即可排除。为了预防这类现象的发生, 建议每次使用完机器后, 点击菜单栏中的maitance中的rinse项, 用系统试剂中的蒸馏水对针进行冲洗, 以防止残留在针孔内的洗板液形成盐类结晶。
3.2 电磁阀故障
3.2.1 故障现象
洗板时, 洗板器可向微孔内注入洗板液, 但不能将微孔板中的废液吸出, 从而使得微孔板中的废液溢到废液槽内, 浮标飘起, 顶到压力传感器, 导致仪器报警。
3.2.2 故障分析
对于这种情况, 在排除非洗板机堵孔的原因后, 主要考虑电磁阀出现故障。因为洗板是在电磁阀的驱动下, 利用液体的正压 (将洗液由洗液桶注入到微孔板) 和负压 (将微孔板内的废液排到废液桶) 进行的。
3.2.3 故障排除
在仪器处于关机状态下, 卸下连接洗板器进水的电磁阀 (位于增强液后面的3个电磁阀的中间) , 然后往进水口注入适量的蒸馏水, 手动按动电磁阀芯, 使其偏向另一侧, 观察注入的水能否全部流出, 如果没有水流出或只流出部分, 则可判断电磁阀损坏, 应更换新的电磁阀。
3.3 加样针的位置调整
3.3.1 故障现象
仪器移动、搬迁后, 仪器的加样针与96孔微孔板、装载在样品架上的试管以及装载在标准品架上的标准品瓶的位置错位。
3.3.2 故障分析
由于仪器是由样品处理系统和板处理系统2部分组成, 当仪器移动后, 原有的坐标方位被打乱, 必须要重新调整加样针的位置, 否则仪器无法正常工作。
3.3.3 故障排除
这里仅介绍加样针与样品试管架位置的校正。加样针与微孔板的位置及加样针与校准品的位置的校正与此类似。加样针与装载在样本架上的试管位置的校正:开启计算机和仪器各部分的电源, 但并不启动计算机的auto DELFIA1235程序。开始菜单→程序-AutoDELFIA Service→AutoDELFIA Service Program。该程序中有2个图标, 1297-sample processor代表样品处理器, 1235-plate processor代表板处理器。点击1297, 进入程序809c 196 Development System, 点击菜单栏中load, 待加载完毕后 (自对话框弹出至消失) 再点击init, 弹出对话框“sample tip check”页面“will tips in wash tubes?”, 点击0=no, (自对话框弹出至消失) , 弹出“Sample processor fill tubing[0=no]”对话框, 点击0-ok。接着点击菜单栏unit→arm, 弹出对话框“is switched off”, 点击ok。再点击菜单栏params→coord→“If you are using a test probe, please install it on rod 3”, 点击ok。菜单栏中的“std tray”、“wash 1”、“wash 2”、“plate”、“rack”分别代表的是样品针与标准架、洗液1、洗液2、板和样品试管架的位置。调整位置时, 先点击Increment“进制”, 即样品针每次前进的长度, 以μm记, 再分别点击“Tip up”、“Tip down”、“Tip in”、“Tip out”、“Tip left”、“Tip right”, 分别代表样品针向上、向下、向里、向外、向左、向右各个位置移动。然后分别调整R1C1、R1C4和RIC2的位置 (R代表rule, C代表column) , 最后将调整结果保存即可。
工作人员在日常工作中不仅要熟练操作仪器, 而且还应了解仪器的原理和构造, 掌握仪器维护和保养知识, 发挥仪器的最佳性能, 这样既能减少仪器的故障发生次数, 又能延长仪器的使用寿命, 同时, 懂得常见故障的排除方法后, 能够及时进行维修, 这对提高医疗服务水平、减少医患纠纷意义重大。
参考文献