人乳头瘤病毒基因分型（精选八篇）
人乳头瘤病毒基因分型 篇1
关键词：已婚女性,宫颈上皮细胞,人乳头瘤病毒,基因分型,基因芯片技术
宫颈癌是威胁全世界妇女健康的重大问题,居全球女性恶性肿瘤发病率的第2位。因此,早期发现、早期诊断、早期治疗是降低宫颈癌发病率和死亡率的关键。现研究已证实,高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要致病因素[1~5]。世界卫生组织新近提出HPV感染性疾病的诊断不仅要有临床和病理学诊断,还应具有基因水平的检测才能确诊。HPV基因分型检测技术的开展,将为临床和流行病学的研究提供客观、准确、科学的依据[1~3]。现采用基因扩增及基因芯片检测技术,对2000例已婚女性宫颈上皮细胞标本进行23种常见的HPV基因检测,以了解南京地区已婚女性宫颈上皮细胞中HPV感染和基因型分布的情况,以便为宫颈癌的防治、高危人群的筛查、HPV疫苗的研发以及流行病学研究提供数据资料。同时也为我国HPV感染基因数据库的建立提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
收集2011年4~10月江苏省南京市扬子石化集团公司的2000例已婚健康女性职工的宫颈上皮细胞标本,年龄23~56岁,平均40.1±13.2岁,其中年龄20~29岁40例,30~39岁594例,40~49岁1258例(40~44岁691例,45~49岁567例),50~59岁108例。受检者均无宫颈环切和锥切手术史。由两位经验丰富的技术人员按照说明书规范操作。
1.2 仪器与试剂
HPV基因分型检测试剂盒(由深圳亚能生物技术有限公司提供);基因扩增仪为新加坡生产的Gene Amp PCR system 2400型;分子杂交仪为江苏省兴化市分析仪器厂生产的FYY-3型;高速冷冻离心机为德国生产的Eppendorf 5810R型;生物安全柜为江苏省苏州市安泰空气技术有限公司生产的BHC-1300ⅡA2型;青岛海尔有限公司生产的-20℃冰箱等。显色液需新鲜配制,使用时所需浓度加蒸馏水配制。
1.3 方法
1.3.1 标本的采集及保存
采用窥阴器或阴道扩张器充分暴露宫颈,用棉拭子擦去宫颈口过多的分泌物,将采样宫颈刷置于宫颈口,顺时针旋转宫颈刷4~5圈,慢慢抽出,以获得足够的宫颈上皮细胞标本,然后沿刷柄折痕处折断刷头,将宫颈刷头部放入洗脱管中,旋紧洗脱管盖,做好标本标识,保持采集管直立,放入-20℃冰箱保存待测。
1.3.2 DNA的提取
将宫颈刷头充分漂洗后,把洗脱液全部转移至1.5 ml的离心管中,随后加入裂解液50μl,充分振荡混匀,在金属浴中加热100℃10分钟,立即13000 r/min离心10分钟后,离心半径为7 cm,取中间层DNA溶液待用。
1.3.3 PCR扩增
将PCR反应管(20μl)3000 r/min离心4秒后依次编号,分别加入2μl矿物油和已提取的DNA样品、空白对照、阳性对照各5μl,反应体系总体积27μl,3000 r/min离心4秒,上机扩增。扩增条件为50℃15分钟,95℃10分钟,94℃30秒,42℃90秒,72℃30秒,共40个循环,72℃5分钟。
1.3.4 杂交、孵育和显色
取15 ml离心管,放入标有样本编号的膜条,加入5~6 ml A液(2×SSC,0.1%SDS)及所有27μl PCR产物,拧紧管盖,将离心管放入沸水浴中变性10分钟(确保A液液面完全位于沸水浴液面之下),取出并立即放入51℃杂交箱内杂交1.5小时,同时取50 ml离心管,加入50 ml B液(0.5×SSC,0.1%SDS),于杂交箱预热。取出膜条,转移至已预热的B液中,51℃轻摇洗涤5分钟,将膜条转移至孵育液(A液∶POD=2000∶1,4张膜可用6μl POD配制成12 ml孵育液),室温孵育30分钟,弃去孵育液,用A液室温轻摇洗涤2次,每次5分钟,再用C液(0.1 mol柠檬酸钠)轻摇洗涤2分钟;显色液(C液19 ml,TMB 1 ml,30%H2O22μl)中显色至少30分钟;转移至去离子水中浸泡即可观察结果。
1.4 结果判定
(1)实验后得到的每张膜条在PC位点必须出现蓝色显示信号;(2)阴性质控品除PC位点出现蓝色显色信号外其余位点均不出现蓝色显色信号;(3)阳性质控品除PC位点出现蓝色显色信号外,必须在相应HPV基因型位点上出现蓝色显色信号;(4)每张膜条上除PC位点外有23种HPV型别(6、11、16、18、31、33、35、39、42~45、51~53、56、58、59、66、68、73、MM4、83型)的杂交显色位点,除PC位点显色外,肉眼可观察23种HPV型别位点上呈现蓝色小圆点为阳性信号;(5)出现一个阳性信号为单一型别的感染,出现两个阳性信号为二重型别的混合感染,出现两个以上的阳性信号为多重型别的混合感染。
1.5 统计学分析
应用统计软件包SPSS 13.0对相关数据进行统计学处理。
2 结果
2.1 单一型别和混合型别的感染情况
2000例已婚女性宫颈上皮细胞标本中23种HPV基因分型检测检出21种HPV基因型别(除44型和MM4型外),其HPV阳性感染者205例,阴性者1795例,HPV感染率为10.25%(205/2000),其中单一型别的阳性检出率为8.80%(176/2000)。单一型别的感染中HPV43型为33例是最主要的感染型别,其阳性检出率为1.65%(33/2000);其次HPV58型为22例,其阳性检出率为1.10%(22/2000)。混合型HPV感染29例,其阳性检出率为1.45%(29/2000);其中HPV16型+X型8例及16型+X型+X型2例是混合型感染的主要型别,占混合型感染的34.48%(10/29);其次是HPV43型+X型6例,43型+X型+X型3例,占混合型感染的31.03%(9/29)。单一型别和混合型别感染出现频率前5位的HPV型别为43型42例、16型28例、58型25例、33型21例及18型18例。205例HPV阳性感染者中单一型别的HPV感染176例,二重型别的HPV感染24例,三重型别的HPV感染5例。单一型别的感染和重叠感染的比例数为6∶1。
2.2不同年龄阶段的HPV感染率
2000例已婚女性中,29岁以下的40例,HPV感染率10.00%(4/40);30~39岁的594例,HPV感染率7.24%(43/594);40~49岁的1258例,HPV感染率11.45%(144/1258),其中40~44岁的691例,HPV感染率10.85%(75/691),45~49岁的567例,HPV感染率12.17%(69/567);50岁以上的108例,HPV感染率12.96%(14/108)。
2.3 高危型HPV感染情况
所有205例HPV感染阳性的南京地区已婚女性中有160例(除6型2例、11型2例、42型8例、43型33例外)都伴有高危型HPV感染,其总感染率为8.00%(160/2000)。
3 讨论
HPV属乳头瘤病毒科,是一类特异感染人类上皮、黏膜的微小共价双链环状DNA病毒。现已发现乳头瘤病毒及HPV有二百多个型别、亚型及变异体,至今已鉴定出一百多种[1~5]。分子流行病学调查显示,高危型HPV导致宫颈癌的概率约为1.00%,而低危型HPV导致宫颈癌的概率仅为0.10%[5]。本研究选择了23种常见致癌型的HPV作为研究的感染源,采用高通量的分型检测技术对南京地区2000例已婚女性宫颈上皮细胞标本进行了23种HPV基因分型的研究,并对HPV基因感染型别的比率作一分析和总结。
由于女性在35岁以后开始进入宫颈癌的高发期,尤其近十年来宫颈癌的发病人群呈现低龄化的趋势,发病率以每年2%~3%的速度递增。临床研究发现,早期宫颈癌的治愈率可达90%以上,于是早期诊断、早期治疗对预防、治疗宫颈癌有着非常积极重要的意义[6,7]。因此,弄清我国各地区、各民族群体中HPV感染基因型分布及基因谱的流行趋势是一件非常重要而且紧迫的工作。这将为我国开发出适合本国各地区、各民族群体HPV感染的基因诊断试剂和疫苗提供非常重要的数据和资料。
本资料显示,2000例已婚女性宫颈上皮细胞标本中23种HPV基因分型检测检出21种HPV基因型别(除44型和MM4型外),其总的HPV感染率为10.25%。提示(1)我国南京地区已婚女性宫颈上皮细胞中即有单一型别的HPV感染,也有混合型别的HPV感染,以单一型别感染为主,混合型别感染为辅。(2)南京地区2000例已婚女性的自然群体中HPV总的感染率为10.25%,表明HPV在南京地区为中等以上的流行度,应密切关注其流行趋势(流行度及基因谱的变化)。(3)南京地区已婚女性宫颈上皮细胞HPV感染存在着两个高峰,一个在29岁以下,一个在50岁以上。以往已婚女性在50岁和60岁出现两个年龄段宫颈癌患病高峰,现发现较多的29岁以下宫颈癌及其癌前病变的患者。由于女性在35岁以后开始进入宫颈癌的高发期,本研究HPV感染率从30岁以上的7.24%到40岁以上的11.45%(40~44岁的10.85%,45~49岁的12.17%),再到50岁以上的12.96%,呈现出逐渐攀升的曲线,达到了50岁以上宫颈癌发病高峰期和HPV高感染期,且宫颈HPV高感染率与宫颈癌高发病率的年龄段相吻合。而29岁以下的感染率为10.00%,提示发病人群呈现低龄化的趋势。(4)本研究检出伴高危型HPV感染的160例感染者,而这些高危型别的HPV感染往往是宫颈癌前病变及宫颈癌的主要诱发因素。因此,对所有伴有高危型别HPV感染的已婚女性对其进行HPV感染型别的追踪检测就显得非常必要,如果她们成为持续性的感染者,就可成为HPV的传染源,而且宫颈癌前病变及宫颈癌发生的风险将会大大增加,应引起我们高度的重视。(5)单一型别和混合型别感染出现频率前5位的HPV型别为43型、16型、58型、33型及18型,这5种型别是南京地区已婚女性宫颈上皮细胞感染出现频率最高的类型,也是我们重点关注和监测的型别。(6)本研究发现单一型别的HPV感染除44型和MM4型外,只是数量上的增加,而混合型别的HPV感染除44型和MM4型外,不但数量上增加,而且组合型别的多样化也不断地增加,暂未发现四重型别的混合感染。由于HPV各型别之间无交叉免疫保护作用,HPV的重叠感染呈现多重化的趋势,目前,HPV的重叠感染仍以二重和三重感染为主。据报道,HPV单一型别的感染可使宫颈癌的发病风险增加19.9倍,而多重型别的HPV感染可使宫颈癌的发病风险增加31.8倍。重叠感染的HPV病毒载量高于单一型别HPV感染,癌变相关风险更大,是宫颈癌发生的一个非常重要的危险因素,并且致病力更强,病变发展更快,复发率更高[5~7]。提示体检医生及临床妇产科医生应该加强对多重型别HPV感染女性及患者的随访跟踪和监控。(7)HPV单一型别的感染和重叠感染的比例一般约为3∶1,重叠感染有多重化的趋势。本组资料中HPV单一型别的感染和重叠感染的比例约为6∶1,比一般的3∶1要高1倍,这可能和受检者均为健康体检已婚女性有关。
我院病理科已对宫颈及肛门区进行了近八年的HPV研究,正在筹建南京地区及江苏省宫颈及肛门区HPV感染的细胞和组织基因数据库。现研究表明,女性生殖道存在着一条HPV感染通道,宫颈是其通道中HPV感染率最高的部位,也就是最易感部位。虽然HPV仍然有许多问题有待继续探索,但是有关HPV致病的研究已表明高危型HPV的持续感染是宫颈癌发生的最主要的病因[8,9]。随着研究的不断广泛和深入,HPV的致癌机制逐渐被认识,由于各种HPV疫苗的开发和应用是现阶段研究的热点之一,所以建立对HPV流行趋势和与宫颈癌发生发展演变关系进行长期监测的数据库是一项非常紧迫的任务。因为该数据库的建立将为宫颈癌及HPV感染相关疾病的防治提供非常宝贵的分子流行病学的基础资料,更有利于政府部门对公共卫生决策的制定。又由于HPV可引起人类的许多恶性肿瘤,此类疫苗具有广阔的应用前景。随着人们对HPV致癌、致瘤机制日益深入的研究,将有助于预防性和治疗性多价疫苗的成功开发和应用,可逐渐减少宫颈癌及其他癌对人类健康的威胁,而宫颈癌很可能会成为人类第一个可进行有效预防的恶性肿瘤,这将造福于广大的女性。
参考文献
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人乳头瘤病毒的真情告白 篇2
我的家族成员很多，有100多个，但实际上给宫颈造成麻烦的多半是HPV16和HPV18两个成员而已。
我非常自豪，因为我成就了一名叫豪森的德国老伯，他发现我（HPV）与宫颈癌之间存在明确因果关系，并由此获得了2008年度的诺贝尔医学奖。
其实，我只是个“小角色”而已，与其他 “大腕”，如引起肝癌的乙型肝炎病毒HBV和丙型肝炎病毒HCV，以及引起艾滋病的人类免疫缺陷病毒HIV相比，我只在女性朋友的宫颈上闹点事儿，而且只要您稍有警惕（每两年做1次宫颈癌筛查），我就难成大事。
至于我是如何缠上您的，有时是天知地知您知我知，但很多时候是真的谁也不知。不过通常是通过性行为，但接触不干净的卫生洁具和用品后也可能沾染上我。
其实，并不是一沾上我就会得宫颈癌，只有长期的、持续的、高负荷地与我亲密接触，才会引起宫颈的癌前病变和宫颈癌。
据说，40%的女性在一生中的某个时期都会与我有过接触，但我通常作为访客出现，多半会自动离开。不过如果您的状态不好（免疫力下降）、环境适宜（多个性伴侣、不洁性生活），我就会在您体内定居！
如果妇科医生发现我缠上了您，您当然会紧张和不快，但是，从另一个角度来说，对您也是一件比较幸运的事情。因为，我被暴露后，我的家族的后续破坏工作多半就做不成了。
那么，什么时候要怀疑到我并对我展开调查呢？如果做宫颈薄层液基细胞学检查（即TCT）提示有意义不明的非典型鳞状细胞（称为ASCUS）或者更高程度的病变，那就要进行HPV检测了。如果证实我不在现场（即HPV阴性），您就大可以放心，半年之后复查TCT即可;如果证实我确实在现场（即HPV阳性），您需要进一步检查，做阴道镜和活检。如果TCT发现为更高级别的病变，我就基本应该出来自首了，检查只是留底备案而已。
对我进行调查，有几个途径：一是宫颈薄层液基细胞学检查（TCT）的报告单上会提示;二是其他方法，报告HPV16、HPV18阳性;三是杂交捕获的人乳头瘤病毒检查（HC2），除了报阳性之外，还报具体数值（是半定量，和HPV的量有一定相关性，但不绝对平行），是目前最先进的检查方法。
如果准备怀孕的妇女沾染上我，我建议您还是先把我的大部队打发走了之后再怀孕（HPV 值明显降低）。因为潜伏下来的少量成员一般不会影响妊娠结局。
即使我已经给您带来了伤害（如各种类型的宫颈癌前病变），您仍然是可以搞定我的。狂轰烂炸的攻击（各种针对宫颈病变的物理治疗和锥切）能将我的部队大部消灭，即所谓“治病即治毒”，留下的残兵一般很难组织有效进攻。而且，您自身的免疫能力有可能最终将我“请出”。
基本可以负责任地说，目前还没有口服药物能对付我。在宫颈局部使用干扰素可能有一定效果。目前西方国家已经开发出了新式武器，即治疗性HPV疫苗和预防性HPV疫苗（主要针对HPV16和HPV18）。据他们官方发布的消息，效果还是不错的。
总之，我并非可怕至极，但您的确需要关注我，否则，我真的会闹出点动静来。
人乳头瘤病毒基因分型 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2010年1—11月因各种妇科疾病就诊于我院妇产科门诊同时行HPV+TCT检查的2046例患者, 年龄28～69岁;均为非妊娠期;无子宫颈上皮内病变史及无盆腔放射史, 采用宫颈细胞刷取材, 行TCT液基制片技术细胞学检查及杂交导流技术分型检测HPV。
1.2 宫颈炎症诊断[2]
两个特征性体征, 具备一个或两个同时具备: (1) 于宫颈管或宫颈管棉拭子标本上, 肉眼见到脓性或黏液脓性分泌物 (通常称为黏液脓性宫颈炎或宫颈炎) 。 (2) 用棉拭子擦拭宫颈管时, 易诱发宫颈管内出血。
1.3 检测方法
2046例女性行HPV+TCT检查, 细胞学异常HPV 阳性者、细胞学≥ASC-US 者均行阴道镜下多点活检;对阴道镜检查不满意行颈管搔刮术。阴道镜下活检及颈管刮宫物均送病理学检查。以组织学结果为诊断标准。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析, 计数资料采用χ2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HPV检测结果
HPV检测结果显示, 2046例女性HPV阳性者859例, 其中多重感染183例, 二重感染128例, 三重感染39例, 四重感染11例, 五重感染4例, 六重感染1例。共感染HR-HPV 1119型次。按其亚型构成比依次为16、58、52、33、18、39、56、68、51、35、45。其中16型阳性构成比占40.8%。
2.2 不同HPV组别中高级别病变检出率比较
HPV (-) 组、非HPV16 (+) 组及HPV16 (+) 组宫颈上皮内瘤样病变 (CIN) Ⅱ～Ⅲ及宫颈原位癌 (CIS) /宫颈鳞状细胞癌 (SCC) 检出率比较, 差异有统计学意义 (χ2=106.04, P<0.05, 见表1) 。
2.3 不同组织学级别中HR-HPV混合感染率比较
正常/炎症组、CINⅠ组、CINⅡ～Ⅲ/SCC/意义不明的不典型腺细胞 (AGUS) 组混合感染率比较, 差异有统计学意义 (χ2=23.55, P<0.05, 见表2) 。
注:HPV=人乳头瘤病毒, CIN=宫颈上皮内瘤样病变, CIS=宫颈原位癌, SCC=宫颈鳞状细胞癌
注:AGUS=意义不明的不典型腺细胞
3 讨论
HPV感染是宫颈癌及其癌前病变的必要因子[3]。国内外学者对其基因结构与功能, 生物学行为以及HPV-DNA致瘤机制进行了大量研究。
HPV有多种基因亚型, 已确定有120多个亚型, 其中与人类生殖道感染有关的有40多种[4]。不同亚型对宫颈上皮的致病力不同, 其中HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等亚型主要与宫颈癌和宫颈上皮内瘤变有关, 被确认为高危型。HPV6、11、42、43、44等亚型与外生殖器尖锐湿疣等良性病变有关, 被确认为低危型。HPV感染率在人群中虽然比较高, 但是, HPV感染绝大多数是自限的[5], 只有少部分持续高危型HPV感染的病例, 具有发展为高度宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌的风险。HPV感染与宫颈病变的发生具备时间先后性, 一般平均感染8～24个月可引起CINⅠ、CINⅡ或CINⅢ, 再过5～10年可演变成宫颈癌。因而预防HR-HPV感染, 则可预防宫颈癌的发生。
本研究结果显示:2046例女性共感染HR-HPV 1119型次。按其亚型构成比依次为16、58、52、33、18、39、56、68、51、35、45。其中16型阳性构成比占40.%。研究结果还显示, 2046例患者HPV阳性者占42% (859/2046) , 而HPV16阳性或混合16阳性者则占总阳性率的53.2% (457/859) 。在HPV (-) 组 、非HPV16 (+) 组及HPV16 (+) 组高级别病变的检出率依次增高, 且在CINⅡ～Ⅲ及CIS/SCC组中未发现HPV阴性者。由此可见HPV16亚型的致病性远高于其他高危亚型。此外结果还显示CINⅠ组及CINⅡ～Ⅲ/SCC/ AGUS组中混合感染率均明显高于正常/炎症组。而CINⅠ与CINⅡ～Ⅲ/SCC/ AGUS组混合感染率无显著性差异。说明高危型HPV混合感染与宫颈病变有一定的关系。但并不决定病变进展程度。
摘要：目的 了解太原市女性的高危型人乳头瘤病毒 (HR-HPV) 感染及患病情况, 并对其中的相关因素进行分析。方法 选择研究期间同时行HPV+TCT检查的2046例女性, 对HR-HPV阳性及细胞学≥ASC-US者, 均行阴道镜下多点活检;对不满意阴道镜者行颈管搔刮术。阴道镜下活检及颈管刮出物均送病理学检查。以组织学结果为诊断标准。结果 受检者HPV感染率为42%, 其中HPV16阳性或混合HPV16阳性者占所有HPV阳性者比例的53%。混合感染183例, 多为二重感染。HPV (-) 组、非HPV16 (+) 组及HPV16 (+) 组宫颈上皮内瘤样病变 (CIN) Ⅱ～Ⅲ及宫颈原位癌 (CIS) /宫颈鳞状细胞癌 (SCC) 检出率比较, 差异有统计学意义 (χ2=106.04, P<0.05) 。正常/炎症组、CINⅠ组、CINⅡ～Ⅲ/SCC/意义不明的不典型腺细胞 (AGUS) 组混合感染率比较, 差异有统计学意义 (χ2=23.55, P<0.05) 。结论 HPV16亚型的致病性远高于其他高危亚型;宫颈炎症或柱状上皮异位的女性感染高危型HPV的阳性率远远高于无柱状上皮异位的正常宫颈女性。
关键词：人乳头瘤病毒,宫颈上皮内瘤样病变,肿瘤, 鳞状细胞
参考文献
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人乳头瘤病毒基因分型 篇4
关键词：人乳头瘤病毒,尖锐湿疣,感染,年龄
人乳头瘤病毒 (HPV) 属于一类具有种属特异性的嗜上皮病毒[1], 其碱基对总共有8 000个左右, 且目前临床上发现的HPV亚型总共有200余种, 而其中有40种HPV亚型与泌尿生殖道感染具有一定的相关性[2], 临床上可依据恶性肿瘤发生的危险性分为高危型、低危型两类, 且不同亚型的HPV感染的疾病预后情况具有一定的差异性。本文研究旨在探讨不同年龄段的HPV感染情况, 详情如下。
资料与方法
2013年1月-2016年1月收集HPV感染的临床检测标本200例作为观察对象, 检测标本均来自宫颈上皮肉瘤变、宫颈炎、宫颈癌、宫颈赘生物、尖锐湿疣、寻常疣等患者。年龄17~78岁, 中位数年龄 (36.59±3.78) 岁。依据观察对象年龄的不同分为不同的年龄段, 包括55岁以上、45~54岁、35~44岁、25~34岁、16~24岁。
研究方法:妇科患者采取专用的HPV取样器, 将其插入子宫颈外口的鳞柱交接部位, 连续转动5圈后停留10 s并将取样器缓慢取出, 将其放入含有保存液的商品化小瓶内, 并送往检验科, -20℃对标本进行保存, 7 d后进行HPV-DNA分型检测。皮肤科患者采用手术方法获取疣体。选用的检验试剂包括荧光定量PCR仪、医用核酸分子快速杂交仪、DNA提取试剂盒、人乳头瘤核酸扩增分型检测试剂盒等。依照HPV分型检测试剂盒的要求对标本进行分型检测。低危型包括6、11、42、43、81型, 高危型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83型。
统计学方法:将本次研究涉及的相关统计学资料纳入SPSS 19.0软件进行分析处理, 计数资料用百分比、率表示, 以χ2检验比较, 计量资料用 (±s) 表示, 行t检验, 以P<0.05为差异具有统计学意义。
结果
检测阳性率:200例受检标本中显示83例为阳性, 阳性率41.50% (83/200) , 包括单纯高危型HPV感染51例 (61.45%) , 单纯低危型HPV感染20例 (24.10%) , 高低危型HPV混合感染12例 (14.46%) 。
不同年龄段HPV感染阳性率:高危型HPV感染与低危型HPV感染的各个年龄段感染例数:16~24岁HPV感染共19例, 25~34岁HPV感染共25例, 35~44岁HPV感染共20例, 45~54岁HPV感染共11例, ≥55岁HPV感染共8例, 呈现“U”型变化趋势, 见表1。
讨论
HPV感染是皮肤科及妇科常见的疾病, 常引起皮肤黏膜鳞状上皮增生, 与尖锐湿疣等性病及多种泌尿生殖道的肿瘤相关。宫颈癌是临床上较为常见的一类妇科肿瘤, 临床发病率较高, 占据所有女性恶性肿瘤的第二位[3], 若出现高危型HPV持续感染现象将引发宫颈癌、癌前病变等不良情况, 而低危型HPV引发的尖锐湿疣疾病较为流行, 全球均存在该类疾病, 近些年来该类疾病在我国的发病率呈现逐年递增的趋势。有关研究指出[4], 导致宫颈癌疾病的一类重要原因为高危型HPV感染, 该类疾病患者多半表现为高危HPV亚型持续感染现象。外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌等则与皮肤的高危型有关。本次研究结果显示, 年龄较大与年龄较小的分组中显示高危型HPV的感染率均较高。
有关文献指出[5], 高危型HPV持续感染是引发宫颈癌、癌前病变等情况发生、发展的一类必备的因素, 当出现HPV多重感染情况时, 当患者宫颈病变级别增加时, 显示感染率也在不断地增加。有关学者研究指出[6], 低危型与高危型HPV单一感染或者多重感染并不能使宫颈疾病病变程度发生改变, 同时当患者年龄不断增长时, 显示单纯高危型HPV感染率持续增高, 说明HPV感染与年龄具有一定的关联性。有关研究显示, 年龄是导致宫颈疾病HPV感染的一类重要因素。
本次研究结果显示, 单纯低危型HPV感染明显低于单纯高危型HPV感染, 比较两组不同年龄段HPV感染率可知, 高危型HPV感染随着年龄的增长而递增, 低危型HPV感染随着年龄的增长而下降。另, 有关研究指出, 低年龄段人群造成的HPV感染类型主要包括混合感染, 究其原因可能为该类人群的免疫系统未被致敏, 性生活频率较高, 卫生观念淡薄等。
综上情况可知, 低年龄段主要表现为高低危型HPV混合感染, 年龄≥55岁的人群主要表现为单纯高危型HPV感染, 当年龄逐渐增长时, 显示单纯高危型HPV感染率不断上升。
参考文献
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人乳头瘤病毒基因分型 篇5
1 资料与方法
1.1 资料来源与诊断标准
收集自2004年1月至2006年12月在湖南师范大学第一附属医院(湖南省人民医院)妇科行手术治疗的HSIL及宫颈癌患者的标本共69例,均为经病理证实的未行放化疗的手术标
本,由不同的两位病理医师重新进行独立的双盲式阅片并做出报告,如果两位医师的诊断结果不一致,则由第3位组织病理学专家再次阅片,并根据多数决定原则做出最终诊断。所有入选的患者均为湖南地区的居民,年龄27~69岁,平均45.4±5.60岁。其中HSIL组23例,宫颈癌组46例。所有标本均经常规甲醛固定,石蜡包埋,每个标本均切取组织3片(每片厚2 mm×4 mm),每片均含有规则的组织。
1.2 实验方法
从石蜡组织切片中提取DNA进行PCR检测,运用SPFIO-PCR技术进行DNA扩增,再利用HPV-DNA酶免疫测定法(DEIA)对扩增产物进行检测,对HPV阳性者利用可识别25种HPV-DNA的反向杂交线型探针检测技术(LiPA)对其进行HPV分型检测。这种分型方法可以检测14种致癌型HPV(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)和11种非致癌型HPV(HPV 6、11、34、40、42、43、44、53、54、70和74)。
1.3 统计学处理
所有数据采用SPSS 14.0统计软件进行统计学分析,组间比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。对多重感染患者各基因型阳性率重复计算。
2 结 果
2.1 两组HPV总的感染率
HSIL组23例标本中HPV总的阳性率为100%(23/23),宫颈癌组46例标本中HPV总的阳性率为97.83%(45/46),两组HPV的感染率差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2 两组HPV多重感染的比例
见表1。两组多重感染的比率差异无统计学意义(χ2=1.856,P>0.05)。6例多重感染的病例均为含HPV 16合并的感染。
注:本次实验结果中,HSIL和宫颈癌组中各有1例应用Lipa检测法未能检测出HPV的型别。
2.3 两组HPV基因型别的分布
由于存在复合感染,66例HPV感染的宫颈病变标本中检出的亚型次数为73次,共检出11种HPV亚型。见表2。由于我们的实验对象为HSIL及宫颈癌患者,所以我们的检测结果中没有发现低危型别感染。其中HSIL组以高危型HPV 16、HPV 52和HPV 58最常见 ; 44例宫颈癌共检出9种高危亚型HPV,以高危型 HPV 16和 HPV 58最为常见。在检出的11种HPV亚型中,HPV 16亚型的检出率明显高于其他亚型,但两组差异无统计学意义(P>0.05)。
3 讨 论
3.1 HPV检测对宫颈高度病变及宫颈癌的意义
从宫颈癌前病变发展为宫颈癌是一个时间较长的过程,其中仅1%进一步发展为宫颈原位癌,其余则维持非典型增生阶段,但级别有所改变[1]。因此,及时发现早期宫颈癌,给予恰当的处理,宫颈癌是一种可预防,可治愈的疾病,关键是进行筛查,防患于未然。国际癌症研究中心(IARC)在2004年对HPV的总结中提出:没有持续的HPV感染,女性发生宫颈鳞癌的可能性为0;高危型HPV检测作为宫颈癌筛查和追踪管理是有效,可行的[2]。
目前的研究认为[3],低级别CIN中HPV基因组基本处于游离状态,病毒感染为一过性或潜伏感染,即使不治疗也会被免疫系统清除,但大多数高级别CIN和浸润癌中高危型HPV整合入宿主基因组DNA,引起细胞功能的丧失或下降,进而发生恶性肿瘤。因而我们的实验中选择HSIL和宫颈癌作为研究对象,探讨HPV感染的型别与宫颈病变进展之间的关系。
3.2 HPV感染率与宫颈病变的关系
在本研究中,HSIL组和宫颈癌组的HPV感染率分别为100%和97.83%,与国外文献报道[4]的99.7%的比率基本一致,说明HPV感染与宫颈病变有很强的相关性,HPV阳性强烈提示着HSIL和宫颈癌的存在。而我们的研究结果比国内文献报道[5]的比率80.07%高很多,我们认为并不预示着湖南地区HSIL和宫颈癌的发病率高于国内其他地区。我们分析可能的原因如下:①目前国内的很多研究所采用的HPV分型检测系统多为HC2和基因芯片技术,只能对某些特定型别的HPV-DNA进行检测,故不能完全反映HPV的感染状况。②我们实验的研究对象为HSIL和宫颈癌的患者,并不包括宫颈低度鳞状上皮内病变的HPV感染
状况。
3.3 HPV多重感染比例与宫颈病变的关系
多重感染表明机体免疫机制清除病毒不利,预示着病情进展,HPV的多重感染是否会增加和促进宫颈病变的发生发展目前却无统一的说法。Lee等[6]认为多重感染发生宫颈癌的危险性比单一型别感染者高,国内也有研究结果支持该看法[7,8]。但多数学者认为,HPV的多重感染在CIN中随着级别的升高呈增加趋势,但并不增加宫颈癌的发生[9,10]。从表1的结果来看,HSIL 组与宫颈癌组比较,多重感染率与宫颈病变级别的升高差异并无统计学意义,提示宫颈病变的严重程度与HPV感染的基因型的多寡无关,而与HPV基因型的致病能力有关。
3.4 HPV分型与宫颈病变的关系
据IARC统计,HPV感染的基因亚型分布有地域性,世界范围内宫颈HPV亚型感染的频率分别为16型(51.0%),18型(16.2%),45型(9%)和31型(6%),上述4个常见类型占80%,其中HPV 16型占51.0%。根据我们的实验结果,HSIL患者中最常见的基因亚型分别为HPV 16(72.73%),HPV 52(22.73%),HPV 58(9.09%);宫颈癌的患者中以HPV 16的检出率最高,占70.45%,其次是HPV 58,检出率为11.36%,HPV 18、HPV 56和HPV 31是并列第3常见的高危感染类型,检出率为4.55%。所有检出的亚型均为高危的HPV型别,说明高危型HPV的持续性感染是导致宫颈癌前病变及宫颈癌发生的最重要原因。
据IARC 2004年报道的全球25个国家共3607例宫颈癌患者的多中心研究显示,HPV 16在所有HPV阳性的宫颈癌患者中的平均感染率为57.4%,中国大陆的比例为79.6%,明显高于其他国家[11]。根据表2的数据统计,湖南地区宫颈高度病变和宫颈癌患者中HPV 16的感染率亦居于首位,并且在多重感染中占很大比例,提示本地区感染的HPV型别中,HPV 16与宫颈癌前病变和宫颈癌的关系最为密切,HPV 16的致癌性最强。
通过对高危型HPV分型的研究,能使我们更清楚的了解湖南地区HPV感染的特点,为我们从根本上预防宫颈疾病提供以下理论帮助。①随着高危型HPV技术的不断发展和完善,病毒在感染初期就可被发现,本研究中HPV 16及其他亚型提供的有效风险度信息可指导临床进行早期追踪治疗,以防止病变进一步进展为HSIL和宫颈癌。②已有的研究表明[12],HPV 16、18和 52 DNA的高负荷是从HSIL向宫颈癌转化过程中的先决条件,而根据我们的研究结果推测,湖南地区中HPV 16和58的持续感染可能是从HSIL转化为宫颈癌的重要因素。③HPV疫苗是近年来研究的热点,2006年6月,美国FDA正式批准宫颈癌疫苗上市,这是世界上第一个肿瘤疫苗。我们的研究结果提示,我们不仅需要研制HPV 16、18的疫苗,同时也需要对感染率较高的HPV 58疫苗进行研制。
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人乳头瘤病毒基因分型 篇6
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究对象为502例来我研究所检验室进行HPV分型检测的女性。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂
DNA提取试剂盒、HPV21导流杂交试剂盒、核酸导流快速杂交仪 (凯普生物技术有限公司) 、高速离心机、PCR仪、水浴箱。
1.2.2 采集标本
要求检测对象于检测前48h内不要做阴道冲洗或阴道内使用药物, 月经正常的妇女, 在月经来潮后10~18d为最佳检测时间, 检测人员以专用采样刷采集宫颈脱落细胞, 标本于4℃保存, 3d内进行检测。
1.2.3 提取DNA
吸取500μl标本于离心管中, 14 000rpm离心5min, 弃上清液;加溶液Ⅰ400μl于沉淀中, 沸水浴15min;再加入400μl溶液Ⅱ, 14 000rpm离心5min, 弃上清液;沉淀即为DNA, 60μl无菌水溶解DNA, 备用。
1.2.4 目的片段扩增
预装24μl反应液的PCR管中加入1μl上述DNA溶液进行扩增, PCR反应条件为95℃9min, 40个循环 (94℃20s, 55℃30s, 72℃30s) , 72℃5min。
1.2.5 导流杂交
450μl杂交液混合20μl PCR扩增产物浸润杂交膜, 45℃杂交10min, 开泵去除液体;加入封阻液500μl, 25℃封阻5min, 开泵去除液体;加入500μl显色液, 36℃条件下显色5min后, 开泵去除液体, 观察并记录结果。
2 结果
2.1 HPV感染率
502例检测标本中病毒感染阳性结果117例, 总阳性率为23.3% (117/502) 。病毒感染阳性患者中单一亚型感染率为66.67% (78/117) 。多种亚型感染率为33.33% (39/117) , 其中双亚型感染率为25.64% (30/117) , 三亚型感染率7.69% (9/117) , 结果如图1所示。
2.2 HPV基因型分布
共检测到18种HPV亚型, 其中高危型别14种, 所占比例为83.24%;低危型别4种, 所占比例为16.76%。低危型别中的43、44型和高危型别中的45型未被检出。感染者中以HPV16、31、6三种亚型多见, 所占比例分别为20.95%、12.57%、8.38%, 具体统计结果见表1。
3 讨论
宫颈癌是严重危害女性的一种恶性疾病, HPV的特定型别与宫颈癌的发生存在紧密联系[4], 采用基因芯片和导流杂交技术, 能及时准确地进行病毒感染的检测与基因型诊断[5]。本研究结果表明, 502例样本中共检出HPV感染117例, 总感染率为23.3%, 低于台州 (35.08%) 、北京 (57.10%) 、阳泉 (35.20%) 及鄂州 (30.93%) 等地区[6]。本地区检测出HPV感染的亚型处于前几位的分别为16、31、6、39、18, 与上述地区相比也存在着区域性的差异:如台州常见亚型为16、11、52, 北京常见亚型为16、58、52, 鄂州常见亚型为16、58、53。综上结果表明, 本地区HPV亚型即与其他地区的常见感染亚型基本类似, 又存在着区域性差异。HPV是宫颈癌的重要致病因素[7], 控制HPV病毒的感染有利于宫颈癌的预防[8], 因此针对女性开展定期的HPV检测是控制和预防宫颈癌的重要手段。通过本实验了解科尔沁地区女性HPV的感染及基因型分布现状, 为在科尔沁地区开展预防宫颈癌的宣传提供理论依据。
摘要：为了解科尔沁地区女性下生殖道人乳头瘤病毒感染现状及该病毒的基因型分布, 采集宫颈脱落细胞提取DNA, 应用快速导流杂交技术检测病毒基因型, 发现502例标本中病毒感染阳性率为23.3%, 共检出18种病毒亚型。其中, 以16、31、6亚型多见, 比例分别为20.95%、12.57%、8.38%, 说明科尔沁地区女性下生殖道人乳头瘤病毒感染率为23.3%, 并以16、31、6亚型多见, 基因型分布大体符合亚洲人群的分布规律, 但又具有独特的地域分布特点。
关键词：人乳头瘤病毒,基因型,感染率
参考文献
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人乳头瘤病毒基因分型 篇7
1 资料与方法
1.1 研究对象
选取2013年11月-2015年10月在淮安市第一人民医院就诊且临床资料完整的6 228例女性患者作为研究对象。年龄16~84岁,平均(38.9±9.5)岁,其中≤25岁患者577例,26~35岁患者1 663例,36~45岁患者2 473例,46~55岁患者1 290例,≥56岁患者225例。在征得患者同意并承诺保护患者隐私的情况下,由妇产科医师专人采集宫颈分泌物,并置于专用的细胞保存液4℃中保存,1周内检测。标本采集前3 d内患者没有阴道内用药或对阴道进行冲洗;24 h内无性行为,且标本采集时患者不处于月经期。排除复查患者的检测结果。
1.2 HPV检测
采用凯普医用核酸分子杂交技术及其配套试剂检测21种常见HPV基因型,其中高危型15种:16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68;低危型6种:6、11、42、43、44和CP8304(81)。经DNA分离提取,聚合酶链反应扩增,导流杂交等检测步骤后显色判定结果。
1.3 统计学方法
采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析,计数资料以率或百分比表示,用χ2检验,多组间的两两比较时用Bonferroni法校正检验水准,P<0.05为差异有统计学意义,
2 结果
2.1 不同年龄段HPV阳性检出率比较
HPV总阳性检出率为37.73%(2 350/6 228),其中单纯低危亚型感染率为4.88%(304/6 228),单纯高危亚型感染率为27.76%(1 729/6 228),混合型感染率为5.09%(317/6 228)。≤25岁、26~35岁、36~45岁、46~55岁、≥56岁年龄段女性HPV阳性检出率分别为41.07%(237/577)、35.38%(588/1 663)、37.73%(933/2 473)、37.91%(489/1 290)、45.78%(103/225),经χ2检验,不同年龄段的阳性检出率比较,差异有统计学意义(χ2=12.950,P=0.012);且≥56岁年龄段与26~35岁年龄段比较,差异有统计学意义(χ2=9.273,P=0.002),≥56岁年龄段感染率高于26~35岁年龄段。≤25岁及≥56岁年龄段感染率略高,而26~35岁、36~45岁、46~55岁等3个年龄段的感染率偏低;HPV阳性检出率与年龄段呈近似U形分布。见附图。
2.2 HPV阳性的基因亚型重数构成比
将检出1种HPV基因亚型作为单重感染、检出2种HPV基因亚型作为二重感染、检出3种HPV基因亚型作为三重感染,以此类推,分别统计HPV阳性的基因亚型重数构成比。2 350例HPV阳性标本中,单重、双重、三重、四重、五重及以上感染构成比分别为66.03%(1 555例)、22.76%(536例)、7.09%(167例)、2.93%(69例)、1.19%(23例)。各年龄段均以单重感染为主,其中≤25岁年龄段的五重及以上感染构成比最高(2.14%),但与其他年龄段比较,差异无统计学意义(P>0.05);36~45岁年龄段的单重感染构成比最高(68.38%),≥56岁年龄段的单重感染构成比(51.46%)低于其他年龄段(χ2=14.242,P=0.006);≥56岁年龄段的二重(31.07%)感染构成比高于其他年龄段(χ2=11.634,P=0.020),三重(9.71%)和四重(5.84%)感染构成比与其他年龄段比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.3 HPV阳性的基因亚型种类分布
HPV阳性标本中,高危型HPV阳性数为2 861例(81.12%);前5位分别为HPV16(15.23%)、HPV52(11.79%)、HPV58(9.58%)、HPV53(7.00%)和HPV33(6.95%);低危型阳性数为666例(18.88%),前3位为CP8304(HPV81)(7.14%)、HPV11(5.30%)和HPV6(4.31%)。见表2。
3 讨论
HPV感染能引起生殖道黏膜上皮发生增生性损伤,现已成为最常见的性传播疾病之一。>70%女性一生中至少感染1次HPV,但其中大多数是一过性的,一般会在2年内为机体自身免疫系统清除;若2年内没有被清除,则称为HPV的持续感染[4]。根据HPV对宫颈致癌的危险程度,可将HPV基因型分为高危型和低危型。低危型主要引起生殖道尖锐湿疣;高危型则通过产生E6和E7癌蛋白,结合宿主细胞中的抑癌基因p53和Rb,诱导细胞周期调控失常,引发宫颈癌变[5]。高危型HPV的持续感染是宫颈癌变的主要因素。因此,HPV分型检测已成为目前早期筛查宫颈癌、判断疾病类型和选择诊治方案的重要手段之一[6]。
本研究结果显示,①淮安地区女性的HPV感染率为37.73%;高于文献报道的青岛地区(32.2%)[7]、成都地区24.83%[8]、广东地区(7.3%)[9],以及海南少数民族地区(25.96%)[10];但低于湖南地区(44.45%)[11]和辽宁地区(45.6%)[12],这可能与不同研究所选择的目标人群和研究方法不同有关;但也进一步证明HPV的分布存在地域差异性。②淮安地区女性的HPV感染以基因型单重感染为主,但多重基因型感染也存在较大的比例,并且单纯高危亚型HPV感染率(27.76%)高于全国37个城市的综合平均水平(21.07%)[2],提示淮安地区女性宫颈癌的潜在发生率较高,应引起当地疾控部门和居民的重视,尽早采取预防措施。③淮安地区不同年龄段女性HPV感染率比较,差异有统计学意义。在≤25岁和≥56岁年龄段感染率较高,分别为41.07%和45.78%;而在26~35岁、36~45岁和46~55岁等3个年龄段的感染率略低,分别为35.38%、37.73%和37.91%;HPV感染率与年龄段呈近似U形分布,与广东地区报道的结果相似[9]。这可能是因为≤25岁年轻女性性生活较为活跃,易于发生HPV感染;而≥56岁女性HPV感染率显著高于26~35岁年龄段,则可能是由于≥56岁女性雌激素水平和机体免疫力均较为低下,易于感染HPV;另外本研究所选择的老年人群多是到妇科就诊的宫颈疾病患者,而单纯进行宫颈癌筛查的人群较少,这可能也是引起≥56岁年龄组HPV感染率较高的原因之一。因此,应加强对老年女性HPV感染和宫颈癌筛查知识的宣教力度。④淮安地区女性感染的高危HPV亚型以HPV16、52和58为主,与广东、青岛地区报道的结果相似,而与成都,辽宁地区报道结果稍有不同;另外国内其他地区较少见的低危型HPV81在淮安地区女性中感染率较高;提示未来淮安地区HPV疫苗的研制和选择均应结合当地的地域特点进行。但因本文研究结果均来自淮安地区一家最大的综合性三甲医院,初步提示当地人群HPV基因型感染具有独特的地域特点,但对于该地区各种HPV基因型感染率的确切水平及其与宫颈癌等妇科疾病的相关性,还有待当地开展多中心,大样本的进一步合作研究。
综上所述,淮安地区女性HPV感染率较高,且高于国内37个城市的平均水平。当地应重点做好对≤25岁和≥56岁2个高峰年龄段女性的宣教筛查工作,早诊断、早治疗,预防和控制HPV感染及宫颈癌等相关疾病的发生,提高女性的卫生保健水平。
摘要：目的 探讨淮安地区女性感染人乳头瘤病毒(HPV)及其基因亚型分布情况,为HPV感染防治和流行病学研究提供依据。方法 采用核酸分子杂交法筛查6 228例淮安女性生殖道21种HPV基因亚型。结果淮安地区女性HPV总感染率为37.73%(2 350/6 228),其中单纯低危亚型感染率为4.88%(304/6 228),单纯高危亚型感染率为27.76%(1 729/6 228),混合型感染率为5.09%(317/6 228)。不同年龄段之间HPV感染率比较,差异有统计学意义(P<0.05),感染率与年龄段呈近似U形曲线。2 350例HPV阳性标本中,单重、双重、三重、四重、五重及以上基因型阳性构成比分别为66.03%(1 555例);22.76%(536例)、7.09%(167例)、2.93%(69例)和1.19%(23例);高危亚型阳性构成比前5位分别为HPV16(15.23%)、HPV52(11.79%)、HPV58(9.58%)、HPV53(7.00%)和HPV33(6.95%);低危亚型阳性构成比前3位分别为CP8304(HPV81)(7.14%)、HPV11(5.30%)、HPV6(4.31%)。结论 淮安地区女性HPV感染率较高,高危亚型感染以HPV16、52和58为主,低危亚型感染以HPV81、11和6为主。感染高峰年龄段为≤25岁和≥56岁。
关键词：人乳头瘤病毒,基因分型,宫颈癌,多重感染
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人乳头瘤病毒基因分型 篇8
1材料与方法
1.1标本来源、采集、保存
676例标本取自2008年7月—2009年1月本院疑似HPV感染的慢性宫颈炎患者,年龄21～59岁。利用采样器采集宫颈口脱落细胞的样本,将采集刷置于标本保存液中,4℃冰箱保存待用。
1.2试剂及仪器
HPV DNA抽提试剂盒(中国凯普生物科技有限公司),HPV基因分型检测试剂盒(中国凯普生物科技有限公司),可检测21种HPV亚型,包括13种高危亚型(16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59和68型)、5种低危亚型(6,11,42,43和44型)和3种中国人群常见亚型(53,66和CP8304型)。另外在膜上还包括用于质量控制的阴性对照点、内对照点(用于监测PCR反应)和Biotin对照点(用于监测显色系统);扩增仪(PE 9700,美国ABI公司);医用核酸分子快速杂分仪(中国凯普公司)。
1.3方法
分泌物中细胞的DNA提取、PCR扩增、快速杂交和观察结果等过程严格按照说明书操作。
2结果
2.1 HPV阳性的检出率及各型的构成
676例样本中HPV阳性者共175例,检出率为25.9%,在检出的175例阳性者中,各型构成分别为:单一低危型占16.0%,单一高危型占74.9%,中国人常见型占9.1%,另有27例为混合感染者,占15.4%。共检出18种HPV型别。见表1。
2.2 HPV感染的年龄分布
将本实验HPV阳性按照4个年龄段来分析,即<21岁、21～35岁、36～45岁、≥46岁,各组HPV感染率见表2。
注:常见型中有13例为高危型,3例为低危型。
注:混合型为高、低危型混合感染者。
3 讨论
HPV属乳多空病毒科乳头瘤病毒属,为环状双链DNA病毒,也是一种严格嗜上皮病毒。一般认为,各种鳞状上皮(包括皮肤角质层、无角化黏膜)都易于感染HPV,在鼻黏膜、喉黏膜和子宫颈黏膜及在愈合伤口边缘区的柱状上皮和鳞状上皮移行区带处,带有病毒DNA的上皮细胞也可以不出现任何临床表现而呈潜伏状态。宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,临床证明95.0%～99.7%宫颈癌和高危型HPV感染有关[2,2,2,2]。而且不同亚型HPV对子宫颈癌致癌性有不同影响,因此,准确诊断HPV感染及其分型对宫颈癌筛查、早期确诊及治疗效果监测有着重大意义。当机体感染HPV时,病毒基因可整合到宫颈细胞,机体免疫系统可识别感染细胞并加以消除。若感染细胞继续存活并增生,可发展为癌前病变或宫颈癌。有文献报道高危亚型的HPV的持续性或反复感染已被确定为宫颈癌的主要原因,由于不同亚型的HPV其编码外壳蛋白的基因变异很大,不同的亚型HPV之间基本上没有交叉保护抗体,容易造成不同高危型HPV感染或多次感染[3]。而Lee等[4]进一步研究多重感染与宫颈癌的关系,结果显示单一的HPV感染使患病风险增加19.9倍,而多重感染HPV使患病风险增加到31.8倍。
本文通过对676例妇科门诊及住院慢性宫颈炎的患者进行研究,检测出了21型HPV-DNA中的18型,高危未发现HPV-39型、HPV-51型、HPV-56型,低危型未发现HPV-42型、HPV-44型。表1结果显示,676例样本中检出HPV阳性175例,检出率25.9%,高危占74.9%,低危占16.0%,中国人常见型占9.1%。高危型患者其亚型感染率由高到低依次为HPV-16、18、52、33、58、68、31、35、39、45,低危型依次为HPV-6、11、43,中国人常见型依次HPV-53、CP8304、66,高危型基因型以HPV-16、18型为主,其次HPV-52、33型,高危型感染达131例,占总体的74.9%.可见高危型感染的严重性。HPV分布有地理性,有文献[5]指出全世界高危型HPV主要是HPV-16、18型,其次是45、31、33型。而本文显示高危型分布有所不同,HPV-52型为仅次于HPV-16、18型的第三常见亚型。黄光孙等[6]人报道了HPV-58型为仅次于HPV-16、18型的第三常见亚型,这可能与地理的分布的差异有关。表2结果显示,本地区HPV感染高峰为<46岁年龄组,其阳性率为30.3%,与Burk等[7]报道HPV感染高峰为青年组的观点一致,且中青年组多为短暂的感染。而对于大于46岁的感染者,可能存在持续感染的危险,特别是高危型感染,应定期进行HPV分型检测和TCT(液基细胞学检查),以便对宫颈癌进行早期诊断。
HPV分型检测研究一直受到国内外学者的高度重视[8]。目前,对HPV感染的分型诊断主要方法有斑点杂交、Southern印迹及实时荧光PCR等。传统的斑点杂交、Southern印迹由于杂交过程操作复杂,耗时长(杂交需十几个小时甚至1d),检测低拷贝基因的敏感性不足,可能需要使用同位素等.实时荧光PCR检测HPV DNA已经应用于临床,其灵敏度和可靠性已得到认可,但目前能检测的HPV亚型十分有限,主要包括常见的HPV 6,11,16,18 4种亚型,易漏诊其他HPV亚型的感染,不利于流行病学和病因学的进一步深入研究。基因芯片是近年来发展起来的可对病原体核酸进行高通量快速检测的技术。HybrMax法是导流杂交技术结合低密度基因芯片技术,利用PCR扩增提高检测的灵敏度,分子杂交特异性高,是HPV基因型分型检测比较好的方法。
本文通过DNA杂交技术这一高通量基因检测技术,仅一次扩增,既可检验21种高、低、中国人常见型。该方法具有通量高、灵敏度高、特异性好、可检测多重感染等优点,可用于宫颈癌等疾病的早期预警和诊断,有利于防治宫颈癌的发生并了解HPV感染的转归,也可以用于大规模的临床筛查及为HPV疫苗的研究提供了可靠的资料。
摘要：目的 探讨导流杂交基因芯片技术作为临床检测人乳头瘤病毒(HPV)常规方法的实用性,及在宫颈癌筛查中的临床应用价值。方法 采用导流杂交基因芯片技术对676例疑似HPV感染的标本进行基因诊断和分型,检测了13种高危亚型(16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59和68型)、5种低危亚型(6,11,42,43和44型)和3种中国人群常见亚型(53,66和CP8304型)。结果 676例样本中检出HPV阳性175例,检出率25.9%,高危占74.9%、低危占16.0%、中国人常见亚型占9.0%、2种或2种以上亚型混合感染占15.4%。结论 导流杂交基因芯片技术适合于临床筛查HPV感染,能更好的检出HPV感染的基因型,为临床提供较有价值的实验资料,对宫颈癌的筛查有较大的帮助。