有关物质测定

有关物质测定（精选十篇）

有关物质测定 篇1

1 实验材料

甲醇为色谱纯,磷酸、醋酸均为分析纯。

双羟氟轻松及中间体CF11、CF12、CF13由天津太平洋化学制药有限公司提供。

2 色谱条件

仪器:Agilent1100高效液相色谱仪,紫外检测器;色谱柱:Agilent TC-C18(2),4.6mm×250mm,5μm;流动相:0.05%H3PO4-甲醇(43:57);流速:1.0mL/min;柱温:40℃;检测波长:241nm。

3 实验方法与结果

3.1 方法研究

3.1.1 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.05%磷酸溶液(43:57)为流动相;检测波长241nm。理论板数按双羟氟轻松峰计算为14775。

3.1.2 流动相的选择

采用Agilent TC-C18(2)柱为分离柱,考察甲醇-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液作为流动相系统。试验结果表明,选用甲醇-磷酸系统为好。为使杂质峰及中间体和双羟氟轻松峰分开,调整磷酸的浓度、有机相与水相的比例,对色谱条件进一步优化。试验结果表明:在甲醇-0.05%H3PO4 (43:57)流动相下,双羟氟轻松与杂质峰和中间体CF11、中间体CF12、中间体CF13分离良好,因此流动相系统确定为甲醇-0.05%H3PO4 (43:57)。

3.1.3 检测波长的确定

取双羟氟轻松、中间体CF11、中间体CF2和中间体CF13适量,用流动相溶解并稀释成0.4mg/mL;用Waters2695液相色谱仪进行PDA测定,双羟氟轻松和中间体CF11、CF12、CF13分别在240.9nm、240.9nm、242.1nm、240.9nm波长处有最大吸收,双羟氟轻松中未知杂质的最大吸收波长(见表1)。根据主成分、各中间体、未知杂质的最大吸收波长及响应值,故双羟氟轻松有关物质测定的检测波长确定为241 nm。

3.1.4 空白溶剂的测定

取流动相适量,按上述色谱条件测定。试验结果表明,空白溶剂不干扰样品测定。

3.1.5 双羟氟轻松和中间体的分离考察

分别取双羟氟轻松和中间体CF11、中间体CF12、中间体CF13,按上述色谱条件测定,色谱峰保留时间(见表2)。

分别取双羟氟轻松和中间体CF11、CF12、CF13适量,混合均匀,按上述色谱条件测定,HPLC色谱图(见图1)。

试验结果表明:在此色谱条件下,双羟氟轻松不仅能与中间体单独分离,而且在混合状态下与3种中间体也能很好地分离。

3.1.6 双羟氟轻松破坏性试验

酸、碱、氧化破坏:取双羟氟轻松15mg,分别加入0.5mol/L的盐酸溶液、0.2mol/L的氢氧化钠溶液和过氧化氢溶液10mL,置沸水浴中10min,放冷,调pH至中性,用流动相稀释成0.3mg/mL,按上述色谱条件测定。

强光破坏:取双羟氟轻松(0.3mg/mL),置于强光下照射18h,按上述色谱条件测定。

试验结果表明:本品经酸、碱及氧化破坏后,产生新杂质峰,此色谱条件能有效地检出各破坏试验中产生的降解产物,且降解产物峰能与主成分峰达到基线分离,表明本方法对有关物质检查的专属性良好。强光照射18h后,溶液中的色谱峰无显著变化,表明样品对光较稳定。

3.1.7 检测限试验

取双羟氟轻松、中间体CF11、中间体CF12、中间体CF13适量,加流动相逐级稀释,按上述色谱条件测定。试验结果:双羟氟轻松、中间体CF11、CF12、CF13最小检测浓度分别为0.18mg/mL、0.74mg/mL、0.25mg/mL、0.20mg/mL。

3.1.8 线性关系试验

分别量取溶液(0.3mg/mL)0.5mL,1.0mL,1.5mL,3.0mL,5.0mL,用流动相稀释成1.501mg/mL,3.002mg/mL,4.503mg/mL,9.006mg/mL,15.010mg/mL的样品溶液,按上述色谱条件测定,作浓度-峰面积的线性方程,回归方程为:A=38.924C+8.744,r=0.9999 (n=5)。试验结果(见表3)。

试验结果表明:在241nm波长处,双羟氟轻松浓度在1.501～15.010mg/mL范围内,与峰面积呈良好线性关系。

3.1.9 样品溶液重复性试验

取样品溶液,按上述色谱条件测定,连续进样5次,依法进行有关物质检查,试验结果表明:平均主峰面积为12507.2,RSD为0.82%,主要杂质(RT≈9.7min)的平均含量为0.80%,RSD为0.88%。

3.1.1 0 样品溶液稳定性试验

取样品溶液放置0h、2h、4h、8h、12h、24h,按上述色谱条件测定,试验结果表明:双羟氟轻松溶液在24h内基本稳定,平均主峰面积为12327.0,RSD为1.58%,主要杂质(RT=9.7min)的平均含量为0.81%,RSD为1.35%。

3.2 双羟氟轻松的有关物质测定

3.2.1 样品溶液和1.5%对照溶液的制备

精密称取双羟氟轻松适量,用流动相溶解并稀释成0.3mg/mL,即得样品溶液。

精密量取样品溶液适量,用流动相稀释成4.5mg/mL,即得1.5%对照溶液。

3.2.2测定方法

分别取1.5%对照溶液和样品溶液,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～20%,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。单一杂质峰面积不得大于对照溶液主成分的峰面积(1.5%),溶液色谱图中各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主成分的峰面积的两倍(3.0%),试验结果(见表4),HPLC色谱图(见图2,3)。

4讨论

4.1检测波 长的选择

对双羟氟轻松及其中间体用二级管阵列检测器 在20-400nm波长范围内扫描，双羟氟轻松主峰在 240.9nm波长处有最大吸收，中间体CFI1、CF12、 CF13最大吸收波长分别在240.9nm、242. lnm、 240.9nm。其余未知杂质分别在204.9nm、253.9m、239.8nm、243.3nm处有最大吸收。主要已知杂质 最大吸收波长均在241nm左右，与双羟氟轻松基 本- -致，故检测波长确定为241nm。

4.2本品在酸 、碱、氧化破坏及强光照射前后比较， 溶液色谱图中均未在CF11, CF12保留时间位置处 出现色谱峰，在双羟氟轻松样品中没有检出CF11、 CF12。

CF11与CF12的检测限分别为0.74mg/mL 与0.25mg/mL。因此为节省分析时间，将溶液记录 色谱图时间定为主成分峰保留时间的3倍。

摘要：目的:用HPLC法测定双羟氟轻松的有关物质。方法:Agilent TC-C18柱为分离柱,0.05％的H3PO4-甲醇(43:57)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为241nm。结果:双羟氟轻松的主峰和杂质峰能有效地分离,重现性良好。双羟氟轻松检测浓度在1.501～15.010mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999(n=5);检测限分别为:双羟氟轻松为0.18mg/mL、中间体CF11为0.74mg/mL、CF12为0.25mg/mL、CF13为0.20mg/mL。结论:本方法准确、简便、快速、专属性强、重现性好,能很好地控制双羟氟轻松的质量。

关键词：双羟氟轻松,有关物质,流动相,高效液相色谱法

参考文献

[1] 国家药典委员会编.中国药典·二部[S],附录:28,北京:化学工业出版社,2005

[2] BP2007

[3] USP31-NF26:218

[4] 日本药局方,2001:651

测定物质密度教学反思 篇2

实验方案的产生，使学生沉浸在喜悦之中，他们迫不及待地要尝试，此时就放手让学生动手去做，让学生根据自己设计的实验方案，自己选择合适的实验器材，进行模拟科学家研究的“探索研究”，教时适时地给予知道、点拨，使实验方案得到实施，使学生的探究获得成功。

学生强烈的求知欲望和兴趣，模拟科学家们的认真的探究态度，宽松、愉悦、恬淡的课堂氛围，使探索测定物质密度的实验得到了意想不到的成功。通过实验过程的交流，使学生收益匪浅。学生们都说，从实验中的发现，通过经历了科学的探究过程从而学到了物理知识。来自这样的学习过程是深刻的，比那种*通过老师将和做习题达到理解物理知识的学习方法受益更深，更可贵的是有利于今后的生存和可持续发展。

探究式教学，从教学目标看，它着重于全面提高学生的素质，尊重学生的主动精神，充分开发每个学生的智慧潜能，培养学生的能力；从方法上看，它以探究为主，强调了学生的参与性，主动性等，从形式上看，它采用的是开放式教学，它让学生动起来，可以用各种各样的方法来解决实际问题；从学生受影响看，它更能使学生在受教育的过程中，视学习为乐趣，更富有创新力。

有关物质测定 篇3

【关键词】头孢噻吩钠；含量；测定

头孢噻吩钠为第一代头孢菌素，抗菌谱广，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抗菌作用，对奈瑟菌属有较好抗菌作用，但流感嗜血杆菌对本品的敏感性较差[1-4]。头孢噻吩钠适用于耐青霉素金葡菌（甲氧西林耐药者除外）和敏感革兰阴性杆菌所致的呼吸道感染、软组织感染、尿路感染、败血症等[5-6]。本实验对注射用头孢噻吩钠含量及有关物质进行测定。

1.仪器与试药

（1）仪器。LC-5500型高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；FE20K 梅特勒FE20K酸度计（北京联合科仪科技有限公司）；瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；SP-2500型双光束紫外可见分光光度计（苏州市莱顿科学仪器有限公司）；AS-01无油隔膜真空泵（北京优晟联合科技有限公司）；XYF-H 帕恩特超低有机物型超纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；SB25-12D超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；AC150-S21恒温水浴锅（赛默飞世尔科技（中国）有现公司）。

（2）色谱柱：YMCC18色谱柱（4.6*250*5）。

（3）对照品：头孢噻吩钠购自中国药品生物制品检定所。

（4）试剂：甲醇（济南新世纪石化有限公司）、醋酸钠（兴源石油化工商贸有限公司）、冰醋酸（济南新世纪石化有限公司）、乙腈（兴源石油化工商贸有限公司）。

（5）试药：头孢噻吩钠。

2.测定方法确定

2.1色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[7-11]。流动相：0.5%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-甲醇一乙腈（80：5：15）为流动相，检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：室温。理论板数按头孢噻吩钠峰计算应不得低于2000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取干燥后的头孢噻吩钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.3专属性试验

（1）酸破坏试验：取头孢噻吩钠样品约25mg，置于0.1mol/L盐酸溶液中，六十度加热半小时，用氢氧化钠溶液调PH为7，加流动相制成每1mL含30μg的溶液。按色谱条件测定。

（2）碱破坏试验：取头孢噻吩钠样品约25mg，置于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，六十度加热半小时，用氢氧化钠溶液调PH为7，加流动相制成每1mL含30μg的溶液。按色谱条件测定。

（3）高温破坏试验：取头孢噻吩钠样品约25mg，于105"C加热六小时，加流动相制成每1mL含30μg的溶液。按色谱条件测定。

（4）氧化破坏试验：取头孢噻吩钠样品约25mg，加入1毫升H2O2，放置十分钟，加流动相制成每1mL含30μg的溶液。按色谱条件测定。

实验结果表明上述专属性试验中，头孢噻吩钠主峰与其它杂质峰均分离较好。

2.4精密度试验

精密称取干燥后的头孢噻吩钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含40μg的溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。

2.5对照品的线性考察

精密称取适量头孢噻吩钠对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含20、40、80、160、320微克的溶液。按色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，头孢噻吩钠在20～320μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.6重现性试验

称取头孢噻吩钠6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明此方法的重现性良好。

2.7样品稳定性试验

取供试品和对照品置室温下放置10小时，每隔2小时测定一次。实验结果放置0小时，头孢噻吩钠含量为98.96%，杂质峰含量为1.04%；放置2小时，头孢噻吩钠含量为98.82%，杂质峰含量为1.18%；放置4小时，头孢噻吩钠含量为98.38%，杂质峰含量为1.62%；放置6小时，头孢噻吩钠含量为97.83%，杂质峰含量为2.17%；放置8小时，头孢噻吩钠含量为96.39%，杂质峰含量为3.61%；放置10小时，头孢噻吩钠含量为95.13%，杂质峰含量为4.87%。供试品溶液随着放置时间的延长，有关物质的含量增加，故应在配制后立即检测。

2.8准确度试验

分别取已知含量的头孢噻吩钠的9份样品，分别加入一定量的头孢噻吩钠对照品，测定含量，计算回收率，平均回收率为99.6%，RSD=0.86%。结果表明此方法的回收率良好。

2.9樣品含量测定

依照上述含量测定方法测定，结果表明头孢噻吩钠样品的纯度较高。样品中主要杂质峰面积之和均未超过对照品溶液主峰面积的2倍。头孢噻吩钠含量为98.96%，杂质峰含量1.04%。

3.讨论

本实验还分别考察0.25%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-甲醇（80：20），乙腈-1%甲酸（20：80），0.5%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-乙腈（80：20），乙晴-水-甲醇（16：80：4，磷酸调节pH值至5.9），0.5%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-甲醇一乙腈（80：5：15）不同比例的流动相，结果以0.5%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-甲醇一乙腈（80：5：15）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.5%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-甲醇一乙腈（80：5：15）为流动相。本实验将供试品溶液室温放置12小时，溶液浓度不变，但杂质量不断增加。本实验采用高效液相法重现性好、回收率高、方法快捷、专属性好，可用于注射用头孢噻吩钠含量及有关物质的测定。

【参考文献】

[1]唐倩，杨元娟，杨宪，曾正渝.高效液相色谱法测定头孢噻吩钠含量和有关物质[J].激光杂志，2010（03）.

[2]许润娟，汤艳群.HPLC法在药品有关物质检查中的应用探讨[J].国际医药卫生导报，2005（07）.

[3]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2000年版.北京：化学工业出版社，2000：196.

[4]梁美凤，李爱香.头孢噻吩钠（弘威雷）的旋光定量法[J].海峡药学，2003（02）.

[5]British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[M/CD].2000.

[6]唐素芳，吉岡澄江.赋形剂对头孢噻吩钠稳定性影响的研究[J].天津药学，1997（02）.

[7]周淑清，丁志玉.头孢噻吩钠中残留溶媒乙酸乙酯、丙酮的测定[J].黑龙江医药，2007（05）.

[8]樊后民，王刚林.高效液相色谱法测定头孢噻吩钠中的有关物质[J].中国药房，2005（11）.

[9]李蔚，朱捷，张妍.注射用头孢噻吩钠含量测定及与3种大输液的配伍稳定性分析[J].第三军医大学学报，2011（12）.

[10]钱桂英，柏大为.注射用头孢噻吩钠中高分子聚合物的测定[J].首都医药，2009（12）.

HPLC法测定呋喃妥因栓有关物质 篇4

1 仪器与试药

1.1 仪器:

岛津高效液相色谱仪,泵:LC-10AT,检测器:SPD-10A,工作站:N2000双通道色谱工作站。

1.2 试药:

呋喃妥因对照品(中国药品生物制品检定所,供HPLC法测定,批号为101166-201001);磷酸盐及四氢呋喃分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;磷酸盐缓冲液(p H7.0)-四氢呋喃(9:1)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为367nm;进样量10μl。

2.2 溶液制备:

对照品溶液的制备:取呋喃妥因对照品适量,加流动相溶解并稀释成0.08mg/ml的溶液,用为对照品溶液。供试品溶液的制备:避光操作,取呋喃妥因栓切成细片,精密称取本品适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,水浴中加热使融化,加二甲基甲酰胺10ml使溶解,加流动相至刻度,摇匀,冷冻使基质凝固(约10分钟),用微孔滤膜滤过,弃去初滤液,取续滤液1ml至10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为供试品溶液。取不含呋喃妥因的阴性样品,同法制备阴性溶液(图1~3)。

2.3 方法学。

2.3.1检测波长的确定:取呋喃妥因对照品溶液,照紫外分光光度法(中国药典2010年版二部附录)在200-400nm波长范围内进行扫描,结果在367±2nm波长处有最大吸收,因此确定检测波长为367nm。2.3.2专属性试验:2.3.2.1酸破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,加2mol/L盐酸溶液2ml,避光放置2小时,用2mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.2碱破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,加2mol/L氢氧化钠溶液2ml,避光放置2小时,用2mol/L盐酸溶液中和至中性,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.3热破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,于100℃水浴加热4小时;水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.4氧破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,加30%过氧化氢溶液2ml,避光放置2小时,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.5光破坏性试验。取呋喃妥因栓适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,于4000LX光照下放置4小时后,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.6阴性干扰试验。取不含呋喃妥因的阴性栓切成细片,精密称取本品适量(约相当于呋喃妥因40mg),置50ml棕色量瓶中,水浴中加热使融化,余下按“2.2供试品溶液制备方法”操作。2.3.2.7结论:样品经酸、碱、氧、热、光破坏后产生的杂质峰均能与呋喃妥因峰完全分离;阴性在样品及杂质出峰时间均无色谱峰出现,不干扰测定;空白溶剂亦不干扰测定;说明此方法专属性强,能有效检查呋喃妥因栓中的有关物质。2.3.3检测限:取呋喃妥因原料制成的对照溶液,用水进行一系列的稀释,精密吸取各稀释液注入液相色谱仪,以信噪比3:1的浓度为检测限度,测得呋喃妥因的检测限为0.8ng。2.3.4溶液稳定性试验:取呋喃妥因栓按2.2供试品溶液制备方法制备供试品溶液,放置8小时,分别于0、1、2、4、6、8小时进样,得呋喃妥因峰面积,计算RSD,考察供试品溶液稳定性,数据如表1所示。结论:平均峰面积为3032823,RSD为4.17%,说明溶液在8小时之内稳定性不好,计算RSD值,结果溶液在2小时内稳定性良好,RSD值小于1.5%,样品溶液配制完成后在2小时之内进行测定。

3 样品有关物质测定

用上述确定的方法对7批呋喃妥因栓样品进行有关物质测定,结果如表2所示。

4 讨论

该法能够准确而有效的测定呋喃妥因栓的有关物质,能够更好的控制产品质量。

摘要：目的:建立一种高效液相色谱法测定呋喃妥因栓的有关物质。方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲液(pH7.0)-四氢呋喃(9:1)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为367nm。结果:此方法专属性较强。结论:此方法能够有效控制呋喃妥因栓的有关物质。

关键词：呋喃妥因栓,有关物质,高效液相色谱法

参考文献

有关物质测定 篇5

食品中辛基酚等5种酚类物质的测定

BJS

201913

范围

本标准规定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于婴儿配方食品、畜肉、禽蛋、水产品、罐头食品、植物油中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的测定。

2原理

试样中加入同位素内标后，经乙腈提取，离心，取上清液经固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

3试剂和材料

除另行规定外，本实验所用试剂均为分析纯，水为GB/T

6682规定的一级水。

3.1

试剂

3.1.1

甲醇（CH3OH）：质谱级。

3.1.2

乙腈（CH3CN）：质谱级。

3.1.3

氨水（NH4OH）：色谱级。

3.2

试剂配制

0.05%

氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀释至1000

mL。

3.3

标准品

辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A标准物质和辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A

-D4同位素内标的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。

3.4

标准溶液配制

3.4.1标准储备溶液（100

mg/L）：分别称取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准物质（3.3）10

mg（精确至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100

mg/L。溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20

℃冰箱中，有效期12个月。

3.4.2混合标准中间溶液（1

mg/L）：分别准确吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准储备液(100

mg/L)(3.4.1)

mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1

mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3个月。

3.4.3同位素内标标准储备溶液（100

mg/L）：分别称取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A

-D4同位素内标（3.3）10

mg（精确至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100

mg/L。溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20

℃冰箱中，有效期12个月。

3.4.4同位素内标混合标准中间溶液（1

mg/L）：分别准确吸取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A

-D4同位素内标标准储备液(100

mg/L)(3.4.3)各1

mL至100

mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1

mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3个月。

3.4.5

同位素内标混合标准工作液（100

μg/L）：分别准确吸取同位素内标标准储备液(1

mg/L)(3.4.4)各1

mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成100

μg

/L的混合标准工作液。临用时配制。

3.4.6混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液

(1

mg/L)(3.4.2)适量，加入同位素内标混合标准中间溶液（1

mg/L）(3.4.4)，使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A浓度分别为0.5

μg/L、1

μg/L、5

μg/L、10

μg/L、20

μg/L和50

μg/L的混合标准系列工作溶液。临用时配制。

3.5

材料

固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200

mg，6

mL。

仪器和设备

4.1高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾（ESI）离子源。

4.2天平：感量分别为0.001g和0.000

g。

4.3涡旋混合器。

4.4

离心机：转速≥8000

r/min。

4.5

超声波清洗器。

分析步骤

5.1

试样制备

5.1.1

乳粉、米粉：试样混合均匀，密封并标明标记，于-20℃冰箱冷藏保存。

5.1.2

禽蛋：取代表性试样约200

g，去壳后用组织匀浆机搅拌均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.3水产品、畜肉：取代表性试样约200

g，用匀浆机匀浆均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.4

植物油：试样混合均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.5

罐头食品：取罐头中固形物试样约50

g,用匀浆机匀浆均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

冷藏保存后的样品解冻后需再次经匀浆机均质后使用。

5.2

提取

准确称取1

g（精确至0.001

g）样品于15

mL具塞玻璃试管中，加入0.1mL同位素内标混合标准工作液（100

μg/L）(3.4.5)

和5

mL乙腈（3.1.2），涡旋混匀，超声提取15

min，8000

r/min离心5

min，取上层乙腈相；残留部分再用5

mL

乙腈重复提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷冻2h，取出于8000

r/min离心5

min，取上清液待净化。

5.3

净化

取固相萃取柱（3.5），使用前用18

mL甲醇活化，6mL水平衡。将5.2项所得上清液加30

mL水稀释,充分摇匀后以1

mL/min~2

mL/min的速度上样，弃去滤液，用12

mL60

%甲醇水溶液（V/V）淋洗，弃去淋洗液，再用6

mL乙腈洗脱，洗脱液于50℃用氮气吹至近干。用1

mL甲醇溶解残渣，待测。

5.4

空白试验

除不加样品外，采用相同的分析步骤进行操作。

5.5仪器参考条件

5.5.1色谱条件

a)

分析柱：

C18

柱（3

μm，50

mm

×

mm），或性能相当者；捕集柱：

C18

柱（5

μm，50

mm

×

4.6

mm），或性能相当者；捕集柱位于进样阀之前。

b）流动相：A为0.05%氨水溶液（3.2），B为甲醇（3.1.1），洗脱梯度见表1。

c）流速：400

μL/min。

d)

柱温：30℃。

e)

进样量：10

μL。

表1

梯度洗脱程序表

时间（min）

A(%)

B(%)

0

14.5

14.51

5.5.2

质谱条件

a)

离子源：电喷雾离子源（ESI源）。

b)

检测方式：多反应离子监测（MRM）。

c)

碰撞气为高纯氮气，干燥气、雾化气、鞘气等均为氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、喷嘴电压、碰撞能量、碎裂电压等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对等信息详见附录B。

5.6

定性测定

按照超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品色谱峰保留时间一致的色谱峰（变化范围在±2.5%之内），并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比（k）的偏差不超过表2规定的范围，可以确定试样中检出相应化合物。

表2

定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度（%）

k＞50%

50%≥k＞20%

20%≥k＞10%

k≤10%

允许的最大偏差（%）

±

±

±

±

5.7定量测定

5.7.1标准曲线的制作

将混合标准工作溶液（3.4.6）分别按仪器参考条件（5.5）进行测定，得到目标化合物峰面积与内标峰面积的比值，根据标准曲线得到待测液中目标化合物的浓度。

对照品色谱图参见附录C。

5.7.2试样溶液的测定

将试样溶液（5.3）按仪器参考条件（5.5）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次；样品中各待测组分的响应值应在标准曲线的线性响应范围内，若超出标准曲线线性范围，应用甲醇（3.1.1）稀释后进行分析。

结果计算

结果按式（1）计算：

…………………………………………（1）

式中：

X—试样中某种组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；

c—由标准曲线得出的样液中某种组分的浓度，单位为纳克每毫升（μg/L）；

co——由标准曲线计算得到的过程空白样品中某种组分的浓度，单位为微克每升（μg/L）

V—试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m—试样称取的质量，单位为克（g）；

f—稀释因子。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。

精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

8检出限和定量限

当称样量为1

g，定容体积为1

mL时，本方法中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A的检出限均为1.0μg/kg，定量限均为2.0μg/kg。

9其他

9.1实验中所用的器具均为玻璃材质，液相色谱-串联质谱仪的管线均为不锈钢或聚四氟乙烯材质。

9.2

严格控制试剂空白，空白值应不得对检测结果产生明显影响，否则扣除空白时会引起较大的误差。

附录A

辛基酚等5种酚类物质相关信息

表A.1

辛基酚等5种酚类物质英文名称、中文名称、分子式、CAS号、相对分子质量

序号

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子量

辛基酚

4-tert-Octyl

phenol

140-66-9

C14H22O

206.33

正辛基酚

4-n-Octyl

phenol

1806-26-4

C14H22O

206.33

壬基酚

Nonylphenol

25154-52-3

C15H24O

220.35

正壬基酚

4-n-Nonylphenol

104-40-5

C15H24O

220.35

双酚A

Bisphenol

A

80-05-7

C15H16O2

228.29

辛基酚-13C6

4-tert-Octylphenol-13C6

1173020-24-0

C14H22O

212.28

正辛基酚-D17

4-n-Octyl

phenol-D17

1219794-55-4

CD3(CD2)7C6H4OH

223.43

壬基酚-13C6

3,6,3-Nonylphenol-13C6

1173020-38-6

C15H24O

226.40

正壬基酚-D4

4-n-Nonylphenol

-2,3,5,6-D4,OD

358730-95-7

C15H19D5O

225.38

双酚A-D4

Bisphenol

A

-3,3’,5,5’-D4

347841-41-2

C15H12

D4O2

232.31

附录B

超高效液相-三重四极杆串联质谱参考条件

质谱参考条件

a）电离方式：电喷雾负离子模式；

b）检测方式：多反应监测（MRM）；

c）离子源温度(TEM):650℃;

d）雾化气(Gas1):

55;

e）辅助气(Gas2):

65；

f）气帘气(Gurtain

Gas):

20;

g）电喷雾电压：-4500V；

h）干燥气流速：11

L/min；

i）定性离子、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表B.1。

表B.1

化合物定性、定量离子和质谱分析参数

化合物

Q1

Q3

DP/V

CE/V

辛基酚

205

133*

-80

205

117

-80

-80

正辛基酚

205

106*

-80

205

119

-80

-54

4-壬基酚

219

133*

-80

219

147

-80

4-正壬基酚

219

106*

-80

219

119

-80

双酚A

227

212*

-80

227

133

-80

辛基酚-13C6

211

139*

-73

正辛基酚-D17

222

108*

-80

壬基酚-13C6

225.1

138.9*

-90

正壬基酚-D4

223

110*

-80

双酚A-D4

231

216*

-80

*

定量离子。

附录C

超高效液相-三重四极杆串联质谱标准品色谱图

双酚A

双酚A-D4

B.2

B.1

壬基酚-13C6

4-壬基酚

B.4

B.3

4-正壬基酚

壬基酚-D4

B.6

B.5

对辛基酚-13C6

4-辛基酚

B.8

B.7

4-正辛基酚

辛基酚-D17

B.10

B.9

0.01

μg/mL混合标准溶液中各化合物MRM色谱图

图C.1

双酚A；图C.2

双酚A-D4；图C.壬基酚；图C.4壬基酚-13C6；图C.5正壬基酚；图C.6

正壬基酚-D4；图C.7辛基酚；图C.8

辛基酚-13C6；图C.9正辛基酚；图C.10

正辛基酚-D17

本方法负责起草单位：中国食品药品检定研究院。

方法验证单位：北京市疾病预防控制中心、国家食品安全风险评估中心、陕西省食品药品监督检验研究院、中国肉类食品综合研究中心、辽宁省食品检验检测院、湖北省食品质量安全监督检验研究院。

有关物质测定 篇6

【中图分类号】G64.26【文献标识码】A【文章编号】2095-3089（2016）15-0-02

今天我说课的内容是利用手持技术测定不同物质溶于水时温度的变化，接下来将从教材分析、学情分析、三维目标、重难点、教法学法分析、教学过程、课外拓展、板书设计、教学特色这几个方面内容来阐述我的教学思路。

一、教材分析

本实验选自人教版九年级化学第九单元《溶液》课题1，这部分的内容主要介绍不同物质溶解于水时溶液的温度变化及从中探求物质溶解于水时温度变化的规律。通过本节实验的探究学习，既复习巩固了前面所学的溶液部分的知识，又引导学生运用生活经验学习化学知识，并教会学生如何将知识应用于生活实际中，同时，也为将来学习溶解度、溶质质量分数与酸碱盐的知识打下基础，起到承上启下的作用。

二、学情分析

本节课将的授课对象是普通中学的九年级的学生。

在知识储备上，学生已学习并初步具备了什么是溶液，溶液的形成等方面知识，并且学生也有溶液溶解时温度变化这方面的生活经历。

在能力储备上，学生具备一定的实验操作能力，但在观察、分析、归纳能力等方面上还有一定的难度，有待进一步提高。

三、三维目标

1.知识与技能

（1）了解温度传感器、数据采集器以及配套软件的相关知识，学会其操作方法。

（2）初步了解物质发生物理或化学变化的过程中常常伴随有能量的转化。

（3）利用手持技术实验，掌握不同物质溶解于水时溶液的温度变化的原理。

2.过程与方法：

通过测量物质溶解与水时溶液温度的变化，探求物质溶解于水时温度变化的规律。

3.情感态度与价值观目标：

体会手持技术在化学中的运用，养成良好的探究精神。

四、教学重、难点

重点：测量物质溶于水时温度的变化。

教学难点：探究物质溶于水时温度的变化规律

五、教法学法分析

教法：根据教学目标的要求、教材和学生的特点，本节课我采用讨论法、实验探究法为主，讲授法为辅。有效利用有利的条件使学生的课堂充满乐趣，努力做到把知识具体化、形象化，这样既体现本节课的教学重点，又突破教学难点。

学法：教学过程不仅需要教师的活动，而且需要学生的活动，只有把教师教的最优化和学生学的最优化融合在一起，才能保证教学最优化有一个完整的过程。提倡学生的学习方法有：交流讨论、动手实验和科学探究。整个课堂体现了教师教为主导，学生学为主体的新课标教学理念，并在学生学习过程中培养学生的观察、分析、归纳能力，动手能力，增强学生学习自主性、互动性，体现合作精神、创新精神。

六、教学流程

这节课，我将采用探究式教学这种教学模式，我按“提出问题→做出假设→设计实验→进行实验→根据实验结果得出结论”这五个环节组织教学。

提出问题：先创设情境 本节课我将拿出几瓶饮料，引入“为什么一些饮料摇一摇就可以自动变冷？”这一问题。让学生思考，小组讨论解决问题的方法，并让学生作猜想。接着教师对学生所得猜想进行解答，解释饮料瓶的隔层装有硝酸钾固体和水，摇晃时使硝酸钾固体溶解于水中吸热，从而使里面饮料变冷。通过这个解释，进一步向学生提出“硝酸铵固体、氯化钠固体、氢氧化钠固体溶解于水时溶液温度会有什么变化？”这一问题。再次激发学生的学习与探知欲，让学生猜想。

做出假设：让学生畅所欲言，发表自己的想法。我可以猜想到学生的答案不外乎这四种①放热、②吸热、③有的放热有的吸热、④既不放热也不吸热

设计实验：学生进过一番发表言论后，让学生以小组为单位设计实验进行验证。（分组标准是实验假设相同的分为一组。）从一个初中学生的角度出发，猜想学生可能会设计让物质溶于水，通过触摸烧杯壁来验证温度的变化。首先，我将肯定学生的想法，接着引导学生思考自己设计的实验所在的缺点（对于一些温度变化不是很明显的物质，采用这种方法很难感受出温度的变化），最后由教师提出采用手持技术来弥补缺点。

进行实验：

预先帮学生准备好实验用品：NH4NO3固体、NaCl固体、NaOH固体、蒸馏水、“探世界”万能数据采集器、温度传感器、磁力搅拌器、计算机、250ml锥形瓶、100ml量筒、台称、铁架台

再提供实验装置安装图，学生根据图安装实验装置。

在学生进行实验前，我将亲自讲解并演示温度传感器、数据采集器以及配套软件的使用步骤，让学生了解其相关知识并学会使用操作。在学生进行小组实验时，我将在课室四处巡视和指导实验。并分别给出表格让学生根据表格小组进行实验：

[探究] a、不同质量的NH4NO3溶于水时温度的变化规律；

b、不同质量的NaCl溶于水时温度的变化规律；

c、不同质量的NaOH溶于水时温度的变化规律；

d、相同质量NH4NO3、NaCl、NaOH溶于水时温度的变化规律。

我将展示一个表格，小组派代表进行填写，最后每个小组得到的数据进行汇总，并组织小组的交流。实现了学生的自主学习、合作学习、探究学习。

实验过程中需注意：

氢氧化钠是一种腐蚀性很强的碱，在称量时须小心不要沾到手。并且取完药品要马上盖上瓶盖，因为氢氧化钠易吸潮。在实验操作时，不仅要完成实验，也要养成正确实验操作的习惯。

得出结论：实验的最终目的是为了的出结论，我再引导学生做最后的表格的完善，解决前面的实验假设。

七、课外拓展

对于学有余力和对化学学习兴趣浓厚的同学，可以展开课外调查：利用手持技术，还能展开那些化学实验，并试着动手做一做。根据教育心理学角度，这一部分的实施，不仅使学有余力的同学扩广知识深度，还能满足他们的求知欲望和增强他们学习化学的自信心，鼓励学生在学习知识的同时也大胆展开探索并学会创新。

八、板书设计

以提纲式板书，有利于学生课后进行复习。物质溶于水时溶液温度的变化：

九、教学特色

1.在进行实验分组时，打破以往的规则，让实验假设相同的学生分为一组，这样学生通过实验来验证自己设想的假设，满足了学生的求知欲，让学生在实验中收获成功，增强他们学习化学的自信心。

2.化学的学习不仅在课堂上，也在课外中。课堂的学习教师主要考虑到大部分同学的学习情况，对于那些学有余力还有化学学习兴趣浓厚的学生，通过一些难度稍微大的课外调查研究，不仅满足了学生的求知欲，扩宽知识深度，也满足了学生在化学学习上的成就感，增强学生的自信心。

参考文献：

（1）衷明华.中学化学实验教学研究[M]，广州：暨南大学出版社，135-137

瑞格列奈片有关物质测定方法的改进 篇7

关键词：瑞格列奈,有关物质,高效液相色谱法

瑞格列奈(Repaglinide)是非磺脲类促胰岛素分泌剂，具有餐时调节体内血糖的治疗特点。其通过模仿生理性胰岛素分泌，可以有规律地控制全日平均血糖，避免餐后高血糖和低血糖后反应性高血糖，并减少低血糖事故的发生。大量临床应用证明其对饮食控制、减轻体重及运动锻炼不能有效控制其高血糖的2型糖尿病(非胰岛素依赖型)患者有很好的疗效，可作为治疗2型糖尿病的一线用药[1]。瑞格列奈为(S)-2-乙氧基-4-[2-[[甲基-1-[2-(1-哌啶基)苯基]丁基]氨基]-2-氧代乙基]苯甲酸。瑞格列奈片的质量标准收载于《美国药典》(USP34/NF29)[2]，采用美国药典中的色谱条件测定瑞格列奈片的有关物质，辅料峰对杂质峰的干扰较大，影响杂质测定结果的准确性，采用改进后的色谱条件进行试验，能够较好地解决这一问题。

1 仪器与材料

高效液相色谱仪(HITACHI 5410 UV Detector,5310 Column oven,5210 Auto sampler,5110 Pump)，甲醇(色谱纯，天津康科德公司)，纯化水，磷酸二氢铵(分析纯，天津康科德公司)，磷酸(色谱纯，天津康科德公司)。

瑞格列奈原料(Dr.Reddy’s laboratories Ltd)，瑞格列奈对照品(中国药品生物制品检定所)，杂质A对照品(USP标准品，批号:GOJ300)，杂质B对照品(USP标准品，批号:FOB269)，自制瑞格列奈片(批号110948)。

2 美国药典规定的高效液相色谱条件

2.1 色谱条件

色谱柱为ECOSIL C18(250 mm×4.6 mm,5μm)，流动相为0.2%磷酸二氢铵(用磷酸调节p H至2.5)-甲醇(30∶70)，流速为1.0 m L/min，检测波长为210 nm，柱温为40℃，进样量为20μL，溶剂为0.2%磷酸二氢铵(用磷酸调节pH至4.0)-甲醇(30∶70)。

2.2 专属性试验

取处方量辅料适量，置50 m L量瓶中，用溶剂适量溶解，超声10 min，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液，依法测定。记录色谱图，见图2，由此可见，在该波长条件下辅料的干扰较大。

3 改进后的高效液相色谱条件

3.1 色谱条件与系统适用性

色谱条件色谱柱为ECOSIL C18(250 mm×4.6mm,5μm)，流动相为0.2%磷酸二氢铵(用磷酸调节p H至2.5)-甲醇(40∶60)，流速为1.0 m L/min，检测波长为240 nm，柱温为40℃;进样量为20μL，以流动相作为稀释液。

系统适用性取瑞格列奈和杂质A、B对照品适量，加稀释液分别制成含瑞格列奈320μg/m L，杂质有关物质A、B各6.4μg/m L的混合对照品溶液，量取20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，瑞格列奈与杂质A的分离度为8.21，杂质A与杂质B的分离度为12.59，杂质A与杂质B的理论塔板数分别为10 024和12 829，拖尾因子分别为1.03和0.97，系统适用性良好。

3.2 专属性试验

3.2.1 辅料干扰试验

取处方量辅料适量，置10 m L量瓶中，用流动相溶剂适量溶解，超声10 min，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液，依法测定，记录色谱图，见图3。

3.2.2 破坏性试验

取瑞格列奈粉末30 mg共4份，分别置100 m L量瓶中，进行如下操作，(1)酸破坏:加入2 mol/L盐酸适量，60℃水浴2 h后用2 mol/L氢氧化钠调pH至中性，加流动相稀释至刻度，过滤;(2)碱破坏:加入4 mol/L氢氧化钠适量，80℃水浴2 h后用4 mol/L盐酸调pH至中性，加流动相稀释至刻度，过滤;(3)氧化破坏:加入6%过氧化氢适量，45℃水浴2 h后加流动相稀释至刻度，过滤，(4)热破坏:取瑞格列奈30 mg，置试管中加热至药物部分融化变色，加流动相转移至100 m L量瓶中，加流动相稀释至刻度，过滤。

分别精密量取上述各续滤液20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的2倍，结果表明，该色谱条件能检出瑞格列奈的主要分解产物且分离度良好。

3.3 线性关系与定量限考察

取瑞格列奈杂质A对照品母液适量，加稀释液配制成浓度为0.4μg/m L、0.6μg/m L、0.8μg/m L、1.0μg/m L、1.2μg/m L、2.0μg/m L的系列标准溶液，在上述色谱条件下依法测定，并以峰面积(A)对浓度(c)进行线性回归，得到线性回归方程:A=5 909.9c-400.38(r=0.999 8);取瑞格列奈杂质B对照品母液适量，加稀释剂配制成浓度为0.1μg/m L、0.2μg/m L、0.3μg/m L、0.5μg/m L、0.8μg/m L、1.0μg/m L的标准溶液，在上述色谱条件下依法测定，并以峰面积(A)对浓度(c)进行线性回归，得到线性回归方程:A=42 982c-685.54(r=0.999 6)。结果表明:瑞格列奈杂质A、B分别在浓度范围0.4～2.0μg/m L、0.1～1.0μg/m L内呈现良好的线性相关性。

取瑞格列奈杂质A、B对照品母液适量，用稀释液逐级稀释，量取20μL进样测定，分别以信噪比(S/N)3和10确定杂质A、B的检测线和定量限，结果表明:瑞格列奈杂质A、B的检测线分别为0.15μg/m L和0.02μg/m L;定量限分别为0.40μg/m L和0.06μg/m L。

3.4 精密度试验

取瑞格列奈片杂质A、B对照品溶液，分别为0.8μg/m L、0.2μg/m L，连续进样6次，结果，杂质A、B峰面积值RSD分别为0.16%和0.12%。

3.5 加样回收率试验

取瑞格列奈片剂粉末及杂质A、B对照品贮备液适量，加入稀释剂制成含瑞格列奈浓度为300μg/m L，杂质A分别为0.6μg/m L、1.0μg/m L、1.2μg/m L的低、中、高样品溶液各3份;杂质B分别为0.1μg/m L、0.2μg/m L、0.3μg/m L的低、中、高样品溶液各3份;测定回收率，杂质A、B平均回收率分别为98.0%和100.5%，杂质A低、中、高样品RSD分别为0.60%、0.57%、0.78%，杂质B低、中、高样品RSD分别为0.24%、0.32%、0.41%，符合要求。

1为瑞格列奈，2为杂质A,3为杂质B

3.6 稳定性试验

取瑞格列奈杂质A、B对照品溶液适量，分别于室温放置0、12、16 h后测定含量，计算得到杂质A在12 h和16 h内的峰面积的变化率分别为1.02%和0.96%;杂质B在12 h和16 h内的峰面积的变化率分别为0.83%和0.56%。结果表明:样品溶液在室温条件下放置16 h内均稳定。

4 讨论

4.1 检测波长的选择

对片剂常用辅料、有关物质A、B和瑞格列奈分别在200～400 nm处进行紫外扫描，结果表明，各辅料在210 nm处均有较大紫外吸收，因此会对杂质的测定产生干扰;经测定发现瑞格列奈及各相关物质在240 nm处均有较强的吸收，而辅料在该波长下的紫外吸收很小，因此，确定改进后的检测波长为240 nm。

4.2 流动相的选择

采用美国药典规定的色谱条件，溶剂峰干扰瑞格列奈杂质B，故对流动相的比例进行适当调整，使得溶剂峰与杂质B的分离度增加同时使得主峰与杂质峰的分离度提高，优化了色谱行为。因此，采用改进后的色谱条件可以使各杂质与主峰完全分离，并降低了辅料对有关物质的干扰，专属性更强。此外，采用流动相作为稀释剂，操作简便易行。

参考文献

[1] Adis.Repaglinide:a review of its use in type 2 diabets mellitus.Drugs,2012;72(5):744—745

有关物质测定 篇8

1 仪器与试药

日本岛津LC-20A型高效液相色谱仪;色谱柱为Hypersil BDS-C18 (250mm×4.6mm , 5μm) 。 克林霉素对照品 (购自中国药品生物制品检定所, 批号110715-200212) ;甲醇 (色谱纯, 美国Fisher Scinetific ) , 水为重蒸馏水, 其他试剂均为分析纯。盐酸克林霉素胶囊 (批号分别为:20050601, 20050602, 20050603) 及阴性样品均为厂家自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Hypersil BDS-C18 (250mm×4.6mm , 5μm) 色谱柱, 磷酸二氢铵溶液 (取磷酸二氢铵2.88g, 加水溶解并稀释成1 000ml, 用80%磷酸溶液调节pH值至3.0) -甲醇 (210∶300) 为流动相, 检测波长为214nm, 流速为1.0ml/min。外标法测定。

2.2 系统适用性实验[2]

取对照品溶液 (克林霉素对照品用流动相溶解并稀释成每1ml约含克林霉素2mg的溶液) 10μl注入液相色谱仪, 记录色谱图, 理论板数按盐酸克林霉素峰计算应≤1 300, 分离度应≥1.5, 色谱图见图1。

2.3 方法耐用性

笔者考察了3种不同厂家生产的C18 (250mm×4.6mm , 5μm) , 柱效和分离度良好, 结果无明显差异, 本研究采用了依利特Hypersil BDS-C18色谱柱进行实验。

2.4 专属性实验

酸破坏性溶液制备:取本品20mg, 置10ml小试管中, 加1mol/L HCl 1ml放置3d, 加流动相稀释至刻度, 中和, 摇匀, 即得。碱破坏性溶液制备:取本品20mg, 置10ml小试管中, 加1mol/L NaOH 1ml放置3d, 加流动相稀释至刻度, 中和, 摇匀, 即得。氧破坏性溶液制备:取本品20mg, 置10ml小试管中, 加30% (体积分数) 过氧化氢 (H2O2) 11ml放置3d, 加流动相稀释至刻度, 摇匀, 即得。强光破坏性溶液制备:取本品20mg, 置10ml小试管中, 于 (4 500±500) lx照射5h, 加流动相稀释至刻度, 中和, 摇匀, 即得。高温破坏性溶液制备:取本品20mg, 置10ml小试管中, 105℃保持4h, 冷却至室温, 加流动相稀释至刻度, 中和, 摇匀, 即得。

按色谱条件分别测定, 结果发现主峰和各分解产物分离良好, 说明本法专属性强, 适用于克林霉林胶囊有关物质的测定。

2.5 有关物质测定

2.5.1 线性关系考察:

精密吸取盐酸克林霉素对照品溶液 (0.332mg/ml) , 分别进样1、2、5、10、15、20μl, 注入液相色谱仪, 按上述色谱条件测定峰面积。以进样量 (μg) (X) 为横坐标, 峰面积 (Y) 为纵坐标, 作回归处理, 回归方程为:Y =-3844+3.542e+004X, r =0.9962 。结果表明, 克林霉素在0.332～6.640μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5.2 检出限:

配制一系列浓度的样品溶液, 按2.1项分别测定, 记录色谱图, 以S/N≥10作为定量限, 以S/N≥3作为最低检出限。比较所测出的信号, 以信噪比3∶1时的相应样品浓度确定检测限。测得定量限为0.35μg, 检出限为0.1μg。

2.5.3 样品有关物质测定:

取本品适量, 精密称定, 加流动相制成每1ml中含10.0mg的溶液, 作为供试品溶液;精密量取适量, 用流动相稀释成每1ml中含0.4mg的溶液, 作为对照品溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪, 调节检测节灵敏度, 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%, 再精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl, 分别注入液相色谱仪, 记录色谱图至主成分峰面积保留时间的1.5倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰, 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍 (8.0%) 。测得3批样品中有关物质分别为1.5、1.3、1.2 (倍) 。典型的样品色谱图见图3。

参考文献

[1]吴永乐, 王宇倩, 吴卫红, 等.克林霉素体外抗菌活性研究[J].中国抗生素杂志, 1996, 21 (6) :427.

有关物质测定 篇9

1 试验材料

对照品名称:奥硝唑

来源:中国药品生物制品检定所

批号:100608-200701。

规格:100mg

供试品名称:奥硝唑片

来源:浙江爱生药业有限公司

批号:110108

规格:0.25g

高效液相色谱仪:安捷伦1100

色谱柱:waters C18 (4.6×250mm, 5μm)

2 方法学验证

根据文献“高效液相色谱法测定奥硝唑片的含量”和“HPLC法测定奥硝唑葡萄糖注射液含量和有关物质”初步将有关物质方法拟定如下, 并进行方法学验证:

2.1 色谱条件与系统适用性试验。

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水 (30:70) 为流动相;检测波长为318nm。理论板数按奥硝唑峰计算应不低于1000。

2.2 测定法。

取本品, 除去包衣, 研细, 精密称取细粉适量, 加流动相制成每1ml中含奥硝唑0.1mg的溶液, 作为供试品溶液;精密量取1ml, 置100ml量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 摇匀, 作为对照溶液。取对照溶液20μl注入液相色谱仪, 调节检测灵敏度, 使主成分峰的峰高约为满量程的20%, 另取供试品溶液20μl, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。

2.3 最小检测限的测定。

精密称取奥硝唑对照品适量, 逐级稀释配制成不同浓度的对照品溶液, 精密吸取20μl进样, 以主峰响应信号为噪声3倍的样品浓度作为检测限。结果:当对照品浓度稀释至1.142μg/ml时, 进样量为20μl时, 主峰响应信号为基线噪声的3倍, 本品的最低检测量为22.84ng。

2.4 专属性试验。

(1) 酸破坏。取供试品20片, 除去包衣, 研细, 取细粉适量 (约相当于奥硝唑25mg) , 置50ml量瓶中, 加流动相适量, 加入1mol/L盐酸溶液10滴, 超声使溶解, 用流动相稀释至刻度。密封, 煮沸10分钟, 冷却至室温滤过, 精密量取续滤液10ml置50ml量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 作为酸破坏供试品溶液。同时做酸破坏空白溶液。 (2) 碱破坏。取供试品20片, 除去包衣, 研细, 取本品细粉适量 (约相当于奥硝唑25mg) , 置50ml量瓶中, 加流动相适量, 加入1m·l/L氢氧化钠溶液5滴, 超声使溶解, 用流动相稀释至刻度。密封, 煮沸10分钟, 冷却至室温滤过, 精密量取续滤液10ml置50ml量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 作为碱破坏供试品溶液。同时做碱破坏空白溶液。 (3) 氧化破坏。取供试品20片, 除去包衣, 研细, 取本品细粉适量 (约相当于奥硝唑25mg) , 置50ml量瓶中, 加流动相适量, 加入30%过氧化氢溶液15滴, 超声使溶解, 加流动相稀释至刻度。室温放置4小时, 滤过, 精密量取续滤液10ml置50ml量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 作为氧化破坏供试品溶液。同时做氧化破坏空白溶液。 (4) 高温破坏。取供试品20片, 除去包衣, 研细, 取本品细粉适量 (约相当于奥硝唑25mg) , 置50ml量瓶中, 置105℃的烘箱中放置2小时。取出, 放至室温, 加流动相适量超声使溶解, 加流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液10ml置50ml量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 作为高温破坏供试品溶液。同时做高温破坏空白溶液。 (5) 光照破坏。取供试品20片, 除去包衣, 研细, 取本品细粉适量 (约相当于奥硝唑25mg) , 置50ml量瓶中, 置药物稳定性检查仪中在4500±500Lx照度下照射24小时, 取出, 加流动相适量超声使溶解, 加流动相稀释至刻度, 滤过, 精密量取续滤液10ml置50ml量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 作为光破坏供试品溶液。同时做光破坏空白溶液。精密吸取上述各供试品溶液各20μl注入液相色谱仪, 记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。结果见表1。

表1专属性试验结果

结果:供试品在酸、碱、氧化、高温、强光破坏条件下, 主峰与各杂质峰均能良好分离, 说明本方法能够将主成份与杂质有效分离, 本方法专属性良好。各试验在主峰保留时间2倍后无杂质峰出现, 因此确定检测记录时间为主峰保留时间的2倍。

2.5 溶液稳定性试验。

试验方法:取供试品20片, 除去包衣精密称定, 研细, 精密称取细粉适量 (约相当于奥硝唑25mg) , 置50ml量瓶中, 加流动相适量超声使溶解, 并稀释至刻度, 滤过, 精密量取续滤液10ml置50ml量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 精密量取20μl注入液相色谱仪, 分别于0、2、4、6、8小时测定峰面积, 记录色谱图, 结果见表2。

结果:供试品溶液在8小时内稳定。

2.6 有关物质测定。

取供试品, 按照该方法进行测定, 结果见表3。

结果:供试品有关物质检查结果小于1.0%, 经方法学试验证明此方法专属性良好, 能够作为本品有关物质检查的方法。根据供试品有关物质检查结果将有关物质限度定为:供试品溶液的色谱图中如有杂质峰, 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积 (1.0%) 。

3 结论

采用高效液相色谱法测定奥硝唑片有关物质, 该方法专属性好、重复性好, 能够有效检测样品含有的杂质, 有效控制产品质量。

摘要：目的:建立高效液相色谱法测定奥硝唑片的有关物质。方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水 (30:70) 为流动相;检测波长为318nm。采用高效液相色谱法测定奥硝唑片有关物质。结果:经方法学结果表明该方法专属性好、能够将杂质与主成分有效分离, 方法耐用性好, 该方法能够有效检测样品含有的各个杂质, 可有效控制产品质量。结论:该方法可有效检出样品杂质, 可以作为奥硝唑片的有关物质检测方法。

关键词：奥硝唑片,高效液相色谱法,有关物质

参考文献

[1]郭利民, 任志强.高效液相色谱法测定奥硝唑片的含量[J].医药导报, 2005 (9) :822.

有关物质测定 篇10

关键词：丁基羟基茴香醚,高效液相色谱法,含量,有关物质

丁基羟基茴香醚(BHA)属油溶性抗氧化剂,广泛用于药品、化妆品和食品工业中。除抗氧化作用外BHA还具有相当强的抗菌力,具有抗霉效果。其生产工艺主要有对羟基苯甲醚催化法和叔丁基对苯二酚催化法[1]。BHA一般是指2-叔丁基-4-羟基茴香醚(2-BHA)和3-叔丁基-4-羟基茴香醚(3-BHA)两种异构体的混合物。商品化BHA中,3-BHA的含量一般至少90%。3-BHA的抗氧化效果比2-BHA强1.5～2倍,两者合用有增效作用[2]。食品行业已于1980年出台了食品添加剂-叔丁基-4-羟基茴香醚的的国家标准[3],并于2008年修订了该标准,标准用气相色谱内标法检测BHA的含量并规定其含量需≥98.5%[4]。英国药典2012版和美国药典32版均收载了BHA,而我国药品和化妆品领域尚无行业及国家卫生检验标准。

BHA的测定通常采用分光光度法,气相色谱法(GC)和薄层色谱法(TLC)。分光光度法灵敏度和鉴别能力差,GC和TLC法样品处理繁琐,耗用试剂多。由于HPLC系统是在常温下分析,对BHA测定的准确度、精密度均优于其它方法。因此,本研究采用HPLC法测定了BHA及其有关物质的含量,制定了化妆品中BHA的原料限量要求,以提高化妆品卫生质量、保障人民群众化妆品的使用安全。

1 仪器与试药

仪器:Waters2695高效液相色谱仪配有二极管阵列检测器,沃特世公司;Sartorius BSA电子天平,德国赛多利斯公司。

试药:3-BHA标准品(批号:MKBG1239V,含量98.5%),Sigma-Aldrich;2-BHA标准品(批号:2014/12,含量99.0%),上海源叶生物科技有限公司;对苯二酚标准品(批号:1396433,含量99.9%),Sigma-Aldrich;甲醇(色谱纯),德国Merck公司;纯化水用Millipore Q纯水系统制备。

2 分析步骤

2.1 色谱条件

色谱柱:资深堂Capcell pak C18 MGⅡ(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇为流动相A,水为流动相B,按表1进行梯度洗脱;检测波长:278 nm,二极管阵列检测器检测,扫描波长范围:200～400 nm;柱温:室温;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 BHA含量测定标准品溶液的配制

精密称取3-BHA及2-BHA 各25 mg(准确至0.1 mg),置于同一25 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。

2.2.2 BHA有关物质测定标准品溶液的配制

精密称取2-BHA约10 mg(准确至0.1 mg),置100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密称取对苯二酚约10 mg(准确至0.1 mg),置50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,精密量取上述溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度。精密称取3-BHA约25 mg(准确至0.1 mg),置50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,精密量取上述溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度。

2.2.3 供试品溶液的配制

准确称取样品约0.1 g(精确至1 mg),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。取溶液经0.45 μm滤膜过滤,滤液作为待测溶液。

2.3 测定法

在2.1色谱条件下,分别取标准溶液(2.2.1)、供试品溶液(2.2.3)进样,进行BHA液相色谱含量测定。分别取标准溶液(2.2.2)、供试品溶液(2.2.3)进样,进行BHA液相色谱有关物质测定。调节检测灵敏度,使标准品溶液中3-BHA色谱峰的峰高约为满量程的25%,记录色谱图至3-BHA主峰保留时间的3倍。样品如为3-BHA和2-BHA的混合物,样品溶液中如有与2-BHA一致的色谱峰,含2-BHA不得过10%(与BHA有关物质测定标准溶液中2-BHA峰面积相比)。样品溶液中如有与对苯二酚一致的色谱峰,含对苯二酚不得过0.2%(与BHA有关物质测定标准溶液中对苯二酚峰面积相比)。其他杂质不得过0.5%(与BHA有关物质测定标准溶液中3-BHA峰面积相比)。

3 方法学验证

3.1 系统适用性

将3-BHA、2-BHA、对苯二酚及空白溶剂注入液相色谱进行测定,空白溶剂对被测定物质没有干扰,各色谱峰分离度良好。3-BHA、2-BHA、对苯二酚色谱图见图1～图3。

3.2 线性范围

分别精密称取3-BHA、2-BHA及对苯二酚适量,用甲醇溶解并稀释配制成3-BHA和2-BHA分别为400、600、800、1000、1200、1400 μg/mL的系列浓度标准工作溶液。对苯二酚为1、3、10、15、20、30 μg/mL的系列浓度标准工作溶液。依次进样,分别进行测定。结果3-BHA、2-BHA进样浓度X在400～1400 μg/mL范围内与峰面积Y线性关系良好;对苯二酚进样浓度X在1～30 μg/mL范围内与峰面积Y线性关系良好。3-BHA回归方程为Y=7363.6X+30914(r=0.999),2-BHA回归方程为Y=4763.4X-31820(r=0.999),对苯二酚回归方程为Y=9456.1X-1488.3(r=0.999)。

3.3 检出限与定量限试验

取对照品溶液,逐级稀释后测定,检出限以信噪比3:1计,定量限以信噪比10:1计。结果3-BHA、2-BHA和对苯二酚的检出限分别为3 ng、6 ng、0.2 ng(S/N=3),定量限分别为10 ng、20 ng、0.6 ng(S/N=10)。

3.4 精密度试验

分别取3-BHA和2-BHA高低两种浓度标准溶液(高浓度为1000 μg/mL,低浓度为5 μg/mL),对苯二酚高低两种浓度标准溶液(高浓度为30 μg/mL,低浓度为5 μg/mL)分别进行日内精密度和日间精密度测定(n=6)。精密度测定结果见表2。

3.5 稳定性试验

分别取3-BHA和2-BHA同一样品溶液于0,4,8,12,24,48,72 h分别进行日内稳定性和日间稳定性测试,计算3-BHA 日内稳定性和日间稳定性的RSD分别为0.5%,1.4%;2-BHA日内稳定性和日间稳定性的RSD分别为0.6%,1.3%,表明3-BHA和2-BHA样品溶液在72 h内稳定。

3.6 重复性试验

分别取3-BHA和2-BHA的样品各6份,按照含量测定处理方法和检测方法进行检测。结果3-BHA含量为97.3%,RSD为0.5%(n=6);2-BHA含量为102.4%,RSD为0.6%(n=6)。

3.7 加样回收试验

分别取3-BHA和2-BHA样品各9份,分别加入高、中、低三个浓度的3-BHA和2-BHA对照品溶液,各平行3份,测定加标后含量,计算加样回收率,结果本方法3-BHA的平均回收率为97.9%,RSD为1.1%;2-BHA为101.0%,RSD为1.2%,表明方法准确性良好。

3.8 耐用性试验

取样品,按含量测定项下方法制备供试品溶液,改变流动相的比例、柱温等条件,并分别用3根不同品牌的以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱进行试验,分别以安捷伦、岛津、沃特世液相色谱仪进行测定,结果表明,该方法耐用性良好。

3.9 样品测定

从生产企业和经销商处收集到BHA样品共计21批,包括2-BHA和3-BHA两种类型样品,包括国产和进口样品,包括工业级、饲料级、食品级、医药级、试剂级等不同级别。21批样品经检测有6批样品不是BHA,有4批样品为2-BHA,有11批样品为3-BHA。15批样品中除1批工业级产品以外,其余14批样品有关物质含量均符合规定。样品含量除1批工业级产品为53.0%,其余14批含量均大于96.0%。

4 讨 论

(1)BHA合成过程中,使用了对苯二酚等化妆品禁用组分作为原料。

英国药典2012版采用薄层色谱法作为BHA中有关物质的检测方法,并规定对苯二酚的限度为0.2%。同时采用气相色谱内标法作为BHA含量测定的方法。本研究采用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时检测BHA含量及其有关物质,方法专属性强、灵敏度高、简单快速,可有效检测BHA的含量及其有关物质。

(2)BHA作为抗氧化剂广泛用于药品、化妆品和食品工业中。

通过对市售BHA样品的分析检测,发现不同级别的样品含量差异较大,而目前药品和化妆品领域尚无行业及国家卫生检验标准。因此,亟需制定相应的质量标准用以控制BHA的产品质量,规范化妆品企业BHA的正确和合理使用,以提高化妆品卫生质量、保障人民群众化妆品的使用安全。

参考文献

[1]夏英姿,蔡可迎,冯大君.丁基羟基茴香醚的合成[J].精细石油化工进展,2001,2(8):28-30.

[2]王克利,李明元.食品抗氧化剂及其分析技术[J].口岸卫生控制,2002,7(6):27-40.

[3]中华人民共和国轻工业部,中华人民共和国卫生部.GB1916-80食品添加剂叔丁基-4-羟基茴香醚[S].北京:中国标准出版社,1980.