牙龈上皮细胞

牙龈上皮细胞（精选五篇）

牙龈上皮细胞 篇1

细胞黏附是维持上皮屏障完整的重要生理活动, 主要由整合素介导的信号传导通路所调控。焦点黏附成分——焦点黏附蛋白paxillin和焦点黏附激酶 (focal adhesion kinase, FAK) 是该传导通路中的基本信号转换单元, 发挥着至关重要的枢纽作用。paxillin和FAK还调控着细胞增殖、迁移和凋亡等重要的细胞功能, 在牙周组织创伤愈合过程中起重要作用[3]。目前, 关于P.gingivalis对整合素介导的信号传导通路的影响以及菌毛在其中发挥的作用的研究还比较少。本研究通过Western blot法检测P.gingivalis ATCC 33277野生株及其菌毛fimA缺陷突变株对永生化人牙龈上皮细胞 (immortalized human gingival epithelial cells, IHGE细胞) 和Hela细胞 (宫颈癌上皮细胞株) 的paxillin和FAK蛋白表达水平的影响并进行比较, 探讨菌毛的致病作用, 从而进一步研究P.gingivalis对牙周组织的破坏机制。

1 材料和方法

1.1 细菌培养

将P.gingivalis ATCC 33277野生株和fimA缺陷突变株 (日本大阪大学齿学部中央实验室提供) 培养于含有酵母浸出物 (1 mg/ml) 、维生素K3 (1 μg/ml) 和氯化血红素 (5 μg/ml) 的胰酶大豆肉汤培养基 (tryptone soya broth, TSB) 5 ml中, 置于厌氧培养箱中 (50 ml/L CO2, 50 ml/L H2, 900 ml/L N2, 37 ℃) 培养至细菌生长达对数期。

1.2 细胞培养

IHGE细胞 (日本大阪大学齿学部牙周病学科Murakami教授惠赠) 培养于角化细胞特异性培养液 (HuMedia KG2, Kurabo, Osaka, Japan) 中, 其中加入0.5 μg/ml氢化可的松, 10 μg/ml 胰岛素, 4 μg/ml 牛垂体提取物, 0.1 ng/ml 人上皮生长因子, 50 μg/ml庆大霉素 和50 ng/ml两性霉素B, 在饱和湿度的环境中 (950 ml/L O2, 50 ml/L CO2, 37 ℃) 培养。

Hela细胞 (由大阪大学齿学部中央实验室提供) 培养于含10% 胎牛血清 (fetal calf serum, FCS) 的DMEM (Sigma Chemicals, St. Louis, MO) 中。

1.3 Western blot法检测paxillin和FAK的表达水平

1.3.1 感染试验

IHGE细胞和Hela细胞以DMEM (含10% FCS) 培养于6孔板中至亚融合。向培养液中加入P.gingivalis ATCC 33277野生株及其fimA缺陷突变株, 使感染复数 (multiplicity of infection, MOI) 分别为0、50、200、500。分别在感染后0、30、60、120 min, 以Triton裂解缓冲液处理细胞并收集细胞裂解液。

1.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳

(SDS- PAGE) 分离胶浓度10%, 浓缩胶浓度4%。电泳时, 电压调至最大540 V, 浓缩胶电流10 mA, 分离胶电流20 mA, 上样量100 μg。

1.3.3 半干式电转印

将分离胶铺在聚偏氟乙烯 (polyvinylidene fluoride, PVDF) 膜表面, 夹于2 层厚滤纸之间, 半干式电转印1 h, 电压20 V。

1.3.4 膜的封闭与杂交

将PVDF膜放入5%脱脂牛奶封闭液中封闭1 h。加入鼠抗人paxillin或FAK抗体 (Transduction Laboratories, Lexington, KY) Ab1 (浓度1 μg/ml) 杂交孵育2 h。加入辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠抗体Ab2 (浓度0.5 μg/ml) 杂交孵育1 h。

1.3.5 显影成像

采用ECL Plus Western blot检测试剂盒 (Amersham Biosciences, UK) 处理杂交膜, 置于自动曝光成像及分析系统 (BIORAD, USA) 中曝光、成像。

2 结果

2.1 P.gingivalis ATCC 33277野生株和fimA缺陷突变株对IHGE细胞paxillin蛋白表达的影响

MOI为200时, P.gingivalis ATCC 33277野生株及其fimA缺陷突变株均能够使IHGE细胞的paxillin显著降解。野生株感染IHGE细胞后60 min, paxillin发生明显降解, 至120 min, paxillin几乎完全被降解。而fimA缺陷突变株在感染后120 min才能使paxillin发生明显降解。在相同感染时间, fimA缺陷突变株对paxillin的降解能力较野生株显著减弱 (图 1A) 。感染后60 min, 野生株MOI为50时即可引起paxillin的明显降解, fimA缺陷突变株在MOI为200时才有明显的降解作用, 并且随着MOI的增加paxillin的降解程度增大;MOI相同的情况下, fimA缺陷突变株对paxillin的降解能力较野生株显著减弱 (图 1B) 。

C:对照组 (无感染) ;W:P.gingivalisATCC 33277野生株;:P.gingivalisATCC 33277fimA缺陷突变株;MOI:感染复数;paxillin相对分子质量:68 000A:MOI为200时P.gingivalis在不同感染时间对paxillin蛋白表达水平的影响;B:感染时间为60min时P.gingivalis在不同感染复数对paxillin蛋白表达水平的影响A:EffectofP.gingivalisonpaxillinproteinlevelatdifferentinfectiontimewhenMOIwas 200;B:EffectofP.gingivalisonpaxillin proteinlevelatdifferentMOIwheninfectiontimewas 60min

2.2 P.gingivalis ATCC 33277野生株和fimA缺陷突变株对IHGE细胞FAK蛋白表达的影响

MOI为200时, P.gingivalis ATCC 33277野生株及其fimA缺陷突变株均能够使IHGE细胞的FAK发生降解。野生株感染IHGE细胞后30 min, FAK即发生明显降解, 至120 min, FAK几乎完全被降解;而fimA缺陷突变株在感染后120 min方可使paxillin发生明显降解。在相同感染时间, fimA缺陷突变株对paxillin的降解能力较野生株显著减弱 (图 2A) 。

感染后60 min, 野生株在MOI为50时即可引起FAK明显降解, 并且随着MOI的增加FAK的降解程度增大, 而fimA缺陷突变株在MOI为200时才有明显的降解作用;MOI相同的情况下, fimA缺陷突变株对FAK的降解能力较野生株显著减弱 (图 2B) 。

C:对照组 (无感染) ;W:P.gingivalis ATCC 33277野生株;△:P.gingivalis ATCC 33277 fimA缺陷突变株; MOI:感染复数; FAK相对分子质量:125 000 A: MOI为200时P.gingivalis在不同感染时间对FAK蛋白表达水平的影响; B: 感染时间为60 min时P. gingivalis在不同感染复数对FAK蛋白表达水平的影响A: Effect of P.gingivalis on FAK protein level at different infection time when MOI was 200; B: Effect of P.gingivalis on FAK protein level at different MOI when infection time was 60 min

2.3 P.gingivalis ATCC 33277野生株和fimA缺陷突变株对Hela细胞paxillin蛋白表达的影响

MOI为200时, P.gingivalis ATCC 33277野生株及其fimA缺陷突变株均能够使Hela细胞的paxillin显著降解。野生株感染Hela细胞后30 min, paxillin发生明显降解, 而fimA缺陷突变株在感染后60 min才使paxillin发生明显降解。在相同感染时间, fimA缺陷突变株对paxillin的降解能力较野生株显著减弱 (图 3A) 。感染后60 min, 野生株和fimA缺陷突变株在MOI为200时可引起paxillin显著降解, fimA缺陷突变株对paxillin的降解能力较野生株显著减弱。当MOI为500时, 野生株和fimA缺陷突变株使paxillin完全降解 (图 3B) 。

C:对照组 (无感染) ;W:P.gingivalis ATCC 33277野生株;△:P.gingivalis ATCC 33277 fimA缺陷突变株; MOI:感染复数; paxillin相对分子质量:68 000A: MOI为200时P.gingivalis在不同感染时间对paxillin蛋白表达水平的影响; B: 感染时间为60 min时P.gingivalis在不同感染复数对paxillin蛋白表达水平的影响A: Effect of P.gingivalis on paxillin protein level at different infection time when MOI was 200; B: Effect of P.gingivalis on paxillin protein level at different MOI when infection time was 60 min

2.4 P.gingivalis ATCC 33277野生株和fimA缺陷突变株对Hela细胞FAK蛋白表达的影响

MOI为200时, P.gingivalis ATCC 33277野生株感染Hela细胞后30 min, FAK即发生明显降解, 但fimA缺陷突变株对Hela细胞FAK的作用不明显。在相同感染时间, fimA缺陷突变株对FAK的降解能力较野生株明显减弱 (图 4A) 。感染后60 min, 野生株和fimA缺陷突变株在MOI为200时可引起Hela细胞FAK明显降解, fimA缺陷突变株对FAK的降解能力较野生株显著减弱。当MOI为500时, 野生株和fimA缺陷突变株使FAK完全降解 (图 4B) 。

3 讨论

P.gingivalis的侵入能够改变细胞的完整性, 受P.gingivalis感染的牙龈成纤维细胞和上皮细胞表现出对细胞外基质的黏附力降低, 细胞形态从扁平变为圆形, 运动能力也受到损害[1,4]。paxillin或FAK缺陷细胞表现出细胞延展和迁移功能的障碍, 焦点黏附动力学和细胞骨架结构的构建受到损害[5], 因而P.gingivalis感染所引起的宿主细胞功能障碍很可能与焦点黏附成分paxillin和FAK受到破坏有关。

C:对照组 (无感染) ;W:P.gingivalis ATCC 33277野生株;△:P.gingivalis ATCC 33277 fimA缺陷突变株; MOI:感染复数; FAK相对分子质量:125 000A: MOI为200时P.gingivalis在不同感染时间对FAK蛋白表达水平的影响; B: 感染时间为60 min时P.gingivalis在不同感染复数对FAK蛋白表达水平的影响A: Effect of P.gingivalis on FAK protein level at different infection time when MOI was 200; B: Effect of P.gingivalis on FAK protein level at different MOI when infection time was 60 min

本实验结果表明, P.gingivalis ATCC 33277 野生株可引起IHGE细胞的paxillin和FAK降解, 这种现象可能与菌毛介导的细菌黏附和侵入上皮细胞密切相关。侵入细胞内的P.gingivalis可通过牙龈素的蛋白酶活性使paxillin和FAK降解。Yilmaz等[6,7]观察到fimA缺陷突变株对上皮细胞的黏附和侵入能力大为减弱。本实验观察到fimA缺陷突变株对paxillin和FAK降解能力也较野生株减弱, 这与其较弱的侵入能力相一致, 故推测P.gingivalis对焦点黏附成分的降解作用可能是继发于菌毛介导的细菌侵入细胞后, 牙龈素对paxillin和FAK的蛋白水解作用。另外, fimA基因表达的缺失并不能使其对paxillin和FAK的降解能力完全丧失, fimA缺陷突变株在感染IHGE细胞后120 min, 可使paxillin和FAK发生明显降解。有学者观察到P.gingivalis fimA缺陷突变株同样能侵入牙龈上皮细胞进而聚积在胞核周围, 因此推测P.gingivalis可能还存在着非菌毛依赖性方式侵入牙龈上皮细胞[6], 故也可引起一定程度paxillin和FAK的降解。

本研究考察了IHGE细胞和Hela细胞2 种上皮细胞对P.gingivalis感染的反应。虽然Hela细胞被P.gingivalis 野生株感染后paxillin和FAK也可发生降解, 但是缺乏IHGE细胞所表现的时间依赖性和MOI依赖性, 故推测P.gingivalis引起的paxillin和FAK的降解作用可能存在着细胞差异性, Hela细胞对P.gingivalis的反应不如IHGE细胞灵敏。同时研究发现, 在细菌感染量较大 (MOI为500) 时, 无论是P.gingivalis的野生株还是fimA缺陷突变株均使Hela细胞的paxillin和FAK完全降解, 但是并不能使IHGE细胞的paxillin和FAK完全降解。可能的原因是Hela细胞对P.gingivalis感染的防御能力较IHGE细胞弱, 当MOI较大时, fimA缺陷突变株能通过非菌毛依赖性方式大量侵入Hela细胞内, 进而发生较强烈的细胞死亡, 从而使信号分子破坏殆尽。由此推测, IHGE细胞较Hela细胞对于P.gingivalis的研究更具优越性。

另外有研究表明, 菌毛的种类不同, 其黏附、侵入细胞的能力不同, 对焦点黏附成分的降解作用也不同。有学者采用6 种fimA基因型的P.gingivalis感染Hela细胞, 结果表明具有Ⅱ型fimA基因型的P.gingivalis黏附和侵入细胞的能力最强, 并且其对paxillin和FAK的降解能力也最强[8]。还有学者发现, W50黏附和侵入细胞的能力较弱, 其对paxillin和FAK亦没有降解作用, 可能是菌体表面菌毛稀疏的结果[5]。由此可见, P.gingivalis菌毛介导的黏附和侵入可能对焦点黏附成分的降解起着促进作用。P.gingivalis所引起的paxillin和FAK的降解必然使牙龈上皮细胞的完整性遭到破坏, 并促进病原微生物向深部牙周组织侵袭, 影响组织的自我修复和再生。

参考文献

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[3]Nakamura K, Yano H, Uchida H, et al.Tyrosine phospho-rylation of paxillin alpha is involved in temporospatial regu-lation of paxillin-containing focal adhesion formation and F-actin organization in motile cells[J].J Biol Chem, 2000, 275 (35) :27155-27164.

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[5]Hintermann E, Haake SK, Christen U, et al.Discrete pro-teolysis of focal contact and adherence junction componentsinPorphyromonas gingivalis-infected oral keratinocytes:Astrategy for cell adhesion and migration disabling[J].InfectImmun, 2002, 70 (10) :5846-5856.

[6]Yilmaz O, Young PA, Lamont RJ, et al.Gingival epithelialcell signalling and cytoskeletal responses toPorphyromonasgingivalisinvasion[J].Microbiology, 2003, 149 (Pt 9) :2417-2426.

[7]Yilmaz O, Jungas T, Verbeke P, et al.Activation of thephosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway contributes tosurvival of primary epithelial cells infected with the perio-dontal pathogenPorphyromonas gingivalis[J].Infect Im-mun, 2004, 72 (7) :3743-3751.

牙龈上皮细胞 篇2

结构考试题

一、单项选择题（共26题，每题的备选项中，只有 1 个事最符合题意）

1、患者戴用全口义齿一月，复查时自述戴牙后一直感觉咀嚼无力，面部酸痛。原因可能为

A．患者身体不适 B．人工牙为塑料牙 C．垂直距离过低 D．关节功能紊乱 E．关系有误

2、全口义齿初戴时，如果出现前牙开合，其原因不可能是 A．颌关系错误 B．人工牙变位

C．上下颌基托远端有早接触 D．后牙区咬合高

E．患者不会用义齿咬合

3、急性根尖周炎应急处理的措施不包括

A．安抚治疗

B．开放髓腔

C．消炎止痛

D．脓肿切开

E．降低咬合

4、属于碱性氨基酸的是____ A．苏氨酸

B．精氨酸

C．酪氨酸

D．甘氨酸

E．色氨酸

5、异烟肼抗结核杆菌的作用机制是 A．抑制细菌分枝杆菌酸的合成 B．影响细菌胞质膜的通透性 C．抑制细菌核酸代谢

D．抑制细菌细胞壁的合成 E．抑制DNA螺旋酶

6、关于口腔检查，以下不正确的是____ A．是全身检查的一部分

B．应掌握各种检查方法，并了解其临床意义

C．须熟悉口腔各部正常解剖生理情况，并且能认识早期的病变

D．是建立正确诊断和治疗的基础

E．检查后须完成病历书写，而无需对病人过多地交代病情

7、临床常用的消毒方法是 A．根管荡洗 B．根管封药 C．微波处理 D．电解治疗 E．高频电疗

8、氟牙症是牙发育矿化过程中摄入过量氟引起的

A．釉质着色

B．牙齿外形异常

C．釉质发育不全

D．牙本质缺陷

E．牙骨质异常

9、前牙3/4冠邻面预备时下面不恰当的是

A．近远中面平行

B．在唇舌向与邻面外形一致

C．唇侧边界止于接触区

D．与长轴平行

E．两邻面向长轴稍聚合2°～5°

10、在我国，实现人人享有口腔卫生保健的基本目标是

A．在全社会全面开展口腔健康教育

B．向全社会人群提供最基本的口腔保健用品

C．在全社会全面推进口腔自我保健的实践和普及

D．使初级口腔卫生保健达到全社会的每个成员

E．在全社会倡导有益于口腔健康的行为习惯与生活方式

11、进行单侧唇裂修复术最合适的年龄是出生后

A．1个月内

B．1～2个月

C．3～6个月

D．7～10个月

E．1岁左右

12、龋的药物治疗适用于____ A．静止龋

B．猖獗龋

C．牙本质浅龋

D．未成洞的浅龋

E．乳牙龋

13、不属于缓冲区的是

A．上颌隆突

B．颧突

C．切牙乳突

D．下颌舌骨嵴

E．上颌后堤区

14、妊娠期龈炎的临床特点是

A．牙龈出血

B．牙龈显著的炎性肿胀、肥大

C．严重时伴有轻度疼痛

D．以前牙区为重

E．以上都是

15、不符合可复性牙髓炎诊断的是 A．患牙对温度测验表现为一过性敏感

B．叩诊反应同正常对照牙齿

C．没有自发性疼痛

D．出现夜间疼痛，影响睡眠

E．刺激去除，疼痛消失

16、以下情形中，可以参加执业医师资格考试的是

A．有医学专科学历，在医疗机构中工作满1年

B．有医学专科学历，在医疗机构中试用期满2年

C．有医学专科学历，在医疗机构中工作满2年

D．取得执业助理医师执业证书后，具有医学专科学历，在医疗机构中工作满2年

E．取得执业助理医师执业证书后，具有医学专科学历，在医疗机构中试用期满2年

17、WHO规定龋病的患病水平的衡量标准是12岁儿童的 A．龋齿发病率 B．患龋率 C．龋均 D．龋面均 E．无龋率

18、鸟氨酸循环合成尿素，一个氮原子来自 NH3，另一个来自

A．谷氨酸

B．谷氨酰胺

C．天冬氨酸

D．天冬酰胺

E．氨基甲酰磷酸

19、患者主诉左上第一磨牙有龋洞和冷热食痛，医生作温度测验时应 A．先测左上第一磨牙 B．先测正常的左上前磨牙 C．先测正常的右上第一磨牙 D．先测正常的左下第一磨牙 E．先测正常的左上第二磨牙

20、目前控制菌斑最常用的方法是

A．刷牙

B．牙线

C．药物含漱

D．洁治

E．牙签

21、男性，50岁。金属全冠粘固后1个月，咀嚼时出现咬合痛，最有可能的原因是

A．急性牙髓炎

B．创伤性尖周炎

C．牙龈萎缩引起颈部过敏

D．慢性牙髓炎

E．继发龋

22、混合支持式义齿是由

A．基牙支持

B．基牙和支托支持

C．粘膜和牙槽骨支持

D．粘膜和支托支持

E．粘膜和基牙支持

23、有关根管预备的目的，错误的是

A．消除感染源

B．扩大根管便于根管消毒

C．扩大根尖孔以利引流

D．减少弯曲根管的弯曲度

E．预备根管形态以利充填

24、下列所指为缺牙区，哪一类属Kenne-dy分类第二类第三亚类（）A． B． C． D． E．

25、下列哪类患者不适宜使用可摘局部义齿修复

A．肝炎

B．咽炎

C．脑炎

D．偏头痛

E．癫痫

26、备洞过程可能对牙髓造成伤害的主要原因 A．牙本质牙髓是-复合体 B．切割了牙本质小管 C．切割了成牙本质细胞突 D．切割时产热

E．切割时使用了涡轮机

二、多项选择题（共26题，每题的备选项中，有 2 个或 2 个以上符合题意，至少有1 个错项。）

1、患者，男，15岁，被诊断为青少年牙周炎，医生在对其进行牙周治疗后选择了抗生素作为辅助治疗，最适宜的抗生素是

A．四环素

B．螺旋霉素

C．多西环素

D．卡那霉素

E．青霉素

2、漱口液改善口臭的机制不包括

A．机械清洗作用

B．杀菌作用

C．掩盖异味作用

D．去除舌苔作用

E．拮抗异味物的产生

3、龋齿的治疗方法是

A．药物疗法

B．药物疗法+磨除法

C．充填术+盖髓术

D．充填术+药物疗法+磨除法

E．药物治疗+充填术+拔除术

4、阿司匹林预防血栓形成的机制是 A：激活抗凝血酶

B：抑制环加氧酶，减少TXA2生成 C：抑制维生素K促凝血的作用 D：阻断血小板糖蛋白受体 E：抑制凝血酶的生成

5、女，28岁。左下后牙进食痛已半年，平时食物进洞后痛。查左下第一磨牙咬合面龋深，洞内粉红色息肉状物，探略敏感，叩痛(+)，冷测迟钝，可探及牙周袋。该患牙诊断最可能是 A．深龋 B．牙周息肉

C．慢性根尖周炎

D．慢性增生性牙髓灸 E．慢性溃疡性牙髓炎

6、女，35岁。牙周病综合治疗后，需用牙周夹板固定松动牙。下列各类修复中，可作为前牙牙周夹板的固位体是（）A．连续卡环 B．联合卡环 C．回力卡环 D．尖牙卡环 E．倒钩卡环

7、应用异烟肼时并用维生素B6的目的是

A．延缓抗药性

B．减轻肾损害

C．防治周围神经炎

D．增强疗效

E．减轻肝损害

8、皮肤创口缝合后过度外翻是因为____ A．进针点距创缘过远

B．两侧进针深度不一致

C．皮肤切口两侧进针间距大于皮下间距

D．皮肤切口两侧进针间距小于皮下间距

E．打结过紧

9、三叉神经痛患者在疼痛发作时上颌的痛性抽搐不包括

A．痛区潮红

B．眼结膜充血

C．出汗流涎

D．流泪

E．患侧鼻腔黏液减少

10、病例组有暴露史的比例显著高于对照组，则

A．暴露与该病有因果关系

B．暴露是该病的病因

C．该病是由这种暴露引起的D．该病与暴露存在联系

E．该病与暴露没有联系

11、可激动骨骼肌N2受体的药物是

A．毛果芸香碱

B．新斯的明

C．毒扁豆碱

D．氯琥珀胆碱

E．筒箭毒碱

12、颞下颌关节紊乱病的病因为

A．精神因素

B．颌因素和关节负荷过重

C．免疫因素

D．解剖因素

E．多因素相互作用的结果

13、某患者，男，35岁，自诉右上后牙近一个月来进食时有时有疼痛感，经口腔内科诊断为右上第一磨牙隐裂牙，来口腔修复科会诊，请问该患者最佳治疗方案是何种____ A．铸造金属全冠诊断性暂时修复

B．塑料全冠诊断性暂时修复

C．烤瓷全冠诊断性暂时修复

D．不作任何处理

E．以上均不是

14、青春期龈炎时牙龈的表现为

A．龈沟深度2mm以内

B．前牙唇侧龈乳头肥大

C．粉红色

D．牙龈质地坚韧

E．探诊后牙龈无出血

15、RPI卡环组中邻面板的作用是 A．防止义齿龈向移位 B．增强义齿的固位 C．有利于美观

D．减少基牙所受扭力 E．防止食物嵌塞 16、6岁女孩，因尿频、尿急、尿痛就诊，无发热，腰酸，尿常规：白细胞满视野，红细胞：3～5个/HP，血沉正常，C-反应蛋白阴性，应考虑 A．上尿路感染 B．下尿路感染 C．尿频综合征 D．肾结核

E．出血性膀胱炎

17、女，20岁。因左下后牙冷热痛而就诊，无自发痛。检查发现深龋，探痛，但未穿髓，无叩痛。在治疗该深龋时，错误的操作是()A．由于窝洞较深，洞壁不必修直

B．为避免穿髓，可保留少量软化牙本质

C．用大球钻以先中央后四周的方式逐步去除腐质

D．可疑有牙髓暴露而又不能肯定时应做安抚治疗观察

E．接近髓角时，如患者特别敏感，应注意检查有无牙髓暴露

18、对苯二氮类的叙述，哪项不恰当（）。A．增强GABA能神经传递和突触抑制 B．具有镇静、催眠、抗焦虑作用 C．可缩短睡眠诱导时间

D．首选用于治疗癫痫持续状态 E．较大量易引起全身麻醉

19、关于拔上颌中切牙下列哪项是错误的

A．唇侧牙槽骨壁薄

B．单根弯向近中，断面呈三角形

C．先使用唇腭侧摇动力

D．应用旋转力效果好

E．最后沿牙根纵轴方向牵引脱位 20、游离皮片移植后抗感染力最强的是

A．厚中厚皮片

B．带脂肪的全厚皮片

C．表层皮片

D．全厚皮片

E．薄中厚皮片

21、全口义齿修复应在拔牙多长时间后进行 A．一周 B．.三周 C．一个月 D．三个月 E．六个月

22、父母吸烟在哪个期对孩子的危害最为明显____ A．新生儿期

B．婴儿期

C．妊娠期

D．幼儿期

E．乳儿期

23、釉质和牙骨质在牙颈部相连的关系是

A．约30%牙骨质少许覆盖在釉质上

B．约70%釉质和牙骨质端端相连

C．约10%釉质和牙骨质并不相连

D．全部为釉质和牙骨质端端相连

E．约30%釉质少许覆盖在牙骨质上

24、正常人的开口度为

A．1.7～2.5cm

B．2.7～3.5cm

C．3.7～4.5cm

D．4.7～5.5cn

E．5.7～6.5cm

25、循环血液中的异常物体随血流运行，堵塞血管腔的过程称为 A．血栓 B．栓子 C．栓塞 D．梗死 E．血栓形成

26、备洞过程可能对牙髓造成伤害的主要原因 A．牙本质牙髓是-复合体 B．切割了牙本质小管 C．切割了成牙本质细胞突 D．切割时产热

牙龈上皮细胞 篇3

1 材料和方法

1.1 主要试剂和设备

K-SFM (Keratinocyte-SFM, GIBCO, Invitrogen Co., USA) , DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium, GIBCO, Invitrogen Co., USA) , FBS (Fetal Bovine Serum, HyClone, 赛默飞世尔生物化学制品 (北京) 有限公司, 中国) , 多聚赖氨酸 (Poly-L-Lysine, SIGMA, sigmaaldrich Co., USA) , dispase Ⅱ (SIGMA, sigma-aldrich Co., USA) , Trypsin-EDTA (GIBCO, Invitrogen Co., USA) , 鼠抗人角蛋白单克隆抗体 (上海时代生物科技有限公司, 中国) , CO2饱和培养箱 (BB5060UV, Heraeus Ltd., Germany) , 超净工作台 (HFsafe 2000, 上海力申科学仪器有限公司) , 倒置相差显微镜 (IX71, Olympus Co., Japan) , 普通光学显微镜 (Olympus Co., Japan) 。

1.2 牙龈上皮细胞的原代培养

1.2.1 酶消化法

切除Beagle犬第三恒切牙牙龈组织立即放入含10%FBS的DMEM中。超净台中尽可能剪去纤维结缔组织, PBS冲洗三遍, 随后剪成1 mm×5 mm组织块, 置于0.25%dispaseⅡ酶溶液中, 4℃保存16～18 h。机械分离上皮和真皮, 0.25%Trypsin-EDTA消化成单细胞悬液, 800 g离心5 min。K-SFM重悬细胞, 以6×105接种细胞, 2 d后换液, 以后隔天换液, 倒置相差显微镜下观察, 18～20 d后计数。

1.2.2 玻片覆盖组织块法

切除Beagle犬第三恒切牙牙龈组织立即放入含10%FBS的DMEM中。超净台中尽可能剪去纤维结缔组织, PBS冲洗3遍, 将组织剪碎并置于6孔板中, 加入少量含10%FBS的DMEM, 缓慢盖上盖玻片, 每孔加入3 ml培养液, 5%CO2培养箱中静置培养, 2 d后首次换液。此后每隔2 d换液且倒置相差显微镜下拍照。于培养后9～10 d弃去原培养液, PBS冲洗2遍, 换用K-SFM继续培养, 隔日换液, 待细胞长至皿底70%～80%, 计数, 传代培养。

1.2.3 酶消化联合玻片覆盖组织块法

切除Beagle犬第三恒切牙牙龈组织立即放入含10%FBS的DMEM中。超净台中尽可能剪去纤维结缔组织, PBS冲洗三遍, 随后剪成1 mm×5 mm组织块, 置于0.25%dispase酶溶液中, 4℃保存16～18 h。机械分离上皮和真皮, 置于6孔板中, 加入少量含10%FBS的DMEM, 缓慢盖上盖玻片, 每孔加入3 ml培养液, 5%CO2培养箱中静置培养, 2 d后首次换液。此后每隔两天换液且倒置相差显微镜下拍照。于培养后9～10 d弃去原培养液, PBS冲洗两遍, 换用K-SFM继续培养, 隔日换液, 待细胞长至皿底70%～80%, 计数, 传代培养。

1.3 牙龈上皮细胞的鉴定

制细胞爬片, 广谱细胞角蛋白抗体染色。

2 结果

2.1 细胞形态学观察

酶消化法组首次换液见大量细胞呈悬浮状, 圆球形, 折光性较强 (如图1a) , 培养9～12 d后镜下仅见少量上皮细胞, 体积较大, 形态不规则, 胞浆中出现许多细小颗粒 (如图1b) 。

玻片覆盖组织块法组首次换液见组织块周围圆形或方形上皮细胞爬出, 胞核明显, 位于胞质中央 (如图2a) , 培养9～10 d组织块周围大量上皮细胞聚集 (如图2b) , 且6个六孔板除无细胞爬出及污染的7个孔外, 18个孔组织块周边出现成纤维细胞, 换用K-SFM后, 仍可见成纤维细胞 (如图2c) , 培养成功率仅为30.56%。

酶消化联合组织块法组, 首次换液见组织块周围大量大小不一, 折光性弱的圆形上皮细胞 (如图3a) ;培养9～10 d后上皮细胞仍沿组织块周边生长, 且6个六孔板均有上皮细胞爬出, 除3个孔污染外, 其余均未见成纤维细胞;换用K-SFM后第2天, 见单个细胞脱离组织块向周边爬片生长 (如图3b) ;换液后第4天, 较多细胞游离迁移到培养板边缘, 核分裂相增多, 呈活跃增殖状态, 细胞大小均一, 呈典型铺路石样生长 (如图3c) ;培养18～20 d细胞长至皿底70%～80%且均未发现成纤维细胞, 培养成功率为91.67%。

2.2 生长时间

酶消化法组首次换液见大量细胞悬浮, 9～10 d后仅可见少量上皮细胞, 培养18～20 d计数平均约3×104/ml细胞。玻片覆盖组织块法组首次换液见上皮细胞沿组织块周围散在分布, 培养9～10 d组织块周围大量上皮细胞聚集, 培养18～20 d 70～80%上皮细胞接触, 此时计数约4×105/ml。酶消化联合组织块法细胞生长时间同组织块法相似, 但未发现成纤维细胞污染。

2.3 免疫组织实验

角蛋白染色阳性, 证实原代培养细胞为牙龈上皮细胞。

3 讨论

Rheinwald[4]等利用滋养层传代培养上皮细胞获得成功以来, 国内外许多学者致力于上皮细胞培养的研究, 力求建立更完善的上皮细胞培养体系。目前, 较为成熟的上皮细胞培养方法主要有dispase酶消化法、组织块法。

单纯dispase酶消化法进行牙龈上皮细胞培养可将上皮层从基膜处完整分离, 保留上皮细胞的活力, 作用快速、温和, 并可有效降低成纤维细胞的污染。但随后的胰酶分解细胞膜表面蛋白质, 增加细胞通透性, 加重离心对细胞损伤, 而且细胞粘附相关的蛋白质也可能被消化, 从而使细胞难以贴壁[5]。本研究利用此法获得的上皮细胞较难贴壁, 首次换液后镜下仅可见少量散在细胞, 无法满足后期实验需求。

玻片覆盖组织块法可避免长时间酶消化对细胞的损伤, 操作相对简单, 细胞生长率高, 但常因混入成纤维细胞而难以大量获得纯上皮细胞。尽管培养后9～10 d换用角质细胞专用无血清培养基, 仍存在成纤维细胞污染[6]。

结合酶消化法和组织块法的优缺点, 笔者将dispase酶分离的上皮层剪碎, 利用有血清和无血清培养基联合培养[7]的玻片覆盖组织块法进行牙龈上皮细胞的培养, 不仅有效降低成纤维污染, 且大大缩短上皮细胞培养时间。

培养基是体外细胞赖以生存和增殖的基础, 培养基成分决定上皮细胞分化程度。血清因含有类似于体内环境条件下的多种促细胞生长营养成分和细胞因子而成为细胞培养的常规添加成分[8]。血清中的蛋白、细胞因子、微量元素以及贴壁因子等, 可使组织块更好贴壁和生长, 利于上皮细胞的爬出[9]。预实验中笔者也发现, 单纯无血清培养基进行上皮细胞培养, 上皮细胞爬出延迟, 生长缓慢, 且悬浮细胞较多, 因此, 培养早期用含血清的DMEM进行细胞培养。但血清中的高浓度钙离子又会诱导上皮分化, 使单层上皮细胞出现复层现象, 加速角化物的形成, 从而降低上皮细胞增殖和游走能力[7]。且血清中潜在过敏反应和病毒感染可能影响上皮细胞的正常生长, 从而导致实验的重复性降低[10]。而无血清培养基中钙离子浓度较低, 可保持上皮细胞较长时间未分化状态, 可抑制成纤维细胞增殖, 成分稳定, 可重复性强。因此, 在无血清培养基中进行上皮细胞的增殖是至关重要的。故本研究在上皮细胞培养到9～10 d, 待组织块周围出现大量上皮细胞后换用角化细胞专用无血清培养基K-SFM, 可有效抑制上皮细胞分化, 促进上皮细胞增殖, 获得大量呈典型铺路石样生长的上皮细胞。

参考文献

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牙龈上皮细胞 篇4

人们一直在探寻解决牙龈退缩的方法,然而如何解决牙龈退缩,一直是医师面临的难题。针对牙龈退缩,目前的研究重点集中在根面覆盖手术上[3]。比较有效的有5 种方法:游离龈移植(自体咀嚼黏膜移植)术、带蒂龈瓣转瓣术、上皮下结缔组织移植(connective tissue graft,CTG)术、无细胞真皮基质移植以及引导性组织再生术。这些方法已在临床研究中表明可有效地进行根面覆盖治疗。我们采用上皮下结缔组织移植术治疗8 例牙龈退缩,取得较好效果,现报告如下。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选择2006- 12~2007- 12就诊于大连市口腔医院牙周科的8 位有局限性牙龈退缩的患者,行膜龈手术,以解决美观问题。纳入患者平均年龄30 岁(22 岁~39 岁);男4 例,女4 例。所有研究对象均全身健康,无慢性系统性疾病,无吸烟史。纳入标准包括有至少3 mm深的 Miller I型及Ⅱ型牙龈退缩[4],在牙龈退缩的根方有角化组织,以及无临床可见的炎症。选择上前牙及前磨牙,要求牙齿无松动,牙髓有活力且无V类洞充填体。

1.2 手术方法

1.2.1 受植区

在被治疗牙的唇颊面距离龈乳头顶部约2 mm做一水平切口,应注意不包括龈乳头。在水平切口的近、远中末端做2 个斜向纵切口,切口超过膜龈联合。锐分离制备半厚瓣,直至半厚瓣能无阻力地复位至釉牙骨质界处。彻底刮净受植区的根面,降低其突度。

1.2.2 供区

从上颌前磨牙及磨牙的腭侧供区牙龈处切取上皮下结缔组织。在切取前用注射针头估计可获得的黏膜厚度。在供区作矩形的3 个切口,并翻起半厚瓣,从瓣下方切取一块大小合适的结缔组织,其表面可带一窄条上皮,随结缔组织移植至受植区。

1.2.3 移植上皮结缔组织

将带窄条上皮的结缔组织立即放在受植区,覆盖根面,将窄上皮放在患牙的釉牙骨质界处或其冠方,用可吸收缝线缝合固定在骨膜和被保留的龈乳头处。将受瓣区的半厚瓣冠向复位或侧向转位,覆盖移植来的结缔组织至少1/2~2/3,缝合固定(图 1)。

(1) 翻起半厚瓣,暴露退缩区; (2) 在供区作3 个切口,然后翻起半厚瓣,切取一块足以覆盖受区根面及结缔组织床的移植结缔组织,其表面带有窄条上皮; (3) 将上皮下结缔组织瓣固定缝合于受区,窄上皮带应位于釉牙骨质界的冠方。箭头示上皮; (4) 将受区的半厚瓣尽量向冠方复位,以覆盖移植物。作褥式缝合,使瓣与移植物密贴。箭头示上皮

1.2.4 缝合、上塞治剂

将供瓣区翻起的半厚瓣复位缝合,可达一期愈合。术区覆以牙周塞治剂,以保护术区伤口,避免愈合初期的机械创伤。

1.3 维护治疗

嘱患者术后3 周内不要用手术区的牙齿。使用0.2%的氯己定含漱液,4 次/d。另外,指导患者避免肌肉的过分牵拉和对手术区的创伤。术后7 d去除牙周塞治剂并拆线。3 周后指导患者用避免对龈缘造成根向创伤的竖转动法刷牙。术后6 个月内不进行手术区的探诊检查。术后12 个月才进行最终检查。

1.4 研究方法

在基线时和治疗后l2 个月时,测量以下指标:龈退缩深度、牙周探诊深度、临床附着水平和角化组织的量。所有测量均由同一位研究者进行,使用压力可控的牙周探针(Florida),探诊力量为0.147 N(15 g),测量值四舍五入,保留到mm。术后12 个月时,患者对美观效果的评价采用视觉类比刻度尺法(VAS)。具体方法为画一条10 cm长的,没有刻度的线,在线的最左边标示“失望”, 在线的最右边标示“完全满意”,测量从零点到患者标记的满意度点之间距离的mm数即为VAS值。

2 结 果

基线的测量值见表 1。平均龈退缩为4.3 mm,平均探诊附着水平为6.5 mm,平均探诊深度为2.3 mm,角化龈平均宽度为2.4 mm。

术后12 个月复查的数据见表 1。根面覆盖平均达3.0 mm,相当于原暴露根面面积的71%。平均临床附着增加3.6 mm。平均探诊深度为1.6 mm,表明探诊深度平均减少0.7 mm。角化组织量有少许增加,角化龈平均宽度为2.9 mm。用VAS法评价患者对疗效的满意度,平均为8.1。

图 2~4为一位22 岁的男性患者术前、术中、术后的情况。

3 讨 论

国外许多学者研究结果表明,结缔组织移植术具有显著的优势。Sedon等[5]通过回 顾 文献, 认为上皮下结缔组织移植术对根面覆盖有效率高达98.9%,是

a: 取腭侧结缔组织瓣; b: 术区缝合后; c: 术后3 周

目前手术方式中较好的选择。Ahathya等[6],采用上皮下结缔组织移植术对16 个位点进行手术,根面覆盖率达87.5%。针对一位患者的左上尖牙和前磨牙的牙龈退缩,Park[7]采用上皮下结缔组织移植术,取得良好的根面覆盖,并降低了牙本质的敏感。

在国内,刘萍[3]采用上皮下结缔组织移植技术治疗烤瓷冠修复后引起的牙龈退缩,观察半年,术后根面覆盖率为85.1%。但是,国内关于采用CTG治疗牙龈退缩还未见达到1 年的长期随访病例报告。本项病例研究结果表明,应用上皮下结缔组织移植结合冠向复位瓣术,可以在保持浅的探诊深度和角化组织量的同时取得相当多的根面覆盖和临床附着增加。术后12 个月的根面覆盖达71%,在其他根面覆盖疗法报告的平均结果范围内,但低于国外学者的相关报道。分析原因可能与术者的临床操作水平相关,如冠向复位瓣或侧向复位瓣能否部分或全部覆盖移植于根面的结缔组织并将其良好固定,根面处理是否完善等。同时,患者能否调节避免对腭 侧取瓣的紧张心理, 能否良好掌

a: 术后半年根面覆盖约达2.0 mm; b: 术后1 年根面覆盖稳定为2.0 mm

握菌斑控制的方法,维护期是否具有良好的依从性也是CTG治疗效果的影响因素。

目前,结缔组织移植在牙周美学外科手术中已被广泛接受和应用。该方法虽然具有容易掌控、预期效果好和供区创伤小的特点,但供瓣区作为第二术区,仍然是CTG最大的不利因素,供瓣区术后可能比受瓣区的疼痛还明显。而且仍然存在供瓣区的病变问题,如供瓣区溃疡或因使用局部可摘义齿,基托长期压迫造成腭部黏膜厚度不够,无法提供组织瓣等[3]。Rahmani[8]采用无细胞基质移植物代替自体组织进行手术,并与自体结缔组织移植术对比,发现2 组可获得相同的疗效。这为将来通过组织工程学方法获取自体组织替代材料,免除手术获取结缔组织,减少患者痛苦带来了希望。

本研究的这些病例虽然取得了一定的疗效,但是,只有在进行随机对照的临床研究之后,才能对CTG治疗牙龈退缩的临床疗效做出恰当的评价。

摘要：目的:观察上皮下结缔组织移植术在牙龈退缩手术治疗中的疗效。方法:对8例上下前牙及前磨牙牙龈退缩的病例行上皮下结缔组织移植术,并进行了12个月的随访观察。结果:治疗前平均龈退缩为4.3mm,平均探诊深度为2.3mm。治疗后12个月复查时,平均根面覆盖为3.0mm(即平均71%的根面覆盖,自60%～80%不等),探诊深度平均为1.6mm,表明有3.6mm的临床附着增加(从2～5mm不等)。结论:皮下结缔组织移植术可以在保持浅袋的同时取得可靠的根面覆盖和临床附着增加。

关键词：上皮下结缔组织移植术,牙龈退缩,根面覆盖

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利用干细胞技术使牙龈再生 篇5

牙龈是指包住齿颈的黏膜组织, 内有很多血管和神经。随着人们年龄的增长, 牙龈一般会或多或少发生萎缩, 产生牙根暴露, 牙齿松动、脱落等症状。

这种生理性萎缩, 属于正常现象, 但给老人们的生活带来许多不方便。日本的科研人员开发出利用从牙周病患者骨髓液中提取的干细胞, 使患者牙龈再生的技术。干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞, 在一定条件下, 它可以分化成多种功能细胞, 具有再生各种组织器官的潜在功能, 医学界称为“万用细胞”。这一技术是日本广岛大学的一个研究小组的成果。研究人员提取了11名30岁至65岁的牙周病患者的骨髓液, 对所含的间充质干细胞进行培养, 使之增殖, 之后与医疗用胶原蛋白混合, 再注入牙周病患者的患病部位。令人欣喜的是, 其中有6人的牙龈恢复了4毫米至8毫米, 因牙周病而出现的牙齿和牙龈之间的缝隙也缩小了。

事实证明, 可以利用干细胞技术使牙龈再生, 并且分泌出促使原有细胞增殖的物质。此次临床研究以症状较轻的患者为对象进行, 研究人员准备今后以中度和重度患者为对象进行研究。他们计划通过提高细胞培养技术, 增强再生效果, 力争在3年内应用于临床。