IFN-γmRNA（精选七篇）
IFN-γmRNA 篇1
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级健康雄性SD大鼠40只, 4～5周龄, 体重120～170g, 购于江西中医学院实验动物中心 (质量合格证JZDW2007-226) 。按照随机原则分为4组, 每组10只, 自由进水与饮食, 常规饲养1周后建立哮喘模型。
1.2 实验用药
(1) 实验用益气温阳护卫汤的制备。益气温阳护卫汤药材购自江西中医学院附属医院。将生黄芪、白术、防风、桂枝、白芍、生姜、大枣、炙甘草、仙茅、仙灵脾等10味药按比例2∶1.5∶1.5∶1∶1∶1∶1∶0.5∶1∶1.5配伍, 取上述生药1200g, 以8倍量冷水浸药0.5h, 第1煎1h (沸后) ;第2煎加6倍量水煎40min, 将两次煎液, 过滤合并浓缩, 将提取物混合成合剂 (其中白术、防风、桂枝、白芍、生姜提取挥发油) , 调至含生药2g/mL, 浓度溶液600mL密封于无菌量瓶, 存放于4℃冰箱。
(2) 地塞米松片 (仙琚制药股份有限公司, 0.75mg/片) 。用药剂量依据2000年版《中国药典》, 根据人和动物体表面积折算的等效剂量比率表计算, 用药量相当于临床等效剂量。
1.3 主要仪器和试剂
(1) 主要仪器:PCR仪 (ABI9700) , Mx3000P Real Time PCR仪 (Stratagene公司) ;台式高速低温离心机 (J-6, J-2, BECKMAN公司) ;-70℃超低温冰箱 (8525型, USA) ;核酸蛋白分析仪 (Du 530型, BECKMAN) ;紫外凝胶扫描仪 (U-NITED KINGDOM) 。
(2) 主要试剂:卵白蛋白 (OVA, Sigma公司) 、RNeasy Mini Kit (50) 、RNAlater RNA Stabilization Reagent (50ml) 、QIAshredder (50) 、Rnase-Free Dnase Set、SYBR?Premix Ex TaqTM (TaKaRa公司) 。
1.4 哮喘模型
参照文献[2]中的方法并加以改进, 制作大鼠哮喘模型:第1天将实验大鼠分别腹腔注射抗原液1mL (含卵蛋白 (OVA) 100mg和氢氧化铝[Al (OH) 3]100mg) 致敏, 第8天重复注射1次加强, 第15天将大鼠置于特制透明玻璃容器内, 以超声雾化器雾化1%OVA, 使之吸入雾化液20min激发哮喘。
1.5 实验动物分组及给药
根据随机原则, 将大鼠分为: (1) 正常对照组:用生理盐水代替致敏和诱发的不同浓度卵蛋白; (2) 哮喘模型组:同哮喘模型制备; (3) 益气温阳护卫汤组:致敏和诱发哮喘组, 第9天开始按每12h用温阳益气护卫汤5mL/kg灌服大鼠; (4) 地塞米松组:致敏和诱发哮喘组, 第9天开始按每12h用地塞米松0.5mg/kg灌服大鼠。各组连续给药4周, 每组大鼠10只, 每组标本采集, 均于诱发后24h内。
1.6 RNA抽提及SYBR Green Real time PCR检测
从外周血单个核细胞用RNeasy Mini Kit (QAIGEN公司) 试剂盒抽提Total RNA。获得的RNA保存于-70℃超低温冰箱中。在Rea1 time PCR仪 (Mx3000P Real Time PCR扩增仪, Stratagene公司上, 用SYBR Green法进行实时定量PCR。引物及探针序列由invitrogen公司合成:GAPDH:Forward Primer:5’-TCTACATGTTCCAGTATGACTCTACC-3’, Reverse Primer:5’-ACATACTCAGCACCAGCATCA-3’, IFN-γ:Forward Primer:5’-GAAGTCCGAGGAGCTGTT-CTGCA-3’, Reverse Primer:5’-TGCAGAACAGCTCCTCG-GACTTC-3’反应体系:invitrogen公司试剂盒, 按下列组份配制PCR反应液 (反应液配制在冰上进行) 。SYBR Premix Ex TaqTM (2×) 12.5μL, PCR Forward Primer (10μM) 0.5μL, PCR Reverse Primer (10μM) 0.5μL, ROX Reference Dye II (50×) 0.5μL, DNA模板XμL (DNA模板的添加量通常在100ng以下, 故根据DNA模板的浓度进行加量) , dH2O to25μL。反应条件:Segment1:预变性95℃10s 1Cycle, Segment2:PCR反应95℃5s 58℃20s 40Cycles。
1.7 数据统计
所有数据用均数±标准差表示。用SPSS13.0统计软件进行统计处理, 组间比较用单因素方差分析, 检验以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
应用TaqMan Real time PCR检测哮喘大鼠PBMC中IFN-γ_mRNA的表达, 结果显示益气温阳护卫组同地塞米松组一样, 可上调IFN-γ_mRNA的表达水平, 其IFN-γ_mRNA的表达水平与空白对照组相当, 结果见表1。
注:*与哮喘模型组比较P<0.01。
哮喘模型组IFN-γ表达明显低于正常对照组, 差异有显著性 (P<0.01) , 益气温阳护卫组IFN-γ的表达明显高于哮喘模型组, 差异有显著性 (P<0.01) , 且与正常对照组IFN-γ的表达相当。
3 讨论
Th1/Th2的失衡是支气管哮喘发病的重要机制, 通过抑制过度亢进的Th2型反应, 使免疫反应向Th1方向发展, 可望恢复Th1/Th2反应平衡, 从而可以预防和治疗支气管哮喘。IFN-γ是由CD8+T淋巴细胞和部分CD4+T淋巴细胞合成的一种可调节其它细胞功能的小分子多肽, 属于Th1细胞因子, 可促进Th1细胞分化, 通过抑制活化的T细胞释放Th2型细胞因子、抑制Th0细胞向Th2细胞的分化、促进T细胞凋亡, 抑制EOS的局部募集、通过诱导NO合成从而抑制气道平滑肌痉挛等抑制Th2反应[3]。目前, 西医治疗支气管哮喘最有效、最常用的药物依然是糖皮质激素, 它可以从多个环节抑制气道炎症, 短期缓解病情, 但长期使用仍然有一定的副作用或依赖性。它作用广泛, 缺乏特异性, 不仅抑制Th2型细胞功能, 同时还强有力地抑制了Th1型细胞功能, 降低了机体的细胞免疫功能, 易于并发病毒等病原微生物的感染。益气温阳护卫汤通过对全身进行调节, 增强机体的御病能力, 可减少支气管哮喘的发作甚至达到长期缓解的目的。本研究发现哮喘大鼠的PBMC中IFN-γ_mRNA的表达降低, 通过益气温阳护卫汤干预后, 可以上调哮喘大鼠PBMC中IFN-γ_mRNA的表达, 且使IFN-γ_mRNA的表达趋于正常的表达。据此认为益气温阳护卫汤可在转录水平通过增强IFN-γ的表达, 正调控Th1细胞的发育, 使Th0细胞正常向Th1、Th2分化, 从而使哮喘中Th2细胞亚群功能亢进得到缓解, 抑制了大量炎症因子的产生及IgE的合成, 最终控制气道慢性炎症。这个结果提示益气温阳护卫汤防治哮喘的作用途径可能是通过该机制实现。
摘要：目的:探讨益气温阳护卫汤对哮喘大鼠IFN-γmRNA的影响。方法:40只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组, 每组10只。采用SYBR Green Realtime PCR测定各组外周血单个核细胞 (PBMC) 中IFN-γmRNA的表达变化。结果:哮喘模型组PBMC中IFN-γmRNA表达显著低于正常对照组 (P<0.01) , 益气温阳护卫组、地塞米松组PBMC中IFN-γmRNA的表达显著高于哮喘模型组 (P<0.01) , 且与正常对照组PBMC中IFN-γmRNA的表达相当。结论:益气温阳护卫汤可以上调IFN-γmRNA的表达, 益气温阳护卫汤防治哮喘的作用途径可能是通过该机制实现。
关键词：益气温阳护卫汤,哮喘,IFN-γ
参考文献
[1]BARNESES PJ, LIM S.Inhibitory cytokine in ast hma[J].Mol Med Toda, 1998, 4 (10) 452-458.
[2]马秀琴, 黄茂, 卞涛, 等.地塞米松对哮喘大鼠肺组织NF-κB和MMP-9及TIMP-1表达的影响[J].南京医科大学学报:自然科学版, 2005, 25 (4) :255.
IFN-γmRNA 篇2
1 材料与方法
1.1 试验动物
民猪, 由吉林省农业科学院畜牧分院试验猪场提供。
1.2 试剂
Taq DNA聚合酶、DNA凝胶回收试剂盒、大肠杆菌DH5α感受态细胞、HindⅢ、pMD18-T载体、RPMI-1640、淋巴细胞分离液和Prime Script One Step RT-PCR Kit Ver.2.0等, 均购自宝生物工程 (大连) 有限公司;Trizol试剂, 购自Invitrogen 公司;刀豆素A (ConA) , 购自Sigma公司。
1.3 引物设计与合成
根据GenBank中已发表的猪IFN-γ基因序列 (登录号为AY188090) , 利用Primer Premier 5.0软件设计1对引物, 引物序列:上游引物5′-ATGAGTTATACAACTTATTTCTTA-3′, 下游引物5′-ATTATTTTGATGCTCTCTGGCC-3′, 预期扩增片段大小为502 bp, 引物由上海英骏生物技术有限公司合成。
1.4 民猪淋巴细胞的分离与培养
无菌条件下采集抗凝的健康民猪静脉血20 mL, 加入等量的D-Hank’s液稀释, 混匀。取稀释的外周血缓慢加入等量的淋巴细胞分离液, 室温 2 000 r/min离心20 min;用尖嘴吸管吸取雾状层, 加入D-Hank’s液洗涤, 室温2 000 r/min离心10 min;洗涤3次, 弃上清液。将白细胞团块重新悬浮到含有10%犊牛血清和RPMI-1640培养液 (含100 μg/mL青霉素、100 μg/mL链霉素) 中;加入ConA至终浓度为5 μg/mL, 诱导刺激, 在37 ℃、5% CO2条件下培养48 h。
1.5 外周血淋巴细胞总RNA的提取
收集诱导48 h的细胞, 置于1.5 mL EP管中, 4 ℃、8 000×g离心2 min;弃上清液, 加入Trizol溶液1 mL, 颠倒混匀, 室温静止10 min;加入三氯甲烷0.2 mL, 剧烈摇动15 s, 使其充分混匀, 室温静止5 min;4 ℃、12 000×g离心15 min;将上层水相转入新的1.5 mL EP管中, 加入异丙醇0.5 mL, 室温放置15 min;4 ℃、12 000×g离心20 min;移去上清液, 加入预冷的75%乙醇1 mL, 4 ℃、7 500×g离心 5 min;弃上清液, 将沉淀物溶于20 μL去RNAase水中, 分装后-80 ℃保存, 备用。
1.6 IFN-γ基因的扩增
纯化后的总RNA, 以 Oligo (dT15) ACP为3′端引物逆转录合成cDNA第1链。总反应体系 (20 μL) :总RNA 2 μg, 10×Buffer 4 μL, 2.5 mmol/L dNTP 0.5 μL, dT-ACP 12 μL, RNase Inhibitor 0.5 μL, SuperscriptⅡ反转录酶1 μL。42 ℃ 60 min, 94 ℃ 5 min, 冰上5 min终止反应。以cDNA 为模板进行PCR反应, 扩增条件:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s, 51 ℃退火30 s, 72 ℃延伸30 s, 共35个循环;72 ℃再延伸7 min。用1%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。
1.7 IFN-γ基因测序及序列分析
将回收产物IFN-γ基因扩增产物与载体于4 ℃连接过夜, 转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。对阳性重组质粒进行酶切鉴定, 对鉴定为阳性的质粒送上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。在NCBI上, 将试验获得序列与GenBank中已知的各种序列进行相似性搜索, 寻找同源核苷酸序列。利用DNAMan软件进行序列分析, 得出同源关系树和系统进化树。
2 结果与分析
2.1 目的基因的RT-PCR扩增
以总RNA为模板, 经PCR反应扩增出长度为502 bp的片段, 与预期结果一致, 见图1。
M.DL-2 000 Marker;1.PCR扩增产物;2.空白对照。
2.2 民猪IFN-γ基因重组质粒的构建及鉴定
PCR扩增产物与pMD18-T载体连接, 构建重组质粒。经PCR及双酶切鉴定, 得到与预期结果大小相符的目的片段, 见图2。
M.DL-2 000 Marker;1.pMD18-IFN-γ重组质粒酶切鉴定;2.pMD18-IFN-γ重组质粒PCR鉴定。
2.3 民猪IFN-γ基因的氨基酸序列
试验扩增的民猪IFN-γ基因片段长度为502 bp, 编码166个氨基酸。NetNGIyc1.0在线分析结果表明, 该氨基酸序列有2个潜在的N糖基化位点, 分别位于第39 bp处和第106 bp处, 结果见图3。
2.4 民猪IFN-γ基因编码蛋白抗原决定簇和疏水性预测
利用计算机DNAStar和DNAMan软件, 预测民猪IFN-γ基因编码蛋白抗原决定簇和疏水性。结果表明, 民猪IFN-γ基因编码蛋白具有很强的抗原性 (见164页彩图4) 和疏水性 (见图5) 。
2.5 民猪IFN-γ基因核苷酸序列分析结果
将民猪IFN-γ基因与GenBank中相似的核苷酸用DNAMan软件进行同源性比较。民猪IFN-γ基因与藏猪 (登录号为AY293733) 、贵州白香猪 (登录号为JF906510) 、成华猪 (登录号为AF493993) 、梅山猪 (登录号为DQ666352) 的同源性为100%, 与长白猪 (登录号为DQ839398) 、荣昌猪 (登录号为DQ902588) 和内江猪 (登录号为DQ913893) 的同源性为99%, 见图6。
民猪IFN-γ基因和藏猪、成华猪的亲缘关系较近, 与长白猪、荣昌猪亲缘关系较远, 见图7。
3 讨论
IFN是动物体内出现最早、最快的抵抗病毒的细胞因子, 而且由于其广谱的抗病毒作用及强大的免疫调节功能越来越受到人们的关注[3]。在疾病的治疗上, IFN具有传统药物不可替代的作用。我国是一个养猪大国, 近年来随着规模化养猪的不断发展, 各种传染性疾病的发生更为频繁, 大量使用抗生素造成猪肉品质下降, 严重威胁人类的健康, 因此需要IFN类广谱抗病毒生物制剂来治疗和加强疫苗的免疫效果。研究应用RT-PCR技术从ConA诱导培养的猪外周血淋巴细胞中扩增出长度为502 bp的IFN-γ基因片段, 将该基因片段克隆到pMD18-T载体上, 测得民猪IFN-γ基因核苷酸序列。经分析, 民猪与GenBank中藏猪、贵州白香猪、成华猪、梅山猪的同源性为100%。进一步证实了国内多种地方品系猪种IFN-γ基因具有较高的同源性[4,5,6,7,8]。在遗传进化上, 民猪和藏猪、成华猪的亲缘关系较近, 与长白猪、荣昌猪的亲缘关系较远。
民猪是东北地区一个古老的地方猪种, 具有产仔多、肉质好、抗寒、耐粗饲等优点。研究成功获得了民猪IFN-γ基因cDNA序列, 共编码166氨基酸, NetNGIyc1.0在线分析结果表明, 含2个潜在的N糖基化位点;从蛋白抗原决定簇预测的结果可以看出, 该基因编码蛋白具有很强的抗原性和疏水性。研究为下一步IFN-γ基因分子免疫佐剂效应的研究及民猪基因种质资源的发掘和疾病防治奠定了基础。
摘要：为了获得民猪干扰素-γ (IFN-γ) 基因, 并对该基因进行序列分析, 试验采用RT-PCR技术, 根据猪IFN-γ基因设计1对引物, 从刀豆素A (ConA) 活化的民猪外周血淋巴细胞中提取总RNA, 获得了长度为502 bp的片段, 将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。结果表明:民猪IFN-γcDNA长度为502 bp, IFN-γ基因的开放阅读框大小为501 bp, 编码166个氨基酸, 含有2个潜在N-糖基化位点;民猪IFN-γ基因与藏猪、贵州白香猪、成华猪和梅山猪等的同源性为100%。
关键词：民猪,干扰素-γ (IFN-γ) 基因,克隆,序列分析
参考文献
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IFN-γmRNA 篇3
1 材料与方法
1.1 材料
本研究选用清洁级SD雄性大鼠36只,均为10周龄,体质量310～420g。按编号计算机随机数表平均分为观察一组、观察二组、对照组。重组人IFN-γ试剂(自丽珠集团),链霉卵白素试剂盒(博士德生物工程有限公司),ICAM-1单克隆抗体(美国Santa Crμz Biotechnology公司产品),凝胶图像扫描仪(Amersham Pharmacia Biotech公司产品),凝胶电泳仪(SIGMA公司产品)。
1.2 标本处理
观察一组、二组间隔一周分别抽取100U/mL、200U/mL浓度IFN-γ3mL注射入大鼠侧脑室，对照组大鼠间隔一周侧脑室注射人工脑脊液3mL，共注射3次。每组12只大鼠分别于第一次注射后21d、24d、27d、30d随机各选出3只，采用脊椎脱臼法处死，取大脑组织0.20g～0.30g，其中部分组织常规制作5μm厚石蜡切片，3-丙氨基三乙氧基硅烷（APES）胶涂片，室温下放置24h，二甲苯、酒精梯度脱蜡，PBS液漂洗3次后进行免疫组织化学染色。剩余组织按每100mg加入1mL RIPA裂解液和10μl PMSF，匀浆器混匀，冰浴静置30min，室温下2500～3000r/min离心20min，取上清液1mL转移于离心管，-20℃保存。
1.3 免疫组织化学染色
所有标本先制作HE染色，取光镜下染色结构完整组织再制作切片进行免疫组织化学染色。将ICAM-1单克隆抗体用抗体稀释液稀释至1∶25滴于标本上，4℃低温过液后37℃恒温箱复温1h。PBS液漂洗3次，滴加稀释滴度1∶150生物素标记二抗，37℃恒温箱放置30min。PBS液漂洗后滴加滴度1∶150的辣根酶标记的链酶卵素，37℃恒温箱放置30min，用PBS洗3次，将1∶50的3,3-二氨基联苯胺（3,3-diaminbzidine,DAB）滴于标本上，待显微镜下终止显色反应后，冲洗切片，苏木精染色，中性树胶封片。
1.4 ICAM-1蛋白表达测定
采用免疫印记法定量检测上清液中可溶性ICAM-1。分别灌制分离胶和堆积胶，拔出梳子，接通凝胶电泳，维持恒压220V，将蛋白质标准品和上清液样品分别加入样品孔，电泳40min，制备两块凝胶，其中一块采取室温下考马斯亮蓝R-250染色10min，剩余一块凝胶留作免疫印迹检测。分别将硝酸纤维素膜、凝胶转移至缓冲液中浸泡15～30min。浸泡后取出按“三明治”式制作聚丙烯酰胺凝胶-膜，接通200mA恒压电流，转移150min，蛋白质标准品加入样品空，使用丽春红S进行总蛋白质染色。将聚丙烯酰胺凝胶-膜取出，置入封闭液封袋中，4℃保存12h。去掉封闭液，加入用封闭液稀释的ICAM-1单克隆抗体，封闭液封袋，室温下振荡1h。去掉封闭液，再将制膜放置玻璃培养皿中，使用TBS洗液浸泡制膜15min，反复泡洗4次。去掉TBS洗液，将封闭液稀释的二抗同膜一并转移到杂交袋中，封袋，室温下振荡1h。重复TBS液浸泡洗膜10min×4次。室温下，使用碱性磷酸酶显色25～30min。蒸馏水浸泡洗膜终止反应。膜晾干后拍照。考马斯亮蓝R-250染色凝胶使用Amersham Pharmacia Biotech图像扫描仪扫描，将每点面积扫描定量值换算成单位蛋白浓度值（mg/mL）[3]。21d、24d、27d、30d每时刻ICAM-1表达水平为3份样品取均值。
1.5 免疫印记检测评价
蛋白质标准品共显出205kD、116kD、97kD、84kD、66kD、55kD 6条粉红色带。样品膜碱性磷酸酶显色后，若在蛋白质标准品分带基础上于第2～3条带之间位置出现一条暗粉色带。说明分子量为97～116kD蛋白分子被电泳显色，由此证实CAM-1蛋白在提取脑组织中表达。
1.6 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量观察指标以均值±标准差（）表示，计量资料采用t检验，检验水平设为0.05,P<0.05说明差异存在统计学意义。
2 结果
2.1 观察一组、二组大鼠侧脑室注射IFN-γ21d、24d、27d、30d后，ICAM-1单克隆抗体免疫组织化学均呈阳性表达，阳性率为100%。对照组大鼠ICAM-1单克隆抗体免疫组织化学染色均呈阴性。具体参见图1、图2。
2.2 观察一组大鼠脑组织细胞ICAM-121d、24d、27d、30d表达水平分别为（1.59±0.11)mg/mL、（1.66±0.12)mg/mL、（1.73±0.10)mg/mL、（1.75±0.09)mg/mL；观察二组大鼠脑组织细胞ICAM-121d、24d、27d、30d表达水平分别为（1.63±0.13)mg/mL、（1.69±0.13)mg/mL、（1.75±0.12)mg/mL、（1.77±0.10)mg/mL与对照组大鼠脑组织细胞ICAM-121d、24d、27d、30d表达水平分别为（0.99±0.09)mg/mL、（1.00±0.05)mg/mL、（1.01±0.06)mg/mL、（1.01±0.07)mg/mL相同时段大鼠脑组织细胞ICAM-1表达水平有所差异，t 21d=172.28、144.00;t 24d=209.47、188.65;t 27d=300.00、226.67;t 30d=332.31、293.96,P<0.05，说明差异存在统计学意义。具体参见表1。
3 讨论
细胞间粘附分子（intercellμlar adhesion molecμle,ICAM-1），主要受体为淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1），通过巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1,CD11b/CDl8）等多种粘附分子，介导白细胞与血管内皮细胞粘附并和穿壁作用。大量临床研究证实[4]，ICAM-1的表达受多种细胞因子的调节，在缺氧、肿瘤、外伤、自身免疫性疾病、糖尿病等慢性损伤情况下，IL-1、TNF-2、TFN-γ因子大量表达，使得ICAM-1的表达上调。因此，ICAM-1的表达增高（血清slCAM-1含量升高）是内皮细胞和白细胞损害或激活的重要标志[5]。
脑组织因缺血再灌注引起的炎性病理改变早期即可出现ICAM-1表达增高，Zhang[6]等实验研究报告中大鼠短暂性MCAO模型中，在缺血1h后即可检测出ICAM-l mRNA转录高表达，再灌注10h后达表达水平峰值。说明ICAM-1表面蛋白表达也显著增高，实际检测中后者在再灌注2h即开始表达。在随后的研究中发现细胞因子表达幅度与峰值与ICAM-1表达水平分布一致，尤其是肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和γ干扰素（IFN-γ）最为明显。认为细胞因子通过激活kB(NF-kB）途径，与靶基因的kB位点结合，并诱导相应ICAM-1靶基因转录水平上调，高表达ICAM-1、血管细胞粘附分子（VCAM-1）等细胞间粘附分子。
本研究中通过SD大鼠经侧脑室人工注射不同浓度IFN-γ，建立脑慢性模型，在不同时段对大鼠脑组织中ICAM-1检测，观察一组、二组大鼠注射IFN-γ1h、2h、4h、8h后脑组织中ICAM-1表达水平均高于对照组注射人工脑脊液大鼠，P<0.05，差异存在统计学意义。同时，研究发现在注射IFN-γ1h21d后ICAM-1仍然呈持续高水平表达，且在慢性炎症期内（21-30d)ICAM-1表达水平呈持续性升高。综上所述，本研究认为炎性病理改变诱发的细胞因子表达增高、血管内皮细胞损伤以及白细胞激活，在脑损伤后ICAM-1表达水平上调具有密切相关性。
参考文献
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IFN-γmRNA 篇4
神经系统是胎儿发育的关键一环, 为了尽量减少其他因素的干扰, 主要研究IFN-γ对胚胎神经干细胞的影响, 希望找到感染因子对神经系统的作用方式, 为临床诊断、治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
实验用孕14 d～16 d Wistar大鼠由上海交通大学医学院实验动物中心提供。所有的实验操作均按照美国国家研究委员会1996年制定的实验动物保护和使用指南 (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals) 和上海交通大学医学院动物保护和使用委员会制定的啮齿动物生存性手术的指南与策略 (The Guidelines and Policies for Rodent Survival Surgery) 执行。
1.2 实验方法
1.2.1 神经干细胞的分离和培养
取孕16日胚龄的SD大鼠, 经乙醚麻醉, 常规消毒后取其胚胎, 于显微手术镜下剥离大脑半球及脊髓组织, 分别置于L15培养液 (GIBcoBRL公司) 中, 吹打成细胞悬液。收集细胞悬液过尼龙筛网后, 离心并重悬于无血清的神经干细胞基础培养液DFNG (DMEM/F12培养液、 N2、谷氨酰胺, GIBcoBRL公司) 中, 按1×105/mL密度种瓶, 同时添加碱性成纤维生长因子 (bFGF, GIBcoBRL公司) 和表皮生长因子 (EGF, Sigma 公司) 终浓度均为20 μg/L, 于5%CO2, 37 ℃细胞培养箱中培养。
1.2.2 神经干细胞的分化
神经干细胞分化实验时, 将分散的单个细胞种于多聚赖氨酸包被的培养盖玻片上, 接种密度为每片种5×104个活细胞。分化培养液为DFNGH添加1% FBS, (fetal bovine serum, GibcoBRL公司) , 每3 d换液1次。于接种后第6天用于免疫组化染色。IFN-γ处理组的细胞加入IFN-γ (200 U/mL) 至分化培养液中孵育。
1.2.3 免疫组化
取切片回复至室温, 10 mM PBS (pH7.4) 水化10 min。神经干细胞鉴定时, 切片用含0.3% Triton X-100 的1×PBS 预渗透15 min, 然后用含10%正常山羊血清或正常驴血清的0.3% Triton X-100-PBS/PBS室温封闭1 h。加适当稀释度的一抗4 ℃孵育过夜。 一抗包括:小鼠抗大鼠nestin 单抗 (IgG1, BD Pharmingen公司) , 用于鉴定神经干细胞;兔抗βⅢ-tubulin 多抗 (Covance Research Products 公司) , 用于鉴定神经元;兔抗GFAP多抗 ( Sigma公司) , 用于鉴定星型胶质细胞;小鼠抗RIP单抗 (IgG3, Chemicon 公司) , 用于鉴定少突胶质细胞。切片最后用PBS 洗3次 (每次10 min) , 然后用含有Hoechst 33342 (Sigma 公司, 用于染核) 的Gel/Mount aqueous (Biomeda 公司) 封片后, 置Olympus BX60荧光显微镜下镜检。
1.2.4 IFN-γ刺激
培养3 d～4 d, 神经干细胞增殖形成较大的神经干细胞球, 可用于传代。传代时, 低速离心收集干细胞球, 通过机械吹打方式使其分散成单个细胞悬液后种瓶。细胞传至第2代时, 种瓶后第2天加不同浓度的IFN-γ (20 U/mL, 200 U/mL或2 000 U/mL, PeproTech公司) 刺激48 h。
1.3 统计学处理
采用SPSS 10.0统计软件包。数据以均数±标准差
2 结 果
2.1 神经干细胞的鉴定
在存在EGF和bFGF的培养液中, 来自胚胎大鼠前脑的神经干细胞可以迅速增殖形成漂浮的神经球。对神经球的免疫荧光染色显示神经球中几乎所有细胞均表达神经干细胞的标志干扰素。神经干细胞球切片未见β-tubulinⅢ、GFAP、Rip 等神经元和胶质细胞标志表达。 在撤除EGF和bFGF并添加1%FBS的条件下, 接种于经多聚鸟氨酸包被的盖玻片上的神经干细胞可分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。
2.2 IFN-γ影响神经干细胞的生长状态
在传代后1 d加入不同浓度 (20 U/mL, 200 U/mL和2 000 U/mL) 的IFN-γ刺激1 d后, 胚胎神经干细胞的形态。从形态上可以发现, 没有加入IFN-γ的神经干细胞保持了强大的增殖能力, 但随着IFN-γ浓度的增加, 神经干细胞的增殖能力逐渐减弱, 而成球生长的能力丧失, 倾向于贴壁生长, 伸出较多突起。
2.3 IFN-γ影响神经干细胞的分化
神经干细胞在胚胎发育过程中有时间特异性, 在不同的时间分化成各类细胞的比例不同, 那么在这个分化过程中, IFN-γ是否会改变这种分化格局呢?为此, 将分散的单个神经干细胞接种于多聚赖氨酸包被的培养盖玻片上, 撤去bFGF和EGF, 加入1% FBS和200 U/mL的IFN-γ分化7 d。结果发现, 经过IFN-γ刺激的神经干细胞能够分化成神经元, 少突胶质细胞和星形胶质细胞。与对照不加IFN-γ的相比, 神经干细胞分化成Rip阳性的少突胶质细胞比例增加了2.6倍, 分化成GFAP阳性的星形胶质细胞比例减少了33.1%, 分化成β-tubulinⅢ阳性的神经元比例增加了2.8倍。
3 讨 论
神经干细胞是神经发育的起始细胞, 由干细胞发育而来, 具有自我复制和多向分化的潜能, 能够分化成神经元, 少突胶质细胞和星形胶质细胞, 是神经发育的重要细胞。IFN-γ是一种重要的炎性介质, 在病毒感染、细菌感染等疾病中大量分泌, 但是IFN-γ是否会影响神经干细胞的生长状态, 对神经干细胞有怎样的影响呢?本研究发现, 大剂量IFN-γ对神经干细胞具有毒性作用, 其毒性具有剂量依赖作用, 严重的感染或者疾病产生的炎性因子可能直接对胎儿产生不利影响。
IFN-γ如何影响中枢神经系统的发育, 也有一些相关报道。使用人神经母细胞瘤Paju细胞系的研究表明[8], IFN-γ诱导神经分化, 促进神经突起生长。 Butovsky等[9]发现成年中枢神经系统中, 低剂量的IFN-γ激活的小胶质细胞, 能够通过T辅助细胞, 辅助大脑皮质外粒层神经元的生成。另外, IFN-γ能够通过激活Shh途径, 刺激这些细胞的自分泌生长, 直接影响大脑皮质外粒层神经元的增殖和命运[10]。本实验发现, 200 U/mL的IFN-γ改变了正常的分化格局。与正常分化的对照相比, 神经元分化为8.8%, 增加了2.8倍;少突胶质细胞分化为5.2%, 增加了2.6倍;星形胶质细胞分化为12.1%, 减少了30.0%。由于神经元和少突胶质细胞的发育主要发生在出生后, 而IFN-γ提前了神经发育的过程, 这样可能造成胎儿神经发育的异常。胎儿在母体内没有外界刺激而主要增加细胞数量, 而在出生后在声、光、电等各种外界刺激的作用下形成正确的突触联系, 而IFN-γ改变了正常的分化格局, 造成神经系统发育的提前, 可能会造成突触形成异常, 从而影响胎儿神经系统的正常发育。
胎儿神经系统的发育关乎胎儿健康, 神经干细胞正常的增殖和分化具有时间和空间特异性, 任何改变这种分化格局的药物或者炎症因子都可能造成胎儿出生后神经系统发育的异常, 但是什么因素影响, 通过什么途径影响, 都值得继续探讨和研究。
摘要：目的探讨感染因子IFN-γ对胎鼠神经系统分化的影响。方法利用IFN-γ (浓度0U/mL, 20U/mL, 200U/mL, 2000U/mL) 对大鼠体外培养的胚胎16d的神经干细胞进行刺激, 观察神经干细胞生长状态和分化格局的变化。结果中等浓度的IFN-γ (200U/mL) 能够促进神经干细胞的分化, 使得神经干细胞向神经元和少突胶质细胞分化增加, 而向星形胶质细胞的分化降低。结论严重的炎症反应会通过释放大量IFN-γ改变神经干细胞的生长和分化状态。IFN-γ能够改变神经干细胞正常发育的时间格局, 从而可能对新生儿智力发育造成不利影响。
关键词：分化,IFN-γ,神经干细胞
参考文献
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IFN-γmRNA 篇5
关键词：慢性荨麻疹,γ-干扰素,白介素-10,儿童,细胞因子
慢性荨麻疹是一种病因复杂的慢性过敏性疾病,严重影响人们的正常生活,尤其是儿童。本研究采用ELISA法检测78例慢性荨麻疹患儿血清中IFN￣γ、IL￣10水平变化,进一步探讨儿童慢性荨麻疹免疫相关发病机制。
1 资料与方法
1.1 临床资料
共收集我科门诊2012年1～12月慢性荨麻疹儿童66例,其中男36例,女42例;年龄6～14(9.31±1.23岁;病程6w～6年。正常对照儿童组42例,男20例,女22例;年龄6～14(8.91±2.04)岁。均来自我院健康体检儿童,无湿疹、荨麻疹、过敏性鼻炎、哮喘等过敏性疾病病史。两组性别、年龄均具有可比性(P>0.05)。本研究入选标准:(1)符合慢性荨麻疹诊断标准[2];(2)3d内未服用抗组胺药物,治疗前1个月未用过糖皮质激素或免疫抑制剂;(3)无自身免疫性疾病及其他严重系统性疾病。
1.2 方法
入选者经知情同意后抽取空腹静脉血3ml,肝素抗凝,分离待用。用ELISA法检测血清中IFN￣γ、IL￣10水平。试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供,严格按试剂盒说明书操作。
1.3 统计学分析
结果以表示,采用SPSS 17.0软件进行两样本t检验,P<0.05为差异有显著性。
2 结果
观察组血清IFN￣γ显著低于健康对照组;而IL￣10则显著高于健康对照组。见附表。
3 讨论
儿童荨麻疹是常见皮肤黏膜的过敏性疾病,以反复发作的局限性风团,并伴有剧烈搔痒为主要临床表现。反复发作病程持续6w以上者为慢性,严重影响患儿的身心发育。随着免疫学研究的不断深入,国内外大多研究表明辅助性T淋巴细胞的两个亚型(Th1和Th2)细胞数目和活性失衡是诱发变态反应性疾病的关键因素,慢性荨麻疹存在细胞因子网络的调节紊乱[1～3],但大都为成人方面的研究,较少涉及儿童。
注:与对照组相比,*:P<0.01
Thl细胞与Th2细胞之间的平衡主要是通过其自分泌和旁分泌的细胞因子相互调节的:Th1细胞主要分泌IL￣2、IFN￣γ和TNF￣β等细胞因子,而Th2细胞主要分泌IL￣4、IL￣5、IL￣6、IL￣10和IL￣13等;Th2细胞主要调节体液免疫反应,在诱发过敏反应中起着决定性的作用。本课题研究表明慢性荨麻疹患儿血清IFN￣γ水平较正常组低,而IL￣10则显著高于正常对照组。IFN￣γ是促进CD4细胞转变成Th1细胞的主要细胞因子,能促使Th0细胞向Th1细胞分化,抑制向Th2细胞分化[7]。IFN￣γ降低,其抑制Th2细胞分化减弱,使机体处于Th2为主导的免疫抑制状态。而IL￣10增高能进一步抑制Th1细胞增殖及合成IFN￣γ、IL￣2等细胞因子;并可刺激B细胞产生IgE增多,嗜酸性粒细胞活化,释放各种促炎症介质及细胞因子,导致变态反应性慢性炎症发生。所以,本研究提示慢性荨麻疹患儿体内亦存在Th1和Th2细胞因子网络的调节紊乱,导致机体对各种变应原的免疫应答向Th2型偏移,机体长期处于免疫抑制状态,这可能是导致儿童慢性荨麻疹病情反复难于治愈的原因之一。
参考文献
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IFN-γmRNA 篇6
关键词：乳酸菌,IL-2,IFN-γ,小鼠,血清
白细胞介素-2(IL-2)是由活化的T淋巴细胞产生的一种重要的细胞因子,能激活T细胞和促进B细胞分化和分泌抗体,诱导产生干扰素,增强单核细胞以及自然杀伤细胞(NK细胞)的活性,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用,是一类天然的免疫增强剂[1]。IFN-γ可诱导巨噬细胞、B细胞等细胞MHCⅡ类分子和协同刺激分子的表达,提高抗原递呈能力,诱导Th1型免疫应答,在免疫调节、抗病毒感染等方面起着非常重要的作用[2]。IFN-γ能有效抑制辅助T细胞形成向Th2转化,且能抑制B淋巴细胞合成IgE[3]。IL-2、IFN-γ主要反映Th1的水平。据报道,饲喂乳酸菌可以使小鼠抗体产量增加,吞噬活性、T细胞功能和自然杀伤细胞活性增强,还有降血脂、抗肿瘤的作用[4]。因此,试验用乳酸菌饲喂小白鼠,对其血液中IL-2、IFN-γ的含量变化进行测定,现报道如下。
1 材料
1.1 乳酸菌
LZ1、LZ2,笔者分离于内蒙古呼和浩特市30日龄仔猪粪便。
1.2 试验动物与饲料
昆明系小鼠(清洁级),雄性,体重为18~22g,购自内蒙古大学实验动物研究中心;小鼠常规饲料,购自内蒙古大学实验动物研究中心饲料室。
1.3 试剂
小鼠IL-2、IFN-γ定量ELISA试剂盒,购于伊莱瑞特生物科技有限公司。
2 方法
2.1 菌株的活化及试验菌液的制备
从冻干管中取出400μL益生菌至MRS琼脂培养基中,在最适温度37℃静止培养24h为1代,连续驯化2代,吹打混匀菌液,吸取1mL菌液加入10%灭菌脱脂乳液中培养24h,并调整其菌数为2.0×108cfu/mL。
2.2 试验动物分组与饲养方式
将LZ1、LZ2菌株制成2.0×108cfu/mL的脱脂乳悬液,以表1设计方案灌服给各试验组小鼠,1次/d,连续灌服。对照组灌服生理盐水。
2.3 检测步骤与方法
连续给小鼠灌服菌株脱脂乳悬液,分别在第10,20,30天灌服1h后,每组各随机选择8只摘眼球采集全血,放入37℃恒温箱中30min,然后放入4℃冰箱1h,3000r/min离心3min,分离血清并放入-20℃冰箱保存,备用。
本试验采用双抗体夹心ABC-ELISA法,按照试剂盒说明书进行检测。
2.4 结果计算与判断
所有OD值减去空白值后,再行计算。以标准品500,250,125,62.5,31.25,15.63,7.81,0ng/mL的OD值在软件CurveExpert1.3上作图,画出标准曲线,在该曲线图上查出相应小鼠IL-2、IFN-γ的含量。采用统计软件SPSS18.0对所得数据进行方差分析,采用EXCEL作图。
3 结果
3.1 血清中IL-2含量测定结果(见表2、表3)
注:数据肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05),大写字母不同表示差异极显著(P<0.01),字母完全相同表示差异不显著(P>0.05)。
由表2可见:饲喂菌液LZ1低、中、高剂量组在10,20,30天时血清中的IL-2含量均极显著高于对照组(P<0.01)。LZ1高剂量组在第10,20,30天时极显著高于低剂量组(P<0.01),LZ1高剂量组在第10天时显著高于中剂量组(P<0.05),LZ1高剂量组在第20天时极显著高于中剂量组(P<0.01),LZ1中剂量组在第20天时极显著高于低剂量组(P<0.01)。
注:数据肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05),大写字母不同表示差异极显著(P<0.01),字母完全相同表示差异不显著(P>0.05)。
由表3可见:饲喂菌液LZ2低、中、高剂量组在10天时血清中的IL-2含量均极显著高于对照组(P<0.01),LZ2低剂量组在10天时显著高于中剂量组(P<0.05)。LZ2中剂量组在20天时显著高于对照组(P<0.05)。LZ2低、中剂量组在10,20天时均极显著高于高剂量组(P<0.01)。LZ2低剂量组在20天时均极显著高于中剂量组和对照组(P<0.01)。
3.2 血清中IFN-γ含量测定结果(见表4、表5)
注:数据肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05),大写字母不同表示差异极显著(P<0.01),字母完全相同表示差异不显著(P>0.05)。
由表4可见:饲喂菌液LZ1低、中剂量组在10,20,30天时血清中的IFN-γ含量均极显著高于对照组和高剂量组(P<0.01)。LZ1低剂量组在10,20,30天均极显著高于中剂量组(P<0.01)。LZ1高剂量组在10天时显著高于对照组(P<0.05)。
由表5可见:饲喂菌液LZ2低、中剂量组在10天时血清中的IFN-γ含量均极显著高于对照组(P<0.01)。LZ2中剂量组在10天时显著高于高剂量组(P<0.05)。LZ2低剂量组在10天时极显著高于中、高剂量组(P<0.01),在20天时极显著高于中、高剂量组和对照组(P<0.01)。LZ2对照组和低、中剂量组在30天时极显著高于高剂量组P<0.01)。LZ2低剂量组在30天时显著高于对照组和中剂量组
注:数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异极显著(P<0.01),字母完全相同表示差异不显著(P>0.05)。
4讨论
由于菌株不同、剂量不同所导致的IL-2、IFN-γ增强和减弱效果也是不同的。
随着饲喂时间的增加,LZ1菌株低、中、高剂量组IL-2的含量不断增加,表明LZ1菌株促使IL-2的mRNA表达量增加,导致小鼠的免疫功能增强。IL-2细胞因子基因表达可能被ERK1/2信号通路调控。LZ1菌株激活了IL-2的信号通路,MAPK信号通路磷酸化后一个主要的结果就是使MAPK信号通路下游的核转录因子(如NF-κB和AP-1)活化,然后NF-κB和AP-1调节参与免疫和炎症反应的各种基因表达[5]。持久激活的ERK可部分转入核内,在核内聚集后,使相应的转录因子磷酸化,通过Elk-1活化AP-1组成元件c-Fos、Fra-1和Fra-2DNA连接活性[6]及NF-κB家族的c-Rel核转位,以此来上调IL-2的表达。
LZ2菌株表低、中、高剂量组IL-2含量均极显著高于对照组(P<0.01),但随着饲喂时间的增加,IL-2的含量不断降低,表明LZ2菌株促使IL-2的mRNA表达量降低,导致小鼠的免疫功能减弱。LZ2菌株可能使IL-2的ERK1/2信号通路的活性降低。
对于IFN-γ含量,随着饲喂时间的增加,LZ1菌株和LZ2菌株低、中、高剂量饲喂组均极显著或显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),呈现不断降低的趋势,表明LZ1、LZ2菌株使IFN-γ的mRNA表达量降低,导致小鼠的免疫功能减弱。
李焕荣等[7]研究发现,由于IL-10基因mRNA含量的升高抑制了IFN-γ的表达。有学者研究,垂体腺苷酸环化酶激活肽与血管活性肠肽(VIP)通过上调B7.2(表达于单核细胞、树英状细胞及巨噬细胞,提供刺激T细胞免疫信号的重要分子)的表达而诱导巨噬细胞活化,后者刺激抗原提呈CD4+T细胞,诱导IL-4与IL-5产生,而减少IFN-γ表达[8]。体外试验结果表明,PGE2抑制人外周血细胞、T细胞IFN-γ的产生。张群等[9]研究发现,PGE2可抑制混合淋巴细胞培养反应(MLR)中脾细胞IFN-γmRNA的表达,进一步从基因表达水平证明了PGE2抑制IFN-γ产生的机制。
有人分离和培养来自溃疡性结肠炎(UC)和局部回肠炎(CD)的病变结肠组织和正常对照结肠组织中的CD4+T细胞,给予CD2和CD28抗体刺激后,CD的CD4+T细胞分泌IFN-γ明显增多,进一步研究发现黏膜固有层中分泌IFN-γ细胞数也增多,同样条件培养外周血CD4+T细胞亦显示CD4+T细胞分泌IFN-γ明显增多[10]。因此,推测高剂量组血清中IFN-γ的含量在20天时突然高于中剂量组,可能是由于LZ2菌株刺激了小鼠的CD2和CD28抗体的产生。
参考文献
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IFN-γmRNA 篇7
关键词：肺炎支原体肺炎,白细胞介素-6,干扰素γ
肺炎支原体肺炎是儿科最常见的非典型肺炎之一, 其发病率呈逐年增高趋势。肺炎支原体肺炎的发病机制还不十分清楚, 目前主要认为与病原菌的直接侵入、呼吸道上皮细胞的吸附和免疫反应有关, 而且免疫反应可能占主导地位[1]。本研究通过对血清IL-6、IFN-γ 测定, 探讨肺炎支原体肺炎患儿可能的免疫变化, 现报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料随机选取2014 年1~12 月在郑州市儿童医院呼吸科住院并确诊为肺炎支原体肺炎的患儿40 例作为观察组, 选取同期住院的普通肺炎患儿40 例作为对照组。普通肺炎及肺炎支原体肺炎的诊断均参照中华医学会相关疾病的诊断标准。排除伴有先天性疾病 ( 先天性心脏病、内分泌疾病等) 、血液性疾病及出现肺部并发症的患儿。观察组患儿平均年龄 (26.9±18.5) 个月, 男28 例 (28/40, 70%) , 女12例 (12/40, 30%) , 平均入院至发病时间 (2.35±1.95) d ;对照组患儿平均年龄 (24.8±22.6) 个月, 男24 例 (24/40, 60%) , 女16例 (16/40, 40%) , 平均入院至发病时间 (2.96±2.21) d。两组年龄、性别及发病时间等一般资料比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1. 2 方法所有符合条件的患儿均在入院后4 h进行静脉采血, 用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定两组血清IL-6 及IFN-γ水平, ELISA检测过程严格按试剂盒说明进行操作 (检测试剂盒购自武汉博士德公司) 。实验步骤严格按试剂盒说明书执行。
1. 3 统计学方法采用SPSS17.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差 ( ±s) 表示, 采用t检验;计数资料以率 (%) 表示, 采用χ2检验。P<0.05 表示差异具有统计学意义。
2 结果
观察组患儿血清IL-6 水平为 (66.2±52.2) pg/ml, 对照组患儿血清IL-6 水平为 (45.6±35.2) pg/ml, 观察组患儿血清IL-6水平明显高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;观察组患儿血清IFN-γ 水平为 (69.5±45.2) μg/L, 对照组患儿血清IFN-γ 水平为 (63.2±33.5) μg/L, 观察组患儿血清IFN-γ 水平明显高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。
3 讨论
肺炎支原体是儿童呼吸道感染常见的病原菌之一, 据文献报道, 全球支原体感染率为9.6%~66.7%[2], 且有逐年增高趋势。肺炎支原体肺炎大多预后良好, 少数病情进展迅速, 易合并胸腔积液、肺不张及双侧弥漫性肺间质病变, 甚至累及皮肤、心脏及肝脏, 消化道, 神经系统等其他脏器, 个别危重的进展为难治性肺炎支原体肺炎, 可导致死亡。一般认为肺炎支原体感染后主要通过直接侵犯和 ( 或) 自身免疫反应两方面引起, 其中免疫在致病过程中起主要作用。
IL-6 是一种具有多种生物活性的细胞因子, 主要由纤维母细胞、单核/ 巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞以及多种瘤细胞产生, 在炎症反应中主要起促进炎症反应的作用[3]。肺炎支原体感染机体后, IL-6 作为一种非特异性炎症因子, 分化和分泌免疫球蛋白, 诱导T细胞分化及B细胞生长, 参与炎症反应的病理过程。IL-6 通过细胞及体液免疫等途径引起疾病的发生。一方面可以通过诱导T细胞的分化, 加强炎性细胞因子的释放, 促进炎症的发生;另一方面可以导致自身抗体的产生, 诱发自身免疫性疾病的发生[4], 导致免疫紊乱。本研究提示IL-6 水平在肺炎支原体肺炎急性期明显高于普通肺炎患儿, 提示其在肺炎支原体肺炎早期的免疫变化中起重要作用。
IFN-γ 在机体感染病原体后的早期防御反应中有重要作用。肺炎支原体感染小鼠24 h之内NK细胞被活化, 并且通过分泌IFN-γ 直接抑制肺炎支原体生长。本实验显示肺炎支原体肺炎患儿IFN-γ 水平明显高于普通肺炎患儿, IFN-γ 在肺炎支原体感染后, 参与体内的免疫反应。另外有报道显示[5]肺炎支原体感染重症患儿血清中IFN-γ 水平明显高于轻症患儿, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。还有研究发现[6]急性期血清IFN-γ 水平可能与病情的轻重呈正相关, 通过检测血清中IFN-γ 的水平可以了解病情的轻重, 从而及时给予对症处理。
综上所述, IL-6、IFN-γ 在肺炎支原体肺炎的免疫紊乱中起到一定作用, 通过早期对IL-6、IFN-γ 水平的检测, 可以早期进行对症处理, 减少并发症的发生。
参考文献
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[5]左慧敏, 刘秀云, 江载芳.白介素8白介素10及γ-干扰素在肺炎支原体肺炎中的作用.中国实用儿科临床杂志, 2008, 23 (4) :269-271.