萘降解菌

萘降解菌（精选三篇）

萘降解菌 篇1

本工作从柴油污染土壤中筛选、分离出一株高效萘降解菌N-3，对其进行了菌种鉴定及PCR扩增实验，并考察了该菌株对单一萘、菲、蒽、芘、芴的降解能力及降解过程中脱氢酶活性的变化。

1 实验部分

1.1 试剂、材料和仪器

萘、菲、蒽、芘、芴、氯化三苯基四氮唑（TTC）：纯度均为99%,Sigma-Aldrich公司；正己烷：分析纯；葡萄糖：纯度为97%。

Tris-HCl缓冲溶液：三羟甲基氨基甲烷浓度为0.05 mol/L,p H=7.19。

土样：取自某市的柴油污染土壤。

LB培养基：蛋白胨10.0 g，酵母粉5.0 g,Na Cl 10.0 g，蒸馏水1 000 mL,p H=7.0,121℃灭菌15 min，保存备用。

无机盐培养基：KH2PO4 1.0 g,K2HPO4 1.0FeSO4·7H2O 0.1 g，蒸馏水1 000 mL,pH=7.0,121℃灭菌15 min，保存备用。

萘选择性培养基及PAHs降解培养基：分别用正己烷配制萘、菲、蒽、芘、芴质量浓度为1 g/L的有机溶液，过滤除菌，取一定量添加到无机盐培养基中，使萘、菲、蒽、芘、芴的质量浓度分别为50mg/L，待正己烷挥发完毕后备用。

在上述培养基中分别加入质量分数为2%的琼脂，即得相应的固体培养基。

6010型紫外-可见分光光度计：惠普公司；GC-2010型气相色谱仪：日本岛津公司。GTR21-1型离心机：北京时代北利公司。

1.2 萘降解菌的筛选

取10 g柴油污染土壤加入到100 mL无机盐培养基中，于温度30℃、转速170 r/min条件下浸取4h，将浸取液在3 000 r/min下离心5 min，将10 mL上清液加入到100 mL萘选择性液体培养基中经4代富集培养（萘质量浓度从50 mg/L逐步提高到200 mg/L）后，取适量富集培养液，稀释涂布在萘选择性固体培养基平板上，待有明显菌落出现时从中选取大小、形态各异的菌落在LB固体培养基上进行进一步划线纯化分离。

将各纯化后的菌株分别接种于LB液体培养基中，于温度30℃、转速170 r/min条件下摇床培养20 h，培养液在转速6 000 r/min下离心，用生理盐水重悬浮并调节菌悬液在600 nm处的吸光度（OD600）为1，冷藏备用。

将各菌悬液按10%（φ）的接种量分别接种到萘选择性液体培养基中，观察其生长情况并测定培养液中的萘含量，实验设置3组平行试样。

1.3 萘降解菌的鉴定

利用Baldwin等[15]2003年报道的nah基因的简并引物nahf/nahr，对筛选出的菌株进行PCR扩增实验，用细菌DNA提取试剂盒（Tiangen）对菌株进行DNA提取。选择一株生长情况最好、对萘降解能力最强且含有nah基因的菌株作为萘降解菌。

菌株的鉴定工作委托中美泰和生物技术（北京）有限公司完成。

1.4 萘、菲、蒽、芘、芴的降解

将萘降解菌的菌悬液按10%（φ）的接种量分别接种于100 mL含不同PAHs的降解培养基中，于温度30℃、转速170 r/min条件下摇床培养，定时取样，测定菌体生长曲线及降解后培养液中各PAH含量，实验设置3组平行试样。

1.5 分析方法

1.5.1 菌体浓度的测定

以菌体培养液的OD600值表征培养液中的菌体浓度。

1.5.2 萘、菲、蒽、芘、芴质量浓度的测定

试样经正己烷萃取后，用气相色谱仪测定各PAHs的质量浓度。色谱条件：进样口温度300℃，检测器温度330℃，毛细管柱50 m×0.25 mm×0.25μm，柱温130℃保持3 min，以15℃/min的升温速率梯度升温至280℃，进样量1μL。

1.5.3 脱氢酶活性的测定

通过测定微生物的脱氢酶活性可以了解微生物对有机污染物的氧化分解能力，具体方法见文献[16]：取2 mL降解后培养液于一系列具塞试管中，加入p H=8.5的0.05 mol/L Tris-HCl缓冲溶液、0.1 mol/L葡萄糖溶液、0.5%(w)TTC各2 mL，置于30℃恒温培养箱中反应4 h。加入2滴浓硫酸中止反应，并准确加入5 m L甲苯，充分振荡，萃取。待反应生成的红色三苯基甲臜（TF）被完全萃取到有机相时，将有机相在4 000 r/min下离心5 min，过滤后测定滤液于486 nm处的吸光度（OD486），以此表征萘降解菌的脱氢酶活性。

2 结果与讨论

2.1 萘降解菌的筛选

经过富集培养，在萘选择性固体培养基平板上得到3株能以萘为唯一碳源和能源生长的菌株，分别命名为N-1,N-2,N-3。3株菌在萘选择性培养基中的生长曲线见图1，降解60 h后3株菌的萘降解率见图2。由图1和图2可见，菌株N-3生长情况最好，且降解60 h后的萘降解率最高，达到25.31%。

3株菌的nah基因扩增电泳照片见图3。由图3可见，菌株N-1和N-3中均含有nah基因，而菌株N-2中未发现。结合图1～3的结果，以下实验选择N-3作为萘降解菌。

M：分子标记；NC：空白对照；N-1,N-2,N-3：萘降解菌

2.2 菌株N-3的鉴定

经过对菌株N-3的16S rDNA序列分析，鉴定其为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。对该菌进行简单生理生化实验，结果表明：该菌为革兰氏阴性菌，菌体的一端有单鞭毛，无芽胞；氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖和木糖，产酸不产气，但不分解乳糖和蔗糖，可液化明胶，可分解尿素，可还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气，吲哚试验呈阴性，可利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。

2.3 菌株N-3对萘、菲、蒽、芘、芴的降解

菌株N-3在不同PAHs体系中的生长曲线见图4。由图4可见：菌株N-3在萘、菲、蒽、芘、芴等5种PAHs中都能生长；在蒽和菲中生长情况最好，其次是萘，在芘和芴中生长情况最差。菌株N-3对不同PAHs的降解率见图5。由图5可见：经过84 h的降解，菌株N-3对萘、菲、蒽、芘、芴的降解率分别为28.81%,34.83%,36.65%,27.50%,23.47%；菌株N-3对这5种PAHs降解能力的大小顺序为：蒽>菲>萘>芘>芴，与该菌在不同PAH体系中的生长情况呈一定的正相关性。实验结果表明，该菌不仅可有效降解萘，而且也能有效降解液相中其他种类的PAHs。

2.4 菌株N-3的脱氢酶活性

菌株N-3在不同PAHs体系中的脱氢酶活性见图6。由图6可见：菌株N-3在所有PAHs体系中的OD486都是先增大后减小；在菲和蒽体系中，菌株N-3的脱氢酶活性在前72 h上升迅速，而后略有下降；在萘、芘和芴体系中，菌株N-3的脱氢酶活性在前60 h上升迅速，而后呈下降趋势，总体均低于菲和蒽体系中的脱氢酶活性。这表明该菌株对萘、芘和芴的降解能力没有对菲和蒽的降解能力强。该结果与菌株N-3对不同PAHs降解率的结果呈正相关性，由此也可证明用脱氢酶活性表征微生物对有机污染物的降解能力是一种可靠的方法。

3 结论

a）从柴油污染土壤中分离出一株降解萘的菌株N-3。该菌能以萘为唯一碳源及能源生长，经鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），含有萘双加氧酶基因nah。

b）该菌能有效降解液相中的萘、菲、蒽、芘、芴。在质量浓度为50 mg/L的不同种单一PAH体系中，经过84 h的降解，萘、菲、蒽、芘、芴的降解率分别为28.81%,34.83%,36.65%,27.50%,23.47%。

c）菌株N-3的脱氢酶活性与其对不同PAHs的降解率呈一定的正相关性，且对PAHs的降解具有广谱性。

摘要：从柴油污染土壤中筛选分离出一株萘降解菌N-3,进行了菌种鉴定及萘双加氧酶基因(nah)验证,并考察了该菌对不同种类多环芳烃(PAHs)的降解能力及降解过程中脱氢酶活性的变化。实验结果表明:该菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),含有nah基因;当分别对液体培养基中质量浓度为50 mg/L的萘、菲、蒽、芘、芴降解84 h时,菌株N-3对萘、菲、蒽、芘、芴的降解率分别为28.81%,34.83%,36.65%,27.50%,23.47%。菌株N-3的脱氢酶活性与其对不同PAHs的降解率呈一定的正相关性。该菌不仅能有效降解萘,且对其他种类PAHs也有一定降解作用。

苯酚降解菌的筛选与降解特性研究 篇2

苯酚降解菌的筛选与降解特性研究

以沈阳北部废水处理厂活性污泥为菌源,经过驯化、培养、筛选出一种降解能力较强的菌株GP6,该菌为球菌,革兰氏染色阴性,能以苯酚为唯一碳源和能源生长,降解苯酚的最佳条件为: 温度30 ℃,pH 7.0,振荡转速150 r/min,好氧.进而研究了氮源和碳源等因素对苯酚生物降解的`影响.

作 者：律泽 魏炜 袁雅姝 霍石磊 LV Ze WEI Wei YUAN Ya-shu HUO Shi-lei 作者单位：沈阳建筑大学市政与环境工程学院,辽宁,沈阳,110168刊 名：辽宁化工英文刊名：LIAONING CHEMICAL INDUSTRY年，卷(期)：38(12)分类号：X703关键词：苯酚 驯化 筛选 苯酚降解菌

萘降解菌 篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料患者均为门诊病例, 随机分为两组, 特比萘芬治疗组70例, 男48例, 女22例, 年龄16～56岁, 平均28.

5岁, 病程2个月～2年, 平均10.8个月。对照组65例, 男37例, 女28例, 年龄16～54岁, 平均27.4岁, 病程3个月～3a, 平均11.4个月。所有患者均具有典型的临床症状, 直接镜检均查到圆形糠秕孢子或菌丝, 近1个月来未内服其他抗真菌药物, 半月来未局部外用过抗真菌药。

1.2 治疗方法治疗组:

患者每日餐后服特比萘芬250mg, 连续14天。对照组:每天用2%酮康唑洗浴1次患处。方法是先用清水冲洗皮肤, 使皮肤湿润, 然后取5～10ml2%酮康唑洗剂涂于患处, 用手搓摩3～5min, 保留药液于皮损处5min, 然后用清水冲洗干净, 连用14天。两组治疗期间停用其他口服抗真菌药物。用药2周后随访1次, 共随访2次, 同时作治疗前后真菌学检查和临床评估。

2 结果

2.1 疗效评定标准痊愈为临床症状消失, 皮疹完全消退, 局部仅留色素沉着斑, 真菌检查 (-) 。

显效为临床症状及皮疹大部分消退达70%以上, 真菌检查 (-) , 或偶见少许菌丝 (+) 。有效为临床症状及皮疹消退达30%～69%, 真菌检查 (+) 。无效为临床症状及皮疹消退在30%以下, 真菌检查 (+) 。

2.2 治疗结果治疗组总有效率95%, 对照组总有效率72%, 经统计学处理P<0.

05, 两组疗效差异有显著性。2.3副作用治疗组有2例服药后出现头晕、胃肠道不适, 停药后症状消失, 其余病例未见不良反药后适当外涂护肤品症状消失。

3 讨论

糠秕孢子菌具有嗜脂性。嗜脂性糠秕孢子菌在毛囊内过度生长, 由菌体脂酶分解皮脂产生脂肪酸引起毛囊发炎, 这是糠秕孢子菌毛囊炎发病的机制。特比萘芬是新一代丙烯胺类抗真菌药, 它通过抑制真菌细胞膜中的角鲨烯环氧化酶, 使细胞内角鲨烯大量聚积, 真菌因细胞壁破裂而死亡, 因此具有杀菌作用, 同时又因麦角固醇缺乏使真菌细胞膜形成受阻, 真菌生长受干扰, 故又起抑菌作用。