芦荟大黄素（精选三篇）
芦荟大黄素 篇1
一、大黄素的物理性质
橙色针状结晶,或土黄色结晶粉末。熔点223～224℃,易升华,可溶于乙醛、苯、乙醇、稀氨水、碳酸钠水溶液,易溶于热乙醇,在乙醚及苯中呈黄色,氨水及硫酸中呈绯红色。芦荟大黄素的结构式如下:
二、浸取方法
1. 材料:
芦荟粉。
2. 设备:
液相色谱仪、1000ml四口瓶、压滤器(自制)、N2钢瓶、真空泵、SHD-Ⅱ电动揽拌器、布氏漏斗等。
3. 试剂:
95%乙醇、乙酸乙酯、甲苯、DMF。
4. 乙醇回流提取:
经发酵后芦荟干燥原粉50g,置于1000ml四口瓶中,加入700m195%乙醇,加热至回流,并不断搅拌,共回流5小时,回流完毕后,将热物料置于保温的压滤器中,通N2压滤得大黄素乙醇溶液和原粉残渣,大黄素乙醇溶液降温析晶,减压抽滤,得大黄素结晶颗粒,原粉残渣再经过两次乙醇回流,重复以上步骤。
5. 乙酸乙酯回流提取:
方法步骤与上述乙醇一致,得黄色结晶颗粒
6. 甲苯回流提取:
方法步骤与上述相同,得橙色结晶颗粒
7. DMF回流提取:
方法步骤与上述相同,得橙黄色结晶颗粒
三、结果分析(见表1)
由上表可知,由甲苯回流浸取效果最好。
以上仅就各种溶剂的浸取效果做出选择,然而并未给出甲苯回流的最佳时间,原粉与甲苯的最佳配比,原粉的细度等指标,下面通过正交实验作出科学选择。
以甲苯为浸取剂进行三因素四水平正交实验即L9 (34)
A:甲苯回流时间B:原料与甲苯配比C:原粉的细度
从上表可以看出配比量主要因素,极差为13,回流时间次之相差为8,细度最次,极差为1。A中A3最优,B中B3最优,C中C1最优,所以最优组合应该是A3、B3、C1。即甲苯回流时间2h最优,配比1:10m/m最优,细度200目最优。
四、实验部分
取芦荟干燥粉碎(200目)原粉50g,置于四口瓶中,加入500g甲苯,加热搅拌回流2h,回流完毕后,压滤,将残渣滤除,得母液,母液降温至常温,抽虑得23.8g橙黄色结晶大黄素,干燥后17.65g,得率35.3%,色谱含量(HPLC)可达98%。
参考文献
[1]万金志,乔悦昕芦荟的化学成分及其研究[J].中草药,1999,30(2):151-153.
[2]张伟强,王诗明中药芦荟的开发研究概况[J].中国中医药科技,1998,5(6):401.
[3]AryayevNA芦荟提取物—科学和临床资料[J].国外医学:中医中药分册,1 981,5:39-43.
芦荟大黄素 篇2
关键词：舒血通合剂,芦荟大黄素,大黄酸,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚,HPLC
舒血通合剂为成都中医药大学附属医院临床应用多年的经验方,由川芎、大黄、三七、水蛭等药材组成。其疗效确切、可靠,主要用于出血性中风恢复期、心气不足、瘀血作痛等证候者。本品为复方中药制剂,大黄为该合剂主药之一,为了更加全面、有效地控制其质量,采用高效液相色谱法对舒血通合剂中大黄素的含量进行了测定。
1仪器与试药
HP-1100高效液相色谱仪(美国惠普):惠普四元梯度泵,惠普自动进样器,惠普柱温箱;P211D电子分析天平(Sartorius,德国);Phenomenex-C18柱(5μm,4.6mm×250mm)。
大黄素(批号:110756-200110)、大黄酚(批号:110796-201118)、大黄酸(批号:110757-200206)、芦荟大黄素(批号:110795-201007)、大黄素甲醚(批号:110758-20101)均为供含量测定用且由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯,水为蒸馏水,其余均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:Phenomenex-C18柱(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-0.1%磷酸(75∶25),柱温为30℃ ,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为254nm,进样量为10μL。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3 000[1,2]。
2.2对照品溶液制备
精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品1.74、3.22、2.18、1.78、0.46mg置50mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3供试品溶液制备
精密吸取样品溶液2mL,置100mL锥形瓶中,加10%盐酸8mL,超声2min,再加入10mL的氯仿,(80±5)℃水浴1h放至室温,置分液漏斗中,分取氯仿层,滤液再用氯仿(10、10、10mL)萃取3次,合并萃取液,回收氯仿至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,定容,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。
2.4专属性试验
取不含大黄的阴性样品,按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。取对照品溶液、 供试品溶液、阴性对照溶液各适量,按上述色谱条件进样测定。结果表明,阴性对照在芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚保留时间处无干扰峰出现。色谱见图1。
注:图1中对照品依次为芦荟大黄素(aloe-emodin) 、大黄酸(rhein)、大黄素(emodin)、大黄酚(chrysophanol)、大黄素甲醚(physcion)。
2.5线性关系考察
精密量取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚混合对照品溶液5.0、4.0、3.0、2.0、1.0、0.5 mL,分别置于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得系列标准溶液,分别精密量取10μL,测定峰面积。以峰面积积分值(Y)对对照品浓度(X)进行线性回归,得回归方程分别为Y1=37.224 X+3.016,Y2=35.806X+2.999,Y3=27.829 X+2.601,Y4=46.319X+2.592,Y5=37.871X-2.101(均为r=0.9999,n=7)。结果表明,芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的检测浓度分别在1.705～ 34.104、3.220～64.400、2.180～ 43.600、1.771～35.422、0.459～ 9.182μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.6精密度试验
精密量取同一份对照品溶液10μL,连续进样6次,记录峰面积。结果,RSD分别为1.03%、0.949%、1.01%、0.942%、1.08%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.7稳定性试验
取同一份供试品溶液,分别于0、2、4、8、12h进样测定,每次10μL。结果, RSD分别为2.08%、2.14%、2.08%、1.95%、2.49%(n=5),表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.8重复性试验
取同一批(批号:20120602)样品适量,按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液,用甲醇转移至10 mL量瓶中,经0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液10μL,注入HPLC仪,测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量。结果,样品平均含量分别为56.301、113.17、65.755、56.720、18.990μg·mL-1, RSD分别为2.07、2.35、2.40、1.88、2.77%(n=6),表明该方法重复性良好。
2.9加样回收率试验
取已知芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的样品(批号:20120602)1mL, 精密量取6份,分别精密加入相同量的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品溶液,照“2.3”项下方法制备供试品溶液并测定含量,计算加样回收率,结果见表1。
2.10样品含量测定
取3批样品 (批号:20120601、20120602、20120603)各适量,分别按 “2.3”项下方法制备供试品溶液,照上述方法测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。结果见表2。
3讨论
3.1提取溶剂的选择
样品挥干后用70%乙醇直接超声处理后进行测定,但此方法用于成药测定干扰组分很大,分离效果不好。后改为,取一定量样品加入盐酸超声后水解,再用三氯甲烷多步萃取后制备的样品,杂质干扰峰少,分离效果好, 重复性好。
3.2色谱条件筛选[3,4,5]
在大黄的含量测定中,实验考察3种不同的色谱条件,分别为色谱条件Ⅰ:色谱柱:Phenomenex-C18(5μm,4.6mm×150mm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(85∶15);流速:1mL/min,柱温:25℃;色谱条件Ⅱ:色谱柱:Phenomenex-C18(5μm,4.6mm×150mm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(80∶20);流速:1mL/min,柱温:25℃;色谱条件Ⅲ:色谱柱:Phenomenex-C18(5μm,4.6mm×250mm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(75∶25);流速为1mL/min,柱温:30 ℃。其中色谱条件Ⅰ,大黄各对照品分离度较低,峰形较不对称;色谱条件Ⅱ,峰形对称性不理想且有干扰。实验结果表明短柱对该样品中大黄对照品的分离效果不理想,长柱效果较好。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:22.
[2]吴俊珠,周浓,罗碧燕,等.HPLC测定黄连上清丸中5种大黄蒽醌类化合物的含量[J].云南中医中药杂志,2010,31(9):66-67.
[3]崔玉芹,董振敏,门金玉,等.高效液相色谱法测定通舒口爽胶囊中大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的含量[J].中南药学,2009,7(1):20-23.
[4]黄齐林,马志刚,曹秋娥.高效液相色谱法快速测定大黄中大黄素,大黄酸和芦荟黄素的研究[J].分析试验室,2006,25(10):71-73.
芦荟大黄素 篇3
1仪器与试管
定量毛细血管 (Drummond, USA ) ;手动点样仪 (Nanomat 4, 瑞士CAMAG) ;自动点样仪 (Automatic TLC Sampler 4, 瑞士CAMAG) ;双槽展开缸;薄层板加热器 (TLC Plate HeaterⅢ, 瑞士CAMAG) ;薄层扫描仪 (TLC Scanner 3, 瑞士CAMAG) ;大黄素、大黄素甲醚、大黄酚对照品 (中国药品生物制品检定所提供) ;溶剂和试剂均为分析纯。何首乌购自湛江市药检所。
2实验方法
2.1 薄层扫描条件[2,3]
大黄素:λs=440nm, λR=700nm, SX=3, 狭缝6.0mm×1.20mm;大黄酚:λs=435nm, λR=700nm, SX=3, 狭缝6.0mm×1.20mm;大黄素甲醚λS=435nm, λR=700nm, SX=3, 狭缝6.0mm×1.20mm;双波长反射法锯齿扫描。
2.2 样品制备
对照品溶液:精密称取15mg大黄素、大黄素甲醚、大黄酚对照品, 置于100ml容量瓶中, 加氯仿溶解并稀释至刻度, 制成0.15mg/ml的对照品溶液。药材溶液:精密称取何首乌粗粉 (过2号筛) 1g, 加2.5mol/L硫酸40ml, 直火缓缓加热回流3h, 再分别加氯仿30ml, 置水浴中回流30min, 抽滤, 再将酸液及残渣加氯仿20ml, 置水浴上浓缩适量, 转移至10ml量瓶中, 加氯仿至刻度, 摇匀。
2.3 薄层层析条件
层析条件:国产预制板硅胶G于105℃活化1h, 置于干燥器中备用。环己烷-丙酮-甲酸乙酯-乙醇-水 (1: 3.5: 1.6: 0.25: 3.65) , 上层溶剂, 展距15cm, 取出晾干。显色条件:105℃烘约5min, 用氨蒸汽熏。
2.4 测定波长的选择
取对照品溶液及供试品溶液适量点样, 展开, 取出, 晾干, 用瑞士CAMAG TLC Scanner 3双波长薄层扫描仪进行紫外-可见光谱扫描, 结果大黄素在540nm波长处有最大吸收, 而700nm处基本无吸收, 大黄酚在535nm波长处有最大吸收, 而700nm波长处基本无吸收, 大黄素甲醚在540nm波长处有最大吸收, 而700nm波长处基本无吸收, 故选择以上的薄层扫描条件。
2.5 标准曲线与线性关系
精密称取大黄素、大黄素甲醚、大黄酚对照品0.5、 1、2、 4、 6、 8、10μl, 点于同一硅胶板上, 展开, 展距15cm, 分别对大黄素、大黄素甲醚、大黄酚斑点进行扫描, 计算峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 点样量为横坐标绘制标准曲线。回归方程如下:大黄素:A=1490.1X-38.48, r=0.9991;大黄酚:A=548.02X-1258.30, r=0.9994;大黄素甲醚:A=689.32X-4259.67, r=0.9995。大黄素点样量在0.4～1.2μg, 大黄酚在0.1～0.6μg, 大黄素甲醚在0.4～1.5μg线性关系良好。
2.6 测定方法精密度与重现性
2.6.1 精密度试验:
对大黄素、大黄酚、大黄素甲醚同一斑点连续扫描5次, 测峰面积积分值, RSD%分别为0.93、0.67、1.23;对同一样品在同一薄层板上不同位置点相同量样, 依法展开、显色、扫描, 测定峰面积的RSD分别为3.06%、1.26%、1.87%;对同一样品在不同薄层板上点相同量样, 依法展开、显色、扫描, 测定峰面积的RSD%分别为3.65%、4.26%、3.79%。
2.6.2 重现性试验:
取同一批药材制成5份, 按样品测定方法进行试验, 结果表明重现性良好, RSD%分别为1.84, 2.03, 3.67。
2.7 稳定性试验
取大黄素、大黄素甲醚、大黄酚对照品溶液, 按上述条件点样, 展开, 取出, 晾干, 显色, 对在同一板上的同一斑点扫描测定, 每隔20分钟测定1次面积。结果表明, 斑点在展开晾干显色后60min内基本不影响测定。
2.8 样品含量的测定
(1) 大黄素测定:何首乌药材溶液点样4μl; (2) 大黄酚:何首乌药材溶液点样5μl; (3) 大黄素甲醚:何首乌药材溶液点样5μl。点样后展开, 展距15cm, 用氨气蒸汽熏, 扫描, 计算面积。结果见表1。
2.9 加样回收率试验
精密称取何首乌药材粉末2.0g, 加入一定量大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品, 按上述方法制备样品, 开展, 显色, 扫描测定, 计算回收率。其中大黄素平均回收率为98.65%, RSD 2.14%;大黄酚加样平均回收率为98.97%, RSD 2.05%, 大黄素甲醚加样平均回收率为99.37%, RSD1.94%。结果见表2, 表3, 表4。
3讨论
3.1 展开剂的选择
通过比较了不同体系和比例的展开剂, 如正已烷-乙酸乙酯-甲酸、正已烷-乙酸乙酯-氯仿-冰醋酸、石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸、苯-乙酸乙酯-甲酸、甲苯-乙酸乙酯-甲酸、苯-乙酸乙酯-甲酸-甲醇-水、正已烷-乙酸乙酯-氯仿-甲酸、正已烷-丙酮-甲酸乙酯-乙醇-水等, 结果以正已烷-丙酮-甲酸乙酯-乙醇-水为展开剂, 大黄素分离效果最好。
3.2 注意事项
薄层板显色前, 需加热将展开剂完全挥发, 否则影响显色效果。
参考文献
[1]江苏新医学院.中药大辞典 (上册) [M].上海:上海科学技术出版社, 483.
[2]李玉芳, 何玄华.何首乌现代研究进展[J].中成药, 1997, 19 (5) :37.