花生种子（精选七篇）
花生种子 篇1
关键词：花生,种子,贮藏
花生是青岛市主要油料作物和经济作物, 也是重要的出口创汇农产品, 在青岛市农业生产中占有重要地位。近年来, 青岛市充分利用国家、省市促进种业发展的各种利好政策, 立足当地优势, 以种子企业为依托, 大力发展花生良种繁育基地, 每年繁育生产花育22号、花育25号和花育31号等花生良种3 000万kg以上, 销往省内及河南、安徽、河北和辽宁等外省地区, 已成为全国花生良种重要生产基地。但是, 由于花生种子脂肪和蛋白质含量高, 若贮藏不当, 极易造成发芽率降低, 甚至丧失种用价值, 影响着花生生产的发展和花生种子经营企业的经济效益。
为此, 根据花生种子的贮藏特性, 结合多年贮藏实践, 研究制定出一套花生种子安全贮藏技术规范, 为确保花生种子安全贮藏、保证花生种子质量提供了技术保障。
1 花生种子贮藏特性
花生种子因其脂肪和蛋白质含量高, 贮藏过程中若对水分和温度等控制不当, 在高温、高湿、机械损伤、氧气、日光及微生物的综合作用下极易发热霉变、走油、酸败、变质, 造成种子发芽率降低, 甚至完全丧失种用价值。
2 影响花生种子安全贮藏的因素
2.1 种子含水量
花生种子含水量的高低是花生种子能否安全贮藏的关键因素。含水量低时, 种子内的水分与蛋白质、碳水化合物等牢固结合在一起, 成为束缚水, 水分在这种状态下不能在细胞内移动, 几乎不参与新陈代谢反应。随着种子含水量的增高, 细胞内便会出现能够移动的游离水 (细胞内出现游离水的含水量称为临界水分) 。种子内出现游离水时, 其所含脂肪酶和其他酶的活性增加, 而使呼吸增强, 含水量越高, 呼吸作用也就越强, 呼吸热积累过多, 种子易生霉、酸败。因此, 种子安全贮藏的含水量应保持在临界水分以下。
一般作物种子在25℃以下, 含水量不超过其非油部分的14%~15%时, 种子的呼吸作用即可趋于稳定。花生种子含油量约为46%, 其临界水分应为8.1%。含油量越高的花生, 其安全贮藏的临界水分应越低。因此, 大花生种子的安全含水量应在8%以下, 小花生种子应在7%以下。
2.2 贮藏温度
温度是花生种子安全贮藏的又一个重要因素。在自然贮藏条件下, 充分干燥的花生堆内温度随气温的升降而变化。在低温条件下, 种子内酶的活性较弱, 呼吸热积累也较少, 游离脂肪酸增加很少, 霉菌停止活动, 花生贮藏的时间较长。温度越高, 安全贮藏的时间越短。据试验, 花生种子含水量为8%时, 在温度低于20℃的条件下, 脂肪酸变化不大;在温度高于20℃的条件下, 温度越高, 酶的活性越强, 种子中的游离脂肪酸含量就越多, 酸价随之升高。这就是在高温下花生种子很容易氧化酸败、失去生活力的主要原因。高温还是加速病菌侵染种子的主要因素, 所以在种子贮藏过程中一定要注意温度的变化。
2.3 环境湿度
花生种子的安全贮藏, 除种子本身的含水状况外, 受贮藏环境空气湿度影响也很大。若相对湿度超过75%, 种子的含水量就会超过安全贮藏的水分标准, 贮藏的花生种子易发生酸败和霉变。据试验, 温度不高于20℃时, 花生种子贮藏在相对湿度70%以下的环境下相对安全。
2.4 通风条件
贮藏期间应保持通风良好, 以促进种子堆内气体交换, 起到降温散湿作用。花生种子贮藏应分别建囤或堆垛, 各个囤或垛间要留不小于0.5 m的通风道, 靠墙处最好空0.7 m。垛底垫木架, 囤或垛内也要留通风孔。不论室内、室外、囤贮或堆垛, 都要注意体积勿过大, 以保持通风良好。但在高温高湿季节, 贮藏花生种子则应尽可能隔绝大气与种子堆或贮藏库的气体交换, 以利于保持种子堆内干燥和低温, 故应采取密闭贮藏的方法。
2.5 病菌害虫
由于花生荚果是在土壤中生长发育成熟的, 所以果壳上带有大量的病菌。在环境条件适宜的情况下, 不少病菌可以迅速侵染受过损伤、生理上不健全的花生种子, 也能侵染完整无损的花生种子。另外, 花生种子贮藏期间, 还易遭受印度谷螟、拟谷盗、锯谷盗、玉米象等害虫的危害。花生种子受病虫为害, 很容易发生霉变, 失去生活力。
3 花生种子安全贮藏规范技术
3.1 仓库和设备
3.1.1 仓库
仓库要牢固安全, 不漏雨、不潮湿, 门窗齐全, 能通风、能密闭。有防潮设施, 有垫板。仓库有附属晒场。库内不准堆放易燃易爆、化肥、农药等与种子无关的物品。
3.1.2 器具
要有麻袋、编织袋、苫布、扫帚、包装、运输、清扫、整理等仓用工具和清选机械、熏蒸杀虫机械和通风设备及准确的衡器。
3.1.3 仪器设备
配备测温仪器、测湿仪器、测游离脂肪酸仪器和种子检验仪器。
3.1.4 消防器材
配备灭火器械和水源。
3.2 入库标准
种子纯度、净度、发芽率必须符合国家规定的花生种子质量标准。为确保花生种子安全贮藏, 大花生种子水分应在8%以下, 小花生种子水分应在7%以下。
3.3 种子保管
3.3.1 种子堆放
花生种子宜采用袋装堆放, 分非字型、半非字型。袋装高度一般为7袋。种子堆垛和沿仓壁四周应留有0.5~0.6 m的通道。种子仓库、堆垛要有标牌, 标明品种、产地、入库年月。花生原种和少量新品种种子一律用新袋装, 袋内外应有标签。
3.3.2 防止种子混杂
种子在翻晒、倒仓、并垛、并仓、加工精选时, 要检查核对标签和堆垛卡片, 严防混杂。不同的花生原种不得相邻堆放。散落在地上混杂的种子, 不得作种用。种子翻晒前, 必须清理晒场, 一次翻晒一个品种, 翻晒两个以上品种时, 至少有2 m的间隔距离, 并有隔离设置。花生原种必须单独翻晒。
3.3.3 种子检查
花生种子贮藏环境条件:温度不高于20℃, 相对湿度70%以下。种子贮藏期间, 实行定期定点检查, 遇到灾害性天气要及时检查。检查内容包括种子温度、水分、发芽率、仓温、仓湿、黄曲霉毒素和虫霉鼠雀等, 检查结果均应记入卡片。
种温检查:种子入库完毕后的半个月内, 每3 d检查一次, 以后每隔10 d检查一次。
种子水分检查:一、四季度, 每季度检查一次;二季度, 每月检查一次。
种子虫害检查:按不同季节虫害的活动规律确定检查重点, 种温在15℃以下每季度一次, 15~20℃每半月检查一次, 20℃以上每周检查一次。检查方法为袋装种子分层扦样, 500包以下扦样10包, 501包以上按2%比例拆包取样, 散装种子100 m2以内扦样5~10点, 101~500 m2扦样10~15点。每点 (包) 样品不少于1 kg。虫害的密度以最大部位表示, 按1 kg种样中的活虫头数为计算单位。
种子发芽率测定:种子进出仓时各测定一次。11月至翌年4月, 每月测定一次。
游离脂肪酸测定:测定游离脂肪酸的变化, 是判断花生种子贮藏是否安全的标准之一。花生种子入库时测定一次。种子水分8%、温度20℃以下时, 每月测定一次。当温度超过25℃时, 每半月测定一次。
3.4 仓库密闭与通风
3.4.1 仓库密闭
为提高种子贮藏的稳定性, 在高温、高湿季节, 原则上种子以密闭贮藏为主。
3.4.2 仓库通风
气温下降季节或仓内温、湿度较高时, 应予通风。通风时应准确掌握仓内温、湿度与仓外空气温、湿度状况, 当仓外温、湿度两项指标低于仓内, 或一项指标相同、一项低于仓内时都可通风, 反之不能通风。
3.4.3 机械去湿
具有密闭条件的仓库, 根据仓库大小和种子贮藏数量, 配备不同功能的去湿机, 以降低仓内湿度。
3.5 防治虫害
花生种子贮藏期间的虫害防治, 应以防为主。已入库的花生种子, 不宜采用熏蒸, 以免因虫尸水分多留于种子内招致生霉。
3.5.1 仓内外清洁卫生
仓内保持清洁卫生, 要求做到无洞无缝;仓外3 m内无垃圾、无积水、无杂草等, 做到清洁无虫。
3.5.2 清仓消毒
种子入库前要清扫仓库, 用敌敌畏、敌百虫喷雾消毒, 密闭72 h, 然后通风24 h。
3.5.3 治虫
当虫量达到防治指标 (即每一调查点1 kg有虫两头) 后要立即进行防治。可选用辛硫磷微粒剂拌花生种子进行防治。
3.6 防霉变
花生种子因受潮、结露和自然吸湿而超过10%时, 易受黄曲霉等菌类侵染而发霉变质, 进而使种子酸败, 损害生活力。因此, 贮藏期间如发现种子超过安全水分标准时, 必须及时晾晒至花生种子安全贮藏的水分标准以下, 以防种子受黄曲霉等菌类侵染而发霉变质。
3.7 防鼠雀
花生种子 篇2
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花生种子 篇3
【关键词】水花生；水浸液；一年生黑麦草；种子萌发；幼苗生长
水花生又叫空心莲子草，属苋科莲子草属，是国家环保总局、中国科学院2003年1月制定的第一批外来入侵物种的16种物种之一[1]，在我国23个省都有发生，是一种多年生宿根性杂草，其适应性广，在水陆均可生长，遍布于水稻田及田埂、河道、蔬菜田、果园、林地及草坪地，在四川省为害十分严重。目前，该草已成为农林渔业生产中的重要恶性杂草[2]，同时，该草还能传播多种寄生虫病（涤虫、水蛭、肝片吸虫、姜片吸虫、日本血吸虫），因此，其饲用价值也不高[3]。
近年来，随着对牧草病虫草害的深入研究，植物的化感作用越来越受到众多学者的重视。化感作用是指一種植物通过向环境释放某些化学物质而在其周围形成一个微环境区域，从而抑制或促进该区域内其他植物（或其他微生物）生长的现象[4]。水花生的化感作用备受许多学者关注[5，6]，而关于水花生的化感作用方面的研究很少。本文以一年生黑麦草种子为受体，初步研究了水花生不同部位、不同浓度水浸液的化感作用，确定其是否对其草坪植物具有化感作用，若有则确定其作用强度，以期为减弱水花生对其草坪草的化感效应提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
一年生黑麦草种子，购于四川省农科院。
1.2 试验方法
1.2.1 水花生苗根、茎、叶收集及浸提液制备
供试的水花生苗采自四川省成都市温江区成都农业科技职业学院的实验基地内，其地理坐标为北纬30°42′、东经103°50′，海拔为534m，属亚热带湿润季风气候。将采集来的鲜水花生苗的根、茎、叶在烘箱（烘箱中的温度为60℃）里进行烘干，再将干燥水花生的根、茎和叶分别在1%天平上称取50g/份，将称量好了的水花生各放入1个大烧杯中，再用1000ml量筒分别量取1000ml蒸馏水1份，倒入烧杯中将水花生苗的根、茎、叶茎浸泡24h，最后把水花生苗的根、茎、叶渣去掉，将剩下的液体用磨口瓶装起来并贴上标签，这就成了水花生的水浸液（水花生苗根、茎、叶收集及浸提液制备参照Han等人的方法[7]）。
1.2.2 种子萌发生物检测
受试一年生黑麦草种子经浮选后，选取粒大、饱满、大小一致的种子，用蒸馏水清洗，晾干后备用。受试植物种子（均30粒）用5.25g/L次氯酸钠消毒15min，然后用蒸馏水洗4次，每次1min；将受试植物种子放置在垫有2层滤纸、直径为9cm的皮氏培养皿中，分别将不同部位（叶、茎、根）、不同浓度（0g/L、10g/L、20g/L、30g/L、40g/L和50g/L）的水浸液5ml注入培养皿中，对照为蒸馏水，每个处理3次重复；然后将培养皿放到人工气候箱（湿度85%，温度28℃）中进行萌发实验。在实验过程中记录下实验数据：待一年生黑麦草种子萌芽后7d 后记录其最终发芽率，记录完发芽率，测定所有一年生黑麦草萌发幼苗的根长和苗长。
1.3 数据统计
采用SPSS（12.0）统计软件进行单因素方差、LSD和相关性分析（P<0.05）。
2 结果与分析
2.1 不同浓度水花生水浸液对黑麦草种子萌发的影响
表1 不同部位、不同浓度水花生水浸液对黑麦草种子萌发率的影响
由表1可以看出，与对照相比，所有部位的水花生水浸液对一年生黑麦草种子的萌发率均表现出抑制作用，并且随着浓度的增加，其抑制效应在增强。当水花生叶浸液浓度达到10g/L时，一年生黑麦草种子萌发率就与对照达到显著性差异水平，较对照降低了12.6%；当水花生茎浸液浓度达到10g/L时，一年生黑麦草种子的萌发率也与对照达到显著性差异水平，较对照降低了9.7%；当水花生根浸液浓度达到40g/L时，一年生黑麦草种子的萌发率才与对照达到显著性差异水平，较对照降低了8.8%。通过以上分析说明，水花生不同部位水浸液对一年生黑麦草种子萌发的影响强度顺序为叶>茎>根。
2.2 不同浓度水花生水浸液对黑麦草幼苗生长的影响
由表2可以看出，与对照相比，所有部位的水花生水浸液对一年生黑麦草幼苗的生长均表现出抑制作用，并随着浓度的增加，其抑制效应有所增强。当水花生茎浸液浓度达到10g/L和30g/L时，一年生黑麦草种子幼苗的根长和苗长分别与对照达到了显著性差异水平，较对照分别降低了21.7%和17.0%；当水花生叶浸液浓度达到20g/L时，一年生黑麦草种子幼苗的根长和苗长就与对照达到了显著性差异水平，分别较对照降低了17.9%和21.4%；与对照相比，水花生根水浸液对一年生黑麦草幼苗的根长和苗长无显著性影响，这说明其抑制效应是最弱的。通过以上分析说明，水花生水浸液对一年生黑麦草幼苗生长的影响强度顺序也为叶>茎>根。
表2 不同部位、不同浓度水花生水浸液对高羊茅幼苗生长的影响
3 讨论与结论
（1）鉴于在同一浓度下，水花生水浸液对一年生黑麦草种子萌发及幼苗生长的影响强度顺序为叶、茎大于根，因此，在修剪草坪时应尽量将水花生的地上部残株处理掉，以减轻水花生茎和叶通过雨水淋溶对其草坪草造成的化感抑制作用。
（2）本实验只是进行了简单的室内生物检测，与其实际生长的土壤条件相差甚远，因此，还需进行大量草坪实际试验，以进一步论证此实验结果的可靠性。
参考文献
[1]潘先虎. 水花生的危害及其防除技术[J]. 现代农业科技， 2008，（6）：102-103.
[2]夏立群，李建强，李伟.论克隆植物的遗传多样性[J].植物学通报，2002，19（4）：425-431.
[3]张格成，李继祥，陈秀华.空心莲子草主要生物学特性研究[J] .杂草科学，1993， （2）：10-12.
[4]Rice E. L. Allelopathy. Academic press，Orlando，FL. 1984.
[5]韩丽梅，沈其荣，鞠会艳等. 水花生地上部水浸液的化感作用及化感物质的鉴定. 生态学报，2002，22（9）：1425-1432.
[6]阎吉昌，张奕，韩丽梅.连作水花生化感作用研究[J].水花生科学，2002，21（3）：214-217.
[7]Han Chun-mei， Pan Kai-wen， Wu Ning et al. Allelopathic effect of ginger on seed germination and seedling growth of soybean and chive. Scientia Horticulturae，2008，（116）：330-336.
*作者简介：
李春龙（1976— ），男，内蒙古通辽人，硕士，讲师，农艺师，主要从事作物栽培、设施园艺、特种经济作物栽培等教学工作。
基金项目：
花生种子贮藏注意事项 篇4
二是要提高种子净度, 清除杂质及没有发育成熟的秕果、病果和破伤的荚果。
三是对贮藏场地要严格消毒灭菌、防潮, 保持库内通风干燥。
四是贮藏器具以编织袋、麻袋为好, 避免用不透气的塑料袋贮藏。塑料袋贮藏种子易造成空气不流通, 使种子进行无氧呼吸, 种胚中毒, 同时呼吸产生的水份和热量不易散发, 而使种子发热霉变。
五是花生种子不能与农药、化肥同仓存放。许多农药和化肥都有一定的挥发性、腐蚀性, 时间一长, 对种子的细胞和种胚具有损害作用。
大连地区花生种子携带真菌研究 篇5
粮食中真菌污染是一个全球性食品安全问题。据联合国粮食及农业组织 (FAO) 报道, 全球每年约有25%的粮农作物遭受霉菌及其毒素的污染, 约有2%的农作物因污染严重不能食用或失去经济价值。花生是世界上主要的油料作物, 也是大连地区主要的粮油作物和重要的出口农产品之一。据国外报道, 花生病害有50余种, 我国花生侵染性病害有38种, 其中真菌性病害17种, 这些病害借种子带菌传播是很重要的一个途径, 并且一些真菌种类产生的真菌毒素给人类生产和生活带来极大的损失及危害, 部分毒素已被证实具有致癌、致畸、致细胞突变的“三致作用”。目前已知的真菌毒素有200多种, 其中曲霉菌毒素 (黄曲霉毒素、棕曲霉毒素等) 、青霉菌毒素和镰刀菌毒素是粮食检测中常见毒素。在我国北方, 人们往往有直接生食花生的习惯, 随着花生贮藏时间的增加, 花生携带真菌数量也会大大增大, 花生贮藏过程中, 携带真菌种类、数量及产生毒素的几率就会加大。本研究旨在调查花生携带真菌种类及数量变化, 对花生贮藏及检测花生中潜在真菌毒素具有一定理论指导作用。
1 材料与方法
1.1 材料
供试50份花生样品均于2014年采自瓦房店、普兰店、庄河、旅顺口、金州5个花生主产区。试验采用的主要仪器有:生化培养箱、生物安全柜、9.0厘米和15.0厘米培养皿、试管。试验采用的药剂主要有:马铃薯葡萄糖琼脂培养基、玉米粉培养基、察氏培养基、乙醇。
1.2 方法
1.2.1 花生样品选取大连地区主要花生种植区瓦房店、普兰店、庄河、旅顺口、金州5个地区的5个农户作为采样点, 每个农户选择2块地, 每块地分别取5个点, 于收获期在每个点各采集0.50公斤新鲜带壳花生样品。并在每个农户中分别采集收获后储存2个月晒干的带壳花生样品, 花生去壳后装入无菌采样袋内并尽快送至实验室检验, 或置4℃冰箱保存待测。
1.2.2 种子表面带菌检验采用滤纸保湿培养检验法:用底部铺有3层滤纸, 直径为15厘米的灭菌培养皿作培养床。先用无菌水润湿滤纸, 将目测观察发育正常的花生种子10粒均匀排列在滤纸上, 每品种处理3皿, 置于25℃温箱中保持湿润状态培养。种子周围长出菌落后计数, 并移至马铃薯蔗糖琼脂培养基上进行纯化培养。待产生子实体后, 根据菌落培养特征和真菌形态特征进行真菌鉴定。
1.2.3 种子内部寄藏真菌的检验采用分离培养检验法:先将花生种子在70%酒精中浸2~3秒, 然后移入0.1%升汞液中杀菌2分钟, 再用无菌水冲洗3次。将经表面杀菌的花生种子置于盛有P SA的平板上, 每皿摆放5粒, 每一品种重复5次。于25℃温箱中培养, 2~3天后观察, 待种皮周围长出放射状菌落, 以菌落的形态、颜色等表观特征为标准分别记数特征相似的菌落。纯化培养, 观察真菌生长情况并拍照, 待长出子实体后进行真菌鉴定。并计算分离频率:分离频率 (%) =某一分离物的出现数/所有分离物总数×100%。
2 结果与分析
2.1 花生种子携带真菌种类鉴定
通过滤纸保湿培养检验法和分离培养检验法, 共获得160余个菌株。通过纯化培养和形态鉴定, 共鉴定出12属25种的真菌。其中, 接合菌2属4种, 子囊菌1属1种, 无性型真菌9属20种 (表1) 。
2.2 花生种表和种内携带真菌比较
由表2可知, 花生种表和种内携带真菌检出次数和不同种类真菌的分离频率均有一定的差异。其中, 种表分离真菌数量 (100种) 要高于种内分离数量 (69种) 。种表和种内分离真菌中曲霉菌 (Aspergillus) 分离频率均最高, 分别为42%和44.93%, 其中黑曲霉 (Aspergillusniger) 分离率均最高, 分别占11%和11.59%, 可产生黄曲霉毒素的黄曲霉 (Aspergillusflavus) 分离率分别为4.0%和4.35%;青霉属 (Penicillium) 分离率仅次于曲霉属, 分别占15.0%和13.04%。种内、种表均分离到可引起花生病害的致病菌腐皮镰孢菌 (Fusariumsolani) 和立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani) , 二者分别占种子带菌总分离率的10.8%和3.45%。
3 小结与讨论
通过对50份花生样品种子带菌鉴定, 发现种表、种内带菌有一定差异性, 且种表带菌数量明显高于种内带菌, 但带菌种类差异不大。试验中分离获得12属25种真菌中曲霉属、青霉属为优势种群, 其中黄曲霉是可产生黄曲霉毒素的重要真菌类群, 黄曲霉污染是目前制约花生生产、加工的重要问题, 该毒素达到一定剂量可致癌。王润初 (1985) 报道河南中牟等地的花生种子中分离获得11种真菌, 典型致病菌8种, 其中色二孢菌在种子检出比例中占46.2%, 黑曲霉占15.4%, 未见黄曲霉报道。杨兆森 (1995) 对陕西关中花生种子寄藏真菌种类报道了21种真菌, 其中交链抱菌 (Alternaria) 、黑曲霉 (Aspergillus ) 、镰孢菌 (Fusarium) 、根霉菌 (Rhizopus) 、叶点霉 (Phyllosticta) 及色二孢菌 (Diplodia) 为主要类群。本研究中花生种子携带真菌以腐生型真菌曲霉属、青霉属、木霉属、毛霉属为主, 可致病性病原真菌种类较少, 与之前的相关报道不同, 可能与花生种子品种、当地生态环境及农作物轮作情况有一定相关性。此外, 种内和种表携带真菌类群, 除了花生茎点霉 (种表) 和匍枝根霉 (种内) 分布差异外, 基本呈现整体相关性。
种子带菌是农业生产病害传播的重要途径, 也是部分可产生危害人类健康毒素的真菌重要载体。本研究通过对大连主要花生产区花生携带真菌种类调查, 旨在明确花生种子带菌情况和健康状况, 以期对生产上花生土传病害预测预报及花生中真菌毒素的检测提供理论指导。
摘要：花生种子携带真菌会在一定程度上影响种子萌发或降低幼苗活力, 导致花生品质下降或产量降低。本研究在来自瓦房店、普兰店、庄河、旅顺口、金州5个花生产区的花生种子上共检测出12属25种真菌, 其中曲霉属 (Aspergillus) 、青霉菌 (Penicillium) 、木霉属 (Trichoderma) 、毛霉属 (Mucor) 等为优势菌群, 并且种表、种内携带优势菌群相互影响, 呈现一致性。
花生种子 篇6
1 材料与方法
1.1 试验材料
鲁花14花生种子, 由山东省花生研究所提供。
1.2 试验方法
1.2.1 改进的CTAB法。
(1) 称取0.2 g新鲜组织或-70℃保存的样品, 在液氮中充分研磨成粉末状, 研磨中不断缓慢加入液氮, 防止材料解冻。 (2) 将研好的组织迅速转移至预热 (65℃) 的含有600μL CTAB提取液的EP管中, 立即剧烈涡旋振荡30 s, 使其混匀。 (3) 65℃水浴剧烈涡旋振荡3~5次, 振荡时间2~5 min。 (4) 稍微冷却后将等体积的氯仿∶异戊醇按24∶1的比例加入水浴中, 涡旋振荡1 min, 混匀, 4℃、12 000r/m离心15 min。 (5) 将上清液转移到另一新的EP管中, 加入2μL的DNaseⅠ, 37℃水浴15 min。 (6) 再加入等体积的氯仿∶异戊醇 (24∶1) 涡旋振荡1 min, 混匀, 4℃、12 000 r/m离心15 min。 (7) 将上清转移到另一新的EP管中, 加入1/3体积8mol/L Li Cl, 使其终浓度为2 mol/L, 4℃过液沉淀。 (8) 4℃、12 000 r/m离心20 min, 弃上清。 (9) 分别用70%乙醇、无水乙醇洗沉淀, 晾干, 加30~50μL DEPC-H2O溶解沉淀。
1.2.2 总RNA的提取。
在实验室改进的CTAB法的基础上作以下改良:一是将步骤 (4) 中等体积的氯仿∶异戊醇 (24∶1) 改为水饱和酚∶氯仿∶异戊醇 (25∶24∶1) 。二是在用DNase I消解DNA前再用等体积氯仿∶异戊醇 (24∶1) 抽提1次。三是在沉淀RNA时设计了4个处理, 处理A:加入1/3体积的8mol/L Li Cl, 使其终浓度为2 mol/L, 4℃过夜沉淀, 离心等操作同上。处理B:加入等体积的异丙醇, -20℃放置1 h以上, 离心等操作同上。处理C:加入1/10体积3 mol/L Na Ac (p H值5.2) 和2.5倍体积-20℃预冷的无水乙醇, -20℃放置2 h以上, 离心等操作同上。处理D:加入3/4体积6 mol/L Li Cl和等体积的异丙醇, -20℃放置1 h, 离心等操作同上。
1.2.3 总RNA的质量检测。
参照奥斯伯等[2]的方法, 用紫外分光光度计检测RNA质量。同时, 分别取1.5μL RNA产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。
2 结果与分析
2.1 不同沉淀方法获得的花生种子总RNA琼脂糖凝胶电泳结果比较
对不同沉淀方法得到的总RNA进行电泳比较[3,4,5]。由图1可以看出, 不同沉淀方法获得的总RNA, 28S r RNA和18S r RNA 2条带完整, 前者亮度约为后者的2倍, 说明提取的RNA降解少, 完整性好。4种方法的结果不同:处理A所得RNA无DNA污染, 亮度比其他3个处理所得RNA的条带亮度明显大, 说明提取所得的RNA产率高;而处理B、C、D沉淀的RNA有轻微的DNA污染, 需要进一步纯化。
注:1、2为Li Cl过夜沉淀 (处理A) ;3、4为异丙醇沉淀 (处理B) ;5、6为Na Ac和无水乙醇沉淀 (处理C) ;7、8为Li Cl和异丙醇沉淀 (处理D) 。
2.2 不同沉淀方法获得的花生种子总RNA紫外分光光度计测定结果
用紫外分光光度计对不同沉淀方法得到的总RNA测定结果如表1所示, 可以看出:处理A所得RNA, A260/A280在1.8~2.0之间, 说明没有蛋白质或酚类污染;A260/A230均在2.0以上, 样品受离子和小分子的干扰少, 多糖的去除较为干净, RNA浓度为535~565μg/m L, 得率最高。处理B、C所得RNA, A260/A280在2.0左右, 说明没有蛋白质或酚类污染;A260/A230大于2.4, RNA得率不高, 说明此沉淀方法所得的RNA中含有多糖等物质的共沉淀。处理D所得RNA的A260/A280在1.8~2.1之间, 但是A260/A230小于2.0, 表明样品受离子和小分子的干扰, 多糖去除不干净。紫外分光光度计测定结果与琼脂糖凝胶电泳结果基本一致。
3 结论与讨论
成功提取高质量花生种子RNA的关键在于去除蛋白、多糖、多酚等杂质[6]。该试验中, 先用水饱和酚∶氯仿∶异戊醇 (25∶24∶1) 再用氯仿∶异戊醇 (24∶1) 抽提溶液, 去除蛋白更彻底, 同时还对DNA进行了初步消除。在沉淀方法上, 用Li Cl、异丙醇、Na Ac和无水乙醇、Li Cl和异丙醇分别对RNA进行沉淀。结果显示, Li Cl处理的RNA纯度好, 没有DNA污染, 得率最高;异丙醇处理获得的沉淀体积大, 导致多糖和酚类物质的共沉淀作用;Na Ac和无水乙醇处理所得的RNA产率较低。Li Cl和异丙醇处理所得的RNA受离子和小分子的干扰, 多糖的去除不干净, 且和异丙醇、Na Ac和无水乙醇处理一样, RNA中存在DNA污染, 需要进一步进行纯化, 后续的纯化操作提高了RNA提取的成本且增加降解的几率。所以, 该研究认为采用Li Cl过夜沉淀的方法沉淀花生种子总RNA效果最好。
摘要：在CTAB法的基础上, 分别用LiCl、异丙醇、NaAc和无水乙醇、LiCl和异丙醇对花生种子总RNA进行沉淀。结果表明:LiCl过夜沉淀的花生种子总RNA纯度、完整性和产率均较高, 效果最好。
关键词：花生种子,总RNA提取,CTAB法,RNA沉淀
参考文献
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花生种子 篇7
1 材料与方法
1.1 试验概况
试验安排在惠安县东桥镇散湖村进行, 土质为壤土, 地力水平中等, 排水条件良好。供试的花生品种为当地主栽品种粤油116, 起垄栽培, 各处理的栽植密度及田间管理措施一致。供试的药剂为10%吡虫啉种子处理微囊悬浮剂 (商品名:祥泰拌丰) , 由山东德浩化学有限公司生产;10% 二嗪磷颗粒剂, 由江苏省南通江山农药化工股份有限公司生产;5%毒死蜱颗粒剂, 由江苏徐州生物化工有限公司生产。
1.2 试验设计
试验共设4 个处理, 分别为10%吡虫啉种子处理微囊悬浮剂2 kg/100 kg种子拌种 (A) ;10%二嗪磷颗粒剂12 kg/hm2穴施 (B) ;5%毒死蜱颗粒剂30 kg/hm2穴施 (C) ;以不施药作空白对照 (CK) 。3 次重复, 共12 个小区, 随机区组排列, 小区面积36 m2。
1.3 试验实施
试验于2012 年3 月16 日进行, 先起垄, 垄宽90 cm, 每垄种植2 行。拌种处理, 按前述剂量拌种晾干后播种;穴施处理, 在下种后覆土前按试验设计的剂量撒于拌种穴内, 随即覆土。
1.4 调查内容及方法
2012 年7 月24 日收获花生时, 每小区调查4 点, 每点取0.5 m2, 拔出花生供测产, 深挖土壤30 cm, 调查蛴螬活虫数, 计算防效。测产调查全部荚果受害率, 计算防效;并晒干称重, 计算产量及增产效果。
调查结果按下列公式计算:
2 结果与分析
由表1 可知, 试验地蛴螬大发生, 对照区花生受害十分严重, 荚果的受害率达92.8%;但处理A防虫效果达97.6%;受害率防治效果达98.6%, 在3 种药剂中防效最好;其次是处理B, 也有较好的效果, 防虫效果和受害率防治效果分别为86.9%和82.5%;处理C效果较差, 2 种防效分别只有42.9%和13.0%。由于虫害严重, 对照区的产量只有2 个较好防治区产量的1/5, 即处理A、B分别较CK产量增幅达407.8%和412.2%, 2 个处理增幅相仿;处理C尽管防虫效果较差, 但产量仍较CK增幅达102.8%。
3 结论与讨论
试验结果表明, 10%吡虫啉种子处理微囊悬浮剂持效期长, 防效优异, 播种时一次拌种施用, 即可控制花生田全生育期蛴螬的为害, 保产作用十分显著;尤其是与颗粒剂穴施比较[3], 拌种使用更省工, 操作简单, 施用方便;不仅防效更为特出, 而且毒性低, 使用也十分安全, 值得并建议在花生产区大面积推广[4,5,6,7]。
参考文献
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