外周T细胞淋巴瘤

外周T细胞淋巴瘤（精选十篇）

外周T细胞淋巴瘤 篇1

1 材料与方法

1.1 研究对象

60例恶性肿瘤患者均为来我院住院的病人, 经临床或病理确诊为老年恶性肿瘤患者, 均未接受过放化疗。其中男性34例, 女性26例, 年龄65~89岁, 平均年龄70.6岁;肿瘤组60例中肺癌28例, 消化道肿瘤21例, 乳腺癌11例。同时选取来本院体检中心做体检的60例健康老年人为正常对照组, 其中男性32例, 女性28例, 年龄65~82岁, 平均年龄66.5岁。

1.2 试剂与仪器

Simul TESTIMK-lymphocyte试剂盒购自美国BD公司, 检测仪器为美国BD公司的FACS-Calibur流式细胞仪。

1.3 标本采集与检测

所有研究对象抽取外周静脉血2 m L, 用PE荧光标记的单克隆抗体20μL, 加入EDTA抗凝血100μL发生抗原抗体反应, 溶血剂2 m L破坏红细胞, 磷酸盐缓冲液洗涤, 固定液固定后用流式细胞仪检测外周血白细胞分化抗原3 (cluster differentiation-3, CD3) 阳性T淋巴细胞、CD3和CD4双阳性的T淋巴细胞、CD3和CD8都是阳性的T淋巴细胞。

1.4 统计学处理

计量资料以±s表示, 采用SPSS17.0统计学软件, 用t检验进行统计学分析。

2 结果

肺癌患者总 (CD3) 阳性T细胞低于正常组 (P<0.05) , 消化道肿瘤以及乳腺癌患者总T细胞与正常组比较无明显变化。但CD4+细胞、CD4+/CD8+比值在肺癌、消化道肿瘤以及乳腺癌患者中均明显低于正常对照组 (P<0.05) , 仅肺癌患者Ts的CD8+细胞升高 (P<0.05) 。总CD3+T细胞、CD3和CD4双阳性T淋巴细胞、CD3和CD8双阳性T淋巴细胞, CD4+/CD8+比值在各肿瘤组之间比较无明显统计学意义 (P>0.05) , 见表1。

*与正常组比较, P<0.05

3 讨论

肿瘤是在各种内外致癌因素共同作用下, 机体自身细胞发生恶变转化而成。肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关, 尤其是T细胞介导的细胞免疫, 在肿瘤免疫中占重要地位[4]。随着对肿瘤免疫机制的了解和肿瘤免疫治疗的应用, 越来越多的细胞免疫检测指标被用来监测肿瘤的发生、发展和判断治疗效果及预后, 目前应用最多的是T细胞亚群的测定。

免疫老化是指机体自然衰老过程中出现的免疫系统增龄性老化改变。胸腺为中枢免疫器官, 是产生幼稚T淋巴细胞的主要场所, 对于机体的免疫功能起着决定性的作用。胸腺的慢性退化萎缩, 被认为是增龄所致的免疫功能衰退的重要原因。T淋巴细胞是获得性免疫的主要组成成分, 是机体介导细胞免疫的效应细胞, 能对抗外源性病原微生物及内源性衰老细胞的毒害作用, 维持机体内环境的稳态。T淋巴细胞在免疫老化的过程中, 受自身及外界环境的影响会发生表型、功能及信号转导通路的改变, 影响T淋巴细胞免疫效应功能的正常发挥, 是导致老年人机体免疫功能异常和易患感染、肿瘤、自身免疫性疾病的重要原因。

T淋巴细胞在免疫调节、免疫监视及杀伤靶细胞方面具有极其重要的作用。CD3+代表成熟T淋巴细胞, 即总T细胞。按其表面标志T细胞分为CD4+和CD8+两大亚群, 按功能不同分为辅助性T细胞 (help T cell, Th) 、细胞毒性T细胞 (cytotoxic T cell, CTL或Tc) 、抑制性T细胞 (suppressor T cell, Ts) 。CD4+T细胞主要是Th细胞, 少数为CTL, 其对抗体生成、巨噬细胞活化及CTL的活化有辅助、放大效应, 并通过它们发挥作用。CD8+T细胞主要是Tc细胞。Ts能通过抑制细胞免疫功能来调节机体的免疫应答, 正常状态下保持着一定的数量及活性水平, 当发生肿瘤后, 这类细胞数量显著增多, 抑制机体对肿瘤的免疫效应, 从而使肿瘤逃避机体的免疫监视, 促进肿瘤的生长。近几年来国内外多项研究表明, 癌症患者外周血T细胞亚群有着明显的变化, 表现为CD4+细胞减少, CD8+细胞 (Ts和Tc) 增多, CD4+/CD8+比值下降或倒置, 这种变化随着肿瘤的进展愈加明显。其中的机理是肿瘤通过表达、释放某种肿瘤抗原或其他可溶性免疫抑制因子, 抑制淋巴细胞分化增殖, 使得淋巴细胞表面CD4+抗原减少, CD8+细胞反应性增多, 而增多的CD8+细胞可能是以抑制性T细胞为主, 这反过来对CD4+细胞产生抑制作用, 使得CD4+/CD8+比值下降[5]。

本研究选择未经放、化疗的初诊肿瘤患者作为研究对象, 结果发现, 肺癌患者细胞免疫功能发生了不同程度的异常, 总T细胞、Th细胞、Th/Ts值均降低, Ts细胞增高, 提示恶性肿瘤患者存在明显的免疫抑制, 也说明肿瘤患者普遍存在免疫功能低下, 免疫细胞不能有效识别、排斥和杀灭肿瘤细胞, 与国内研究报道一致[6]。其机理可能为肿瘤通过表达、释放某种肿瘤抗原或其他可溶性物质, 诱导激活Ts细胞, 从而参与机体的免疫抑制。而乳腺癌以及消化道肿瘤仅Th细胞、Th/Ts降低, 总T细胞、Ts细胞差异不明显, 可能与所选患者群体不尽相同有关, 提示Th细胞、Th/Ts可能较总T细胞、Ts细胞反应更灵敏, 能更早地反映机体免疫状态。国内学者[7]研究发现肿瘤患者放、化疗或手术治疗3周后, 其外周血T、B、NK等淋巴细胞亚群的数量及比值会随病情的好转而逐渐转归, 完全缓解患者会逐渐升至正常水平, 说明恶性肿瘤患者, 外周血淋巴细胞亚群的细胞数及比值的变化, 对指导恶性肿瘤的治疗和疗效观察有一定临床意义。但对于老年肿瘤患者, 多数已经失去手术及放疗、化疗机会。有学者[8]报道早期 (I~Ⅱ期) 的肿瘤患者免疫功能异常并不明显, 其TT、Th、Ts、Th/Ts与正常组比较差异不明显, 而晚期 (Ⅲ~Ⅳ期) 肿瘤患者细胞免疫明显抑制, 提示随着疾病进展机体免疫功能逐渐降低。在病理学分期为Ⅱ期或Ⅲ期患者, 5年生存率分别为66.6%和18.2% (P<0.05) [8]。所以, 对于只能保守治疗的老年肿瘤患者, 免疫功能程度的检测对预后的价值意义更大。

本研究结果表明:恶性肿瘤患者主要存在细胞免疫功能的改变和紊乱, 主要表现在T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的降低;对淋巴细胞亚群的测定, 可判定机体免疫功能状况, 对肿瘤病人进行辅助诊断、预后及对疾病的预防等, 均具有重要的临床意义。目前研究表明, 由于淋巴细胞具有高度特异性的蛋白/受体蛋白的相互作用, 免疫疗法能够提供高度靶向治疗[10]。激活或改造的免疫细胞能移动到癌组织, 并在其中引发持久的抗肿瘤免疫反应。随着老龄化社会的到来, 我们期待着免疫疗法给广大肿瘤患者带来福音。

摘要：目的:了解老年恶性肿瘤患者的细胞免疫功能状况, 为肿瘤的治疗及预防提供参考。方法:用流式细胞仪分别对肺癌、消化道肿瘤、乳腺癌患者及健康对照组外周血总T细胞、Th、Ts、Th/Ts细胞进行检测, 用SPSS 17.0软件对各组细胞的Th数值及Th/Ts比值进行统计学分析。结果:Th细胞数及Th/Ts比值在肺癌、消化道肿瘤以及乳腺癌患者均明显低于正常对照组 (P<0.05) 。结论:老年恶性肿瘤患者的细胞免疫功能处于抑制状态。

关键词：老年恶性肿瘤,T细胞亚群,流式细胞仪

参考文献

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t淋巴母细胞淋巴瘤什么原因引起的 篇2

目前 T-LBL 仍缺乏标准的治疗方案，多数研究推荐使用急性淋巴细胞白血病(ALL)类似的化疗方案。

年 NCCN 治疗指南中推荐的治疗方案全部是治疗 ALL 的方案：BFM、CALGB、Hyper-CVAD，并认为无论是 Ⅰ 期还是 Ⅳ 期的 T-LBL 患者，均应以化疗为主。

而大剂量化疗第 1 次完全缓解后进行自体或者异基因造血干细胞移植(auto- or allo-HSCT)治疗尚存在争议。

1. 化疗方案

Jeong SH 等的研究显示 Hyper-CVAD 方案的完全缓解率可高达 73%。

美国安德森肿瘤中心推荐 Hyper-CVAD 联合奈拉滨方案作为 LBL 的一线治疗方案。

但 Kota V K 等的研究显示，Hyper CVAD/甲氨蝶呤-阿糖胞苷方案治疗，其总体预后不好，中位生存时间为 17.6 月，2 年生存率为 35%，且复发率高。Stock W 等的研究纳入了 321 例患者，其中 CALGB 治疗组 7 年总生存 46%。

2. 造血干细胞移植

外周T细胞淋巴瘤 篇3

健康志愿者20例，年龄50～68岁；HBV携带25例，年龄52～72岁；慢乙肝28例，年龄51～67岁。均符合2000年西安会议所修订的病毒性肝炎诊断标准，排除合并其他肝炎的存在。

主要试剂和仪器：流式细胞仪及试剂，全自动血液分析仪。

方法：清晨空腹静脉血，分别进行白细胞计数和分类及淋巴细胞亚群检测。样品测定管，EDTAK3抗凝，加入10μl TRITESTCD4FITC/CD8PE/CD3PerCP，再加入50μl抗凝血，振荡混匀，室温避光20分钟。加入1ml溶血素，振荡混匀，室温避光10分钟。1500r/分离心5分钟，弃上清液。加入1ml PBS，1500r/分心5分钟离钟，弃上清液，重复1次，加入450μl PBS，流式细胞仪分析。将白细胞计数和淋巴细胞百分比相乘，得出淋巴细胞计数。CD3+，CD4+，CD8+细胞计数为淋巴细胞计数与各自百分比的乘积。

统计学处理：SPSS11.5统计软件分析，T淋巴细胞百分率用(X±S)，组间均数比较用t检验。

结果

慢乙肝组CD4+/CD8+百分率比值比另两组降低(P＜0.05)；慢乙肝组CD8+百分率比另两组升高(P＜0.05)；而HBV携带组CD4+/CD8+百分率比值、CD8+百分率与对照组有差异，但无统计学意义(P＞0.05)。

各组间CD4+百分率，CD3+百分率无显著性差异(P＞0.05)。

讨论

乙肝病毒的活动受到机体免疫系统的控制，innate和adaptive以及病毒变异的过程是非常复杂的。免疫系统漠视病毒的存在，保持免疫耐受状态时是一个免疫平衡；免疫系统强大到控制病毒又是另一个平衡；而双方反复搏斗的过程就会造成肝脏损伤。

细胞免疫在HBV清除中起主导作用，执行者是T淋巴细胞，CD4+T细胞和CD8+T细胞是其主要亚群，CD4+T细胞水平和功能下降将导致细胞免疫低下。CD8+T细胞分为幼稚型和效应/记忆型，CTL是其效应阶段，是细胞免疫的主要效应细胞［2］，特别是在抗病毒及胞内感染的作用尤为明显。迄今的研究认为急性HBV感染时，CD8+T细胞在病毒的清除中起主要作用，这可能是HBV感染后免疫清除期的免疫病理机制。慢性HBV感染时，CTL数量不足及功能缺陷导致机体不能及时清除病毒，感染得以持续，以往一些研究也说明了这一点。

本实验室无法检测HBV特异CD8+CTL，通过检测CD8+T细胞发现，慢乙肝组CD4+/CD8+百分率比值比另两组降低(P＜0.05)；CD8+百分率比另两组升高(P＜0.05)；与文献报道是一致的，提示了老年慢乙肝患者体内存在CD8+T细胞功能障碍，根据特异性CD8+T细胞在HBV清除中的重要作用，不难判断老年慢乙肝患者存在特异性CD8+T细胞功能障碍；HBV携带组CD4+/CD8+百分率比值比对照组略低、CD8+百分率比对照组略高，但无统计学意义(P＞0.05)；各组间CD4+百分率，CD3+百分率无显著性差异(P＞0.05)。李梦东等曾报告［3］，CD4+百分率在各型肝炎均有下降，CD4+/CD8+百分率比明显下降，与本实验结果不一致。这可能与实验的方法、试剂及病例不同有关。本实验CD4+，CD3+百分率在3组间无显著性差异，说明老年HBV感染者的成熟T细胞总量无明显改变，与李玲报导慢乙肝患者外周血T淋巴细胞总数可无变化相一致［4］。

通过本实验可发现老年慢乙肝患者體内存在CD8+T细胞免疫功能障碍，尤其是特异性CD8+T细胞存在功能缺陷，这也可能是HBV感染慢性化的主要免疫病理机理，这为对乙肝患者进行特异性的免疫治疗提供了理论依据。如何使其获得具有正常功能的CD8+T细胞，是以后在乙肝治疗方面的研究方向。

参考文献

1 骆抗先.乙型肝炎基础与临床.北京:人民卫生出版社,2001.

2 龚非力.医学免疫学.北京:科学出版社,2004:151-152.

3 李梦东.实用传染病学.北京:人民卫生出版社,1998.

4 李玲,顾长海.慢性乙型肝炎PBMC凋亡及淋巴细胞亚群的检测.中国免疫学杂志,2001,11.

外周T细胞淋巴瘤 篇4

1 对象和方法

1.1 对象

接触组:某研究所雷达设计人员38名,其中,男性27人,女性11人;年龄范围为27～59岁,均值为(34.1±8.41)岁;接触工龄范围为2～41 a,均值为(9.92±8.61)a,接触时间≤10 a的有28人,>10 a的有10人。对照组;某设计部无职业微波接触史的机关工作人员39名,其中,男性31人,女性8人;年龄范围为26～51岁,均值为(33.6±4.91)岁;工龄范围为2～28 a,均值为(8.62±5.85)a,工龄≤10 a的有25人,>10 a的有14人。2组人员性别、年龄、工龄构成无差异,手机使用情况一致,近期均无X线照射、病毒感染及用药史。

1.2 微波辐射强度测定

①检测仪器为EMR射频电磁辐射分析仪,已校正(北京市计量检测科学研究院),德国Narda公司生产。依据《作业场所微波辐射卫生标准》[1],测定作业人员仪器调试时操作位的辐射强度,包括头部、胸部及腹部。②收集该研究所雷达设计人员作业场所以往的微波辐射强度测定资料(采用经北京市计量检测科学研究院计量校正的江苏宿迁无线电厂生产的微波漏能仪对作业现场进行微波辐射强度测定)。

1.3 方法

1.3.1 仪器和试剂

1.3.1.1 仪器

XE-2100型全自动血细胞分析仪,日本东亚希森美康公司生产;FACS Caiibur流式细胞仪,美国Becton Dickinson Co.生产;KS 5000P型离心机,日本Kubota Co.公司生产。

1.3.1.2 试剂

红细胞裂解液、不同荧光素标记的抗大鼠抗体CD3+-FITC、CD4+-APC、CD8+-PE均为美国Becton Dickinson CO.公司生产。

1.3.2 样品制备与指标测定

1.3.2.1 外周血白细胞计数和淋巴细胞百分率的检测

①无菌抽取受检者肘静脉血2.5 ml,置于含枸橼酸抗凝的试管中;②取0.5 ml抗凝血,在XE-2100全自动血细胞分析仪上进行测定。

1.3.2.2 T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值的检测:

①取100 μl抗凝外周全血,加入10 μl荧光标记的CD3+-PerCp、CD4+-FITC、CD8+-PE抗体,室温避光孵育20 mim;②加入450 μl红细胞裂解液,室温避光孵育10 min;③1 200 r/min 离心5 min(离心半径=8 cm);④弃上清,用4 ℃预冷的PBS洗涤2次;⑤加入2 ml PBS,混匀,1 200 r/min 离心5 min,弃上清;⑥加入300 μl预冷的PBS(4 ℃),在流式细胞仪上进行检测。

1.4 统计方法

用SPSS 16.0软件进行统计分析,用t检验对样本均数的差别进行显著性检验。

2 结果

2.1 微波辐射强度测定结果

2002—2009年及以往该研究所雷达设计人员作业场所仪器调试及操作位微波辐射强度监测资料,见表1。

作业人员日接触2～8 h,平均工作时间4 h。工作现场备有微波防护服、防护帽及防护眼镜,但使用情况不一。接触强度随科研内容而变化,偶尔存在超标现象(国家卫生标准脉冲波平均功率密度为25 μW/cm2,日接触剂量不超过200 μW/cm2)。

2.2 白细胞、淋巴细胞及T淋巴细胞亚群检测结果

由表2可见,与对照组相比,接触组白细胞计数和淋巴细胞百分比均有所降低,但降低差异不显著;与对照组相比,接触组CD3+、CD4+、CD8+百分含量均升高,差异有统计学意义(P<0.01);CD4+/CD8+比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 2组工龄间T淋巴细胞亚群比较

由表3可见,与对照组相比,接触组工龄≤10 a组T淋巴细胞亚群的差异无统计学意义;>10 a组CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值均升高,且CD3+升高与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。接触组和对照组组内工龄≤10 a和>10 a间T淋巴细胞亚群的差异不显著。

注:与对照组比较,aP<0.05,bP<0.01。

注:与对照组比较,aP<0.05。

3 讨论

微波通过热效应和非热效应对机体产生各种生物学影响,尤其是非热效应影响和机制的研究已成为当前微波研究领域中的前沿课题。免疫系统又是微波辐射敏感靶系统之一,成为研究微波辐射损伤效应的重要内容[2,3,4]。外周血T淋巴细胞亚群的检测是观察机体细胞免疫水平的重要方法。CD4+为辅助性T细胞,对于机体的特异性和非特异性免疫以及对细胞和体液免疫均有重要的调节作用;CD8+为抑制性或杀伤性T淋巴细胞;CD4+/CD8+比值是反映机体免疫状态的重要指标。

微波对职业人群免疫功能影响的报道不多,且研究结果不尽相同,可能与各实验室所使用的微波性质、频率、辐射功率密度及时间等不同有关。Moszczynski等[5]调查微波辐射对职业暴露工作人员功能的影响,结果发现,电视转播和卫星通讯中心人员血清IgG和IgA水平增加,淋巴细胞和T淋巴细胞亚群CD8+减少。雷达操作人员血清中IgM水平升高,CD8+减少。Dmoch等[6]还发现Th和Ts比值下降以及NK细胞数量减少。但是以上效应均未引起相应的临床症状。Tuschl等[7]在从事微波治疗的医生中,未发现其淋巴细胞亚群与正常对照组有差异。

本实验结果表明:①与对照组相比,微波接触组外周血白细胞计数及淋巴细胞百分比均有所降低,但差异不显著;②CD3+、CD4+,CD8+升高,差异显著。由于接触组CD8+升高的幅度较大,导致CD4+/CD8+比值降低,差异显著;③长期低剂量、高功率微波辐射能明显影响人体的免疫功能,但与暴露者的工龄长短未显示明显的正相关趋势,说明微波辐射对人体免疫功能的影响未表现出累积效应;④从接触组以往作业现场调查的资料看出,作业者经常处在微波辐射强度超标的环境中,可能导致接触组工龄>10 a组CD3+较对照组升高显著;⑤2002—2009年间,由于该研究所对仪器设备加强了屏蔽防护,致使现场微波辐射强度降低至国家卫生标准范围之内,故2组工龄≤10 a组T淋巴细胞亚群差异无统计学意义。

通过对某研究所雷达科研人员(接触组)和非微波作业人员(对照组)进行调查,结果提示,长期低剂量、高功率微波辐射对职业人群的免疫功能是有影响的,客观有效的职业防护应当引起关注。然而,接触组T淋巴细胞亚群升高的原因,以及引起外周血T细胞亚群分布和比值改变的机制还有待本实验室进一步研究。

参考文献

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外周T细胞淋巴瘤 篇5

焦炉工GSTM1、GSTT1基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨GSTM1和GSTT1基因多态性与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系.[方法]选择某焦化厂248名焦炉作业工人,其中炉顶区作业工人99人,炉侧作业78人,炉底作业71人.120名与之相匹配的对照人群选自该厂非职业多环芳烃(PAHs)暴露者.采用单细胞凝胶电泳实验观察外周血淋巴细胞DNA损伤;运用多重PCR方法检测GSTM1、GSTT1基因多态性.同时,通过问卷调查的方式了解被调查者的`年龄、吸烟、饮酒和个人职业暴露史.[结果]炉顶和炉侧区作业工人外周血淋巴细胞的Olive尾矩(Olive Tail Moment,OTM)经对数转换后分别为1.37±1.16和1.46±0.97,均明显高于炉底区和对照组(OTM分别为0.98±1.18、0.56±0.99),差异显著(P＜0.05).经调整年龄、吸烟、暴露等级等因素后,焦炉作业组中GSTM1(-)基因型和GSTM1(+)基因型的外周血淋巴细胞DNA损伤分别为1.36±1.15和1.15±1.10,差异无显著性(P＞0.05).其中炉顶区作业工人GSTM1(-)基因型OTM明显高于GSTM1(+)基因型(分别为1.56±1.08、1.09±1.25,P＜0.05).此外,在焦炉作业组中,GSTM1(-)GSTT1(+)基因型OTM为1.44±1.13,明显高于GSTM1(+)GSTT1(+)基因型0.94±1.06,差异具有显著性(P＜0.05);GSTM1(+)GSTT1(-)和GSTM1(-)GSTT1(-)基因型OTM分别为1.36±1.10、1.28±1.17,两者差异无显著性.[结论]在炉顶作业工人中,GSTM1基因型可以明显影响外周血淋巴细胞DNA损伤程度.GSTM1和GSTT1基因存在交互作用,同时携带GSTM1(+)和GSTT1(+)基因型的焦炉作业工人淋巴细胞DNA损伤水平较低.

作 者：白云 商慧珍 柴栋梁 李雅彬 杨晓波 王红 谭皓 邬堂春 BAI Yun SHANG Hui-zhen CHAI Dong-liang LI Ya-bin YANG Xiao-bo WANG Hong TAN Hao WU Tang-chun  作者单位：白云,杨晓波,王红,谭皓,邬堂春,BAI Yun,YANG Xiao-bo,WANG Hong,TAN Hao,WU Tang-chun(华中科技大学,同济医学院,公共卫生学院,教育部环境与健康国家重点实验室,武汉,430030)

商慧珍,柴栋梁,李雅彬,SHANG Hui-zhen,CHAI Dong-liang,LI Ya-bin(太原钢铁(集团)有限公司疾病,控制中心,太原,030027)

刊 名：环境与职业医学  ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ENVIRONMENTAL AND OCCUPATIONAL MEDICINE 年，卷(期)：2006 23(6) 分类号：Q786 关键词：焦炉工   GSTM1   GSTT1   基因多态性   DNA损伤  

黄鳝T淋巴细胞数量的检测比较试验 篇6

早期玫瑰花环形成的T淋巴细胞是对SRBC具有高度亲和力的T细胞亚群，它与T细胞的体内外功能活性密切相关，能更敏感地反映机体细胞免疫的水平和动态变化，是目前检测细胞免疫水平最为简便快速的方法之一。在总玫瑰花环试验中，静止期和活动期的T淋巴细胞，均能与不同数量的SRBC自发形成E花环，所得E花环的百分率和绝对数可代表被检标本中全部T淋巴细胞的百分率和总数。是目前鉴定和计算外周血液和各种淋巴样组织中T淋巴细胞的最常用方法之一。通过对黄鳝T淋巴细胞的测定，可以了解不同发育阶段黄鳝的免疫活性，运用到实践上，可以对不同阶段的黄鳝的免疫力的强弱进行针对性的照料，当其免疫力弱时，可以加强防病治病的力度，从而达到科技运用到实践中的目的。

材料与方法

·实验材料

1、实验动物

白兔:购于荆州沙市区钟鼓楼菜市场，体重1.32kg，试验前常温饲养10天。

不同规格的黄鳝15条，购于荆州花鸟鱼市场，试验前22℃饲养7天，数据如表1所示。

2、实验器材

离心机；移液枪；枪头；水浴锅；EP管；注射器；显微镜；计数板；载玻片；盖玻片；高温灭菌锅；冰箱；制冰机等。

3、实验试剂

瑞氏粉；甲醇；甘油；姬姆萨氏粉；戊二醛；碳酸氢钠；磷酸氢二钠；磷酸二氢钠；小牛血清；柠檬酸钠；柠檬酸；氯化钠；percoll分层液；蒸馏水；氯化钾；氢氧化钠等。

· 实验方法

1、黄鳝血液的制备

（1）取出黄鳝，用剪刀剪断其脊椎，使其瘫痪，失去抵抗。

（2）用剪刀对准肛门下方少许处斜向剪断尾部，将断口对准事先准备好的装有阿式液的EP管，血液自然流进EP管。

（3）当血液量少的时候可以适当轻挤黄鳝躯体，使血液能更多的被采集。

（4）将收集好的血液存放在碎冰上备用。

2、黄鳝淋巴细胞的分离

（1）将1份10€譖BS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100 % Percoll悬液，其密度为1.1294 g/ml。

（2）用PBS稀释100% Percoll而获得所需密度的Percoll分离液。

（3）用稀释液稀释60 %则此时的Percoll分离液比重为1.0777g/ml，即可用于淋巴细胞的分离。

（4）取5ml的Percoll分离液于10ml的EP管中，将等倍稀释的黄鳝血液0.5ml小心叠加在分离液上。

（5）将EP管放在离心机上进行离心（1500rpm/min，10min）

（6）离心之后将EP管取出，可以看到EP管中有四个细胞层，从上到下第二层为淋巴细胞。

（7）用10um的移液枪小心的将这层细胞吸出，即为比较纯的淋巴细胞，将其收集好放在碎冰上备用。

3、兔红细胞的采集

（1）取5ml的注射器，用阿式液润洗。

（2）将白兔取出，按住其四肢和耳朵，让其面朝上躺着不能动弹。

（3）将注射器插入其心脏，缓缓抽出2ml血液，将血液迅速移入装有阿式液的EP管中，上下轻轻转动，让血液充分和阿式液混合。

（4）将制备好的兔血液放在碎冰上备用。

4、兔红细胞和黄鳝淋巴细胞的计数

（1）将采集好的兔红细胞稀释100倍，充分混匀。

（2）用移液枪吸取少量混液，小心的加在计数板上。

（3）将计数板放在显微镜下进行计数，计算出原兔红细胞的密度，配制出所需浓度的兔红细胞悬液

（4）用同样的方法配制出黄鳝淋巴细胞悬液。

5、玫瑰花环的形成

（1）取0.3ml小牛血清于1ml的EP管中，再加入0.3ml兔红细胞和0.1ml黄鳝淋巴细胞，混匀。

（2）将EP管放在37℃水浴锅中反应25min。

（3）将EP管取出，放在离心机里离心（500 rpm/min，5min）。

6、玫瑰花环的制片、染色及镜检；

（1）将1滴反应好的培养物滴在玻璃片上，用枪头将其均与的涂抹在一定范围之内。

（2）将玻璃片放在一边让其自然干燥，干燥后滴加1滴甲醛在上面，5min后用6.4的PBS液冲洗。

（3）等其自然干燥后再滴加瑞式液，4min后再用6.4的PBS液冲洗。

（4）等其自然干燥后再滴加吉姆萨式液，4min后用6.4PBS液冲洗，干燥。

（5）每份培养液制备3份玻璃片。

（6）将制备好的玻璃片放在显微镜下进行观察，凡吸附3个或更多家兔红细胞的单核细胞，为RE花环形成细胞，共计数100个细胞，计算出百分率

不同规格黄鳝T淋巴细胞数量的比较（如表2所示）

通过上面表格可以看到，随着黄鳝规格的变大，其E玫瑰花环形成率逐渐增高，这也就是说，随着黄鳝的长大，其免疫力会逐步增强，而小黄鳝的免疫力最弱，在生活当中，应该更加注重黄鳝幼体的防病抗病工作。

外周T细胞淋巴瘤 篇7

1 临床资料

1.1 一般资料

选择回顾性调查2007年1月至2008年12月由杨浦区中心医院肿瘤科出院的晚期肺癌78例,所有患者均经肺部CT和(或)病理证实,按1997年国际抗癌联盟(UICC)TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期;分为合并肺部感染组37例,男性30例,女性7例,年龄47～88岁,中位79岁,其中死亡出院患者15例,均有典型呼吸道症状,X线胸片示伴有感染病灶;无合并肺部感染组41例,男性31例,女性10例,年龄49～86岁,中位73岁,其中死亡出院患者9例。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂

贝克曼库尔特公司提供的单抗组盒:T淋巴细胞采用CD4-FITC/CD8-PE/CD3-CY5,自然杀伤细胞采用CD3-FITC/CD16+CD56-PE。

1.2.2 仪器

美国Coulter公司流式细胞仪,EPICS XL型。

1.3 观察指标

晚期肺癌入院检验外周血T细胞亚群及自然杀伤细胞亚群。

1.4 统计学

数据以表示,采用t检验,P<0.05为显著性差异界限。

2 结果

2.1 晚期肺癌中合并肺部感染组与无肺部感染组外周血T细胞亚群及自然杀伤细胞亚群测定比较

与无肺部感染组比较,合并肺部感染组CD4+下降(P<0.05),而CD3+下降,CD8+升高,CD4+/CD8+比值下降,自然杀伤细胞升高无明显差异(P>0.05),见表1。

2.2 晚期肺癌中死亡患者与存活患者外周血T细胞亚群及自然杀伤细胞亚群测定比较

注:*P<0.05,**P<0.01

注:*P<0.05,**P<0.01

注:*P<0.05,**P<0.01

与存活患者比较,死亡患者CD8+显著升高(P<0.01),CD4+/CD8+比值显著下降(P<0.01),而CD3+升高,CD4+下降,自然杀伤细胞升高无明显差异(P>0.05),见表2。

2.3 存活肺癌患者中合并肺部感染组与无合并肺部感染组外周血T细胞亚群及自然杀伤细胞亚群测定比较

与无合并肺部感染组比较,合并肺部感染组CD4+显著下降(P<0.05),CD3+下降,CD8+升高,CD4+/CD8+比值下降,自然杀伤细胞升高无明显差异(P>0.05),见表3。

3 讨论

肺癌是严重威胁人类生命健康的常见恶性肿瘤,它的发生、发展与机体的免疫功能状态有关[1]。肺癌合并肺部感染是肺癌晚期最常见的并发症之一,是增加患者疼痛、恶化病情导致恶液状态加重的主要原因之一[2]。Watanabe[3]指出,住院肺癌患者继发感染者占51.4%。

机体在抗肿瘤的免疫反应中,细胞免疫反应与体液免疫反应共同参与,以细胞免疫为主,T淋巴细胞是抗肿瘤免疫的最重要细胞,其水平变化可以反映机体免疫功能的状况[4,5]。在免疫学上,CD3+代表了总T细胞水平,反映机体总的细胞免疫状态。它按CD表型分为CD4+和CD8+两大亚群。CD4+又称T辅助或诱导细胞,其主要功能是通过分泌淋巴因子,增加和扩大免疫应答过程,辅助诱导其他免疫细胞共同发挥抗肿瘤作用。CD3+、CD4+T淋巴细胞减少必导致免疫功能低下[6]。CD8+又称为T抑制细胞或细胞毒T细胞,其通过自身及抑制因子在免疫反应中起负向作用,抑制CD4+细胞和B细胞功能,从而抑制抗体形成及细胞免疫反应。CD8+细胞增多有利于肿瘤持续增长,而在肿瘤发展过程中又可诱导和激发CD8+细胞,从而促进肿瘤增殖[7]。自然杀伤细胞表型为CD16+或CD56+,是一组无需抗原致敏,也不受MHC限制的免疫细胞,可直接发挥抗肿瘤效应,并发挥免疫监视作用,通过分泌细胞因子来调节免疫应答,是机体免疫防御体系的第一道防线[8]。自然杀伤细胞数量的减少导致机体的免疫功能下降。CD4+/CD8+比值保持动态平衡,以维持机体细胞免疫功能的稳定,比值降低说明机体T细胞亚群失衡,提示机体免疫功能低下。因此,患者外周血T细胞亚群及自然杀伤细胞的变化是机体抗肿瘤免疫能力的一个侧面反映。

有关肺癌发病机制的研究表明,肺癌的发生、发展与患者自身免疫功能缺陷或降低有密切关系,多项研究显示肺癌患者CD3+细胞数,CD4+细胞数及CD4+/CD8+比值明显低于正常对照组,CD8+细胞数明显高于正常对照组,提示肺癌患者免疫功能低下[9,10,11]。

本研究结果显示,所有晚期肺癌中合并肺部感染组CD4+T淋巴细胞降低,说明辅助调节细胞(CD4+)呈抑制状态,提示晚期肺癌患者合并肺部感染后细胞免疫功能较未合并感染者更加低下。临终肺癌患者CD8+(抑制/杀伤性T淋巴细胞亚群)增高、CD4+/CD8+比值降低更明显(P<0.01),说明细胞毒细胞呈过度增殖,显示随着病情进展,肿瘤负荷增多,细胞免疫功能较存活的患者更为低下。另外,CD4+出现降低趋势,虽未达到显著性程度,仍提示晚期肺癌患者病情恶化后,机体的细胞免疫功能渐趋下降。晚期肺癌合并肺部感染的死亡病例(15/37)较无感染的(9/41)多,同时存活晚期肺癌患者合并感染后CD4+T淋巴细胞降低,说明辅助调节细胞(CD4+)呈抑制状态,表明无论病情进展与否,晚期肺癌患者合并肺部感染后的免疫功能较未感染者更为低下。

外周T细胞淋巴瘤 篇8

关键词：卵巢癌,T淋巴细胞亚群,流式细胞术

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤, 在女性生殖系统恶性肿瘤病死率占第一位[1]。严重威胁着女性的生命健康。有研究表明T淋巴细胞作为一种胸腺依赖性淋巴细胞, 在抗肿瘤免疫效应中发挥重要的作用。本研究就卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群的变化进行分析, 报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2011年8月~2012年12月在我院妇产科接受初次手术治疗, 并经组织病理学确诊为卵巢癌的患者89例, 年龄24~78 (53.46±15.04) 岁。将89例卵巢癌患者按照国际妇产科联盟 (FIGO) 分类进行临床分期, 其中I期16例;II期19例;Ⅲ期20例;Ⅳ期32例。各组患者年龄差异无统计学意义 (P>0.05) 。以上所有患者确诊前均未进行过手术及放化疗, 无免疫系统疾病, 也未服用过任何免疫抑制剂。从同期在我院进行健康体检的健康女性人群中选取25例, 年龄53.32±13.84岁, 作为正常对照组。

1.2 仪器与试剂

流式细胞仪器型号为FACSCalibur;试剂为CD4 FITC/CD8 PE/CD3 Per CP三色鼠抗人单克隆荧光抗体。仪器和试剂均购自美国BD公司。

1.3 方法

(1) 取研究对象100μl EDTA￣K2抗凝全血置于专用流式试管; (2) 加20μl单克隆抗体, 充分混匀后室温避光反应15min; (3) 加500μl溶血素混匀, 室温避光静置15min, (4) 混匀上机检测。

1.4 统计学分析

数据采用SPSS 15.0分析, 计量资料采用t检验, 计数资料采用χ2检验。P<0.05差异具有统计学意义。

2 结果

卵巢癌患者及对照组外周血T淋巴细胞亚群检测结果比较见附表。

3 讨论

与对照组比较, #:P<0.05;与Ⅰ期组比较, *:P<0.05;与Ⅱ期组比较, △:P>0.05;与Ⅲ期组比较★:P<0.05

卵巢癌起病隐匿、缺乏特异性症状, 确诊时常为晚期。相关资料显示卵巢癌平均5年生存率仅为37%[2]。现代研究证实, 肿瘤的发生发展与肿瘤宿主的免疫状态密切相关, T淋巴细胞亚群在肿瘤免疫监视中起中心调控作用, 是机体抗肿瘤免疫的重要效应细胞。对肿瘤的发生、发展、疗效和预后有直接的影响。

根据T细胞表面分化抗原将成熟的T细胞分为CD4+和CD8+。CD4+为辅助性T细胞, 具有协助体液免疫及细胞免疫的功能, 在抗肿瘤中起积极的作用。CD8+为抑制/杀伤T细胞, 具有免疫调节效应, 并能抑制B细胞产生抗体;CD4+/CD+8比值的恒定维持着细胞免疫反应的平衡。在既往的研究中, CD4+T和CD8+T及CD4+/CD8+比值可以作为人体免疫状态重要的监测指标[3]。本研究显示, 卵巢癌患者体内CD3+、CD4+细胞与对照组及良性肿瘤患者比较显著降低, 而CD8+细胞显著增加, 说明卵巢癌患者存在着不同程度的T淋巴细胞免疫功能的紊乱, 其免疫功能较正常人显著低。其机制可能是肿瘤在发生、发展过程中分泌大量的免疫抑制因子 (TDSF) [4]。这与黄羽等[5]报道不一致, 可能是所选研究对象不同及实验方法不同所致。随着卵巢癌患者病情的发展, 由Ⅰ期至Ⅳ期患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+逐渐减少而CD8+逐渐升高, 说明患者免疫状态与临床分期有直接关系, 随着肿瘤的临床分期的增加外周血T淋巴细胞亚群受到抑制的程度逐渐增强导致细胞免疫功能逐渐下降, 免疫功能的削弱可能是肿瘤进展的结果。研究结果还表明年龄对患者外周血T淋巴细胞亚群的影响无显著性。这与有关研究一致[6]。

综上所述, 卵巢癌患者的兔疫功能越低下, 且临床分期与他们的兔疫状态呈现出明显的负相关, 病期越晚, 免疫状态越差。因此, 通过监测卵巢癌患者外周血中细胞免疫功能状况, 可以了解卵巢癌其免疫功能, 为临床上估计其预后提供参考, 也为免疫制剂的抗肿瘤治疗提供理论依据。

参考文献

[1]李阳敏.卵巢癌早期诊断与治疗新进展[J].西南军医, 2008, 10 (5) :106-108.

[2]SANT M, AARELEID T, BERRINO F, et al.EUROCARE-3:survival of cancer patients diagnosed 1990-94-results and commentary[J].Ann Oncol, 2003, 14 (5) :61.

[3]Li Y, Geng S, Yin Q, et al.Decreased level of recent thymic emigrants in CD4+and CD8+T cells from CML patients[J].J Transl Med, 2010, 8 (3) :47.

[4]Kawamoto K, Nakamura S, 1washita A, et a1.Clinicopathological characteristics of primary gastric T-cell lymphoma[J].Histopathology, 2009, 55 (6) :641-653.

[5]黄羽, 曾星, 李莎莎, 等.49例肿瘤患者外周血树突状细胞亚群与细胞免疫功能的研究[J].国际检验医学杂志, 2011, 32 (7) :1053-1054.

外周T细胞淋巴瘤 篇9

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2009年9月至2011年9月我院收治的宫颈癌患者34例,所有患者均经病理确诊,肿瘤分期按照FIGO的临床分期,其中I期12例,II期14例,III-IV期8例,年龄20~64岁,平均(40.47±9.49)岁。所有病例均未经放疗或化疗,均未手术治疗,均无免疫系统疾病或使用过免疫系统抑制剂。对照组20例均为健康女性,年龄25~62岁,平均(45.36±8.34)岁。

1.2 试剂和仪器

单克隆抗体抗CD4PE、抗CD8PE及IFN-γ、IL-6PE,均由美国BD公司生产,Cyodetect TM试剂盒(荷兰Immimo Qual Products公司),RPMI 1640培养液(美国Gibco公司),胎牛血清(杭州四季青公司),OPTI-MEM培养液(美国Gibco公司),CO2细胞培养箱(德国Herus公司),Epics XL型流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司),VEGF-ELISA试剂盒(深圳晶美公司),酶标仪(英国Labsystems Multiskan MCC/344)

1.3 实验方法

1.3.1 外周血T淋巴细胞亚群监测

所有患者均晨起空腹抽取静脉血,肝素抗凝,采用Cyodetect TM试剂盒提供方法。分离外周血淋巴细胞,采用Ficoll密度梯度离心法常规分离外周血淋巴细胞,所分离的淋巴细胞用RPMI 1640培养液稀释1×106个/m L,加入刺激物刺激细胞,多聚甲醛固定细胞,置入37℃、5%CO2细胞培养箱内培养6h。收获细胞后,固定处理细胞,多色荧光素染色,标记细胞表面抗原和细胞内因子,进行流式细胞仪分析。

1.3.2 血VEGF监测

采用ELISA方法,加入100μL的血清标本(已通过离心处理)于100μL缓冲液中稀释,连续加入96孔微量反应板(予包被抗VEGF单抗)中,室温下静置2h,去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3min,然后加入200μL抗VEGF单抗,在室温下静置2h,去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3min,再收工洗涤拍板2次。加入显色剂30min后观察显色效果。显色满意后在酶标仪(主波长450nm,辅助波长630nm)读取光密度值,绘制标准曲线,求得VEGF的相对含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS16.0统计软件进行分析,计量资料以均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,P<0.05差异有显著性。

2 结果

2.1 宫颈癌患者T淋巴细胞亚群与正常对照组比较:宫颈癌II期、III-IV期患者CD4+细胞、CD4+/CD8+比值均显著降低,CD8+细胞增高(P<0.05)。肿瘤期别越晚,CD4+细胞、CD4+/CD8+比值下降越显著(P<0.05)(表1)。

2.2 与正常对照组相比,IL-6水平显著升高(P<0.05),IFN-γ水平则无明显差异性(P>0.05)。肿瘤期别越晚,IL-6水平升高越明显(P<0.05),IFN-γ水平则无明显变化(表2)。

2.3 临床分期中各组的VEGF水平显著高于对照组(P<0.05),肿瘤期别越晚,VEGF水平升高越显著(P<0.05)(表3)。

(%,均数±标准差)

注:*P<0.05(与正常对照组比较),ΔP<0.05(与宫颈癌I期比较)

(%,均数±标准差)

注:*P<0.05(与正常对照组比较),ΔP<0.05(宫颈癌I期比较)

注:*P<0.05(与正常对照组比较),ΔP<0.05(宫颈癌I期比较)

3 讨论

宫颈癌是全球女性中发病率仅次于乳腺癌的第二个最常见的恶性肿瘤,其发病率呈升高和低龄化的趋势[4]。宫颈鳞癌是由人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)诱发的女性生殖道恶性肿瘤,其免疫原性最强,肿瘤免疫也应该最活跃[5]。当宿主的免疫功能低下或缺陷时,肿瘤发生率增高,而在肿瘤进展时,肿瘤患者的细胞免疫功能受到抑制,两者互为因果,双方各因素的相互作用对肿瘤的发展起着重要的作用。

T细胞依据其细胞表面分子标志物的不同分为不同的亚群,在抗肿瘤免疫中分别起到不同的作用,如CD4+T细胞、CD8+T细胞,在抗肿瘤免疫中既可起到抗肿瘤的作用,又可起到抑制抗肿瘤的作用。外周血T淋巴细胞在亚群数量上的协调比例,特别是CD4+/CD8+的比值是反映细胞免疫平衡的敏感指标,有助于反应机体免疫的调节能力。在正常情况下,CD4+/CD8+比值维持动态平衡,以保持机体免疫功能稳定[6]。本研究显示宫颈癌患者的CD4+细胞、CD4+/CD8+明显低于对照组,进一步说明宫颈癌患者在未行任何治疗时的免疫功能低下。本研究还提示随着肿瘤期别的增高,CD4+细胞、CD4+/CD8+逐渐减少,而CD8+逐渐增高,说明细胞免疫功能越差,越易发生淋巴结转移及远处转移,预后越差[7]。

CD4+T细胞为辅助性T细胞,在机体的免疫调节中起着重要作用,在不同的抗原刺激下CD4+Th0进一步向Th1或Th2分化,在正常生理情况下Th1、Th2两类细胞处于相互抑制,相互转化的平衡状态,一旦平衡被打破,机体会处于Th1优势或Th2优势的漂移状态,从而出现各种病理反应,甚至发生肿瘤[8]。INF-γ是Th1分泌的主要细胞因子,且可诱导前体T细胞向Th1分泌,而INF-γ是抗肿瘤免疫中较早出现的细胞因子,具有较强的抗肿瘤和免疫调节功能[9]。IL-6由Th2分泌产生,可介导血管形成。本研究中INF-γ与对照组比较无明显差异性,且在各级肿瘤中也无明显差异性,IL-6与对照组比较显著升高(P<0.05),随着肿瘤期别越晚,IL-6升高越明显,说明宫颈癌患者的免疫状态是以Th2型体液免疫增强为主的模式,表明肿瘤患者机体抗肿瘤细胞免疫功能下降,体内出现Th1向Th2漂移,导致患者细胞免疫缺陷,对肿瘤的免疫监视作用降低,提示发生肿瘤免疫监视逃逸的可能性大,从而导致肿瘤的发生或复发[10]。

血管内皮生长因子(vascμLar endothelial growth factor,VEGF)家族成员对宫颈癌的生长及转移具有重要影响。人VEGF基因位于染色体6p(14,15),其基因结构为8个外显子被7个内含子所隔开,其编码区跨度约14kb。VEGF是一种肝素结合型糖蛋白二聚体,相对分子质量为40k Da~46k Da,有两个相对分子质量为20~23的相同亚基经二硫键连接而成。VEGF通过与其受体结合而发挥生物学效应,VEGF与受体结合后,可立即引起钙离子内流,激活细胞内信息传递,对内皮细胞产生促分裂、增生和趋化作用,并能增强血管通透性,有利于血浆、纤维蛋白外渗,促进血管形成[11]。而肿瘤血管形成是决定肿瘤大小、局部和远处转移的关键因素,与肿瘤的预后相关。本研究提示随着肿瘤期别的增高,VEGF水平逐渐升高,说明VEGF与宫颈癌的转移、侵袭能力相关。

因此,应用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群等指标监测宫颈癌患者的免疫状态,为宫颈癌患者的免疫辅助治疗提供依据。同时通过监测VEGF,对宫颈癌的早期诊断、病情进展的判断及疗效观察有一定的参考价值。另外,国外相关研究发现向荷瘤动物胸腺和骨髓中注入重组VEGF,可显著抑制多能干细胞、淋巴系干细胞的迁移和分化,抑制T细胞的成熟和功能,提出VEGF干扰干细胞向T淋巴细胞分化是肿瘤免疫缺陷的可能机制[12]。国内有研究报道,IL-6与VEGF在宫颈癌组织中显著表达,而且IL-6的表达与肿瘤大小、间质浸润深度和VEGF相关[13]。VEGF是否干扰T淋巴细胞分化,造成细胞免疫功能缺陷,仍需进一步在宫颈组织学、细胞学上作研究,为宫颈癌的药物治疗及免疫治疗提供新的理论依据。

摘要：目的 探讨宫颈癌患者外周血T淋巴细胞亚群及血VEGF水平的临床意义。方法 采用流式细胞仪(FCM)对34例宫颈癌患者外周血T淋巴细胞亚群进行检测,同时应用ELISA法检测血VEGF水平。随机抽取健康女性20例为对照组,比较两组T淋巴细胞亚群及VEGF。结果 宫颈癌患者外周血CD4+、CD4+/CD8+比值较对照组均明显下降(P<0.05),而CD8+水平、IL-6、VEGF显著升高。IFN-γ水平与对照组无明显差异性。肿瘤期别越晚,CD4+/CD8+比值越低,CD8+、IL-6、VEGF水平越高,IFN-γ水平则无明显差异性。结论 宫颈癌患者T淋巴细胞亚群改变导致细胞免疫功能降低,肿瘤细胞发生免疫逃逸,促进宫颈癌的发生、发展;VEGF诱导肿瘤血管形成,促进宫颈癌的侵袭、转移。

外周T细胞淋巴瘤 篇10

1 对象与方法

1.1 对象

本研究时间为2010年8—10月,随机选取的核潜艇艇员35名,均为健康男性,平均年龄为(27.5±1.9)岁,艇员出航时间为8月17日,返航时间为9月22日,共出航36 d。

1.2 方法

1.2.1 长航前后白细胞总数和淋巴细胞总数的检测

于出航前1天上午7:00和返航后次日上午7:00坐位抽取肘静脉血2 ml,注入含7.5%EDTA二钠20 μl的试管中。采用日本Sysmex XT-1800i全自动五分类血液分析仪检测WBC总数和淋巴细胞数。

1.2.2 长航前后TL-CFU形成数的检测

主要试剂和仪器:淋巴细胞分离液(军事医学科学院提供),T克隆体系(军事医学科学院提供),96孔细胞培养板(丹麦NUNC公司),超净工作台(北京冠鹏锦华设备有限公司),倒置相差显微镜(日本Olympus公司)。

于出航前1天上午上午7:00和返航后次日上午7:00坐位抽取肘静脉血5 ml,注入含7.5%EDTA二钠50 μl的试管中,加3 ml 1640培养液混匀后沿试管壁缓慢加到淋巴细胞分离液上,4 ℃ 1 700 r/min离心15 min,收集中间呈絮状的淋巴细胞,加入1640培养液8 ml洗涤;1 500 r/min离心15 min,去上清,再加入1 640培养液8 ml洗涤;1 000 r/min离心10 min,去上清,加入1640培养液,调整细胞的浓度至2.0×106/ml;将细胞悬液0.1 ml加入到0.9 ml的T克隆体系中,充分吹打混匀后取0.4 ml平均分配到细胞培养板的4个孔中(此时每孔中的细胞数为2.0×104),置于37 ℃,5%的CO2孵箱中培养7 d。倒置显微镜下进行原位计数,以大于40个细胞以上的细胞团计数集落。

1.3 统计学处理

用SPSS 11.0对数据进行统计学处理,检测结果以undefined表示,组间比较用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 长航前后艇员外周血WBC和淋巴细胞数的变化

长航后,核潜艇艇员外周血WBC总数较长航前减少,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);外周血淋巴细胞数则较长航前增多,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

2.2 长航前后艇员外周血T淋巴细胞集落形成率的变化

长航后,核潜艇艇员外周血TL-CFU形成率为(68.95±16.80)个/2×104 MNC,较长航前的(39.99±14.30)个/2×104 MNC显著升高,两者差异有统计学意义(t=6.935,P<0.01)。

3 讨论

核潜艇长航对机体免疫系统是一种复杂的应激刺激,且具有因素混杂性、刺激持续性、无法回避性等特点。潜艇舱室内的电磁、温湿、放射及有害气体等环境因素构成了对机体的环境应激;长期的社交缺失、孤独感和时空隔绝焦虑等社会因素构成了对机体的心理应激[2]。这些因素的共同作用可使机体出现生理心理的多方面变化,本研究拟通过对外周血WBC及淋巴细胞长航前后变化的研究,探讨核潜艇长航应激因素对免疫系统的影响。

内分泌系统是应激作用时反应最为迅速的调控体系,糖皮质激素、肾上腺激素、甲状腺激素、胰高血糖素等一系列应激相关性激素快速释放入血,调动机体的防御机制[3]。免疫系统也是其调节靶系统之一,长时间持续应激刺激可以使机体应激水平整体上调,免疫系统呈现高敏、高反应性的特点。曾有针对水面舰艇艇员的研究显示,长航后艇员的免疫反应增强,淋巴细胞活性增高[4],本研究亦获得类似的结果,长航后艇员外周血的淋巴细胞数量较长航前增多,同时TL-CFU形成能力亦显著升高。由此可见,长航应激因素作用可加速淋巴细胞的成熟及促进其释放,而能形成集落的T淋巴细胞主要是外周血中少量CD4+ T淋巴细胞,故长航后外周血淋巴细胞除数量增多外,其中活化的CD4+T细胞数量也增多,CD4+T辅助细胞活化是细胞免疫应答启动的重要环节,其分泌的IL-2是最重要的淋巴细胞刺激因子,能加快淋巴器官内的淋巴细胞成熟分化,促进其功能[5],这可能是长航后外周血淋巴细胞数量增加的重要原因。CD4+T辅助细胞可分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子,这些细胞因子可介导炎症反应、辅助B淋巴细胞产生与吞噬作用有关的免疫球蛋白,并激活巨噬细胞、中性粒细胞等一系列复杂免疫反应,增强机体免疫反应强度[6],CD4+T辅助细胞增多提示机体对外免疫应答能力在长航后出现了上调。而应激刺激引起淋巴细胞免疫活性增高的机制尚不完全清楚,可能的途径包括糖皮质激素相关性免疫协同作用、炎症刺激因子诱导的过度免疫反应及甲状腺激素等应激相关激素对淋巴器官的直接激活作用等原因[7]。

本研究中外周血中淋巴细胞数呈现升高的改变,但核潜艇长航后艇员外周血中白细胞总数显著下降,故粒系细胞数量的显著下降是造成白细胞数量的下降的原因。研究显示,应激状态下体内氧自由基的含量可显著升高[8],对机体细胞产生氧毒性,中性粒细胞是其中最为敏感的细胞之一,氧自由基可使粒细胞膜脂质过度氧化,膜体稳定性变差,易破裂变形,细胞出现中毒性改变,分裂延迟,体积增大,胞质内碱性磷酸酶活力的下降,内质网肿胀,核浓缩,并可诱发细胞的凋亡;同时骨髓内粒细胞也出现原位破坏,骨髓内早期出现凋亡细胞,导致释放到外周血中的粒细胞减少。此外氧自由基还能损害粒细胞功能,表现为寿命缩短及黏附、分泌、吞噬等功能减弱[9]。与此同时,长航后外周血辅助性CD4+T淋巴细胞活性上调,机体表现出对外来抗原的高反应性表现,免疫反应强度升高,大量粒细胞在细胞因子等因素作用下,趋化并参与炎症反应[10],这一过程亦造成外周血中粒细胞的过度消耗。此外,研究显示,粒细胞胞质内存在糖皮质激素、肾上腺激素等激素的受体,体内应激相关性激素的高水平,亦可直接通过与粒细胞包膜、胞质及胞内细胞器上相关受体的相互作用,影响粒细胞的数量和功能,短期内可激活粒细胞的功能,增强粒细胞吞噬、黏附等作用,但长期的应激刺激和激素作用,则会造成细胞器和DNA损伤,加速粒细胞的过度消耗,促进凋亡程序启动,造成外周血中粒细胞数的下降[11]。

长航后,艇员外周血中淋巴细胞总数及CD4+T辅助淋巴细胞数虽明显上调,但由于免疫效应细胞如粒细胞、巨噬细胞等数量和功能受慢性持续应激因素作用的影响而下降,其免疫效应受影响,艇员整体免疫力仍然呈现一个下降的趋势[12],易罹患各种疾病。

核潜艇舱室环境复杂,多种复杂因素的联合作用造成的持续应激效应可使艇员免疫功能受损,导致艇员对于感染性疾病的罹患风险增加。采取各种有效措施预防慢性应激刺激对艇员免疫功能损害,改善官兵的健康状况,对于保证潜艇官兵战斗力非常重要 。

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