αIL-10（精选七篇）
αIL-10 篇1
1 资料与方法
1.1 临床资料
病例选自2013年3月-2014年1月在南阳医专第一附属医院呼吸科住院的42例支气管哮喘患者, 且病例确诊均符合中华医学会呼吸病学会哮喘组的诊断标准[3], 女18例, 男24例, 平均年龄 (43.6±5.3) 岁, 患者均排除肺部和其他脏器器质性病变, 也排除急性感染性疾病, 且患病前1个月不曾应用过与调节免疫力有关的药物。同时抽取我院38例健康体检者作为对照组, 其中女17例, 男21例, 平均年龄 (45.2±4.7) 岁, 对照组在性别和年龄上与患病组相比, P>0.05, 差异均无统计学意义, 具有可比性。
1.2 研究方法
1.2.1 样本的采集。
对照组、患病发作期组和恢复期组均于清晨空腹抽取静脉血5ml, 以3000r/min离心15min, 继而取上清液加入试管中, 塞好口, 做好标记, 放入-70℃低温冰箱中保存待检, 避免反复冻融, 并在有效期内进行检测。
1.2.2 检测方法。
本研究采用酶联免疫吸附法 (ELISA法) , 对支气管哮喘患者哮喘发作期、恢复期及对照组血清中IL-6、IL-10和TNF-α的水平进行检测, 三种试剂盒均购于上海恒远生物科技有限公司, 操作时严格按照说明书进行。
1.3 统计学处理
使用SPSS12.0统计软件进行统计学分析, 测得的结果以均数±标准差 (x±s) 来表示, 组间的差异采用t检验, P<0.01, 说明差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平
各组血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平与方差分析结果, 见表1。
注:各组在年龄、性别上无统计学差异, P>0.05。
2.2 各组间血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平的比较
从表1可以看出, 支气管哮喘患者在哮喘急性发作期血清中IL-6、TNF-α的浓度均高于恢复期和正常对照组, P<0.01, 差异具有统计学意义;恢复期IL-6、TNF-α的浓度比哮喘急性发作期要低, 但与对照组相比还是有所增高, P<0.01, 差异具有统计学意义;而IL-10在哮喘急性发作期血清中的浓度却低于正常对照组, P<0.01, 差异具有统计学意义;恢复期IL-10的浓度比哮喘急性发作期高, 但比正常对照组低, P<0.01, 差异具有统计学意义。
3 讨论
支气管哮喘是一种有多种炎症细胞、炎症介质与细胞因子参与的变态反应性疾病, 以气道阻塞、气道炎症和气道高反应性为主要特征。目前对于哮喘发病机理研究的还不太清楚, 但有相关研究证实血清中细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α的表达增加或异常表达与该病的发生发展有着密切的关系[4]。
IL-6是至今为止发现的生物学活性最广泛的细胞因子, 可以调节免疫应答, 促进B细胞的增殖和分化。IL-6是一种具有抗炎症和促炎症双相作用的多效性细胞因子, 正常的浓度IL-6可促进多克隆B细胞的增殖分化, 同时诱导T淋巴细胞合成及表达的IL-2与IL-2R, 来抑制单核细胞、内皮细胞等分泌释放TNF-α等促炎症细胞因子, 以维持机体正常的自身免疫功能, 但高浓度的IL-6, 一方面可以抑制T淋巴细胞合成及表达IL-2与IL-2R, 致使相关细胞分泌释放促炎因子而加重炎症反应;另一方面能刺激B细胞而使其功能亢进, 并通过自身免疫性的反应产生自身抗体, 导致自身免疫病的发生, 使周围细胞和组织出现免疫病理损伤。本实验结果显示:支气管哮喘患者在哮喘急性发作期血清中IL-6的浓度高于正常对照组 (P<0.01) ;恢复期IL-6的浓度比哮喘急性发作期要低, 但与对照组相比还是有所增高 (P<0.01) 。说明IL-6参与了哮喘的发病过程, IL-6是重要的促炎性细胞因子, 高浓度的IL-6, 能促进其他炎性因子的释放, 加重炎症反应;还能促进B细胞增殖分化产生过多的IgE, 使肥大细胞、嗜碱性粒细胞释放大量的生物活性介质, 来加重哮喘的发作。
IL-10主要是由单核-巨噬细胞和各种亚群的T细胞合成分泌的一种具有多功能的抑制性细胞因子, 参与了多种疾病的发病过程, 对疾病的转归有重要的影响。本实验结果显示:IL-10在哮喘急性发作期血清中的浓度却低于正常对照组 (P<0.01) ;恢复期IL-10的浓度比哮喘急性发作期要高, 但比正常对照组要低 (P<0.01) 。说明IL-10参与了哮喘的发病过程, IL-10具有抑制炎症介质IL-6、TNF-α的作用, 哮喘发作时血清中IL-10的水平降低, 其抑制作用也降低, 导致IL-6和TNF-α等炎症介质和IgE的过度表达, 这与哮喘的急性发作有重要的关系。
TNF-α主要由活化的巨噬细胞产生, 一种促炎性细胞因子, 在免疫应答的调节和炎症损伤反应中起着重要的作用。它的生物学活性具有双重性, 一方面它在机体的免疫防御中有重要的作用, 正常的情况下, 在人体内的活性比较低, 但具有调节免疫应答和促进免疫细胞增殖分化的生理功能;另一方面它也参与机体的免疫病理损伤, 如果浓度过高可引起局部炎性反应, 严重时可导致多器官受损[5]。TNF-α可以通过刺激内皮细胞、组织内巨噬细胞释放IL-6、IL-8等炎症因子, 来加重炎症反应。本研究结果也表明, 支气管哮喘患者在哮喘急性发作期血清中TNF-α的浓度高于正常对照组和恢复期组 (P<0.01) , 且发现哮喘发作期血清中浓度越高, 病情越严重, 说明TNF-α浓度的变化与哮喘病的进展有密切的关系。
综上所述, 细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α是支气管哮喘发病过程中主要的调节性炎症介质, 其浓度的高低直接影响着疾病的转归, 动态监测其浓度的变化, 对评价哮喘的病情和指导临床治疗均有很大帮助。
参考文献
[1]伏开新, 姚加平, 李静, 等.支气管哮喘患儿血清TNF-α、VIP、MTL和GAS检测的临床意义[J].放射免疫学杂志, 2013, 26 (4) :399-401.
[2]喻昌利, 郭艳丽, 刘和亮.细胞因子白细胞介素-10在哮喘发病机制中的作用及其治疗效应[J].中国医学前沿杂志, 2012, 4 (11) :45-50.
[3]中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南[J].中华结核和呼吸杂志, 2008, 31 (3) :177-180.
[4]Chung KF.Cytokines in chronic obstructive pulmonary disease[J].Eur Respir J Suppl, 2001, 34:50s-59s.
αIL-10 篇2
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取本院儿科2014年1~12月收治的90例MPP患儿作为肺炎组, 其中男52例, 女38例;年龄1~11岁, 平均年龄 (7.3±1.9) 岁。将患儿按照病情程度分为轻症组50例:热程<15 d, 肺部体征较轻, 且无肺外并发症;重症组40例, 热程≥15 d;肺部体征重, 肺外并发症≥2个。以同期在本院进行健康体检的100例健康儿童作为对照组, 其中男64例, 女36例;年龄3~10岁, 平均年龄 (5.9±2.2) 岁。两组研究对象在性别、年龄等一般资料方面比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 检查方法
对照组禁食12 h后, 于第2天清晨抽取5ml静脉血, 以双抗夹心法 (ELISA) 对血清中TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10浓度进行测定。分别抽取肺炎组患儿治疗前、治疗后 (15±2) d 3 ml空腹静脉血, 并以ELISA法测定血清中免疫因子浓度。
1.3 观察指标
对比肺炎组患儿的血清与对照组健康儿血清中TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10浓度, 对比轻症组与重症组患儿血清中各因子浓度。
1.4 统计学方法
采用SPSS22.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 实施t检验;计数资料以率 (%) 表示, 实施χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肺炎组与对照组血清中各因子浓度对比
对照组血清中各因子浓度低于肺炎组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。
2.2 肺炎患儿血清中各因子浓度比较
轻症组与重症组血清中IL-10浓度比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , TNF-α、IL-6及IL-8浓度均显著低于重症组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。见表2。
注:两组比较, P<0.05
注:与重症组比较, aP<0.05, bP>0.05
3 讨论
肺炎支原体为呼吸系统感染主要病原菌, 是儿童获得性肺炎首要病原菌[3,4,5,6]。MPP为儿童常见病, 发病率呈逐年升高趋势。该病的发病机制主要为肺炎支原体侵入或者免疫功能紊乱[7]。研究指出, 支原体肺炎同免疫反应密切相关, 主要特征为细胞因子过度表达, 一旦机体感染肺炎支原体, 就会激活免疫系统, 使得细胞免疫受到抑制, 进而引发肺部广泛病变[8,9]。
TNF-α是巨噬细胞产生的细胞因子, 为炎症反应期间最早出现的炎性介质, 参与到MPP引起的肺部损伤, 且表达水平随着病情程度升高[10,11,12]。IL-6是重要的免疫调节因子, 能够参与到体液免疫调节与肺部的炎症病理过程中, 出现在炎症反应急性期, 在局部损伤激活炎症细胞后, IL-6的分泌会增加, IL-6的水平能够反映肺部的感染程度[13]。IL-8为多源性炎性细胞因子, 它对于噬碱性细胞、中性粒细胞等有强烈趋化作用, 过度表达会导致组织损伤, 能够反映MPP感染程度与转归[14]。IL-10为抑制性细胞因子, 有着广泛的免疫抑制活性, 分泌减少会引起炎症过程与组织损伤[15]。
αIL-10 篇3
1 资料与方法
1. 1 一般资料选取2012 年11 月- 2015 年6 月我院收治的重症冻结期肩周炎患者95 例, 随机分为研究组48 例和对照组47 例。纳入标准: 所有患者均符合重症冻结期肩周炎的诊断且均具有家属或患者知情同意书。排除标准: 其他炎性反应性疾病, 如心肌炎、肝炎、肾炎、上呼吸道感染等, 其他恶性肿瘤性疾病如肺癌、胃癌等及药物过敏者。研究组男10 例, 女38 例;年龄54 ~ 69 ( 60. 5 ± 3. 5) 岁; 病程5 ~ 52 ( 35. 2 ± 5. 6) 个月。对照组男9 例, 女38 例; 年龄53 ~ 68 ( 60. 8 ± 3. 3) 岁; 病程6 ~ 54 ( 35. 5 ± 5. 8) 个月。2 组患者性别、年龄、病程等一般资料上无显著差异 ( P > 0. 05) , 具有可比性。
1. 2 方法
1. 2. 1 对照组: 对照组采取麻醉下手法松解治疗。患者手术前禁食7h, 进入手术室后建立静脉通道, 检测心率、脉压、呼吸等生命体征, 在患者前中斜角肌的肌间注射1. 5% 利多卡因 ( 山东华信制药集团股份有限公司生产, 批号: 国药准字H37023907) 250mg麻醉, 待臂丛阻滞完成后, 对患者进行手法松懈治疗。固定其肩部, 握住患者肘部, 让其患肩可向各个方向运动, 然后将患肩的前臂慢慢抬起, 做内收、外展、内旋、外旋松懈动作。将患肩消毒后, 采取关节穿刺。患者进入病房后, 对患者进行持续的外展抬举约160°的动作。手术后给予地塞米松 ( 重庆莱美药业股份有限公司生产, 批号: 国药准字H20080356) 10mg加入5% 葡萄糖注射液200ml中静脉滴注1h抗炎治疗, 术后给患者采用相应的西药治疗。
1. 2. 2 研究组: 研究组采取麻醉下手法松解综合方法进行治疗。患者手术后3d, 在其侧条口穴处进行针刺处理, 并在牵引的条件下, 患肩关节进行适当的活动, 同时给予患者中药治疗, 给予具有散寒通络作用的药物: 桂枝、当归、白术、人参各10g, 葛根、芍药各30g, 水煎服, 每天2 次。再用具有软坚散结功效的药物进行熏洗: 生草乌、海藻、昆布、生川乌、桂枝各20g, 艾叶、透骨草、威灵仙各30g, 每次2h, 每天2 次。
1. 3 观察指标2 组患者分别在治疗前后空腹抽取静脉血3ml, 室温静置30min后3000r / min离心15min, 取离心后的上清液分别检测血清IL-6、IL-10 及TNF-α 水平。血清IL-6、IL-10及TNF-α 均采用酶联免疫吸附法进行检测。IL-6 和TNF-α 的检测试剂盒为武汉中帜生物科技有限公司提供的白介素-6 ( IL-6) 检测试剂盒和肿瘤坏死因子-α ( TNF-α) 检测试剂盒。IL-10 的检测试剂盒为上海研域生物科技有限公司提供的人白介素-10 ( IL-10) 检测试剂盒。检测人员均为本院检验科专业人员, 操作过程均严格按照厂家说明书进行。
1. 4统计学方法应用SPSS 20. 0 统计软件进行数据处理。计量资料以± s表示, 组间比较采用t检验, P < 0. 05 为差异有统计学意义。
2 结果
治疗前2 组血清IL-6、IL-10 及TNF-α 水平无显著性差异 ( P > 0. 05) 。治疗后2 组血清IL-6、IL-10 及TNF-α 水平均低于治疗前, 且研究组血清IL-6、IL-10 及TNF-α 水平较对照组显著性降低, 差异均有统计学意义 ( P < 0. 05) 。见表1。
注: 与治疗前比较, *P < 0. 05; 与对照组治疗后比较, #P < 0. 05
3 讨论
肩周炎在中医辨证中分为瘀滞型、风寒湿型、气血虚型三种, 治疗上主要以解决粘连和疼痛为主[3]。临床上对重症冻结期肩周炎患者应采取积极及时的治疗, 进而减少患肩关节的粘连, 患侧上肢的无力、萎缩等[4]。重症冻结期肩周炎患者另一重要表现为疼痛, 其特点为不动微痛或不痛, 动时患肩剧烈疼痛, 这种疼痛是持续性的, 遇到冷风、冷天气等疼痛感觉加重, 严重影响患者生活状态[5]。本文对照组采用的麻醉下手法松解进行治疗, 能恢复患者的关节功能, 减轻疼痛, 对粘连的组织进行松懈。研究组采用麻醉下手法松解综合方法治疗还能去除风寒、调理气血, 使肌肉表面能够活动, 进而改善患肩血液循环, 减轻炎症和患者疼痛。有临床报道[6]麻醉下手法松解综合方法能提高重症冻结期肩周炎患者的治疗效果, 与本文结果吻合。
血清IL-6、IL-10、TNF-α 三种检测指标均为炎性反应性指标, 机体发生炎性反应时会显著性的增高。重症冻结期肩周炎的发生和发展过程中常伴随着炎性反应, 在该疾病患者体内血清IL-6、IL-10、TNF-α 水平显著增高。吴坛光等[7]报道指出重症冻结期肩周炎与慢性无菌性的炎性反应相关, 当患者的软组织受到损伤后, 机体会大量地释放细胞炎性反应因子, 参与患肩局部的炎性反应, IL-6、IL-10、TNF-α 作为主要的促炎因子, 刺激巨噬细胞、内皮细胞等活化和聚集, 激发进一步的炎性反应, 其含量与重症冻结期肩周炎的发生和发展密切相关。临床上常将血清学指标IL-6、IL-10、TNF-α 联合检测, 辅助判断炎症的发生和治疗疗效的评估。本文采用麻醉下手法松解综合方法治疗的研究组和采用麻醉下手法松解方法治疗的对照组进行对比研究发现, 结果显示, 治疗后2 组血清IL-6、IL-10 及TNF-α 水平均低于治疗前, 且研究组血清IL-6、IL-10 及TNF-α水平较对照组显著性降低, 差异均有统计学意义 ( P < 0. 05) 。表明麻醉下手法松解综合方法对重症冻结期肩周炎进行治疗, 能有效地降低患者血清IL-6、IL-10 及TNF-α 水平。
摘要：目的 探讨麻醉下手法松解综合方法治疗重症冻结期肩周炎对患者血清IL-6、IL-10及TNF-α水平的影响。方法 将重症冻结期肩周炎患者95例随机分为研究组48例和对照组47例。对照组采用麻醉下手法松解治疗, 研究组在对照组的基础上联合中西医综合法治疗, 分别于2组患者治疗前后检测血清IL-6、IL-10及TNF-α水平。结果 治疗后2组血清IL-6、IL-10及TNF-α水平均低于治疗前, 且研究组血清IL-6、IL-10及TNF-α水平较对照组显著性降低, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论 麻醉下手法松解综合方法对重症冻结期肩周炎进行治疗能有效地降低患者血清IL-6、IL-10及TNF-α水平。
关键词：手法松解综合方法,重症冻结期肩周炎,血清炎性指标
参考文献
[1]宋海云, 何华琼.浮针刀配合手法松解治疗肩周炎临床研究[J].辽宁中医药大学学报, 2015, 17 (2) :114-116.
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[3]顾银元.综合疗法治疗肩周炎[J].中国社区医师, 2015, 31 (22) :86-87.
[4]Caborn D, Rush J, Lanzer W.A randonmized single-blind comparison of the efficacy and tolerability of hylan G-F 20 and triamcionlone hexacetonide in patients with osteoarthritis of the knee[J].J Rheumatol, 2011, 26 (2) :333-334.
[5]Ghosh P, Guidolin D.Potential mechanism of action of intra-articular hyaluronan therapy in osteoarthritis:are the effects molecular weight dependent[J].Seminars in Arthritis and Rheumatism, 2012, 16 (1) :10-37.
[6]任红艳.麻醉下手法松解综合治疗重症冻结期肩周炎的疗效研究[J].检验医学与临床, 2015, 12 (12) :1796-1797.
αIL-10 篇4
1 材料和方法
1.1 主要药物及试剂
人肿瘤坏死因子酶联免疫试剂盒 (天津所罗门生物科技有限公司) ,人白介素-10酶联免疫试剂盒(天津所罗门生物科技有限公司),人白介素-17酶联免疫试剂盒 (天津所罗门生物科技有限公司)。注射用乳糖红霉素(湖南科伦药业有限公司),弗氏完全佐剂(Sigma 公司)。
1.2 动物模型的制备
Wistar雌性大鼠共45只,180～220g,清洁级,由大连医科大学提供。随机分为3组:Ⅰ组予以0.9%氯化钠注射液0.1mL于大鼠足跖部,Ⅱ组及Ⅲ组予以0.1%弗氏完全佐剂0.1mL注射于大鼠足跖部,第6、12天予以加强免疫。Ⅲ组治疗组造模14d后予腹腔注射红霉素注射液50mg/kg每日一次,连续10d;Ⅰ组对照组及Ⅱ组模型组给予等量0.9%氯化钠注射液。于造模30天后处死大鼠,采集血清。
1.3 标本制备
45只大鼠断头取血每只约5mL,3500r/mL,低温离心15min,分离血清取上清液,-80℃保存备用。
1.4 统计学方法
所有数据均以均数±标准差undefined表示,应用SPSS17.0软件系统,不同组间用方差分析,各组间两两比较用t检验,P<0.05为有统计学意义。
2 结果
见表1。治疗组大鼠血清TNF-α、IL-17水平增高,IL-10水平降低,于造模组有显著差异,有统计学意义。红霉素对佐剂性关节炎大鼠血清中的TNF-α、IL-17的表达水平呈抑制作用,对IL-10的表达呈提升作用。
注:△与对照组相比较P<0.05;▲与模型组比较P<0.05;*与治疗组比较P>0.05。
3 讨论
类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种全身免疫性侵蚀性关节炎,除累及关节外还会出现多种关节外表现。RA的基本病理改变是滑膜炎,导致滑膜软骨及软骨下骨组织破坏,最终导致关节畸形和功能丧失。RA的发病机制尚不清楚,多数研究认为与多种因素有关,RA发病的中心环节是细胞因子的作用及相互作用,这些细胞因子与相应受体结合,可引起炎症、蛋白质水解、细胞募集和增殖,随着研究的深入,细胞因子的作用机制及数量变化逐渐成为新的热点。
红霉素(Erythromycin,EM)除具有较好的抗菌活性外还有多种新应用,如治疗糖尿病胃轻瘫、淋病、寻常座疮、免疫系统缺陷及失调方面的疾病。大环内酯类抗生素能抑制中性粒细胞的聚集和活化,促进中性粒细胞凋亡和清除,上调巨噬细胞的吞噬能力,能减少炎性介质如IL-1、IL-8、TGF-β等的分泌量[5]。已有很多实验室及临床研究证实大环内酯类药物有调节免疫的作用,但研究还不够全面深入,仍需进一步研发,并且红霉素用于治疗RA的相关报导很少。肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)是维持机体稳定及正常功能的关键细胞因子, TNF-α在免疫方面的作用主要通过与多种细胞及细胞因子的调节和相互作用实现的。众多的研究证明TNF-α在RA患者的关节滑膜液中浓度明显高于正常人水平[1],是整个细胞因子网络瀑布式反应的枢纽,在RA炎症反应滑膜新生血管形成中起关键作用。实验室和临床研究证实使用TNF-α抑制剂可有效的减轻RA的症状,延缓病情进展。本实验中模型组大鼠血清中TNF-α水平显著增高,治疗组应用红霉素干预后大鼠血清中TNF-α水平和模型组相比明显降低,这与以往同类实验结论相一致,由于TNF-α在RA的发生和发展中起着非常明确和关键的作用,提示红霉素对TNF-α的分泌有抑制作用,对RA有一定的治疗效果。
白细胞介素17 (Interleukin-17,IL-17) 是一种前炎症因子、炎症反应的微调因子同时也是促炎因子。IL-17能直接和间接通过与TNF-α、IL-1协同并增加IL-6等促炎细胞因子分泌量从而导致RA患者骨和软骨侵蚀破坏。研究发现RA患者关节滑膜及滑膜液中IL-17大量表达[2]。IL-17能刺激加强破骨细胞活性,加强对软骨细胞合成基质的抑制效应,使骨及软骨被侵蚀破坏。IL-17与IL-1和TNF-α在促进细胞因子分泌和炎症进展中有同样的重要作用,且彼此之间有协同效应。本实验中发现模型组大鼠血清中IL-17水平增高显著,应用红霉素干预治疗组后大鼠血清中IL-17水平明显低于模型组,表明红霉素能抑制IL-17的分泌。
白细胞介素10(interleukin-10, IL-10 )是机体内最重要的起抗炎及调节免疫作用的细胞因子,是机体免疫调节的中心环节。IL-10能直接或间接的减少抗原刺激性T细胞的增殖,从而实现对免疫应答的抑制。有研究表明给予IL-10可有效减少滑膜组织中致炎细胞因子的生成,使由丝裂原诱导的T细胞增殖反应得到抑制[3]。IL-10可减低IL-1、TNF-α生成,提高IL-1R拮抗剂及可溶性TNF-αR的含量,通过以上机制减少RA滑膜炎性细胞浸润,激活破骨细胞,使病情发展得到控制[4]。本实验中,造模后大鼠血清中IL-10的水平明显降低,大鼠用红霉素治疗后血清中IL-10水平则明显升高,表明红霉素可以增高IL-10的分泌,进一步说明红霉素对RA有较好的治疗作用。
TNF-α、IL-10和IL-17是RA发病机制中较为重要的几个细胞因子,而红霉素是一种研究较多,价格较低廉的老牌抗菌药,通过此次实验发现了红霉素用于治疗RA的新依据,为类风湿性关节炎的临床治疗提供新的思路。
参考文献
[1]Youn J,Kim HY,Park JH,et al.Regulation of TNF-α-mediatedhyperplasia through TNF receptors,TRAFs,and NF-KB insynoviocytes obtained from patients with rheumatoid arthritis[J].immunology letters,2002,83:85-93
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[4]张义浜.类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展[J].细胞与分子免疫学杂志,2005,21:88-99
αIL-10 篇5
关键词：动脉粥样硬化,巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白
动脉粥样硬化 (atherosclerosis, AS) 及其并发症严重威胁着人类的健康。在AS过程中单核细胞转变成巨噬细胞吞噬大量氧化型低密度脂蛋白 (oxidized low density lipoprotein, ox LDL) , 形成泡沫细胞。巨噬细胞源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化形成和发展中的早期特征, 在AS过程中起着至关重要的作用[1]。巨噬细胞在干扰素γ (interferon gamma, IFNγ) 或内毒素 (lipopolysaccharide, LPS) 诱导下可分化为经典活化型 (classically activated, M1型) , 具有促炎作用, 可诱导一氧化氮合成酶 (inducible nitric oxide synthase, i NOS) 的高表达;在白细胞介素4 (Interleukin4, IL4) 诱导下分化为替代活化型 (alternative activated, M2型) 巨噬细胞, 具有抑炎作用, 其标志物为精氨酸酶1 (Arginase 1, Arg1) [2]。本研究通过体外实验探讨M1和M2型巨噬细胞经oxLDL刺激后细胞内脂质含量及分泌的细胞因子TNFα和IL 10的浓度差别及意义。
1 材料与方法
1.1 实验材料
C57BL/6小鼠由山西医科大学动物中心提供;DMEM高糖细胞培养基 (Hyclone) ;胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司) ;巨噬细胞集落刺激因子 (Macrophage colony stimulating factor, M CSF) 、IL 4、IFNγ (Pepro Tech) ;氧化型低密度脂蛋白 (北京协生生物有限公司) ;白细胞介素10 (IL10) 、肿瘤坏死因子 (TNFα) 的ELISA试剂盒 (Bioswamp) ;油红O粉剂 (Sigma公司) ;丙二醇 (天津化学试剂公司) ;淋巴细胞分离液Ficol、青链霉素混合液、4%多聚甲醛 (Solarbio) ;Trizol (Invitrogen公司) ;RT PCR试剂盒 (FERMENTA公司) ;DEPC (Invitrogen公司) ;三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇 (北京化工厂) ;c DNA合成试剂盒和Real Master Mix (SYBR Green) 试剂盒 (Takara, 日本) 。
1.2 巨噬细胞的分离及培养
断颈处死小鼠, 取两条后腿, 于超净台内用镊子和剪刀剥离肌肉, 剥离干净的骨头置于含PBS (其内含双抗) 的培养皿中。切断两端骨, 用1 m L注射器吸入PBS冲洗液冲洗骨髓腔。再用枪反复吹打冲洗出来的骨髓, 使其呈单细胞悬液, 吹打之后过200μm的筛网。取15 m L离心管中加入4 m L淋巴细胞分离液Ficol, 将细胞悬液按 (4∶6的比例) 缓慢加入, 使其在Ficol之上。2 500 r/min离心20min, 用移液管吸除PBS层, 取白膜上下3 m L~4 m L置于新离心管中, 加入等体积PBS, 1 500 r/min离心8min。弃上清, 用培养基 (RPMI1640含20%胎牛血清) 重悬细胞后种入2个12孔板内, 提前在其中一个12孔板内放入盖玻片。2 h后换液并加入40 ng/m L巨噬细胞集落刺激因子 (MCSF) 刺激。约3 d后待细胞长满70%~80%, 分成两组:一组加入细胞因子IL4 (40 ng/m L) 刺激使巨噬细胞向M1型极化, 另一组加入细胞因子IFNγ (50 ng/m L) 刺激使巨噬细胞向M2型极化。刺激24 h后取未放盖玻片的12孔板, 收集细胞提取RNA;另一个12孔板M1型和M2型组各自分为两组:空白组 (control组) , 给予oxLDL 40 ng/L刺激48 h组;每组设3个副孔。
1.3 Real time PCR检测
行Real time PCR检测M1型特异标志i NOS和M2型特异标志Arg1的RNA转录情况。细胞孵育结束后收集细胞, 按Trizol试剂盒说明书提取细胞总RNA并将总RNA逆转录合成c DNA, 取产物以GAPDH为内参照进行定量PCR扩增GAPDH引物上游为5′CCTGGAGAAACCTGC-CAAGTATGA 3′, 下游5′TTGAAGTCACAGGAGA-CAACCTGG3′;i NOS引物上游5′CAGAGGAC-CCAGAGACAAGC3′, 下游5′TGCTGAAA-CATTTCCTGTGC 3′;Arg1引物上游5′GTTGGG-TACCTCTTTGGCAA3′和下游5′-GCCCAGAAT-GATGACGTTACCC 3′;反应结束后进行软件分析。
1.4 油红O染色
oxLDL刺激结束后吸上清置于新的EP管内。用PBS冲洗3次, 4%的多聚甲醛固定15 min, PBS冲洗1次, 再置于丙二醇中固定5 min, 轻轻吸去丙二醇, 0.5%油红O的丙二醇溶液, 置60℃烤箱中染色15 min, 用85%丙二醇冲洗5 min, 再用PBS洗3次, 蒸馏水清洗1次, 苏木素复染2 min~5 min, 1%HCl分色及返蓝后封片, 显微镜下观察到油红O可将细胞内脂滴染成红色, 苏木精将细胞核染成蓝色。
1.5 IL 10和TNFα的浓度检测
将oxLDL刺激结束后吸取的上清液, 采用双抗体夹心法测定上清液TNFα和IL 10的水平, 检测步骤按照试剂盒说明书操作:将预包被TNFα或IL10的酶标板室温放置20 min, 分别加入倍比稀释的TNFα标准品或IL 10标准品和血清标本, 在TNFα试剂盒的标准品孔和样本孔中依次加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的检测抗体, 用封板膜封住后37℃水浴30min;在IL 10试剂盒内加入生物素标记的抗IL10抗体, 盖膜后37℃温浴30 min。然后, 分别用各试剂盒内的洗涤液洗涤。洗完后在TNFα试剂盒每孔中加入底物A、B后37℃避光孵育15 min, 加终止液后15 min内读板。而IL10试剂盒在洗涤完后每孔加入酶标试剂, 再次孵育、洗涤, 然后加入显色液A、B, 避光孵育后加入终止液后15 min内读板。均用450 nm波长检测吸光度 (OD值) 。
1.6 统计学处理
采用SPSS17统计软件进行统计学分析, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 RTPCR检测M1和M2型巨噬细胞的表面标志 (见图1)
Arg1的表达在IFNγ刺激组低于IL 4刺激组, 而i NOS的表达则相反。
2.2 各组培养基中IL10、TNFα浓度
M1及M2型巨噬细胞分别给予40 mg/L oxLDL刺激48 h, 然后取上清液行ELISA检测TNFα和IL 10的浓度, 在M1组和M2组给予ox LDL刺激与control组IL 10、TNFα浓度相比较差异有统计学意义 (P<0.05) , M1组和M2组在给予40 mg/Lox LDL后两组间IL 10、TNFα浓度差异有统计学意义 (P<0.05) 。详见图2、图3。
3 讨论
巨噬细胞泡沫化是AS发生过程中的起始步骤, 与细胞内胆固醇稳态失衡、胆固醇的吸收与排泄、胞内的代谢等机制相关[3]。脂质摄取主要由SR A、CD36等完成[4], 而胆固醇流出主要由ATP结合盒转运体A1 (ATP binding cassette transporter A1, ABCA1) 介导。ABCA1是一种膜蛋白, 以ATP作为能源促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出并与细胞表面的载脂蛋白A 1 (apolipoprotein, apo A 1) 结合, 形成新生的高密度脂蛋白 (HDL) 。因此增加巨噬细胞ABCA1表达可促进胆固醇外流阻止泡沫化, 具有抗AS发生和发展的作用[5,6]。ABCA1功能障碍将导致巨噬细胞内大量的胆固醇沉积而成为泡沫细胞, 继而浸润血管壁, 促进AS的发生发展。最近Field等[7]用肠细胞系Caco 2研究TNFα对ABCA1表达及HDL介导的胆固醇外流的调控时发现, TNFα可以通过降低ABCA1基因启动子活性显著降低ABCA1表达, 同时TNFα能促进ABCA1降解并在一定程度上抑制其合成。
IL 10是一种多效性抗炎因子, 主要由淋巴细胞、肥大细胞和巨噬细胞产生, 在抑制血管壁的炎症中起重要作用。IL 10通过抑制各种炎性介质引起的细胞因子的合成与分泌, 包括抑制TNFα诱导的促炎性细胞因子的产生、核因子κB (nuclear factor kappa B, NFκB) 的激活、基质金属蛋白酶的产生、组织因子的表达及细胞凋亡, 发挥抗AS的作用[8]。研究发现IL10可部分抑制TNFα所引起THP1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调[9]。本研究发现用40 mg/L ox LDL刺激M1型和M2巨噬细胞后, M1型巨噬细胞内脂质较M2型多, 上清液中TNFα的浓度较M2型高, 而IL 10的浓度较M2型低;相反的是M2型巨噬细胞中的脂质较M1型少, 上清液中IL10的浓度较M1型高, 而TNFα的浓度较M1型低。因此推断ox LDL刺激后M1型巨噬细胞胞质中的脂质含量较M2型多, 可能是由于M1型巨噬细胞能分泌大量TNFα降低ABCA1表达水平, 减少了胆固醇的外流, 从而导致巨噬细胞内脂质的堆积。同时M2型巨噬细胞分泌大量的IL 10抑制了TNFα引起的巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调和脂质含量的增加。因此外源性给予TNFα的拮抗剂或给予IL 10的激动剂上调ABCA1表达水平可能成为未来抗AS的新靶点。
参考文献
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αIL-10 篇6
1 对象及方法
1.1 对象
收集2013年8月至2015年8月我院脑病科收治的符合诊断标准的急性脑梗死的住院患者80例, 其中男49例, 女31例, 年龄45~87岁, 平均 (63.72±9.37) 岁, 病程为3~24h, 平均病程为 (7.32±9.12) h。纳入标准:所有病例均行CT及MRI检查确诊脑梗死。排除标准: (1) 脑出血、出血性梗死、短暂性脑缺血发作等脑血管疾病; (2) 血液系统疾病; (3) 严重器官功能障碍及全身性疾病患者等。
1.2 研究方法与内容
所有患者均采用依达拉奉+阿加曲班治疗, 依达拉奉30mg bid, 疗程14d, 阿加曲班10mg bid, 疗程10d。所有患者均给予常规治疗, 即控制血压、血糖、血脂、抗凝等对症治疗。所有患者于治疗前后, 采用NIHSS量表评分, 评价神经功能缺损变化, 检测细胞因子IL-10、TNF-α表达水平及Th1、Th2细胞数量。监测肝功能、肾功能、凝血功能变化及不良反应。
1.3 实验方法
所有实验对象均在清晨, 空腹抽取静脉血8ml, 分别置于2支肝素锂抗凝管中, 一支采用ELISA检测细胞因子IL-10、TNF-α表达水平, 一支采用FCM检测Th1、Th2细胞数量, 用百分比表示。所有标本于采集后1h内进行相关实验。所有实验方法按试剂说明步骤书操作。本实验以CD3+CD8-细胞间接鉴定为Th细胞, 因Th1特异性分泌细胞因子IFN-γ, Th2特异性分泌细胞因子IL-4, 故通过FCM检测细胞内IFN-γ、IL-4以区别, 即CD3+CD8-IFN-γ+为Th1细胞, CD3+CD8-IL-4+为Th2细胞,
1.4 统计学处理
计量资料的统计描述采用均数±标准差, 所有数据均进行正态性检验, 符合正态分布的数据, 两组间比较采用t检验。采用SPSS22.0统计软件进行统计分析。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 NIHSS量表评分比较
阿加曲班+依达拉奉治疗前NIHSS评分15.82±6.33, 治疗后NIHSS评分8.76±6.23, NIHSS评分较治疗前显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。
2.2 ELISA测定血清细胞因子IL-10、TNF-α表达
阿加曲班+依达拉奉治疗后IL-10较治疗前升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) , TNF-α较治疗前下降, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 具体见表1。
2.3 FCM测定Th1、Th2细胞百分比比较
阿加曲班+依达拉奉治疗后Th2较治疗前升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) , Th1较治疗前下降, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 具体见表2。
2.4 不良反应
给药前后血尿常规、肾功能均无异常, 无胃肠道不适症状, 无严重不良事件发生。
3 讨论
在ACI发病中, 遗传、环境和免疫等因素共同发挥作用, 免疫因素是近年来针对ACI病因学探讨的主要方面, 而热点又集中在Th1、Th2等方面。T细胞应答和Th1、Th2细胞因子平衡的偏移在ACI中发挥重要作用[1]。Th1、Th2是CD4+T细胞亚群, 它在机体防御反应中具有重要的意义, 参与了炎性疾病的发病, 其中细胞因子TNF-α属Th1细胞亚群, 促进炎症反应, IL-10属Th2细胞亚群, 抑制炎症反应[2,3]。ACI发生后集体受下丘脑-垂体-肾上腺轴调节, 产生了大量糖皮质激素, 导致机体发生炎症反应, 从而使Th1、Th2失衡, 炎性指标TNF-α上升, IL-10下降, 这与本研究观察结果一致。本研究检测了阿加曲班+依达拉奉对ACI患者PBMCs细胞因子TNF-α、IL-10的表达及Th1、Th2细胞分布状态的影响, 研究发现:治疗后PBMCs细胞因子TNF-α的表达较治疗前降低, IL-10的表达较治疗前升高, Th1细胞分布状态低于治疗前, Th2细胞分布状态高于治疗前。依达拉奉是脑神经保护剂, 能有效清除自由基, 抵抗自由基造成机体应激性损伤, 可改善Th1/Th2失衡状态[4]。阿加曲班[5]不仅具有抗凝作用, 能直接与凝血酶活性位点结合, 灭活凝血酶, 还可以调节内皮细胞功能, 抑制血管收缩, 下调各种炎症因子。阿加曲班联合依达拉奉可以显著改善ACI患者神经功能, 影响炎性因子分泌, 调节Th1/Th2平衡[6]。这很可能是阿加曲班联合依达拉奉治疗ACI的相关机制之一。
综上, 阿加曲班联合依达拉奉能够改善ACI患者神经功能, 调节Th1/Th2平衡, 有利于促进疾病康复。
参考文献
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αIL-10 篇7
1 资料与方法
1.1 临床资料与分组 健康献血者30例,男20例,女10例,年龄(35.38±5.71)岁;2008年5月至2008年7月我院CRF患者30例,男18例,女12例,年龄(38.17±9.63)岁,慢性肾小球肾炎12例,高血压肾病3例,间质性肾炎2例,糖尿病肾病9例,慢性肾盂肾炎3例,多囊肾1例。有活动性肝炎、两周前有严重感染、自身免疫性疾病、妊娠、有恶性肿瘤病史任何之一者除外。
入选患者均按慢性肾功能衰竭的一体化治疗方案进行治疗8周,病情好转者进入统计。
1.2 检测方法 采集标本:晨空腹采血6 ml,置入无内毒素试管,2000r/min离心10 min,分离出血清置-70℃冻存。采用双抗夹心ELISA法测血清中细胞因子IL-1β及IL-10浓度(由晶美生物制品有限公司提供)。实验操作按试剂盒说明书进行。
1.3 统计学方法 所有数据用均数±标准差
2 结果
2.1 慢性肾功能衰竭患者一般资料 入选患者均符合慢性肾功能衰竭的诊断标准且病情稳定,均进行统计学处理。与健康献血者在年龄、性别构成等方面均无差异。
2.2 治疗前慢性肾功能衰竭组与正常对照组相比较,血浆IL-1β、IL-10水平均明显高 (P<0.01)。8周后,慢性肾功能衰竭组治疗后与治疗前比较,血浆IL-1β水平明显降低而IL-10水平明升高(P<0.01) (表1)。
注:与正常对照组比较,▲▲P<0.01;与治疗前比较,**P<0.01
3 讨论
由肾功能衰竭本身及透析引起的机体微炎症状态近年来备受医学研究人员的重视,因为这与慢性肾功能衰竭时心血管疾病、营养不良、贫血等多种并发症的发生及发展密切相关,是导致患者死亡率增高的一个重要因素[1,2]。
IL-lβ是触发免疫和炎症反应的重要介质,是脓毒症动物的血浆中及内毒症刺激人类单核细胞所产生的主要炎症介质,可激活其它细胞因子的生产,包括IL-6。 IL-8及TNF-a [3]。 其具体作用机制不十分明确,可能通过以下途径:①介导黏附分子ICAM-1表达上调,白细胞聚集,引起血管炎性反应;②使磷脂酶 A2增多,磷脂过度降解,直接引起细胞膜损伤;③使局部兴奋性氨基酸增多,诱导一氧化氮合酶表达,加重神经细胞毒性作用[4,5]。
IL-10作为一种炎性抑制细胞因子,可抑制炎性细胞因子的合成和分泌,抑制局部炎症反应[6];可减轻许多前炎性细胞因子的毒性作用[7];可抑制单核细胞和巨噬细胞合成和分泌 IL-6 和TNF-a,通过阻断转录减少细胞间黏附分子-1 和基质金属蛋白酶的合成和释放[8] 。
总之,本研究表明CRF患者存在不同程度的细胞因了水平的紊乱,同时细胞因子可能参与CRF的发生与发展,在免疫和炎症反应中起重要作用。因此,检测CRF患者血清中IL-1β、IL-10水平,对了解病情、指导临床和观察预后及防治并发症均有重要的临床意义。
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